小鼠巨噬细胞功能的检测
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定,实验报告（共2篇）
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定,实验报告(共2篇)实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察姓名：李思露学号：131140040一、实验目的1. 通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程；2. 了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法二、实验原理吞噬作用也称为胞吞作用（cellular eating），指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质（直径一般大于250mm）的过程。
许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。
不同动物来源的巨噬细胞或同一动物来源的不同巨噬细胞吞噬功能强弱不同，个体吞噬细胞的平均吞噬能力是机体非特异性免疫功能强弱的重要反映。
吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。
内吞内吞体吞噬溶酶体胞吐巨噬细胞吞噬自身衰老凋亡细胞而不吞噬正常细胞，原因是，凋亡细胞细胞膜内侧面的磷脂酰丝氨酸反转到胞膜外侧面而被巨噬细胞模式识别受体识别。
吞噬功能一般用吞噬百分率和吞噬指数两个指标反映。
吞噬百分率＝吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100％吞噬指数＝吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数三、实验材料、试剂及器材（一）材料：1. 健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，每只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL。
2. 抗凝鸡血（二）试剂:1. 4%淀粉肉汤2. D-Hanks液3. 0.85％生理盐水4. 180IU/mL肝素钠生理盐水溶液（三）用品普通光学显微镜、10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃）、5mL一次性注射器、10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等四、实验操作1. 巨噬细胞收集：脱颈处死小鼠；腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤，暴露腹膜；用带(转载于: 写论文网:)针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。
免疫学实验10 小鼠巨噬细胞功能测定
1.实试验的方法。
2.实验原理
巨噬细胞具有吞噬、分泌和参与免疫应答的各种 功能，是机体免疫水平和功能的重要指标，与抗肿瘤免 疫也有重要关系。本试验将鸡红细胞注入小鼠腹腔时， 会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。取小鼠腹腔液涂片、染色 ，在显微镜下观察可见鸡红细胞被吞噬的现象。计算吞 噬百分率和吞噬指数，可判断巨噬细胞的吞噬功能，据 此可判断机体的非特异性免疫水平。
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的巨噬细胞
5.注意事项
（1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。 （2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。 （3）如小鼠腹腔液过少，可腹腔注入适量Hank’s液揉动 后再取。 （4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。 （5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未 被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。
（5）提起腹前壁，避开血管剪一小口，用毛细吸管吹吸 混匀腹腔内液体，并收集于试管内。 （6）在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液制作涂片 。待涂 片晾干后，瑞氏染液染色5min。 （7）结果判断：高倍镜/油镜下镜检。镜下可见巨噬细胞 核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核 被染成蓝色。计数巨噬细胞吞噬鸡红细胞情况，计算吞噬百 分率和吞噬指数。 ①吞噬百分率：即100个巨噬细胞中吞噬有鸡红细胞的 巨噬细胞数。 ②吞噬指数：将100个巨噬细胞中所吞噬的鸡红细胞 总数除以100即得吞噬指数，即平均每个巨噬细胞吞噬的鸡 红细胞数。
3.实验器材
（1） 器具：注射器、离心管、载玻片、平皿、烧 杯、橡皮乳头、解剖剪和镊子、解剖盘。 （2） 材料：Hank’s液、6%淀粉肉汤液、瑞氏染 色液、 1%鸡红细胞悬液、 小鼠。
4.实验方法（小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能体内测定法）
巨噬细胞吞噬细胞功能实验
实验一巨噬细胞吞噬细胞功能实验原理：巨噬细胞具有活跃的吞噬功能，能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。
巨噬细胞受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。
此次实验我们用体内法来介绍巨噬细胞的吞噬功能。
体内法：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美兰染色，显微镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞内被杀死而染为紫色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
方法：（1）试验前3天，小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使鸡红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用滴管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴0.06%冷美兰溶液，盖上盖玻片（4）高倍镜下进行观察，计数。
实验结果：100个巨噬细胞中已吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞的数目吞噬百分率 = ———————————————————×100%100个巨噬细胞100个已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞中鸡红细胞的数目吞噬指数 = ———————————————————×100%100个已经吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞结果分析：正常值吞噬百分率：62.77±1.38吞噬指数：1.058±0.049我们的实验结果偏低，原因可能是腹腔注射时没有完全注射到腹腔内，部分残留在腹腔壁上。
实验二沉淀反应（双向琼脂扩散实验）原理：双向琼脂扩散试验是定性实验。
将可溶性抗原与相应抗体与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
如果不是相应的抗原与抗体，就不出现沉淀线。
本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。
方法：（1）将熔化的1%琼脂加在玻片上，3ml/板。
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
巨噬细胞的实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本生物学特性；2. 掌握巨噬细胞吞噬功能实验的操作方法；3. 分析巨噬细胞吞噬功能的影响因素。
二、实验原理巨噬细胞是免疫系统中的一种重要细胞，具有吞噬、清除病原体、分泌细胞因子等生物学功能。
本实验通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠；2. 实验试剂：鸡红细胞、生理盐水、冷亚甲蓝染色液、培养皿、显微镜、移液器等。
四、实验方法1. 实验动物处理：取健康小鼠，腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导腹腔巨噬细胞产生。
2. 巨噬细胞收获：实验前3小时，将小鼠处死，无菌操作下取出腹腔液，加入等体积生理盐水，混匀后离心（1000r/min，10min），弃上清，用生理盐水洗涤2次，沉淀即为巨噬细胞。
3. 巨噬细胞吞噬实验：将收获的巨噬细胞加入培养皿中，加入适量鸡红细胞，37℃培养1小时。
4. 巨噬细胞染色：将培养好的巨噬细胞加入冷亚甲蓝染色液，染色5分钟。
5. 巨噬细胞观察：用显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，计算吞噬百分率和吞噬指数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，部分鸡红细胞被吞噬细胞包裹。
2. 实验分析：（1）吞噬百分率：吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100%；（2）吞噬指数：吞噬的鸡红细胞总数/吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数。
六、实验结论本实验成功观察到了巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，说明巨噬细胞具有吞噬功能。
吞噬百分率和吞噬指数可以作为评估巨噬细胞吞噬功能的重要指标。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在免疫系统中具有重要作用，吞噬功能是其重要生物学特性之一。
2. 本实验采用腹腔巨噬细胞，操作简便，结果可靠。
3. 影响巨噬细胞吞噬功能的主要因素包括：巨噬细胞的来源、成熟度、环境因素等。
4. 本实验为后续研究巨噬细胞吞噬功能的影响因素提供了基础。
八、实验总结本实验通过观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，成功评估了巨噬细胞的吞噬功能。
小鼠腹腔巨噬细胞原代培养实验具体步骤及方法
小鼠腹腔巨噬细胞原代培养实验具体步骤及方法巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。
巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。
巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周，多用做原代培养，难以长期生存。
步骤一、实验材料准备1. 动物：各个品系的小鼠2-4只。
2. 试剂：RPMI1640培养基(含酚红)，小牛血清，双抗，培养液(10%小牛血清、RPMI1640、双抗)，台盼兰等。
碘酒绵球和酒精绵球。
3. 器械：一次性注射器、手术器械。
二、实验方法如果采用刺激物，则可在实验前三天腹腔注射3%巯基乙醇酸钠每只2 mL，获得的巨噬细胞数要多一些。
不采用刺激物，直接开始下面的步骤。
1. 拉颈处死小鼠，在75%酒精浸泡1-2分钟，移入超净台中，仰卧位固定于解剖板上，碘酒消毒腹部皮肤，酒精绵球脱碘。
用手术直剪充分剪开腹部皮肤，暴露腹部肌层，再用酒精绵球消毒腹部肌层。
2. 用注射器抽取5 mL含双抗的RPMI1640培养基注入腹腔，用绵球轻揉腹部1-2 min，然后，用眼科镊稍提起腹腔，并用眼科剪剪开一个小口，用吸管吸取细胞悬液，移入离心管中(个人认为，此法比用注射器抽吸好一些)。
3. 1 000 rpm离心5 min后，用含双抗的RPMI1640培养基洗涤一次，再次离心，重悬细胞于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中，如果是作为饲养细胞使用，则选择相应的培养液。
台盼蓝拒染法计数，将细胞稀释到目的浓度后，接种即可。
4. 如果是作为饲养细胞使用，调整浓度至2x105个/mL，接种到96孔板中，每孔100-200 uL；如果作为其它实验使用，可以调整成2x106/mL，加到24孔平底培养板中，1 mL/孔；5% CO2温箱孵育2 h后，换液，并用RPMI1640培养基洗1-2次，弃去未粘附细胞，贴壁细胞为单层的巨噬细胞。
三、结果巨噬细胞刚贴壁时偏圆形，或者类似鹅卵石形状，然后慢慢伸出伪足，铺开呈三角形或多角形。
小鼠巨噬细胞功能的检测
小鼠巨噬细胞功能的检测伍国强（兰州大学草业学院兰州730020）摘要：本实验用CFA免疫小鼠后，检测小鼠腹腔巨噬细胞的数目以及用中性红检测巨噬细胞的吞噬能力。
结果表明，免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的数目和吞噬能力均有所提高。
关键词：巨噬细胞；功能；检测1 前言巨噬细胞是一种多功能免疫细胞,在机体的特异性和非特异性免疫反应中发挥重要功能。
主要作用有：（1）吞噬杀伤作用：直接吞噬、调理吞噬作用。
（2）抗原提呈作用：即外来的抗原性异物通过巨噬细胞的捕获、加工和处理后，与胞内合成的MHC-1/II类分子形成抗原肽－MHC分子复合物，并被呈递到细胞膜表面，被TCR 识别的作用。
具有此作用的细胞叫抗原呈递细胞（antigen presenting cell,APC)。
此外，巨噬细胞表面还表达多种共刺激分子，如B7、ICAM-1、LFA-1,3等分别与T细胞上的CD28、LFA -1(CD11)、LFA-2(CD2)等相互作用，为T细胞的活化提供第二信号。
（3）抗肿瘤作用：Mφ被某些细胞因子如IFN-γ激活后能有效杀伤肿瘤等靶细胞，其吞噬杀菌能力也显著提高。
（4）分泌生物活性介质，产生免疫应答和其它免疫效应：如IL-1,12、IFN、TNF、PGE等;以及某些补体成份和凝血因子、组织修复因子等。
为了检测巨噬细胞的吞噬功能，我们用CFA免疫的小白鼠作为实验材料检测其腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。
2 材料与方法2．1 材料2．1．1 药品：生理盐水、0.6%环磷酰胺、Hank’s溶液、1640培养基、细胞裂解液、中性红等。
2．1．2 仪器：血球计数板、细胞培养箱、分光光度计等。
2．1．3 动物：小白鼠2只，由兰大医学院动物实验中心提供。
2.2、方法2．2．1 小鼠腹腔巨噬细胞制备取小白鼠2只，分为对照组和实验组，对照组注射0.1ml生理盐水，试验组注射0.1mlcFA。
48小时后，小鼠眼眶放血，断颈处死。
腹腔注射3ml预冷的生理盐水。
吞噬活性检测实验报告
一、实验背景吞噬活性是机体免疫系统中的重要功能之一，主要由巨噬细胞等免疫细胞执行。
吞噬活性检测对于研究免疫细胞的生物学特性、疾病诊断及药物研发具有重要意义。
本实验旨在通过体外实验方法，检测巨噬细胞的吞噬活性，并分析影响吞噬活性的因素。
二、实验材料与仪器1. 材料：（1）小鼠巨噬细胞：购自某生物技术公司；（2）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）：购自某微生物菌种保藏中心；（3）生理盐水、PBS缓冲液、DMEM培养基等；（4）台盼蓝染液、二甲基亚砜（DMSO）等；（5）激光共聚焦显微镜、倒置显微镜、流式细胞仪等。
2. 仪器：（1）CO2培养箱；（2）低温高速离心机；（3）超净工作台；（4）电子天平；（5）移液器、吸管等。
三、实验方法1. 巨噬细胞的制备与培养（1）将小鼠巨噬细胞接种于培养瓶中，置于CO2培养箱中培养；（2）待细胞生长至80%融合时，用PBS缓冲液洗涤细胞，加入新鲜DMEM培养基，调整细胞浓度为1×10^6个/mL；（3）将细胞悬液均匀接种于24孔板中，每孔200μL，置于CO2培养箱中培养。
2. 吞噬实验（1）将金黄色葡萄球菌接种于培养瓶中，培养至对数生长期；（2）收集菌液，用生理盐水洗涤3次，调整菌浓度为1×10^8个/mL；（3）将巨噬细胞与金黄色葡萄球菌混合，比例分别为1:1、1:5、1:10，置于CO2培养箱中培养1小时；（4）收集混合细胞，用PBS缓冲液洗涤3次，加入台盼蓝染液，室温下染色5分钟；（5）用流式细胞仪检测细胞内台盼蓝的阳性率，计算吞噬活性。
3. 影响吞噬活性的因素分析（1）观察不同温度（37℃、42℃、45℃）对吞噬活性的影响；（2）观察不同pH值（pH 6.5、7.0、7.5）对吞噬活性的影响；（3）观察不同细胞浓度对吞噬活性的影响。
四、实验结果1. 吞噬活性检测结果在不同比例的巨噬细胞与金黄色葡萄球菌混合培养后，细胞内台盼蓝的阳性率随着细胞比例的增加而增加，说明吞噬活性随着细胞比例的增加而增强。
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小鼠巨噬细胞功能的检测
伍国强
（兰州大学草业学院兰州730020）
摘要：本实验用CFA免疫小鼠后，检测小鼠腹腔巨噬细胞的数目以及用中性红检测巨噬细胞的吞噬能力。
结果表明，免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的数目和吞噬能力均有所提高。
关键词：巨噬细胞；功能；检测
1 前言
巨噬细胞是一种多功能免疫细胞,在机体的特异性和非特异性免疫反应中发挥重要功能。
主要作用有：（1）吞噬杀伤作用：直接吞噬、调理吞噬作用。
（2）抗原提呈作用：即外来的抗原性异物通过巨噬细胞的捕获、加工和处理后，与胞内合成的MHC-1/II类分子形成抗原肽－MHC分子复合物，并被呈递到细胞膜表面，被TCR 识别的作用。
具有此作用的细胞叫抗原呈递细胞（antigen presenting cell,APC)。
此外，巨噬细胞表面还表达多种共刺激分子，如B7、ICAM-1、LFA-1,3等分别与T细胞上的CD28、LFA -1(CD11)、LFA-2(CD2)等相互作用，为T细胞的活化提供第二信号。
（3）抗肿瘤作用：Mφ被某些细胞因子如IFN-γ激活后能有效杀伤肿瘤等靶细胞，其吞噬杀菌能力也显著提高。
（4）分泌生物活性介质，产生免疫应答和其它免疫效应：如
IL-1,12、IFN、TNF、PGE等;以及某些补体成份和凝血因子、组织修复因子等。
为了检测巨噬细胞的吞噬功能，我们用CFA免疫的小白鼠作为实验材料检测其腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。
2 材料与方法
2．1 材料
2．1．1 药品：生理盐水、0.6%环磷酰胺、Hank’s溶液、1640培养基、细胞裂解液、中性红等。
2．1．2 仪器：血球计数板、细胞培养箱、分光光度计等。
2．1．3 动物：小白鼠2只，由兰大医学院动物实验中心提供。
2.2、方法
2．2．1 小鼠腹腔巨噬细胞制备取小白鼠2只，分为对照组和实验组，对照组注射0.1ml生理盐水，试验组注射0.1mlcFA。
48小时后，小鼠眼眶放血，断颈处死。
腹腔注射3ml预冷的生理盐水。
吸取腹腔渗出液5ml离心管（冰浴）。
1600rpm离心10
分钟，弃上清，4℃生理盐水定容至5ml。
血球计数板镜下巨噬细胞计数。
用生理盐水调mΦ浓度为1×106，取4ml 1600rpm 离心10分钟，弃上清加4ml 1640定悬。
将mΦ加入24孔板，每组4孔，每孔1ml。
37℃，5%CO2细胞培养箱贴壁培养纯化2小时。
2．2．2 巨噬细胞吞噬中性红试验将贴壁纯化好的mΦ弃1640培养液，对照孔加0.5ml生理盐水，其余每孔加0.5ml0.075%中性红,继续培养1小时。
倾去上清液,用温PBS 洗细胞3 次,每孔加入细胞溶解液(为体积分数50 %的乙酸和体积分数50 %的无水乙醇) 2ml ,室温下放置30分钟,待细胞溶解后,即用分光光度计测定OD值。
以OD 值表示巨噬细胞功能的强弱。
3 结果与讨论表：mΦ的浓度及吸光值
mΦ细胞个数mΦ浓度
（个/ml)
0D值
对照组256 6.4×105 0.252
试验组2176 5.44×106 0.283
3．1 免疫小鼠腹腔巨噬细胞浓度从上表可以看出，用cFA免疫的小鼠腹腔巨噬
细胞浓度较对照大，说明了CFA可以刺激巨噬细胞的大量产生。
3．2 免疫小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能增从上表可以看出，试验组的OD值较对照高，说明了免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬能力增强了。