注射剂中常用辅料及相关杂质测定法
药物制剂分析 注射剂分析
注射剂分析 二、常规检查项目与方法
3、可见异物
（一）定义
指存在于注射液、滴眼液中，在规定条件下目视可以观测
到的不溶性物质，其粒径或长度通常大于50µm。
（二）检查方法
1. 灯检法
2. 光散射法
（三）判定结果
取20支，若1支不合格，
可复测20支，均不得检出。
标示量(mg/ml)
注射剂分析 三、含量测定
2、含量测定计算
（2）举例：用HPLC法测定双嘧达莫注射液中双嘧达莫的含量 a) 供试品溶液制备
精密量取本品适量（约相当于双嘧达莫10mg)2.00ml，置50ml量瓶中，加流动相稀 释至刻度，摇匀
b) 对照品溶液制备
取双嘧达莫对照品适量，精密称定，用流动相配制成每1ml中含双嘧达莫0.2mg的溶 液，摇匀
取样量：≤2ml，5支 ＞2ml至50ml，3支 测定方法：体积测量 判定标准：每支装量均不得少于标示量
将内容物分别用 相应体积的干燥 注射器及注射针 头抽尽，然后注 入标化的量具内 ，在室温下检视
＞50ml者，照“最低装量检查法”（通则0942）。
注射剂分析 二、常规检查项目与方法
2、装量差异——注射用无菌粉末 凡检查含量均
灯检法仪器
注射剂分析 二、常规检查项目与方法
4、不溶性微粒
可见异物检查，只能检出50um以上微粒。 在可见异物检查符合规定后，检查溶液型静脉用 注射液中不溶性微粒的大小及数量。 检查方法：光阻法、显微计数法。
注射剂分析 二、常规检查项目与方法
5、渗透压摩尔浓度
静脉输液、营养液、电解质或渗透利尿药（如甘 露醇注射液）等制剂，应在药品说明书上标明渗 透压摩尔浓度。 检查方法：渗透压摩尔浓度测定法（通则0632）
片剂和注射剂中药物含量测定
（1）吸收系数法
A E11c%ml 100
nV
平均片重
标示量%
ms 标示量
100%
（2）对照法
c对
A供 A对
nV
平均片重
标示量%
ms 标示量
100%
例：取司可巴比妥钠胶囊（标示量为0.1g） 20粒，除去胶囊后测得内容物总重为 3.0780g，称取0.1536g，按药典规定用溴量 法测定。加入溴液（0.1 mol/L） 25ml，剩 余的溴液用硫代硫酸钠液（0.1025mol/L） 滴定到终点时，用去17.94ml。空白试验用 去硫代硫酸钠液25.00ml。按每1ml 溴液 （0.1mol/L）
Mg EDTA Na EDTA Mg
[Cd（CN） ] HCHO HO HO CHCN Cd OH
（2）改变pH或指示剂
金属离子 适宜pHFra bibliotekAl 3+ Bi 3+ Mg2+
5～6 2～3 9.7～12
指示剂
二甲酚橙 儿茶酚紫 络黑T
E. A 100 250 1 100%
715 5
m
例：利血平的含量测定方法为： 对照品溶液的制备 精密称取利血平对 照 品 20mg ， 置 100ml 量 瓶 中 ， 加 氯 仿 4ml使溶解，用无水乙醇稀释至刻度， 摇匀；精密量取5m1，置50ml量瓶中， 加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
F c实测
ms——供试品的质量
c标准
95：71．非那西丁含量测定：精密称取本 品 0.3630g 加 稀 盐 酸 回 流 1 小 时 后 ， 放 冷 ， 用亚硝酸钠液（0.1010mol/L）滴定，用 去20.00m1。每1ml亚硝酸钠液（0.1mol/L） 相当于17.92mg的C10H13O2N。计算非那西 丁的含量为（E）
注射剂检验操作规程
注射剂检验操作规程注射剂检验操作规程一、目的与范围：本操作规程是为了规范注射剂检验工作流程，保证注射剂产品的质量，以及确保注射剂符合相关标准和法规的要求。
本操作规程适用于所有注射剂检验工作，包括原辅材料检验、半成品检验、成品检验等。
二、检验设备及仪器：1. 显微镜：用于对样品进行微观检查，检测是否存在异物、杂质等。
2. 压力计：用于检测注射剂容器的密封性和耐压性能。
3. 电子天平：用于测量药液的重量，检测药液的配比是否准确。
4. pH计：用于测定药液的酸碱度。
5. 紫外分光光度计：用于检测药液中的杂质和活性成分的含量。
6. 无菌工作台：用于进行无菌检验和操作。
三、操作步骤：1. 取样：按照规定的抽样方案，从批次中随机取样。
注意避免污染和交叉感染。
2. 外观检查：对样品的色泽、透明度、是否有浑浊、沉淀等进行检查。
3. 标签检查：检查样品上的标签是否完好、清晰，包括产品名称、批号、有效日期等。
4. 物理性质检验：包括药液的密度、温度、粘度、等特性的测定。
5. 包装和标志检验：检查样品的外包装是否完好、符合规定，标志是否准确。
6. 含量测定：根据相关标准，使用紫外分光光度计等仪器测定药液中活性成分的含量。
7. 微生物检验：使用无菌技术，进行微生物检验，包括菌落总数、大肠杆菌等指标的测定。
8. pH值测定：使用pH计测定药液的酸碱度。
9. 无菌检验：在无菌工作台下，对样品进行无菌检验，确保无菌要求。
10. 容器密封性和耐压性检验：使用压力计对容器密封性和耐压性能进行检测。
11. 结论判定：根据检验结果，判断样品是否符合要求。
12. 记录和报告：将检验结果记录在相关文件中，并及时向上级主管部门报告检验结果。
四、注意事项：1. 检验人员应严格遵守无菌操作规程和个人防护措施，以避免交叉感染和个人伤害。
2. 在检验过程中，应做好样品的标识和保存，以免混淆和损坏。
3. 检验仪器和设备应定期校准和维护，确保其准确性和可靠性。
制剂中几种特殊辅料的含量测定方法
关于制剂中几种特殊辅料含量测定方法的几点建议现推荐几种特殊辅料的含量测定方法，可供参考，具体如下：甘露醇甘露醇是制剂中常用辅料，公司内大量品种使用甘露醇作为辅料。
甘露醇分子含有多个羟基，同药物分子之间存在氢键作用，可能会影响药物的溶出，因此准确测定制剂中甘露醇含量对仿制药研发是十分必要的。
经过文献调研及本公司孟鲁司特钠咀嚼片和曲美片中甘露醇含量测定结果，表明如下方法可供参考。
1、色谱条件【1】：色谱柱：HP-5色谱柱（50m×0.32mm×0.52μm）进样方式：直接进样进样量：1μl样品浓度：5mg/ml进样口温度：300℃载气种类：高纯氮气载气流速：1.0ml/ml柱温：260℃分流比1:20检测器：FID检测器检测器温度：300℃2、溶液配制：供试品溶液：将待测样品研细，取细粉10mg，精密称定，置10ml顶空瓶中。
直接加入1ml醋酐，再加入1ml吡啶，加盖密闭，振摇均匀，100℃下保温40min。
保温完毕后，开盖取适量溶液作为供试品溶液。
对照品溶液：取甘露醇10mg，精密称定，置10ml顶空瓶中。
直接加入1ml醋酐，再加入1ml吡啶，加盖密闭，振摇均匀，100℃下保温40min。
保温完毕后，开盖取适量溶液作为对照品溶液。
3、测定法取上述供试品和对照品溶液各1µl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中甘露醇的含量。
在此条件下甘露醇保留时间约为8.4min。
计算公式：含量%=A s×W r×S sA r×S r×P×100%式中：Wr：对照品重量，mgAr：对照品峰面积 As：供试品峰面积Ss：供试品稀释倍数 Sr：对照品稀释倍数P：对照品的含量4、检验仪器：对照品：4、结果与结论4.1结果：曲美片中甘露醇含量测定结果理论含量为文献中给出的投料量或者实际投料量。
从测定结果可以看出，实际测定值和理论值十分接近。
注射剂的检查方法
注射剂的检查方法
注射剂的检查方法可以分为以下几个方面：
1. 外观检查：观察注射剂的外观，包括颜色、浑浊度、悬浮物、气泡等，确保没有明显异常。
2. 尺寸检查：测量注射剂的容量和长度，确保符合规定要求。
3. 透明度检查：观察注射剂的透明度，可以通过比较参比物与待检样品的透光度来判断。
4. pH 值测定：使用pH 试纸、酸度计等仪器测定注射剂的pH 值，确保在适宜范围内。
5. 离子浓度检查：使用离子选择电极或荧光法等测定注射剂中离子的浓度，例如钙离子、钠离子、钾离子等。
6. 值测定：使用光度计、荧光分光光度计等测定注射剂中特定物质的含量，例如药物成分、杂质等。
7. 接触角测定：测定注射剂的润湿性能，通过接触角的大小判断。
8. 尘埃、微生物检查：使用厌氧培养法、菌落总数法等方法检测注射剂中的微生物污染情况。
9. 温度稳定性检查：将注射剂暴露在不同温度下，观察其性状是否有明显变化。
注射剂的检查方法可以根据具体情况选择和组合使用，以确保其质量和安全性。
同时，还应根据相关法规和标准进行检查，确保符合相应的要求。
注射剂有关物质检查法
注射剂相关物质检查法注射剂相关物质系指中药材经提取、纯化制成注射剂后，残留在注射剂中可能含有需要控制的物质。
除还有规定外，一般应检查蛋白质、鞣质、树脂等，静脉注射液还应检查草酸盐、钾离子等。
其检查方法以下。
1.蛋白质除还有规定外，取注射液1m1;加新配制的 30%磺基水杨酸溶液1 ml，混匀，搁置 5 分钟，不得出现污浊。
注射液中如含有遇酸能产生积淀的成分，可改加鞣酸试液1～3 滴，不得出现污浊。
2. 鞣质除还有规定外，取注射液 1 ml . 加新配制的含 1%鸡蛋清的生理氯化钠溶液 5m1[ 必需时，用微孔滤膜 ( 0. 45um) 滤过 ] ，搁置 10 分钟，不得出现浑浊或积淀。
如出现污浊或积淀，取注射液 1 ml，加稀醋酸 1 滴，再加氯化钠明胶试液 4～5 滴，不得出现污浊或积淀。
有聚乙二醇、聚山梨酯等聚氧乙烯基物质的注射液，虽有鞣质也不产生积淀，对这种注射液应取未加附带剂前的半成品检查。
3. 树脂除还有规定外，取注射液5m1，加盐酸 1 滴，搁置 30 分钟，不得出现积淀。
如出现积淀，另取注射液5m1，加三氯甲烷l0ml 振摇提取，分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣加冰醋酸2m1 使溶解，置具塞试管中，加水3m1,混匀，搁置 30 分钟，不得出现积淀。
4. 草酸盐除还有规定外，取溶液型静脉注射液适当，用稀盐酸调理pH 值至 1～2，滤过，取滤液 2m1，滤液调理 pH 值至 5～6，加 3%氯化钙溶液 2～3滴，搁置 10 分钟，不得出现污浊或积淀。
5.钾离子除有规定外，取静脉注射液 2m1, 蒸干，先用小火炽灼至炭化，再在500～600℃炽灼至完整灰化，加稀醋酸2m1 使溶解，置25m1量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。
取10 ml纳氏比色管两支，甲管中精细加入标准钾离子溶液0.8m1，加碱性甲醛溶液 ( 取甲醛溶液，用 0. lmol/L 氧化钠溶液调理pH值至（ 8.0～9.0）0. 6m1, 3%乙二胺四醋酸二钠溶液 2 滴、3 %四苯硼钠溶液0. 5m1, 加水稀释成10ml,。
注射液有关物质及含量测定方法学验证方案
注射液有关物质及含量测定⽅法学验证⽅案注射⽤XX有关物质及含量测定⽅法学验证⽅案样品：⾃制XX供试品：批号：市售品：进⼝XX 批号：国产XX 批号：对照品：XX对照品：⾃制，批号：xxxxxx，XX含量：51.27% ⽔分：1.34%A对照品：来源：批号：B对照品：来源：批号：C对照品：来源：批号：1、⽅法验证注射⽤XX是以XX为原料通过复溶并重新冻⼲获得，制品期间未加⼊任何辅料，同时注射⽤XX有关物质及含量测定⽅法与原料测定⽅法完全⼀致，因此注射⽤XX有关物质及含量测定⽅法学验证可与XX原料⽅法学⼀致，此次⽅法学验证使⽤的样品⽤原料（批号：xxxxxx）代替。
2、检测⽅法含量测定照⾼效液相⾊谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。
⾊谱条件与系统适⽤性试验⽤⼗⼋烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以⽔相-甲醇-⼄腈（800：160：16）为流动相；柱温：30℃；检测波长为260nm。
取对照品溶液作为系统适⽤性试验溶液，量取20µl注⼊液相⾊谱仪，各杂质峰之间及主成分峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合规定，理论板数按XX峰计算应不低于3000。
测定法取本品适量，精密称定，加⽔溶解制成每1ml 中约含XX 0.2mg的溶液，作为供试品溶液。
精密量取供试品溶液20µl，注⼊液相⾊谱仪，记录⾊谱图；另取XX对照品适量，同法测定。
按外标法以峰⾯积计算，按⽆⽔物计算，含XX阳离⼦应为50.0%～54.0%。
有关物质照⾼效液相⾊谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。
取本品，精密称定，加⽔溶解并稀释制成每1ml中约含XX 0.5mg的溶液，作为供试品溶液；另分别取A、B、XX、C对照品适量，精密称定，加⽔溶解并定量制成每1ml中约含A 2.5µg、B 2.5µg、XX5.0µg、C 5.0µg的混合溶液，作为对照品溶液。
取对照品溶液20µl，注⼊液相⾊谱仪，出峰顺序依次为A、B、XX、C，调节检测灵敏度，使主成分⾊谱峰的峰⾼约为满量程的10%～30%；再精密量取对照品溶液和供试品溶液各20µl，分别注⼊液相⾊谱仪，记录⾊谱图⾄主成分峰保留时间的6倍。
杂质检查(4节砷盐检查5注射剂有关物质的检查)概要
27
第六章
• （
第四节 注射剂有关物质检查法
28
第六章
注射剂有关物质系指中药材经提取、 纯化制成注射剂后，残留在注射剂中可能 含有并需要控制的物质。 除另有规定外，一般还应控制蛋白质、 鞣质、树脂等；静脉注射液还应控制草酸 盐、钾离子等，其检查方法如下：
29
第六章
一、蛋白质 取注射液1ml，加新配制的30%磺基 水杨酸试液1ml，混匀，放置5min， 不得出现浑浊。注射液中如含有遇酸 能产生沉淀的成分，可改加鞣酸试液 1～3滴，不得出现浑浊。
15
(2)标准砷斑的制备。精密量取标准砷
第六章
（ 3 ）检查法。取按各药品项 下规定方法制成的供试品溶液 , 置A瓶中,加碘化钾试液5ml与酸 性氯化亚锡试液5滴,在室温放置 10min 后,加锌粒2g,立即将照前 法装妥的导气管C密塞于A瓶上, 并将 A 瓶置 25~40℃水浴中 , 反 应45min,取出溴化汞试纸。将 生成的砷斑与标准砷斑比较, 不得更深。
21
第六章
(2)标准砷对照液的制备: 精密量取标准砷溶液5ml,置A瓶中,加盐 酸5ml与水21ml,再加碘化钾试液5ml与酸性 氯化亚锡试液5滴,在室温放置10min后,加锌 粒2g,立即将导气管C与A瓶密塞,使生成的砷 化氢气体导入D管中,并将A瓶置25~40℃水 浴中反应45min,取出D管,添加氯仿至刻度, 混匀,即得。 若供试品需经有机破坏再行检砷,则应取 标准砷溶液代替供试品，照各品种项下规定 的方法同法处理后，依法制备标准对照液。
13
第六章
古蔡氏法检查砷装置 A: 100ml标准磨口 锥形瓶 B: 中空的标准磨口 塞 C: 导气管(外径 8.0mm，内6.0mm)， 全长约180mm D/E :具孔（孔径 6.0mm）的有机 玻璃旋塞
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注射剂中常用辅料及相关杂质测定法
药用辅料系指在药品制剂中经过合理的安全评价的不包括有效成分或前体的组分，配制注射剂时，可以根据药物的性质加入适宜的辅料。
如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、助溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等，注射剂中所用到的辅料应在标签及说明书中标明。
本法可对注射剂中常用辅料（见附表1）和可能引入的有毒有害溶剂二甘醇及三甘醇进行定性鉴别和定量测定。
本法照气相色谱测定法（《中国药典》2005年版二部附录Ⅴ E）测定。
色谱条件
系统一：极性弹性石英毛细管柱，固定液为聚乙二醇(PEG-20M)；初始温度为50℃，保持5
分钟；以每分钟5℃的速度升至220℃。
进样口温度为220℃，检测器温度为250℃。
系统二：中等极性弹性石英毛细管柱，固定液为(6%)腈丙苯基-(94%)二甲基聚硅氧烷；初始温度为50℃，保持3分钟；以每分钟20℃的速度升至220℃。
进样口温度为240℃，检测器温度为260℃。
系统适用性试验
(1) 以待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数一般应不低于5000。
(2) 待测物色谱峰与相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
(3) 对照品溶液连续进样5次，辅料定量测定要求待测物峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于5%，有毒杂质检查要求待测物峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于10%。
测定法：
（1）常用辅料的定性鉴别和定量测定
供试品溶液的制备：取样品适量，精密称定，根据样品处方中辅料的含量用水或合适的有机溶剂（通常使用甲醇）使溶解，并稀释制成每1ml中约含待测成分约500μg的溶液。
对照品溶液的制备：取各品种项下规定要检查的辅料或溶剂适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含500μg的溶液。
分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各1μl注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中待测成分的含量。
（2）二甘醇等有毒杂质的检查
应根据品种项下规定的有毒杂质限度，采用相同的制备方法和溶剂配制供试品溶液和对照品溶液，其浓度应满足系统定量测定的要求。
以二甘醇的检查为例，其限度一般规定为不得过0.1%。
供试品溶液的制备：取本品约5g，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取二甘醇适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含50μg 的溶液作为对照品溶液。
分别精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算二甘醇含量。
计算法：
（1）定性鉴别和定量测定? 供试液中的辅料色谱峰的保留时间与处方辅料对照品色谱峰保留时间一致；按外标法以峰面积计算，相应辅料的含量应为处方标示含量的80.0％～120.0％。
（2）限度检查? 应根据辅料的生产工艺和可能引入的有毒有害杂质制定相应的限度，按外标法以峰面积计算，供试品溶液所测杂质的含量不得大于规定限度或杂质峰面积不得大于对照品溶液的相应峰面积。
【附注】
（1）除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以相互替代使用。
当用系统一测定上述辅料及杂质时，可能会出现几种溶剂共出峰的情况（如乙醇与异丙醇、丙三醇和三甘醇为共出峰），应采用系统二再进行测定。
（2）在建立注射剂质量标准时，可根据供试品和待测辅料的溶解度选择适宜的溶剂且应不干扰待测物质的测定。
如以水为溶剂能满足方法学验证的要求，优先考虑以水作为溶剂。
（3）当供试品溶液中基质存在干扰时，可采用标准加入法测定含量。
（3）对不宜采用气相色谱法测定的注射剂辅料，可采用其它方法如液相色谱法等测定。
图1?? 常用辅料及杂质对照图谱（系统一）
1.异丙醇；
2.正丙醇；
3.二甲基甲酰胺；
4.乳酸乙酯；
5.二甲基乙酰胺；
6.二甲基亚砜；
7.1,2-丙二醇；
8.1,3-丁二醇；
9.1,3-丙二醇；10.苯甲醇；11.二甘醇；12.肉豆寇酸异丙酯；13.三乙酸甘油酯；14.甘油；15.油酸乙酯；16.苯甲酸苄酯
1.甲醇
2.乙醇
3. 异丙醇
4.丙三醇
5. 三甘醇
图2主要辅料及杂质对照图谱（系统二）
附表1.
常用辅料及相关杂质在系统一时保留时间（RRT）参考值
中等极性色谱柱
极性色谱柱
辅料或杂质名称相对保留时间辅料或杂质名称相对保留时间异丙醇0.098 乙醇0.281
正丙醇0.168 异丙醇0.333 二甲基甲酰胺0.500 丙三醇 1.000
乳酸乙酯0.512 三甘醇 1.227
二甲基乙酰胺0.591
二甲基亚砜0.785
1,2-丙二醇0.803
1,3-丁二醇0.956
1,3-丙二醇 1.000
苯甲醇 1.083
二甘醇 1.178
肉豆寇酸异丙酯 1.206
三乙酸甘油酯 1.263
丙三醇 1.469
油酸乙酯 1.564
苯甲酸苄酯 1.683。