效价测定的基本方法
实验二PMSG生物效价测定
药品与试剂
PMSG（孕马血清促性腺激素）
01
购自某生物科技公司，规格为1000IU/支，用生理盐水稀释至所
需浓度。
生理盐水
02
用于稀释PMSG和注射使用。
乙醇
03
用于消毒实验器具和动物皮肤。
实验方法与步骤
动物处理
药品注射
观察记录
数据处理
实验前对小鼠进行适应性饲 养，保持环境安静、温度适 宜、自由摄食和饮水。实验
深入了解PMSG
通过生物效价的测定，可以进一步了 解PMSG的生理作用、药代动力学特 性以及与其他生物活性物质的相互作 用。
实验原理
生物效价定义
生物效价是指某一生物活性物质与标准品或参照物质相比 较，在特定生物系统中引起相同生物效应的相对能力。
PMSG生物效价测定方法
本实验采用小鼠超排卵实验方法，通过给小鼠注射不同剂 量的PMSG，观察并记录小鼠的排卵数和黄体数，进而计 算PMSG的生物效价。
生物效价。
03 实验结果与分析
CHAPTER
数据处理与统计方法
数据清洗
统计分析
去除异常值、重复数据等，保证数据 质量。
采用t检验、方差分析等统计方法，比 较不同处理组间的差异显著性。
数据转换
对数据进行标准化或归一化处理，消 除量纲影响。
结果展示与解读
01
02
03
表格展示
将实验数据整理成表格， 包括处理组、对照组、平 均值、标准差等关键信息。
实验二pmsg生物效价测定
目录
CONTENTS
• 引言 • 实验材料与方法 • 实验结果与分析 • 实验结论与意义 • 实验注意事项与改进建议
01 引言
中国药典效价测定方法(二)
中国药典效价测定方法(二)#中国药典效价测定方法##引言中国药典是中华人民共和国国家药品监督管理局主管的全国性药品标准参考书，在我国的药物研发和生产中具有重要的指导作用。
其中，药物效价的测定是其中一个重要的内容，本文将详细介绍中国药典中常用的效价测定方法。
##1. 动物实验法 - 作用机理：通过将药物注射到动物体内，观察药物对动物体产生的生理、病理变化，从而确定药物效价。
- 适用范围：适用于需要研究药物在动物体内的作用和副作用的情况。
- 优点：能够模拟药物在人体内的作用，结果可靠。
- 缺点：动物实验对于动物的生命健康存在一定的危害，且实验周期长。
##2. 细胞实验法 - 作用机理：通过将药物作用于细胞培养体外，观察药物对细胞生长、分化和代谢的影响，从而确定药物效价。
- 适用范围：适用于研究药物对细胞生物学活性的影响和细胞毒性的评估。
- 优点：操作简单、结果快速、成本低。
- 缺点：不完全能模拟药物在人体内的复杂作用过程，结果与动物实验或临床疗效可能存在差异。
##3. 反应动力学法 - 作用机理：通过研究药物与特定底物间的反应速率、反应机理等，从而确定药物效价。
- 适用范围：适用于测定药物代谢动力学、酶学活性等方面的效价。
- 优点：结果快速、灵敏度高、定量程广。
- 缺点：不适用于所有药物，需要特定反应物或实验条件。
##4. 生物分离法 - 作用机理：通过特定生物分离技术，将药物与靶标分离，从而测定药物与靶标之间的结合能力，从而确定药物的效价。
- 适用范围：适用于测定药物与特定靶标相互作用、结合能力的情况。
- 优点：结果直观、能够测定药物与靶标间的结合能力。
- 缺点：技术难度较大，对设备和实验技术要求高。
##结论中国药典效价测定方法多种多样，可以根据具体药物的性质和研究目的选择合适的方法进行测定。
当然，这些方法也需要在实践中不断完善和发展，以满足我国药品研发和生产的需求。
作为创作者，我们应当关注中国药典的最新动态，了解最新的效价测定方法，以提高药物质量和临床疗效。
噬菌体效价的测定
（4）为什么选用双层琼脂平板法测定噬菌体效价？
七.实验关键问题，注意事项及实验要求
1.关键问题：稀释，温度，倒板
2.注意事项：移液器使用及登记，
3.实验要求
4.预习报告（写清具体实验步骤），试管清洗，Tip回收，实验室卫生，保持安静，结果观察请于实验后第二日观察。
5.实验报告要求（清晰简洁，记录关键内容）
6.实验过程，实验报告及实验考核综合评定此次实验成绩。
八.物品准备
1.ER2738菌液：每组～10ml（注意保持无噬菌体污染）
2.M13KE：每组一只（1ml）
3.稀释用培养基：无菌水替代（TBS）
4.实验操作无需在超净台进行（原因，另外是否所有测定滴度的实验都可以）
5.EP管，Tip头用量
噬菌体效价的测定
一.目的要求
1.学习噬菌体效价测定的基本方法。
2.掌握双层琼脂平板法测定噬菌体效价的基本方法。
二、基本原理:
噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近100%(一般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染)，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度(效价或滴度)一般不用病毒粒子的绝对数量而是用噬菌斑形成单位(Plaque-forming units,简写成pfu)表示。
(2)凝固后，倒置37℃培养。记录培养时间
5．观察平板中的噬菌斑，将每一稀释度的噬菌斑数目记录于实验报告表格内，并选取 30～300个噬菌斑的平板计算每毫升未稀释的原液的噬菌体数（效价）。
效价测定方法
沈阳药科大学硕士学位论文诺西肤发酵工艺的研究姓名:韩果红专业:微生物与生化药学导师:何建勇教授二00四年五月P24 诺西肚的定性与定量测定2.2，2.1生物效价测定法1.检定菌菌悬液的制备加40一5Oml无菌水到培养好的枯草芽抱杆菌茄形瓶斜面上[枯草芽抱杆菌斜面培养基(%):蛋白陈1.0·NaCI0.5,牛肉膏0.5,琼脂粉1.5.,pH7.8(灭菌前)蒸馏水配制].用接种环刮下芽抱和菌体，摇匀，65℃水浴保温3Om加，杀死营养细胞，保留芽抱，即为检定菌菌悬液。
2.生测平板的制备将生物检定培养基[生物检定培养基(%):牛肉膏0.3蛋白陈0.5,K2HPO4 0.3,琼脂粉1.5，pH8.0-8.2(灭菌前)蒸馏水配制] 2OOml灭菌后自然冷却到50一60℃后，倒入20x3Ocm的生物检定盘中，自然凝固，作为生测平板的下层。
将生物检定培养基100ml灭菌后自然冷却到50一60℃，向培养基中加入一定量的检定菌(枯草芽抱杆菌)菌悬液，混匀，然后倒入检定盘内己凝固的下层培养基上，自然凝固。
3.点样用无菌小镊子取中Sunll的无菌圆滤纸片，按一定规律摆放在上层培养基的表面。
每个待测样品应点样2一3个滤纸片，以其抑菌圈的平均值进行计算。
盘内同时摆放加有不同剂量诺西肤标准溶液(IO00u/m)l的圆滤纸片，每个剂量点2一3个滤纸片，以其抑菌圈的平均值进行计算。
每个纸片上的加样量不超过5ul。
4.培养将点好样的检定盘倒置于4℃冰箱中扩散10小时左右，然后于37℃恒温箱中培养16一18小时，不同点样量的诺西肤在检定盘中产生的抑菌圈大小不同，根据标准品的剂量及相应抑菌圈直径之间的对应关系得标准曲线方程，根据样品的抑菌圈直径通过标准曲线方程计算出对应的效价。
P35 高产菌株选育方法的建立由于出发菌株的产量极低，为了加快高产菌株的筛选进度，为以后的菌种选育打下基础，需要建立一种简便、快捷的菌种选育方法。
为此，用琼脂块初筛的方法进行试验。
实验三 抗生素效价的测定
实验三抗生素效价的生物测定一、实验目的1．熟悉抗生素效价测定的原理2．掌握培养基的配制、灭菌3、掌握接种技术二、实验原理抗生素的医疗价值决定于它的抗菌特性，因此利用它们各自的抗菌活性来测定其效价有着特殊的意义。
效价的测定法有：液体稀释法，比浊法和扩散法等。
本实验采用国际上最为常用的杯碟扩散法来定量测定洁霉素的效价。
测定时，将规格完全一致的不锈钢小管（即牛津小杯）置于含敏感菌的琼脂平板上，并在牛津小杯中加入己知浓度的标准青霉素溶液和未知浓度的青霉素发酵液。
于是，抗生素就自牛津小杯处向平板四周扩散，在抑菌浓度所达范围内敏感菌的生长被抑制而出现抑菌圈。
在一定的范围内，抗生素浓度的对数值与抑菌圈直径呈线性关系。
因此，只要将被测样品与标准样品抑菌圈直径进行比较，就可在标准曲线上查得未知样品的抗生素效价。
三、材料和器皿1 菌种：大肠杆菌（E.coli）。
2培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（作生物测定用时，平板应分上下两层，上层须另加25％葡萄糖）。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g Nacl 5g 琼脂15-20g 1000ml 水pH 7.4-7.63试剂（1）l％pH6磷酸缓冲液：K2HPO4 0.2g（或K2HPO4·3H20 0.253g）KH2P040.8g，蒸馏水100ml。
（2）25% 葡萄糖溶液100ml。
（3）苄青霉素钠盐：1667U／mg（1U即1国际单位，等于0.6ug）。
4其他：牛津小杯（不锈钢小管，内径6土0.lmm，外径8土0.lmm，高10土0.1mm），培养皿（直径90mm，深20mm；大小一致，皿底平坦），试管、滴管、移液管（5ml）、移液枪（1ml）、枪头、镊子、涂布棒等。
四、方法和步骤1标准曲线的测绘(1）倒底层培养基：取无菌培养皿5套，每皿移入20ml牛肉膏蛋白陈底层琼脂培养基，置水平待凝，备用。
（2）铺含菌上层培养基：将装在三角瓶中的牛肉膏蛋白陈琼脂培养基（100ml）融化，待冷却到50℃左右时再加入25%葡萄糖液2ml和大肠杆菌菌液5ml(加入菌液的浓度应控制在使IU／ml青霉素溶液的抑菌圈直径在20－24mm），充分混匀后，用移液管吸取4ml于底层平板上迅速铺平，然后移水平位置凝固。
血清抗体效价的测定
实验报告
10.选择波长630nm，将酶标板置于载板台上，开始扫描，测定OD值。
结果如下所示：
思考题：
1.查阅资料，了解共有哪些类型的ELISA实验，以及本实验中所用ELISA属于哪一类？答：本实验中所用ELISA属于间接法ELISA。
①直接ELISA
原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。
加酶标抗体进行孵育。
固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。
彻底洗涤未结合的酶标抗体。
此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
加底物反应。
直接法主要用于测定抗原。
②间接法ELISA
原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。
洗涤除去未结合的抗原及杂质。
加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。
经洗涤后，加酶标二抗。
固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。
洗涤后，加底物显色。
③双抗夹心法ELISA
原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。
将特异。
抗生素的生物效价测定法(管碟法)
抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
间接ELISA测定抗体的效价
间接ELISA测定抗体的效价【目的】测定样品中抗体的效价（Titer）【基本原理】将特异性抗原包被在固相载体上，加入含待测抗体的样品，使之与固相抗原结合（Ag-Ab），再加入酶标记的抗抗体（亦称二抗），与上述Ag-Ab复合物结合形成Ag-Ab-α-Ab-E复合物。
此时加入底物，复合物上的酶则催化底物而显色，以酶与底物的显色反应程度来确定待测抗体的效价。
由于每步之间均有冲洗步骤，因此若样品中不含相应的抗体，酶标抗体则将被洗掉，底物不显色而呈阴性反应。
间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
1.包被固相载体常用聚苯乙烯微孔板，因为聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。
吸附主要为物理吸附，不发生化学反应，效果与缓冲液的浓度、pH、温育时间，载体表面性质等有关。
缓冲液宜偏碱性，离子强度较低，有利于蛋白质的吸附。
2.封闭由于血清中含有高浓度的非特异性抗体，因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质(例如牛血清蛋白)再包被一次，以封闭固相上的空余间隙。
可用含1％BSA、1％明胶3－5％脱脂奶粉封闭。
酶标抗体可以用含BSA的PBS稀释，以减少非特异性吸附。
3.温育温育最好用水浴，室温也可，微孔板浮在水浴面可使温度迅速平衡。
且板上应加盖，避免蒸发。
应用酶促反应动力学原理，低温可提高结合率，高温可加速反应。
4.待测样品待测样品溶液中需不存在与标记酶相同的酶、底物、酶抵制剂和其它干扰因素，以防止干扰作用。
在检测过程中样本须先行稀释到适当浓度(1:40~1:200)，以避免过高的阴性本底影响结果的判断。
5.洗涤洗涤实验操作过程中决定实验成败的一个关键步骤。
目的是除去未结合的免疫反应物，终止抗原抗体的继续结合，除去标本中与反应无关的成分和游离的酶结合物以及反应过程中吸附在固相载体上的非特异性干扰物。
洗涤次数一般为3～4次，每次3分钟,要微微震荡，特别是最后一次，如有酶结合物的非特异吸附及残留，会使空白值升高，所以要使洗涤彻底。
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（四）中药质量控制体系中生物检定的应用
存在的问题 应用的局限性 造模型的选择：功能主治多 成本高，时间相对长 生物误差较大 对照品的选择难度
谢谢观看！ 2020
一、概述：作用
产品生物活性的信息（ 与临床疗效一致） 评价批与批之间稳定性和一致性 监测不曾预料、不易发现的构象变化 所有变化的综合效应 工艺与方法验证
一、概述：应用范围
药品质量控制项目 性状、鉴别、检查和含量 生物检定------检查类和含量类。 药品（生化药品、中药） 生物制品（疫苗、血液制品）
（三）异常毒性检查法
小鼠，体重17～20g，5只 分别给予供试品溶液0.5ml
结果判断 全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡
（三）异常毒性检查法
限值确定
急性毒性数据（LD50或LD1） 限值至少应小于LD1可信限下限的1/3 （建议采用1/3～1/6） 静脉注射最大剂量0.8ml/20g仍未见毒性反
应或死亡，可以此作为检查限值
（四）溶血与凝聚检查法
本法系将一定量供试品与2%的家兔红细胞 混悬液混合，温育一定时间后，观察其对 红细胞状态是否产生影响的一种方法
（四）溶血与凝聚检查法
结果判断
当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对 照管有溶血发生，若供试品管中的溶液在3
小时内不发生溶血和凝聚，判定供试品符
合规定；若供试品管的溶液在3小时内发生
溶血和（或）凝聚，判供试品不符合规定
（四）溶血与凝聚检查法
限值
一般对注射剂原液和稀释液进行溶血与凝 聚实验研究
一般应高于临床最大使用浓度
（五）过敏反应检查法
本法系将一定量的供试品溶液注入豚鼠体 内，间隔一定时间后静脉注射供试品溶液 进行激发，观察动物出现过敏反应的情况 ，以判定供试品是否引起动物全身过敏反 应
（五）过敏反应检查法
检查法
豚鼠6只，隔日每只每次腹腔注射供试品溶 液0.5ml，共3次，进行致敏
均分为2组，每组3只，分别在首次注射后 第14日和第21日，由静脉注射供试品溶液 1ml进行攻击
（五）过敏反应检查法
结果判断
静脉注射供试品溶液30分钟内，不得出现过敏反 应。如有竖毛、发抖、干呕、连续喷嚏3声、连续 咳嗽3声、紫疳和呼吸困难等现象中的2种或2种以 上，或出现二便失禁、步态不稳或倒地、抽搐、 休克、死亡现象之一者，判供试品不符合规定
0.5mL，不超过10mL 限值剂量应不影响正常体温
（二）细菌内毒素检查法
细菌内毒素检查法的分类 ①定性法： 凝胶法 ②半定量法：凝胶半定量试验 ③定量法：光度测定法 浊度法 （终点浊度法、动态浊度法） 显色基质法（终点显色法、动态显色法）
（二）细菌内毒素检查法
确定内毒素限值 L=K/M
药品质量控制中的生物检定
上海市食品药品检验所 药理毒理室/药物安全评价中心主任
唐黎明
药品质量控制中的生物检定
一、药品质量控制中的生物检定概述 二、效价测定的基本原理和技术要求 三、生物检定中安全性检查制定原则 四、安全性检查的基本原理和技术要求 五、生物检定的发展
一、药品质量控制中的生物检定概述
（三）安全性检查的变化
细菌内毒素替代家兔热原检查 增订异常毒性 增订过敏反应 增订无菌/微生物限度 增订降压物质检查 增订制法要求和特殊的安全性检查
（四）中药质量控制体系中生物检定的应用
不应苛求中药生物检定指标的代表性 不要以理化检定的方法学质量苛求中药生
物检定方法 中药质量生物检定不等于中药药理实验 须具备定量药理学与药检分析的双重属性
一、概述：生物检定的方法
定性 （鉴别）
对能用理化方法测定的药品，生物效价检 测可降为鉴别项的定性测定
一、概述：生物检定的方法
半定量法（活性检查）
理化测定占主导地位
效价测定可归于活性检查项
采用半定量方法
设定限值，不需精密生物统计
尽可能减少实验动物或其他生物体用量
一、概述：生物检定的方法
用注射剂，应考虑设立异常毒性检查
三、安全性检查制定原则
1. 静脉注射
过敏反应检查
所用原料系动物来源或微生物发酵提取物 时，组分结构不清晰，且有可能污染异源
蛋白或未知过敏反应物质的静脉用注射剂
，如缺乏相关的理化分析方法且临床发现
过敏反应，应考虑设立过敏反应检查项
三、安全性检查制定原则
1. 静脉注射
生物检定（bioassay）的定义
生物检定法是利用生物体包括整体、离体 组织、器官、细胞和微生物等评估药物生 物活性的一种方法。它以药物的药理作用 为基础，以生物统计为工具，运用特定的 实验设计在一定条件下比较供试品和相当 的标准品或对照品所产生的特定反应，通 过等反应剂量间比例的运算或限值剂量引 起的生物反应程度，从而测定供试品的效 价、生物活性或杂质引起的毒性。
菌内毒素检查项
三、安全性检查制定原则
3.特殊途径的注射剂
椎管内、腹腔、眼内等特殊途径的注射剂 ，其安全性检查项目一般应符合静脉用注 射剂的要求
必要时增加其它安全性检查项目，如刺激 性检查、细胞毒性检查
三、安全性检查制定原则
4. 注射剂辅料
注射剂辅料使用面广，用量大，来源复杂 ，与药品的安全性直接相关
试验环境中发生了任何有可能影响试验结 果的变化时，须重新进行干扰试验
（二）细菌内毒素检查法
凝胶法
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反 应的原理来检测或半定量内毒素的方法
（二）细菌内毒素检查法
光度测定法
浊度法 利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊
度变化而测定内毒素含量的方法 终点浊度法 动态浊度法
（一）热原检查法
动物：家兔，健康合格，体重1.7kg以上 体温：38. 0 ~39. 6℃的范围内，且最高与
最低体温相差不超过0. 4℃的家兔 结果判断： ＜0.6℃ 总和＜1.3℃
（一）热原检查法
热原检查限值的确定 一般为人用每公斤体重每小时最大供试品
剂量的3～5倍 供试品注射体积每公斤体重一般不少于
二、效价测定的基本要求
实验设计与生物统计： 等反应剂量对比 可靠性测验 可信限和可信限率
二、效价测定的基本方法
直接测定法：
直接测得药物对各个动物最小有效量或最 小致死量的检定方法
洋地黄及其制剂的效价测定------鸽最小致 死量法
二、效价测定的基本方法
量反应平行线测定法：
要求在一定剂量范围内，S和T的对数剂量x 和反应或反应的特定函数y呈直线关系
当S和T的活性组分基本相同时，两直线平 行
三、生物检定中安全性检查制定原则
三、安全性检查制定原则
1. 静脉注射
细菌内毒素（或热原）
三、安全性检查制定原则
1. 静脉注射
异常毒性检查
所用原料系动物来源或微生物发酵液提取 物，组分结构不清晰或有可能污染毒性杂
质，且又缺乏有效的理化分析方法的静脉
（六）降压物质检查法
方法： 体重2kg以上的猫 供试品按一定注射速度静脉注射不同剂量
，观察供试品对猫血压反应的剂量反应关 系
（六）降压物质检查法
结果判断 dT反应平均值不大于ds反应平均值，并且
dT反应平均值任何一次反应值不大于组胺高 剂量反应值，即判定供试品降压物质检查 符合规定
（六）降压物质检查法
一、概述：生物检定的方法
体内检测：
以整体动物为生物体，能反映药物对人体 的作用方式，是最经典的生物效价检测方 法
体内测定法的有蛋白质、肽类激素等
一、概述：生物检定的方法
体外检测
离体动物器官测定法
细胞培养（促进细胞生长、抑制细胞生长、 间接保护细胞）测定法
生化酶促反应测定法
免疫学活性测定法
应根据辅料来源、性质、用途、用法用量 ，配合理化分析方法，设立必要的安全性 检查项目
三、安全性检查制定原则
5. 其它
原料和生产工艺特殊的注射剂必要时应增 加特殊的安全性检查项目，如病毒检查、
细胞毒性检查等
三、安全性检查制定原则
中药注射剂安全性检查项目
热原（或细菌内毒素） 异常毒性 过敏反应 溶血与凝聚 降压物质检查（功能主治中具有与升压相
限值和要求
供试品与对照品注射体积应相同，通常为0.1～1ml/kg 临床单次用药剂量的1/5～5倍作为降压反应物质检查剂量
限值 如供试品有一定降压作用，则可按最大无降压反应剂量的
1/2-1/4作为限值剂量 供试品原液静脉注射1ml/kg剂量未见降压反应，该剂量可
作为给药限值
（七）组胺检查法
L为供试品的细菌内毒素限值 M为人用每公斤体重或每平方米每小时的临床最大用药剂
量 注射剂K=5EU/（kg·h） 放射性药品注射剂K=2.5EU/（kg·h） 鞘内用注射剂K=0.2EU/（kg·h） K=194EU/（m2·h）
（二）细菌内毒素检查法
干扰试验 新药的内毒素检查试验前 建立内毒素检查法时 鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或
降压物质或组胺类物质
所用原料系动物来源或微生物发酵提取物 时, 组分结构不清晰或有可能污染组胺、类
组胺样降血压物质的静脉用注射剂，应考
虑设立降压物质或组胺类物质检查项
三、安全性检查制定原则
2.肌内注射
异常毒性检查
过敏反应检查
细菌内毒素检查
临床用药剂量较大，生产工艺易污染细菌 内毒素的肌内注射用注射剂，应考虑设细
（五）过敏反应检查法
限值确定
测定供试品对豚鼠腹腔（或皮下）和静脉给药的 无毒性反应剂量
在首次给药后14、21、28天中选择最佳激发时间 致敏和激发剂量应小于该途径的急性毒性反应剂
量, 适当参考临床剂量 一般激发剂量大于致敏剂量
（六）降压物质检查法
本法系比较组胺对照品（S）与供试品（T） 引起麻醉猫血压下降的程度，以判定供试品 中所含降压物质的限度是否符合规定