实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳要点
实验三,血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
四、试剂
• 1． 硼酸缓冲液（PH8.6,离子强度0.075mol/L） • 硼酸5.6025g，四硼酸纳5.6099g，氯化钠1.3163g，加 蒸馏水至1000mL • 2．染色液 300mL 含氨基黑10B 0．25 g，甲醇50 mL，冰醋酸10 mL,水 40mL(可重复使用)。 • 3．漂洗液 2000mL 含甲醇或乙醇45 mL、冰醋酸5 mL、水50 mL。 • 4.透明液(现用现配） 无水乙醇:冰醋酸＝7:3
醋酸纤维薄膜电泳是近几年来推广的一种新技 术。它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样 品无拖尾和吸附现象等优点。目前已广泛应用于 血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球 蛋白、同工酶的分离及测定方面。
三、器材
1、醋酸纤维薄膜(2×8 cm) 2、常压电泳仪 3、 点样器(市售或自制) 4、培养皿(染色及漂洗用) 5 粗滤纸 6、玻璃板 7、竹镊
•
在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料 量成正比，故可将各蛋白质区带剪下，分别用 0.4mol/LNaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定 其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密 度计扫描，测定其相对含量。 • 本实验采用的醋酸纤维薄膜电泳，是以醋 酸纤维薄膜为支持物的电泳方法。醋酸纤维素是 纤维素的羟基乙酰化形成的纤维醋酸酯。将它溶 于有机溶剂 (如：丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后， 涂成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维 薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构，有强渗透性、 其厚度约为120μm。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、 γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体 构象、相对分子质量、等电点及形状不同（见下 表），在电场中移动速度不同。由表可知，血清 中5种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0所以在 缓冲液（pH值8.6）中，它们都电离成负离子， 在电场中向阳极移动。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的蛋白质分离和分析方法。
这种方法基于蛋白质在电场中的迁移速度差异，可以实现对蛋白质的定性和定量分析。
在进行这种实验时，需要注意一些实验操作步骤和技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验步骤1.准备样品：从血清中提取要分析的蛋白质样品。
可使用丙酮、醋酸等溶液进行样品的处理和稀释。
2.制备凝胶：将醋酸纤维素膜在磁盘上进行切割，将膜放入电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液。
3.电泳条件：确定好电泳槽内电泳缓冲液的pH值和离子浓度，根据蛋白质的性质确定最佳的电泳条件，如电场强度、电泳时间等。
4.上样：在预定位置上样，可使用微量注射器将样品滴于凝胶表面。
5.打开电源：连接电极，通电进行电泳。
电泳时间根据分析的需要进行调整。
6.固定凝胶：停止电泳后，将凝胶取出，固定和染色。
7.分析：在透明胶支架上对凝胶进行扫描，记录下蛋白质的电泳迁移图像。
实验结果讨论：1.蛋白质的分离：根据电泳上样区域蛋白质的迁移速率和位置，可以对样品中的蛋白质进行定性和定量分析。
根据蛋白质之间的迁移时间差异，可以推测出它们在电场中的相对电荷、分子大小和电泳迁移速率等信息。
2.蛋白质的鉴定：可以通过与已知蛋白质标准品的电泳迁移对照来鉴定样品中蛋白质的种类和含量。
也可以通过进一步的染色技术，如银染、荧光染色等，增强或显示蛋白质带的清晰度，从而更准确地分析样品中蛋白质的种类和富集。
3.实验重复性和稳定性：为了保证实验结果的可靠性，一般需要对实验进行多次重复操作，计算其平均值和标准差。
同时也需要控制实验条件的稳定性，包括电泳缓冲液的配制、电场强度的控制、电泳时间的准确计时等。
确保实验操作的一致性可以降低测定误差。
注意事项：1.实验操作：操作时需佩戴手套，避免样品受到外界污染，减少实验误差。
仔细熟悉实验步骤和操作要求，确保操作正确。
2.样品制备：样品提取和制备过程中需要严格控制温度、pH值和时间等因素，以保证样品质量的一致性。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
二、实验原理（三）
醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白分成五条主要区带， 从正极端起依次为清蛋白/白蛋白Alb， α1-球蛋白， α2-球蛋白，β-球蛋白, γ-球蛋白。这些蛋白经过 染色处理，可展示出清晰的蛋白电泳图谱。如下图所 示。
AX:各组分蛋白光密度值 AT:血清各组分蛋白光密度值之和
六、注意事项
薄膜的浸润是电泳成败的关键之一。 点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，但不宜太干。 点样时，动作要轻、稳，用力不能太大。 电泳时应选择合适的电压，一般稳压在为110 V。 通电时，不得接触槽内的缓冲液或CAM，以防触电。 电泳槽缓冲液的液面要保持一定的高度，同时电泳槽两侧的液面应保持 在同一水平，否则，通过薄膜时有虹吸现象，影响蛋白分子的泳动速度。
五、实验操作
1.实验准备： 1）醋酸纤维薄膜的准备
迎着光辨别醋酸纤维薄膜（CAM）的光面和毛面。 在毛面的一端1.5cm处，用直尺和铅笔轻划一横线，做 点样标记，并用铅笔标号。 将已经编号、标记的CAM膜以毛面朝下的方式浸入巴 比妥缓冲液中，浸泡30 min。
2）电泳装置的准备
电泳装置由电泳槽和稳压电源两部分组成，两者之间有 专门的连线连接。电泳槽的正负极各有一个装缓冲液的槽， 红色为正极，黑色为负极。 电泳槽置于水平台，两侧注入等量的巴比妥缓冲液，使其 在同一水平面。用双层纱布搭桥。
异常的血清蛋白电泳可见以下疾病：
4.急慢性肾炎 表现为a1、a2、和β三种球蛋白均增 高。
5.肾病 见于急慢性肾炎、肾病综合症、肾衰竭等。 表现为Alb降低、a2和β球蛋白升高。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清醋酸纤维素薄膜电泳一、目的要求1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。
2.了解猪血清蛋白质的各种成分。
3.熟悉猪血清中各种蛋白质相对含量的测定原理和方法。
4.熟悉分光光度计的工作原理及使用方法。
二、实验原理1.电泳的基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。
许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。
电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
电泳过程必须在一种支持介质中进行。
自由界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强，影响分离效果。
于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。
最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。
由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变，进而影响其电泳迁移的速度，所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行，缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。
2.醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜,待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。
本实验采用醋酸纤维素薄膜作为介质。
3.蛋白质蛋白质是由氨基酸组成的，其分子中除两端的游离氨基和羧基外，侧链中尚有一些解离基，作为带电颗粒它可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。
蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，又受所处溶液的pH影响。
当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告实验原理1. 电泳的基本原理带电颗粒在电场中向着与其电性相反方向移动的现象称为电泳。
电泳时不同的带电粒子在同一电场中泳动速度不同。
带电颗粒 ( 球形分子 ) 在电场中的电泳速度 (V )从上式看出，带电颗粒在电场中的移动速度 (V ) 与颗粒带电荷量 (Q ) 以及电场强度 (E ) 成正比，与球形分子的大小 ( 半径为 r ) 及所在介质的粘度(η) 成反比。
因此 , 在同一电场、同一介质中进行电泳时，带不同电荷，不同大小的颗粒就可以通过电泳而被分离。
在实际操作中，为了不考虑不同电压对电泳速度的影响，我们常用迁移率（ move rate,M ）来表示带电颗粒的电泳特性，迁移率指带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度，即可见，带电颗粒的净电荷越多，分子颗粒越小，在电场中的迁移率就越快；反之越慢。
但电泳速度和电泳迁移率是两个不同的概念，后者有利于不同电场强度下电泳结果的比较，各种带电颗粒在一定条件下测得的迁移率是一个常数。
2. 影响电泳的主要因素(1) 电泳介质pH 值的影响: 对于蛋白质和氨基酸等两性分子，电泳介质的pH 值影响蛋白质的电离情况，即可决定蛋白质的带电量 (Q ) 。
pH 值小于等电点，分子带正电荷，向负极泳动，如果 pH 大于等电点，分子带负电荷，向正极泳动。
pH 值偏离等电点越远，分子所带净电荷越多，其泳动速度越快。
当缓冲液 pH 等于其等电点时，分子处于等电状态，不移动。
由于血清蛋白质的等电点多在 pH4 ～ 6 之间，因此，分离血清蛋白常用 pH 8.6 的巴比妥缓冲液或三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 缓冲液。
(2) 缓冲液的离子强度 : 离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰；离子强度高，电泳速度慢，但区带分离清晰。
如离子强度过低，缓冲液的缓冲量小，不易维持 pH 的恒定；离子强度过高，则降低蛋白质的带电量 ( 压缩双电层 ) 使电泳速度减慢。
实验三、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
四、操作步骤：
1.浸膜：将裁好的醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中， 充分浸透后用镊子取出用两片滤纸吸干（约20min， 直到膜上没有斑点，中间没有气泡为止）。 2.点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约2cm处， 与边缘平行直线状点加3~5μL待分离血清。注意取 样适量、均匀；血清线位置适当，粗细均匀，不能 有明显扩散现象。
4.醋纤膜分离血清蛋白质的原理
醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作支 持物的一种电泳技术。 醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化形成的纤 维素醋酸酯，具有均一的泡沫状结构，渗透性强， 对分子移动阻力小，用它做区带电泳的支持物，用 样量少，分离清晰，对染料无吸附作用，应用范围 广，快速简便 ,且染色后的薄膜可用乙醇和冰醋酸 溶液浸泡透明，透明后的薄膜便于保存和定量分析。 因此，目前被广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红 蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。
是从正极向负极移动；
当pH距离PI越远时，所带电量越多。
2.电泳分离血清蛋白质的原理
血清蛋白质的等电点为4.8～7.5，均低于8.6，因此电泳 时常采用pH8.6的缓冲液。此时，蛋白质解离带负电荷，在 电场中向正极移动。 由于各种血清蛋白的等电点不同，在同一pH下带的电荷 数也不同，加上各蛋白质的分子大小也有差别，因此在电场 中的移动速度不同。 带电荷多、相对分子量小的蛋白质泳动较快，带电荷少、 相对分子量大的泳动较慢。 这样各种血清蛋白质在同一时间内泳动的距离就不同，从 而可将血清蛋白分离成数条区带。
电泳速度的方向：
正 极 F´
–
F
负 极
电泳速度的大小：当F=F'时，粒子在电场中匀速运动。
电场力 F=QE 摩擦力 F´= 6πrV
F= F´
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告实验报告：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量一、实验目的本实验旨在通过醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清中的蛋白质进行分离和定性，同时利用扫描仪对电泳条带进行定量分析，加深对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量的理解。
二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离方法，主要是利用电泳的原理将血清中的蛋白质进行分离并定性地鉴定。
其原理是基于各种蛋白质在电场中的迁移率不同，大小不同的蛋白质在电场的作用下，向正极或负极移动的速度也不同，从而将血清中的蛋白质分成不同的区带。
三、实验步骤1.准备试剂和仪器：醋酸纤维薄膜电泳试剂盒、电泳仪、醋酸纤维薄膜、玻璃板、移液器、注射器等。
2.配制试剂：按照醋酸纤维薄膜电泳试剂盒的说明书配制分离液、浓缩液和电极液等。
3.加样：将血清样品用移液器加到醋酸纤维薄膜上，控制加样量为5μL。
4.浸泡：将加好样的醋酸纤维薄膜放入分离液中浸泡10分钟，使其完全湿润。
5.电泳：将湿润的醋酸纤维薄膜放在玻璃板上，再覆盖上另一块玻璃板，然后将电泳槽装配好，接通电源进行电泳。
电泳时间和电压根据具体实验条件进行调整。
6.染色：电泳结束后，将醋酸纤维薄膜取出，放入染色液中染色10分钟，以便更好地观察蛋白质条带。
7.脱色：将染色后的醋酸纤维薄膜放入脱色液中脱色，直到背景清晰，蛋白质条带颜色较浅为止。
8.扫描定量：利用扫描仪对脱色后的醋酸纤维薄膜进行扫描，获取各蛋白质条带的OD值（吸光度），计算各蛋白质的相对含量。
四、实验结果通过醋酸纤维薄膜电泳，我们可以成功地将血清中的蛋白质分离成不同的条带。
从扫描结果中我们可以得到各条带的OD值，通过这些数据可以进一步计算出各蛋白质的相对含量。
以下是本实验的部分实验数据：OD值（吸光度）数据分析表：通过本次实验，我们成功地利用醋酸纤维薄膜电泳对血清中的蛋白质进行了分离和定性分析。
同时通过扫描定量，我们得到了各蛋白质条带的OD值以及相对含量。
最新三血清醋酸纤维素薄膜电泳
4、培养皿（泡膜、染色和漂洗用）
5、滤纸
6、镊子
7、试管、试管架、吸量管 8、分光光度计
（定量用）
操作步骤
1、薄膜准备 ①将醋酸纤维素薄膜切成2×8cm的小条。 ②在薄膜粗面一端1.5cm处用铅笔轻轻画一横线。 ③在薄膜角上用铅笔作一标记。 ④将醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中20min。
正常人约2-3%
操作流程
1、薄膜准备 2、电泳仪准备 3、点样 4、上槽 5、电泳 6、染色及漂洗
注意事项
1、最好选用同一批号、厚薄均匀、质量良好 的醋纤膜。
2、样品要新鲜。 3、点样要细窄、均匀、集中。 4、盐桥要平整。 5、电泳槽盖要密封。 6、室温不宜过高。
注意事项
7、选择合适的缓冲液离子强度。 8、两电泳槽内缓冲液面应在同一水平面。 9、要控制好电压、电流和电泳时间。 10、电泳槽内两极溶液要交替使用，操作时应
血清蛋白电泳
光密度扫描
乳酸脱氢酶同功酶电泳
同工酶：催化相同化学反应，而蛋白质分子结构不同的
一组酶。
乳酸脱氢酶
H 心肌型
M 骨骼型
HH HH
LDH1 (H4)
HH HM
LDH2 (H3M)
HH MM
LDH3 (H2M2)
HM MM
LDH4 (HM3)
MM MM
LDH5 (M4)
*生理及临床意义
同工酶谱的改变有助 于对疾病的诊断。
血浆蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱
电泳方向
－
＋
γ
β
α2 α1
A
纤维蛋白原
操作步骤
7、透明 薄膜完全干燥后，浸入透明液中20min后，
取出平贴在玻璃板上（不要留有气泡），完全 干燥后即成透明的薄膜图谱，要作扫描或照相 用。可长期保存。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
标题：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的：
1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理和方法。
2.了解血清蛋白质的组成和分布。
二、实验原理：
醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和鉴定蛋白质的方法。
其原理基于不同蛋白质分子在电场中的迁移率不同，从而实现对蛋白质的分离。
这种电泳方法具有快速、简便、分辨率高等优点。
三、实验步骤：
1.准备试剂和器材：醋酸纤维素薄膜、电极缓冲液、血清样
品、水浴锅、电泳仪、计时器、移液管、剪刀、镊子等。
2.加样：将适量血清样品用移液管加到醋酸纤维素薄膜上，
注意不要形成气泡。
3.电泳：将加好样的醋酸纤维素薄膜放入电泳仪中，接通电
源，开始电泳。
记录电泳时间和电流强度。
4.染色：电泳结束后，将醋酸纤维素薄膜取出，放入染色液
中染色。
5.观察和拍照：观察染色后的醋酸纤维素薄膜，记录各蛋白
带的颜色和位置。
用相机拍摄结果。
四、实验结果：
五、实验结论：
通过本次实验，我们成功地分离了血清中的各种蛋白质，并观察到了它们在醋酸纤维素薄膜上的分布情况。
实验结果表明，血清中含有白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等多种蛋白质。
这种方法有助于我们进一步了解血清蛋白质的组成和分布，为临床诊断和治疗提供参考。
同时，本实验也锻炼了我们实际操作的能力和对醋酸纤维素薄膜电泳原理的理解。
醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质
醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质生物化学实验醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质一、实验目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法二、实验原理蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、点样器；5、竹镊子；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温水浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、7220型分光光度计；13、剪刀四、实验试剂1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml 蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取乙醇45ml ，冰醋酸10ml ，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH 溶液；5、透明液：取冰醋酸25ml 、无水乙醇75ml ，混匀。
五、实验操作1、准备和点样取一条醋酸纤维薄膜，浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液；用玻棒蘸取少量血清，涂在点样器上，然后轻轻于距纤维薄膜一端1.5cm 处接触，样品即呈一条状突于纤维膜上。
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实验三血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
一、目的：
1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法
2、学会常用电泳的使用方法
3、了解用醋酸纤维薄膜作支持物的优点及使用范围
二、原理：
由于各种血清蛋白质的等电点不同，因此在pH8.6的缓冲液中，各种血清蛋白质所带电荷量不同，同时由于它们的分子量也不同，造成电泳迁移率不同，所以在醋酸纤维薄膜上，电泳后，可将各种血清蛋白质分离开。
三、器材：
醋酸纤维薄膜（2×8cm）、电泳仪、点样器（盖玻片）、培养皿、粗滤纸、玻璃板（载玻片）、镊子等。
四、试剂：
巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07。
巴比妥钠12.7g、巴比妥1.66g于蒸馏水中加热溶解后再加水至1000ml）
氨基黑染色液（氯基黑10B0.5g、甲醇50ml、冰醋酸10ml、蒸馏水10ml）
漂洗液（95％乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸馏水50ml）
血清
五、操作：
1、识别标记：将薄膜切成2.5×8cm的小片。
在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm处用铅笔划一线，以标明点样位置。
2、浸泡：用镊子将薄膜无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上(缓冲液盛于培养皿中)，使膜条自然浸湿下沉。
大约10min。
3、点样：取出薄膜，用滤纸将表面的明水吸干，然后平铺在载玻片上（无光泽面朝上），将盖玻片先在小培养皿中的血清中沾一下，再在距膜条一端2cm处轻轻地水平落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
4、电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上（先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲溶液内。
用缓冲溶液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥）。
点样端靠近负极，盖严电泳室，160V，45min。
5、染色：将膜条取出，放在显色液中显色10min。
6、漂洗：将膜条放在漂洗液中漂洗数次，至底色脱净为止，可得到清晰电泳图谱。
六、注意事项：
1、点样要少、轻、直、匀
2、不要将薄膜吸得过干
3、漂洗时不要用镊子来回拉动
4、节约漂洗液
七、结果与分析：
将图谱画在报告纸上，注明各种蛋白顺序，并分析结果。