酵母硒(有机硒)测定方法
硒酵母中硒含量测定方法的研究
硒酵母中硒含量测定方法的研究作者：王建荣马传芳来源：《科学与财富》2019年第08期摘 ;要：在进行硒酵母中硒含量测定方法研究的过程中，常用的测定方法主要有有机硒、总硒、无机硒等测定方法，在进行研究的过程中，相关人员要建立有机硒和无机硒的测定的方法，并且还要将有机硒和无机硒分离处理，采用透析的方法对其进行处理，对五种晒酵母采用不同的培养条件对其进行培养，才能为添加剂领域和医药领域的发展提供科学、合理的数据。
关键词：酵母;有机硒;无机硒1 试验部分1.1 主要仪器与试剂Backman公司DU一7分光光度计1、2、3、4、5为5种不同含硒量的硒酵母在培养基中添加不同量的亚硒酸钠，接种酵母菌，在3O℃下培养48h而得。
变色酸：0.03tool·L-1，称取变色酸1.0930g，定容至100ml。
盐酸苯肼：0.03mol·L-1。
称取0.4400g盐酸苯肼，定容至100ml。
EDTA：0.02tool·L-1，称取EDTA钠盐0.7450g定容至100m|。
氯酸钾：0.6mol·L-1，称取7.3500g氯酸钾。
1#、2#、3#、4#、5#为5种不同含硒量的硒酵母：在培养基中添加不同量的亚硒酸钠.接种酵母菌.在30°C下培养48h而得。
变色酸：0.03mol·L-1，称取变色酸1.0930g.定容至100ml。
盐酸苯肼：0.03mol·L-1，称取0.4400g盐酸苯肼，定容至100ml。
EDTA：0.02mol·L-1，称取EDTA钠盐0.7450g定容至100ml。
氯酸钾：0.6mol·L-1，称取7.3500g氯酸钾、定容至100ml。
HCI-KC1缓冲液：0.2tool·L，取浓盐酸2.50ml稀释至150ml;再取氯化钾2.2500g，定容至150ml，两者混匀。
亚硒酸标液：称取亚硒酸0.08167g，定容至500ml，然后再稀释500倍混合酸：浓硝酸400ml与高氯酸100ml，混匀。
联苯胺比色法测定饲料中有机硒的含量
取消 化液 １ Ｌ于 １５ｍ ０ｍ ２ Ｌ分 液漏 斗 中 ， 另取 ７
选某 公 司富硒 酵母 作 为样 品， 别用 原 子吸 收 分
个分 液漏 斗 ，分 别加 入与 消化液 等量 的空 白溶 液及
标 准 硒工 作 液 ００ ２０ ４０ ６０ ８０ １． Ｌ ．、 ．、 ． 、．、 ． 、００ｍ ，加水 适 量 ，各 加 入 ５ Ｄ Ａ一 Ｎ ％Ｅ Ｔ ２ ａ溶 液 ４ ｍ ， ．％ 的 Ｌ ０５
３ ｉ， 氨水溶液调 ｐ ０ ｎ用 ａ ｒ Ｈ值 ６ ～ ．， ． ７０ 加入 甲苯 ４ｍＬ ５ ， 猛 烈 振 摇 萃 取 ３ ｍ ｎ 静 置 分 层 ， 甲苯 层 滤 液 于 ｉ， 取 ｌ ｍ 比色皿 中 ， ｃ 在波 长 ４ ５ｎ ２ ｍ处测 定 吸光度 。用 标 准硒工 作液 的 吸光 度绘 制标 准 曲线 ，从 标准 曲线 上
２ 深圳职业技 术 学院化生 学院 ， 东深圳 ５ ８５ ） ． 广 １０ ５
摘
要 ： 文介绍 了一 种 简便 可靠的测定 富硒 酵母 中有机 硒含 量的 方法。采 用双氧 水： 本 高氯 酸： 硫酸 为 ３３ ｌ的 ：：
消化液 处理样品 ， 用联 苯胺 比 色 法 测 定 样 品硒 含 量 。在 酸 性 条 件 下 ， 与 ３３一 氨 基 联 苯胺 作 用 ， 硒 ， 二 生成 黄 色络
１２ 仪 器 ．
Ｔ一 ６ 紫外 一 可见分光光度计 、 电加热板 、 Ｋ ８ Ｄ － Ｂ型
电热恒温水槽 、 Ｑ ２ ０ Ｅ型数控超声波仪 、 Ｋ ３０ Ｄ 通风橱 。
１３ 试 剂 ．
污染 ， 因此欧盟等一些 国家和地 区已经 限制 或禁止使 用亚硒酸钠作为硒的营养补充剂 。近年研究表 明 ， 有 机硒 的生物利用 率远高 于无机硒 ， 且毒性 较小 、 口 适 性好 ， 便于在饲 料中应用 ， 因此对 饲料 中无机 硒和有 机硒含量进行准确地测定有重要 意义 。 的测定方法 硒
硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法_郝素娥
第18卷第3期分析测试学报Vo l.18N o.31999年5月FENXI CESHI XUEBAO(J ou rnal of Instrum ental Analy sis)M ay1999硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法郝素娥滕冰(哈尔滨工业大学应用化学系哈尔滨150001)(东北农业大学分析测试中心哈尔滨150030)摘要报道了人工培养硒酵母中有机硒及硒代胱氨酸(S eC y s)和硒代蛋氨酸(SeM et)含量的测定方法。
采用透析处理法使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,并采用催化分光光度法测定了硒酵母中有机硒的含量;采用氨基酸自动分析仪测定了硒酵母中S eCy s和SeM et的含量。
关键词硒酵母,有机硒,硒代胱氨酸,硒代蛋氨酸硒是生物体必需的微量营养元素,缺硒会导致很多疾病。
人体缺硒会诱发心血管疾病和癌症;动物缺硒会导致白肌病和生长缓慢等。
目前用于防治疾病和作为饲料添加剂的主要是无机硒[1]。
有机硒与无机硒相比,具有较高的生物活性(比无机硒约高100倍)和较低的毒性[2],故人们越来越重视有机硒的补充。
硒酵母中有机硒含量较高[3],是一种比较理想的硒营养剂。
为了测定硒酵母中有机硒的含量,首先建立了一种无机硒和有机硒的鉴别方法,并且采用透析处理法使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,再利用催化分光光度法,测定了硒酵母中有机硒的含量;为了确定硒酵母中有机硒的存在形式,采用氨基酸自动分析仪,测定了硒酵母中硒代胱氨酸(SeC y s)和硒代蛋氨酸(SeM et)的含量。
1实验部分1.1材料和仪器透析袋,SeM et(S3625),SeC y s(S3875)购自美国Si g ma公司。
分析仪器选用美国产的DU-7分光光度计和日立835-50氨基酸分析仪。
其他试剂均为分析纯级化学试剂。
1.2有机硒含量的测定1.2.1测定原理Se(Ô)能够催化氯酸钾氧化苯肼生成偶氮离子,继而与变色酸偶合成红色偶氮染料,生成的红色偶氮染料的吸光度与一定含量范围的硒成正比,因而可利用催化分光光度法测定Se(Ô)的量[4]。
富硒酵母中有机硒含量测量方法的探究
第45卷第21期2017年11月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.45No.21Nov.2017富硒酵母中有机硒含量测量方法的探究+周琼，赵松(安康学院化学化工学院，陕西安康725000)摘要：本研究选用透析袋透析法分离富硒酵母中的有机硒和无机硒，用氢化物原子荧光光谱法测定有机硒的条件，选用 100 D分子量的透析袋进行透析，比较不同温度，水流速率下，透析袋对富硒酵母中有机硒和无机硒的分离效果，筛选出最佳分 离条件，该方法检测了不同富硒酵母中的总硒含量，含量为1.40~3.20mg/g;其中有机硒含量为1.30~2.97mg/g，加标回收率 结果为 77. 3%c ~86. 6%〇。
关键词：透析袋；富硒酵母；有机硒；无机硒中图分类号：TQ914. 1文献标志码：B文章编号：1001-9677(2017)21-0121-03 Study on Measurement Method of Selenium Content in Selenium Enriched YeastZHOU Qiong, ZHAO Song(School of Chemistry and Chemical Engineering, Ankang University, Shaanxi Ankang 725000, China)A b s t r a c t：Organic and inorganic selenium in yeast were separated using dialysis bag-dialysis method, the condition of organic selenium was determined by hydride generation atomic fluorescence spectrometry. Dialysis with 100 D molecular weight dialysis bag, the separation effect of dialysis bags on organic and inorganic selenium in yeast at different temperatures and flow rates was compared, and the best separation conditions were selected. The content of total selenium in different selenium enriched yeast was detected. The content ranged from 1.40 ~ 3. 20 mg/g. The organic selenium content ranged from 1. 30 ~2. 97 m g/g, and the recovery rate was 77. 3% ~86. 6%.K e y w o r d s: dialysis bag; selenium enriched yeast; organic selenium；inorganic selenium硒是人体和动物体内必需的微量元素，有多种重要的生物 学功能[1]。
酵母硒(有机硒)测定方法
本产品具有以下特点：
a) 硒含量高：酵母硒的硒含量可高达2500mg/kg，通常为2000mg/ kg。 b) 生理活性高：在提高机体血硒水平方面明显高于亚硒酸钠。 c) 利用率高：酵母硒中生物硒含量占总硒量的98％以上。 d) 毒性低：酵母硒的毒性大大低于亚硒酸钠。 e) 技术先进。
产品有效组分及理化性质
酵母硒是酵母在发酵过程中通过生物转化作用
制备的一类有机硒，其内有机硒的主要存在形式是 L-硒代蛋氨酸（Selenomethionine）和硒代-L-半胱氨 酸（Seleno-L-cysteine）。
（五）有效组分化学结构测试和 微生物菌种鉴定分析
酵母硒中试产品经过法国国家科学研究院LCABIE实验室测定结果如下： （总硒检测结果样品经HNO3-H2O2水解后电感耦合等离子体质谱测定）
酵母硒是利用酵母开发出来的一种有机硒
源。它是通过在酵母菌发酵过程中添加无机硒， 通过酵母细胞对无机硒的摄取，并经过胞内一系
列的还原反应，将高价硒还原成Se2-，最终主要
以硒代蛋氨酸、硒代半胱氨酸等形式参与蛋白质
合成。通过这一系列的生物转化过程，实现了无
机硒向有机硒的转变。
酵母硒产品概述
本产品酵母硒中胞内硒含量达到 2000mg/kg以上，其中
取酵母硒样品用1：5的水进行清洗2~3次测胞内硒含量，所测结果占 总硒的98%以上为合ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ产品。
7
有机硒占总硒比例大于98%。有机硒主要以蛋氨酸硒（seleno
methionine ） 、硒代半胱氨酸（ selenocysteine ）及其衍生
物的形式存在。酵母硒产品呈淡黄色固体粉末状，带有酵母菌 的特有香气， 粗蛋白质含量≥42.0%， 2000mg/kg≤胞内硒含量≤2500 mg/kg， 有机硒含量占总硒的98%以上。
硒代蛋氨酸 酵母硒 质谱
硒代蛋氨酸酵母硒质谱
硒代蛋氨酸（Selenium Methionine）和酵母硒是含有硒的化合物，常常用于膳食补充和饲料添加。
这两种化合物在质谱（Mass Spectrometry）分析中可以被用来确定其分子结构和确定其纯度。
质谱是一种用于测定化合物的分子质量、结构和相对丰度的分析技术。
对硒代蛋氨酸和酵母硒进行质谱分析可能包括以下步骤：
1.样品制备：提取硒代蛋氨酸或酵母硒，并制备适合于质谱分析
的样品。
2.质谱仪器：使用质谱仪器进行分析。
常见的质谱仪器包括质子
转移质谱（Proton Transfer Reaction Mass Spectrometry，PTR-
MS）、电喷雾质谱（Electrospray Ionization Mass Spectrometry，
ESI-MS）和气相色谱质谱（Gas Chromatography Mass Spectrometry，GC-MS）等。
3.分子质量测定：通过测定分子的质荷比（m/z）来测定硒代蛋
氨酸或酵母硒的分子质量。
4.结构鉴定：通过质谱图谱，可以得知离子的裂解模式，从而推
测出硒代蛋氨酸或酵母硒的分子结构。
5.相对丰度分析：通过测定质谱图中峰的相对强度，可以确定不
同离子的相对丰度，从而了解样品的组成。
这些分析有助于确保硒代蛋氨酸和酵母硒的质量和纯度，同时也可以为其应用领域提供更多的信息，例如在膳食补充品、动物饲料或医药领域中的应用。
在进行具体的实验和分析之前，建议咨询专业实
验室或仪器制造商以获取更详细的信息。
硒含量测定方法
硒是人体必需的一种微量元素，参与合成人体内多种酶和蛋白质，同时能够彻底清除自由基，修复细胞组织的损伤。
然而过量摄入会引起硒中毒，对人体造成危害。
因此，对食品尤其是富硒食品中硒的准确定量分析显得非常重要。
查询国家现行标准获得目前食品中硒含量的测定主要有三种方法：第一法为氢化物原子荧光光谱法，第二法为荧光分光光度法，第三法为电感耦合等离子体质谱法。
此外，查阅文献过程中发现，由于不同形态的硒具有不同的毒性，因此针对硒形态的分析和测定也具有一定必要性。
目前报道的硒形态检测方法包括分光光度法、毛细管电泳-电化学发光法、液相色谱法、高效液相色谱-电感耦合等离子体-质谱联用技术等。
由于测定硒含量更为普遍，因此我们主要针对硒含量测定的第一法，即氢化物原子荧光光谱法进行概述。
氢化物原子荧光光谱法对于砷、锑、铋、锗、锡、铅、硒、碲、汞等具有很好的检出限和灵敏度，因此该法被专门用于砷、硒和汞等元素含量测定。
原理：待测元素的原子蒸气光致激发后，在跃迁至低能级过程中发射的光辐射称为原子荧光。
根据所记录的荧光谱线的波长可以判断元素是否存在，同时，可以根据荧光谱线强度获得元素的浓度（定量依据：I f=Kc）。
过程（以硒检测为例）：
分析：氢化物进样法可以使目标元素与可能引起干扰的基质分离，消除了基质干扰，与溶液直接喷雾进样相比，大大提高了进样效率。
分光光度法测定富硒酵母中有机硒的含量
0. 5% 的 DAB 0. 5gDAB 于 100ml 新鲜制备的 四氯甲烷溶液中。
pH 计, 恒温水浴锅, 721 分光光度计。 1. 2 测定原理
2 郑建仙 . 功能性食品 . 轻工出版社 , 1995 3 L aurence. M . Cumm ins, John. L . M a rtin. A n impr ov ed method for determinatio n o f Selenium in Biolog ical M ater ial, Anal Chem, 1965( 3) : 137 4 华东化工 学院分析化 学教研组 编 . 分 析化学之一。人类
膳食中天然食物的硒含量普遍较低, 且受环境的影响 很大, 因而构成了富硒食品巨大的发展空间。近年来, 富硒食品有了一定的发展, 本文介绍了一种测定富硒 酵母中有机硒含量的方法, 以供参考。 1 材料与方法 1. 1 材料与仪器
硒标准溶液 准确称取 2. 190g 干燥的亚硒酸钠 ( 优级纯) , 溶于蒸馏水, 添加 80ml、48% 的 HBr , 然后 用蒸馏水稀释至 1L , 制备成含硒 1g/ L 的标准硒贮备 液。临用时用蒸馏水稀释成 1mg/ kg 的硒标准溶液;
0ml0100ml的硒标准溶液1mgkg各加蒸馏水至40ml用甲酸调节ph23加入4mledta2na以掩盖干扰离子然后加2ml5的dab摇匀于60水浴20min光线暗淡的环境下取出用浓氨水调节ph0ml甲苯猛晃1min静置34min分层然后将有机层通过脱脂棉滤到1cm的比色皿中420nm处测定溶液的吸光度甲苯作空白如图1
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7
样品 名称
总硒含量 mg/kg
标准误差（SD） mg/kg
相对标准偏差 （RSD）, %
GSS-261
3776
45
1.2
酵母硒产品经过法国国家科学研究院LCABIE实验室测定结果如下： （蛋氨酸硒和半胱氨酸硒的含量样品经阴离子交换色谱-电感耦合等离子 体质谱联用测定：）
总蛋氨酸硒
总半胱氨酸硒
相对标 相对标 标准误 标准误 以硒计， 准偏差 以硒计， 准偏差 差（SD） 差（SD） mg/kg （RSD） mg/kg （RSD） mg/kg mg/kg ,% ,% GSS-261 2377 32 1.3 399 19 4.8
酵母硒是利用酵母开发出来的一种有机硒
源。它是通过在酵母菌发酵过程中添加无机硒， 通过酵母细胞对无机硒的摄取，并经过胞内一系
列的还原反应，将高价硒还原成Se2-，最终主要
以硒代蛋氨酸、硒代半胱氨酸等形式参与蛋白质
合成。通过这一系列的生物转化过程，实现了无
机硒向有机硒的转变。
酵母硒产品概述
本产品酵母硒中胞内硒含量达到 2000mg/kg以上，其中
有机硒占总硒比例大于98%。有机硒主要以蛋氨酸硒（seleno
methionine ） 、硒代半胱氨酸（ selenocysteine ）及其衍生
物的形式存在。酵母硒产品呈淡黄色固体粉末状，带有酵母菌 的特有香气， 粗蛋白质含量≥42.0%， 2000mg/kg≤胞内硒含量≤2500 mg/kg， 有机硒含量占总硒的98%以上。
本产品具有以下特点：
a) 硒含量高：酵母硒的硒含量可高达2500mg/kg，通常为2000mg/ kg。 b) 生理活性高：在提高机体血硒水平方面明显高于亚硒酸钠。 c) 利用率高：酵母硒中生物硒含量占总硒量的98％以上。 d) 毒性低：酵母硒的毒性大大低于亚硒酸钠。 e) 技术先进。
产品有效组分及理化性质
酵母硒是酵母在发酵过程中通过生物转化作用
制备的一类有机硒，其内有机硒的主要存在形式是 L-硒代蛋氨酸（Selenomethionine）和硒代-L-半胱氨 酸（Seleno-L-cysteine）。
（五）有效组分化学结构测试和 微生物菌种鉴定分析
酵母硒中试产品经过法国国家科学研究院LCABIE实验室测定结果如下： （总硒检测结果样品经HNO3-H2O2水解后电感耦合等离子体质谱测定）
（3）样品未检测到无机硒，无机硒的检测限为总硒的2%。
可量化和操作的质量标准 酵母硒的鉴定方法
1、国际通用方法： 通过测定蛋氨酸硒的含量来鉴定，即所测得的蛋氨酸硒中的硒含量占 总有机硒的60%左右时可认为该酵母硒产品为发酵完全的合格产品。 建议方法：液质联用仪LC-MS（法国皇家科学院）
2、国内鉴定方法：