纸片法药敏试验相关知识
纸片扩散法药敏试验
纸片扩散法药敏试验一、原理纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。
在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。
不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小。
二、进行药敏实验指征为保证治疗效果，对引起感染的任何病原菌，若不能从该菌的种属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。
尤其当病原菌属于对常用抗菌药物能产生耐药时，就更需进行药敏试验。
若感染是公认的对某一高效抗菌药物敏感的微生物引起的，就很少需要进行药敏试验了。
三、标本要求参加药敏试验的菌株包括从临床标本中分离的常见的、快生长的菌株，如肠杆菌科菌、葡萄球菌、肠球菌、非发酵糖菌；还包括某些苛养的病原菌，如流感嗜血杆菌、肺炎链球菌及其他链球菌、淋病奈瑟菌等。
标本内的正常菌群，通常不作药敏。
对每一种可能致病的细菌进行敏感试验时，使用的单个菌落都应选自原始的琼脂平板，鉴定种属的过程常与此同时进行。
不同菌种的混合物不能在同一药敏平皿上进行试验。
除非在临床急症患者的标本（如阳性血培养物）经涂片革兰染色提示单一的病原菌，一般应避免直接用临床标本（如无菌体液和尿液）做药敏试验。
若用临床标本作了直接药敏试验，也必须按标准方法重复第二次药敏。
四、选药原则详见临床实验室标准化研究所（CLSI）对各种非苛养菌和苛养菌进行常规药敏试验和报告时的选药指南表。
表中的抗菌药物可满足绝大多数临床实验室的常规需要，在此表中各种抗菌药物针对具体的菌种或菌群被分成许多纵列，每一列又根据不同的选择要求分成A、B、C、U等不同的组，其中A组药物用于常规和首选试验，其结果也应常规报告。
药敏试验
判定标准
清晰无细菌生长的试管对应的药物浓度为该药
的MIC；
以MIC前2支试管液体涂培养基
培养 菌落少于5个的试管对应的药物浓度为该 药的MBC。
试 材
试管、移液管、营养琼脂和营养肉汤
方 法
（1）制备药液、菌液、培养基; （2）向第1支试管中加入0.9mL营养肉汤、其 余各试管中加入0.5mL； （3）向第1支试管中加0.1mL药液 取0.5mL 加到第2支试管中……至13支试管，取0.5mL涂 平板 向1-14试管中各加0.5mL菌液 培养。
耐药：直径＜10mm液、牛津杯、钢管放置器、陶瓦盖 步 骤 （1）制备菌液：106-7 （2）制备药液：1280μg/mL （3）制备培养基 （4）涂菌液 （5）放置牛津杯 （6）加菌液 （7）盖陶瓦盖 （8）培养 （9）量直径
三、液体试管二倍稀释法
药敏实验
一、药敏纸片法
试 材
培养皿、培养基、菌种（病料）、药敏片、 培养箱
方 法
（1）制备药敏片 （2）制备培养基：营养琼脂、营养肉汤 （3）涂菌：菌液105 CFU （4）贴药敏片 （5）培养:37℃ 24小时 （6）量直径：
判定标准
敏感：直径＞15mm
中度敏感： 10~15mm
纸片扩散法药敏试验(KB法)
纸片扩散法药敏试验(KB法)纸片扩散法药敏试验，又称为KB法，是一种广泛应用于临床微生物实验室的抗生素敏感性检测方法。
通过该方法，可以快速、准确地评估病原菌对抗生素的敏感性，为临床医生提供治疗选择的依据。
纸片扩散法药敏试验的基本原理是将含有定量抗生素的纸片贴在接种有病原菌的培养基上，抗生素在培养基中扩散形成浓度梯度，抑制病原菌的生长。
通过测量纸片周围形成的抑菌圈直径，可以判断病原菌对抗生素的敏感性。
抑菌圈直径越大，表示病原菌对该抗生素越敏感。
纸片扩散法药敏试验具有操作简便、成本低廉、结果易于判读等优点，是目前临床上使用最广泛的药敏试验方法之一。
然而，该方法也存在一定的局限性，如受环境因素影响较大，结果受操作人员技术熟练程度影响等。
1. 选择合适的培养基：纸片扩散法药敏试验需要使用含有适量营养物质的培养基，以保证病原菌的生长。
2. 控制接种量：接种量过多或过少都会影响试验结果，因此需要严格控制接种量。
3. 选择合适的抗生素纸片：根据病原菌的种类和临床需求，选择合适的抗生素纸片进行试验。
4. 观察抑菌圈：在规定时间内观察抑菌圈的形成情况，测量抑菌圈直径，判断病原菌对抗生素的敏感性。
5. 结果报告：根据抑菌圈直径，按照相应的标准判断病原菌对抗生素的敏感性，并将结果报告给临床医生。
纸片扩散法药敏试验(KB法)是一种简单、实用的抗生素敏感性检测方法，在临床微生物实验室中具有广泛的应用。
通过规范操作，可以提高试验结果的准确性，为临床治疗提供有力支持。
纸片扩散法药敏试验(KB法)的进一步探讨我们需要了解KB法的基本操作步骤。
将含有特定抗生素的纸片贴在已经接种了细菌的琼脂平板上。
随着时间的推移，抗生素会从纸片中扩散到琼脂中，形成抗生素浓度梯度。
如果细菌对该抗生素敏感，那么在纸片周围就会形成一个无细菌生长的区域，即抑菌圈。
抑菌圈的大小与抗生素的浓度和细菌的敏感性有关。
KB法的准确性受到多种因素的影响。
纸片的抗生素含量必须准确，以保证试验的重复性。
药敏试验纸片扩散法操作步骤
药敏试验纸片扩散法操作步骤
药敏试验纸片扩散法是一种常用的检测细菌对抗生素敏感性的方法，其操作步骤如下：
1. 准备培养基：根据需要选择合适的培养基，如Mueller-Hinton（MH）琼脂（常用于细菌药敏试验）。
按照制造商的
说明溶解固体培养基，并加入适当量的琼脂（通常为2%），
将其加热溶解，然后用无菌盘口装好。
2. 菌液制备：从培养基上的细菌菌落中接种一根病菌棒，将其浸入含有3-5毫升无菌盐水的试管中。
3. 菌液浓度调整：将试管中的细菌菌液用比例稀释至合适的浓度（通常为0.5麦克百尼尔/毫升）。
4. 纸片扩散：用无菌的棉签将稀释后的菌液均匀地涂抹在一块布拉格琼脂平板上，然后在琼脂上按要求摆放敏感纸片（一般为阿莫西林、头孢菌素等常用抗生素），注意要与纸片相距一定距离。
5. 培养：将布拉格琼脂平板反面朝上，用无菌培养皿盖好，然后放入恒温培养箱中进行孵育。
通常在35-37°C条件下培养
24小时。
6. 结果录入和解读：观察纸片周围的细菌生长情况，通过测量纸片周围形成的抑制圈直径来评估细菌对不同抗生素的敏感性。
根据抑制圈的直径大小，将细菌的敏感性分为敏感、中等和耐
药三个等级。
注意事项：
- 操作过程需要严格无菌，以免细菌的外源污染影响结果。
- 确保培养皿紧闭，避免细菌的空气传播。
- 操作前后要做好清洁，避免微生物交叉感染。
- 移栽过程要注意避光，避免紫外线对细胞的破坏。
实验6：纸片扩散法测定微生物的药敏性
实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro（圆盘滤纸片法disc diffusion test）一、实验目的：1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。
凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。
原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。
不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。
应用前需进行试验，灵活选择。
三、实验器材1、菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。
2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。
四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）（1）菌液制备：将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。
以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。
（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。
（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）（3）涂平板：无菌操作，用无菌棉棒儿蘸取菌液（金葡）。
将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
kb纸片法药敏实验名词解释
kb纸片法药敏实验名词解释
KB纸片法是一种常见的药敏实验方法，用于测试细菌对抗生素的敏感性。
这项实验通常用于临床医学和微生物学领域。
下面我将从多个角度来解释这些名词。
首先，KB纸片法是指Kirby-Bauer纸片法，是一种半定量的抗生素敏感试验方法。
在这个方法中，细菌培养物被均匀涂布在琼脂平板上，然后在表面放置含有不同抗生素的纸片。
细菌在培养基上生长形成菌落，如果细菌对某种抗生素敏感，它们就不会在靠近含有该抗生素的纸片的区域生长，形成所谓的抑制圈。
通过测量这些抑制圈的直径，可以判断细菌对抗生素的敏感性。
其次，药敏实验是指药物敏感性试验，用于评估细菌或其他微生物对抗生素或其他药物的敏感性。
这项实验对于选择治疗感染性疾病的最佳药物非常重要，因为它可以帮助医生确定哪种药物对特定的病原体最有效。
综上所述，KB纸片法药敏实验是一种通过测量细菌对抗生素的敏感性来评估药物治疗效果的方法，它在临床医学和微生物学领域有着广泛的应用。
希望这些解释能够帮助你更好地理解这些名词。
纸片扩散法药敏试验原理
纸片扩散法药敏试验原理
嘿，朋友们！今天咱来唠唠纸片扩散法药敏试验原理这档子事儿。
你说这药敏试验就像是一场细菌和药物的大作战！咱得想办法知道哪种药物能把那些捣乱的细菌给收拾得服服帖帖呀。
想象一下，咱把含有药物的小纸片就像一个个小战士一样，整整齐齐地放在涂满了细菌的培养基上。
这些小纸片就开始发挥它们的魔力啦！药物会从纸片里慢慢扩散出来，就像孙悟空画的那个圈圈一样，形成一个药物浓度逐渐变化的区域。
这时候细菌们可就面临考验啦！有的细菌比较弱，一碰到稍微厉害点的药物浓度就不行啦，直接被打败，这周围就变得干干净净，没它们的影儿啦。
可有的细菌比较顽固，还能在药物浓度不那么高的地方顽强抵抗呢。
这不就跟咱生活中一样嘛，遇到困难有的人一下子就被打倒了，有的人还能撑一会儿。
那通过观察这些小纸片周围细菌的生长情况，咱不就清楚哪种药物对这些细菌最有效啦！这多重要啊，就像医生治病得找对药一样，不然那不就白折腾啦！
你看，这纸片扩散法药敏试验不就是这么个道理嘛！它就像是一个神奇的魔法，能帮我们找到制服细菌的法宝。
而且操作起来也不难呀，只要咱细心点，按照步骤来，就能得到准确的结果。
咱可别小瞧了这个试验，它可是为了咱的健康保驾护航呢！医生们能根据这个结果来给病人开药，让病人能快点好起来。
这就像是在黑暗中找到了一盏明灯，给人指明了方向。
所以啊，这纸片扩散法药敏试验原理真的是太实用啦！它就像一个默默无闻的英雄，在背后为我们的健康默默付出呢！大家说是不是呀！。
细菌药敏试验
【试验意义】
2 药敏试验的意义 • 1. 可预测抗菌治疗的效果 • 2. 指导临床选择使用抗生素。 • 3. 提供所选择药物的依据； • 4. 监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握
耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐 药菌感染的发生和流行。
【实验材料 】
1.菌种：大肠杆菌肉汤培养物 1 管/组
2.各种药敏片：市售商品药敏片（或自制）1套 （4～5种）/人。
[问题与思考]
• 1.纸片药敏试验操作时应注意哪些事项? • 2.试述纸片扩散法药敏试验的原理及临床
意义。 • 3.纸片药敏试验的步骤及结果判定是什么？
≥18
≤14
15～17
≥18
≤12
13～17
≥18
≤13
13-15
≥18
≤12
13～14
≥15
【注意事项 】
• 影响因素药敏试验结果的因素 1、培养基：培养基质量和pH值。pH过低会导致
氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活 力增强 。 2、药敏纸片的质量，含药量和保存方式 3、接种菌量。 4、试验操作质量：接种细菌后贴片时5～15 分钟； 5、培养时间：不超过24 h 。
细菌药敏试验 （纸片扩散法）
【学习目标】
1.掌握药敏试验的基本原理。 2.掌握药敏试验-纸片法的操作方法及判定。
3.了解药敏试验在实际生产中的指导意义。
【试验原理】
• 1 纸片扩散法原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的 琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水 分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的 梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生 长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。 并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关 关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
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纸片法药敏试验相关数据
表一纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释（肠杆菌科、铜绿假单胞菌）抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm)
耐药中介敏感青霉素G 10unit ≤28 －≥29
氨苄青霉素30ug ≤13 14～16 ≥17
苯唑青霉素1ug ≤10 11～12 ≥13
氧哌嗪青霉素100ug ≤17 －≥18
先锋Ⅵ* 30ug ≤14 15~17 ≥18
先锋Ⅴ30ug ≤14 15~17 ≥18
复达欣30ug ≤14 15～17 ≥18
阿莫西林* 100ug ≤19 20～22 ≥23
氨苄西林/舒巴坦10/10ug ≤11 12～14 ≥15
丁胺卡那霉素30ug ≤14 15～16 ≥17
庆大霉素10ug ≤12 13～14 ≥15
复方新诺明 1.25/23.75ug ≤10 11～15 ≥16
万古霉素* 30ug －－≥17
诺氟沙星10ug ≤12 13～16 ≥17
安灭菌20/10ug ≤13 14～17 ≥18
克林霉素2ug ≤14 15～20 ≥21
克拉霉素15ug ≤13 14～22 ≥23
氯霉素30ug ≤12 13～17 ≥18 表二纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释（葡萄球菌）抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm)
耐药中介敏感青霉素G 10unit ≤28 －≥29
氨苄青霉素30ug ≤28 －≥29
苯唑青霉素1ug ≤10 11～12 ≥13
氧哌嗪青霉素100ug ≤17 －≥18
先锋Ⅵ* 30ug ≤14 15~17 ≥18
先锋Ⅴ30ug ≤14 15~17 ≥18
复达欣30ug ≤14 15～17 ≥18
阿莫西林* 100ug ≤19 20～22 ≥23
氨苄西林/舒巴坦10/10ug ≤11 12～14 ≥15
丁胺卡那霉素30ug ≤14 15～16 ≥17
庆大霉素10ug ≤12 13～14 ≥15
复方新诺明 1.25/23.75ug ≤10 11～15 ≥16
万古霉素30ug －－≥15
诺氟沙星10ug ≤12 13～16 ≥17
安灭菌20/10ug ≤19 －≥20
克林霉素2ug ≤14 15～20 ≥21
克拉霉素15ug ≤13 14～17 ≥18
氯霉素30ug ≤12 13～17 ≥18
表三标准菌株的抑菌环质量控制范围
抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm)
大肠埃希菌ATCC25922
金葡菌
ATCC25923
绿脓杆菌
ATCC27853
青霉素G 10unit －26～37 －
氨苄青霉素30ug 16～22 27～35 －
苯唑青霉素1ug －18～24 －
氧哌嗪青霉素100ug 24～30 －25～33 先锋Ⅵ* 30ug 23～29 29～35 －
先锋Ⅴ30ug 23～29 29～35 －
复达欣30ug 16～20 25～32 22～29 阿莫西林* 100ug 23～29 －18～24 氨苄西林/舒巴坦10/10ug 20～24 29～37 －
丁胺卡那霉素30ug 29～26 20～26 18～26 庆大霉素10ug 19～26 19～27 16～21 复方新诺明 1.25/23.75ug 24～32 24～32 －
万古霉素30ug －17～21 －
诺氟沙星10ug 28～35 17～28 22～29 安灭菌* 20/10ug 25～29 29～37 20～28 克林霉素2ug －24～30 －
克拉霉素15ug －26~32 －
氯霉素30ug 21～27 19～26 －
表四药敏试验相关抗生素名称及缩写
商品名化学名（别名）英文缩写
阿米卡星丁胺卡那霉素AMK
庆大霉素庆大霉素GEN
青霉素青霉素G、盘尼西林PEN
氨苄西林氨苄青霉素AMP
哌拉西林氧哌嗪青霉素PIP
苯唑西林苯唑青霉素OXA
阿莫西林羧氨苄青霉素AZL
先锋霉素Ⅵ头孢拉啶CE
先锋Ⅴ头孢唑啉CFZ
复达欣头孢他啶CAZ
优立欣氨苄西林/舒巴坦AMS
万古霉素万古霉素V AN
诺氟沙星氟哌酸NOR
欣弗克林霉素CLI
克拉霉素克拉红霉素CLA
安灭菌阿莫西林/克拉维酸钾AMC
氯霉素氯霉素CAP
复方新诺明复方磺胺(TMP/SMZ) SXT。