抗生素产生菌初步培养和获取
头孢菌素生产工艺流程
头孢菌素生产工艺流程头孢菌素是一种广谱抗生素，可以用于治疗多种细菌感染。
头孢菌素的生产工艺是一个复杂的过程，涉及到微生物发酵、分离提纯和结晶干燥等多个步骤。
以下将详细介绍头孢菌素的生产工艺流程。
1. 选择合适的产菌株头孢菌素的生产通常是利用青霉属菌株进行发酵产生。
在选择产菌株时，需要考虑其生长速度、生产头孢菌素的能力和稳定性等因素。
通常选择优良的头孢菌素产生菌株进行培养和发酵。
2. 培养种子菌在头孢菌素生产工艺中，首先需要进行种子菌的培养。
首先将产菌株接种到固体培养基上，培养出干净的种子菌。
随后将种子菌接种到发酵罐中进行扩大培养，培养出足够数量的活跃的种子菌。
3. 发酵产生头孢菌素接种好的种子菌被转移到发酵罐中，发酵条件包括适宜的温度、pH值、氧气供应、搅拌速度等。
在发酵的过程中，不断地对生产环境进行监控和调节，确保细菌可以充分生长和产生头孢菌素。
4. 分离提取头孢菌素当头孢菌素的生产达到一定程度后，需要对发酵液进行后处理。
首先通过离心等手段将细菌和培养基分离，得到含有头孢菌素的发酵滤液。
随后对发酵滤液进行酸碱调节和有机溶剂萃取等步骤，将头孢菌素从发酵滤液中提取出来。
5. 精制纯化头孢菌素提取出来的头孢菌素需要进行精制和纯化，以去除杂质和提高纯度。
通常采用色谱层析、结晶、结晶回收等技术，对头孢菌素进行纯化处理。
通过多次结晶过程，得到较高纯度的头孢菌素结晶体。
6. 干燥包装头孢菌素得到的头孢菌素结晶体需要进行干燥处理，以去除结晶体中的水分。
干燥的过程中需要注意控制温度和湿度，确保头孢菌素的质量和稳定性。
随后将头孢菌素进行包装，以确保其在储存和运输过程中不受外界环境的影响。
7. 质量控制和检测在头孢菌素生产的每一个环节都需要进行质量控制和检测。
包括对发酵液、提取物、纯化产物和成品头孢菌素进行质量指标的检测和分析，确保其符合相关的药典标准和公司内部要求。
通过以上工艺流程，可以生产出质量优良的头孢菌素产品。
微生物在医药领域的应用
四、抗生素的制备
获取菌种 孢子制备 种子制备 发酵 发酵液预处理 提取及精制 成品检验
成品包装
微生物在医药领域的应用
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（1）菌种：菌种都是从自然界分离、纯化及选育后获得的。 这些菌种通常采用砂土管或冷冻干燥管保存。要经常进行 菌种选育工作，用人工方法加以纯化和育种，才能保持菌 种的优良性状不变。菌种制备要保持严格的无菌状态。
微生物在医药领域的应用
微生物的发酵
目前应用微生物工业把发酵由微生物扩大到植 物、动物，因此工业微生物学家将所有通过微 生物或其他生物细胞（动、植物细胞）或经过 生物工程改造了的“工程菌”的培养来制备工业产 品或转化某些物质的过程，统称为发酵。
微生物在医药领域的应用
微生物发酵的一般工艺
微生物发酵的一般工艺也就是利用深层培养，进 行微生物发酵生产所需要产品的过程。微生物发 酵一般分发酵与提取2个阶段。其生产的一般工艺 流程如下。
（2）孢子制备：将保藏的菌种进行培养，制备大量孢子供 下一步植被种子使用。需氧发酵制备孢子一般是在摇瓶内 进行，通过振荡，外界空气与培养液进行自然交换获得氧 气。培养基要含有生长因子和微量元素，且碳源或氮源不 宜过多，从而保证生产大量的孢子。还要严格控制培养基 的pH、培养温度、培养时间等条件。
（3）种子制备：使有限数量的孢子萌发、生长、繁殖产生 足够量的菌丝体，供发酵培养所用。在种子罐内微生物菌 丝大量生长、繁殖，因而缩短了下一步发酵罐内菌丝生长 的时间。种子罐中的培养液要尽可能与发酵液一致。而且 要有易吸收的碳源和氮源。
合体但靶位仍能保持其功能。 c. 细胞通透性的改变，使药物进入细胞内减少。
微生物在医药领域的应用
3、细菌耐药性产生的防止对策
抗生素产生菌的来源
N-乙酰葡糖胺 N-乙酰胞壁酸
青霉素作用点
❖ （4）羧肽酶抑制剂的筛选
❖ β-内酰胺类抗生素作用于细菌黏肽合成的 最后步骤----交联反应。短肽交联是由转 肽酶催化的，同时伴随有末端D-丙氨酸的 释放。另外D-丙氨酸也可以在DD-羧肽酶 的作用下去除，该酶的活性可以通过二乙 酰基-L-赖氨酸-D-丙氨酸-D-丙氨酸作为 底物，检测释放的D-丙氨酸来定量分析。
注释：（药物的作用方式是阻止病毒在细胞内复制或释放；如果以病毒和 待测样品同时加入，作用方式是阻止病毒吸附到细胞上或直接杀死病 毒。）
2、病毒酶的无细胞系统筛选模型
病毒基因编码的酶在病毒复制过程中起关键作用。 这些病毒酶与细胞同工酶在理化性质上不同，利 用这种差异，以病毒酶为目的靶，建立无细胞反 应系统，直接筛选病毒酶抑制剂。
❖ 几丁质合成酶抑制剂
方法：几丁质合成酶、待测样品、UDP[14C]-N-乙酰葡萄糖胺，缓冲液中反应后 用纸层析法和放射性同位素测定样品抑制 剂的作用。
三、作用于真菌细胞膜抗生素的筛选
主要是一些多烯类抗生素，两性霉素、制霉 菌素等，特点是抗真菌活性强，但是毒性大， 临床使用受限制。
八、抗病毒抗生素的筛选模型
六、抗细菌药物的筛选模型 和方法
（一）以试验菌为对象的筛选方法（常规方法）
利用很多种微生物作为鉴定菌的琼脂扩散法是一种经典的 筛选方法。目前主要筛选耐药细菌和厌氧菌。
1 抗生素耐药突变株的使用
2 超敏菌株的使用：用传统的琼脂扩散法直接检测发酵液 中所存在的少量抗生素，获得新的抗生素的可能性较大
3 利用厌氧菌作为试验株 双层琼脂平板法，拟杆菌属、 梭杆菌属等厌氧菌，治疗厌氧致病菌。
3克隆抗生素的全部结构基因改变表达体系提高产量对于多肽类抗提高其产阿弗米丁是十六元大环的齐墩果二糖衍生物具有广谱高效抗寄生虫活性其产生菌除虫链霉菌发酵过程中产生两类化合物一类是一组结构非常类似的非典型的大环内酯类抗生素其中b1组分活性最强是人们所期有效药物
从自然界中筛选产抗生素的细菌
从自然界中筛选产抗生素的细菌
1
产抗生素细菌在生态系统中具有重要 的生态功能
它们可以通过产生抗菌物质抑制病原 菌的生长和繁殖，从而维持生态系统
的平衡和稳定
2
3
此外，产抗生素细菌还可以作为生物 修复技术中的微生物剂用于修复受损
的环境和水体等
从自然界中筛选产抗生素的细菌
结论
从自然界中筛选产抗生素的细菌是一个重要的研究方向 。通过对不同类型微生物的筛选和鉴定可以发现新的抗 生素品种或寻找新的用药途径提高临床治疗效果同时还 可以应用于生物防治生物工程和生态保护等领域为人类 健康和环境保护做出贡献。然而随着抗生素的广泛使用 和细菌耐药性的增强需要继续加强从自然界中筛选产抗 生素细菌的研究并探索新的应用途径以应对临床治疗面 临的挑战并为人类健康和环境保护做出更大的贡献
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1 引言 3 产抗生素细菌的种类与特点 5 结论
2 筛选方法 4 产抗生素细菌的应用前景 6 挑战与展望
从自然界中筛选产抗生素的细菌
引言
抗生素是微生物产生的一类具有 抗菌活性的物质，对于治疗由细 菌引起的感染性疾病具有重要意 义。然而，随着抗生素的广泛使 用，细菌对抗生素的耐药性逐渐 增强，给临床治疗带来了挑战。 为了解决这一问题，从自然界中 筛选产抗生素的细菌成为了一个 重要的研究方向
总之，从自然界中筛选产抗生素的细菌是一个 持续而重要的研究领域
通过不断深入研究和技术创新，我们有望发现 更多具有临床应用价值的新抗生素，为人类健
康和环境保护做出更大的贡献
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THE PROFESSIONAL TEMPLATE
(3) 深入研究代谢途径和调控机制：通过对产抗生素微生物的代谢途径和调控机制进行深 入研究，可以发现新的抗生素种类和合成途径，为新抗生素的发现提供更多的可能性
抗生素产生菌株的筛选与改造
抗生素产生菌株的筛选与改造抗生素的产生与筛选及菌株改造引言：抗生素是用于治疗和预防细菌感染的重要药物，它们通过干扰细菌的生长和复制过程来发挥作用。
然而，随着时间的推移，细菌对抗生素的耐药性不断增强，逐渐威胁到人类健康。
因此，发现新的抗生素和改造抗生素菌株的研究变得尤为重要。
一、抗生素产生菌株的筛选：1. 采集环境样本：抗生素产生菌株可以从土壤、水、植物及动物等多种环境中分离得到。
科学家往往选择具有高潜力的样本，如土壤富含有机物质的地区、植物的根系等。
2. 分离纯种菌株：从采集的样本中分离出单一的菌株是关键步骤。
这可以通过对样本进行稀释并在富含营养物质的琼脂培养基上进行菌落分离得到。
3. 抗生素活性筛选：将分离得到的菌株进行抗生素活性筛选。
最常用的方法是通过纸片扩散法。
这种方法通过在琼脂培养基上放置含有不同抗生素的纸片，观察菌株对抗生素的敏感性。
敏感的菌株周围的细菌生长受到抑制，形成清晰的抑制圈。
4. 鉴定和培养优良菌株：筛选出具有抗生素活性的菌株后，进行进一步的鉴定和培养。
鉴定工作包括对其形态特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列进行分析，以确定菌株的分类和物种鉴定。
同时，通过大规模培养和优化培养条件，提高抗生素的生产量。
二、抗生素产生菌株的改造：1. 自然突变：通过自然突变可以获得具有新抗生素活性的菌株。
这种突变可以通过辐射、类似病毒的转位子和基因组重组等方式诱导。
2. 基因工程：通过基因工程技术可以改造抗生素产生菌株，并提高其产量和活性。
常见的方法包括插入外源基因、删除或沉默内源基因等。
例如，将关键抗生素合成途径的酶基因转入细菌中，以提高抗生素产量。
3. 代谢工程：代谢工程可以改变细菌的代谢途径，以增强特定抗生素的生产。
这可能涉及到调控菌株的代谢网络，增加生产抗生素所需合成途径的中间物和酶的产量。
4. 抗药基因探索：通过抗药基因探索可以发现新的抗生素靶标和抗生素作用机制。
科学家可以对已知的抗生素靶标基因库进行大规模筛选，以发现新的抗药基因，从而提供了开发新型抗生素的靶点。
抗生素发酵生产工艺
抗生素发酵生产工艺1. 引言抗生素是一类具有抑制或杀死细菌生长的药物，广泛用于医疗领域。
而抗生素的生产则主要通过发酵过程来实现。
本文将介绍抗生素发酵生产的工艺流程及相关要点。
2. 抗生素发酵生产工艺流程抗生素的发酵生产流程一般包括以下几个关键步骤：2.1. 选材与接种抗生素发酵的起点是菌种的选取与接种。
通常选用的是具有产生目标抗生素能力的细菌或真菌菌种。
接种时应注意保持菌种的纯度，并选择合适的培养基进行预培养。
2.2. 发酵罐配置与预处理发酵罐是抗生素生产的核心设备之一，其配置应根据具体抗生素的特性和工艺要求进行选择。
常见的发酵罐包括摇床发酵罐和搅拌发酵罐。
在进一步发酵前，需要进行罐体消毒和培养基的预处理工作。
2.3. 发酵过程控制发酵过程中，需要对发酵罐中的培养基进行控制和调节，以满足微生物的生长和抗生素的产生需求。
常见的控制参数包括pH值、温度、氧气供应和搅拌速度等。
此外，还需监测微生物的生长和抗生素的产量。
2.4. 抗生素提取与纯化发酵结束后，需要进行抗生素的提取与纯化工作。
常见的提取方法包括有机溶剂法和固相萃取法。
提取后的抗生素需经过一系列工艺步骤，如浓缩、结晶和干燥等，以获得高纯度的抗生素产品。
3. 抗生素发酵生产工艺的关键要点3.1. 培养基配方和优化培养基的配方直接影响着菌种的生长和抗生素的产生。
在选择培养基成分时，需根据目标抗生素的特性和菌种的需求进行优化。
常见的成分包括碳源、氮源、无机盐和生长因子等。
3.2. 发酵过程参数的控制与调节发酵过程中的参数控制对于抗生素的产量和品质具有重要影响。
pH值、温度、氧气供应和搅拌速度是常见的控制参数，需要根据具体菌种和抗生素的特性进行合理的调节和控制。
3.3. 发酵罐的选择与配置发酵罐的选择与配置应根据抗生素的需求和工艺要求进行。
摇床发酵罐适用于部分产生低分子量抗生素的菌种，而搅拌发酵罐适用于大规模生产。
同时，罐体的材质、内部结构和附件设置也需要考虑。
万古霉素产生菌的分离及育种
随着对链霉菌的广泛筛选，大量生物活性物质被
重复収现，从链霉菌得到新的生物活性物质的几率逐
渐 下降．因此，那些用常觃方法较难分离到的稀有放 线菌逐渐被重规，获得这些新型菌株可避免对产生已 知生物活性物质的常见菌株的重复分离。稀有放线菌 的 分 离 成 为 获 叏 新 抗 生 素 的 重 要 途 径 之一， 也是获得新种属和新物质的重要手段．
结果 通过利用制霉菌素、重铬酸钾和万古霉素分别抑制真 菌、细菌和链霉菌等杂菌生长，高效地富集稀有放线菌，
从来自厦 门集美的 ２ 号土样中分离 出XM0301 ，在
高氏培养基上为草帽型放射状菌落，白色孢子。
2.菌株鉴定
• 观察菌丝形态、产孢结构和孢子形态 分离菌株形态特征于葡萄糖天冬酰胺琼脂、马铃 薯浸汁琼脂、高氏一号琼脂和 ＹＥＭＥ 培养基上 ２
基因组改组技术是结合经典诱变育种和原生质体融合技
术収展起来的一种育种新手段，在诱变产生遗传多质性的基 础上，通过多亲本原生质体融合，使带有丌同基因位点正向 突变的数个亲本杂交，基因重组产生新的复合子，然后进行 筛选，最后获得具有多重正向进化标记的高效菌株．
1.原生质体诱变
• 发酵培养基初步调整
将XM0301菌种接种到丌同収酵培养基，采用滤纸法 比较活性物质产量。结果表明，１号収酵培养基营养 丰富，収酵产物最高，而且 均匀无沉淀，便于大量突 变菌株产量比较和筛选，故后续育种实验中XM0301 均采用１号収酵培养基． • XM0301原生质体制备
产生万古霉素和利福霉素等重要临床药物，以及其他
抗菌、抗肿瘤等代谢产物。
万古 霉 素 （vancomycin）是 由 McCormick等 于1955年从一株东方拟无枝酸菌（A.orientalis）的
合理使用抗生素的管理方案
合理使用抗生素的管理方案抗生素是临床治疗中常用的一类药物，对于治疗细菌感染有很好的效果。
但是过度使用和不当使用抗生素会导致细菌耐药性的增加，给临床治疗带来挑战。
因此，合理使用抗生素是非常重要的。
针对抗生素的合理使用，医疗机构和医生都应建立相应的管理方案，确保抗生素的合理应用。
下面将针对抗生素的管理方案从不同角度进行详细介绍。
一、在抗生素使用前要进行细菌培养和药敏试验在使用抗生素之前，应该首先进行细菌培养和药敏试验。
通过细菌培养可以确定感染的细菌种类，从而选择对该种细菌具有杀灭作用的抗生素。
而药敏试验则可以判断该细菌对各种抗生素的敏感性，从而找到最合适的药物治疗。
这样可以避免盲目使用抗生素，降低产生耐药菌株的风险。
二、根据临床诊断和指南选择合适的抗生素在临床治疗中，应该根据患者的具体情况和临床诊断选择合适的抗生素。
不同的细菌感染需要选择不同的抗生素进行治疗，因此医生应该根据患者的病情，遵循临床治疗指南选择合适的抗生素。
同时，应该避免盲目使用广谱抗生素，尽量选择对目标细菌有选择性杀灭作用的药物，以减少对正常菌群的影响。
三、严格控制抗生素的开具和使用在医疗机构中，应该建立严格的抗生素使用管理制度，严格控制抗生素的开具和使用。
医生在开具抗生素时应该符合规定的适应证、用药剂量和疗程，避免滥用抗生素。
同时，医疗机构应该加强对抗生素的审批管理，确保抗生素的合理使用，避免滥用和误用。
四、做好抗生素的监测和反馈在抗生素使用过程中，医疗机构应该做好抗生素的监测和反馈。
通过监测抗生素的使用情况和耐药菌株的产生情况，可以及时发现问题并采取相应措施进行改进。
同时，医疗机构应该建立健全的反馈机制，对于抗生素的不当使用要及时进行反馈，指导医生改进用药行为，提高抗生素的合理使用率。
五、加强医生和患者的教育和宣传医疗机构应该加强医生和患者的教育和宣传工作，提高他们对抗生素的认识和正确使用。
对医生要加强抗生素相关知识的培训，提高他们合理使用抗生素的能力。
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抗生素产生菌获得和初筛一：实验目的学习从土壤中分离微生物的方法学习采集样品和制备培养基学习无菌操作技术二：实验原理自然界含菌样品极其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、烂水果等都含有众多微生物，种类数量十分可观。
但总体来讲土壤样品的含菌量最多。
土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方。
从土壤中几乎可以分离到任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都来源于土壤，所以土壤样品往往是首选的采集目标。
一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）>放线菌（107）>霉菌（106）>酵母菌（105）>藻类（104）>原生动物（103），其中放线菌和霉菌指其孢子数同时也可以从其他微生物富集地方（医院附近，废水等）采集样品。
抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。
本实验采用的抗生素为β-内酰胺类——青霉素类和）四环素类——土霉素。
青霉素属于青霉素类抗生素，干扰细菌细胞壁的合成而产生抗菌作用；土霉素属于四环素类抗生素，作用于病原微生体核糖体30S亚基，抑制肽链的增长，影响细菌或微生物的蛋白质合成。
重铬酸钾可作为比较理想的放线菌分离抑制剂。
根据目标菌落出现数量和抑制剂的价格成本, 重铬酸钾是一种理想的放线菌分离抑制剂, 它具有3 个显着特点: ①可抑制土壤中细菌和真菌的生长; ②不影响放线菌的正常生长, 有时还可刺激一些放线菌的生长;③价格低廉, 在进行土壤放线菌大量分离工作中可推广使用。
高氏一号培养基适合放线菌生长。
三：实验材料四：实验内容1.培养基配制高氏一号改良培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1g,氯化钠，K2HPO4 ?3H2O ，MgSO4?7H2O ，FeSO4?7H2O ，琼脂20g，水1000ml，终浓度为50×10-5重铬酸钾，～。
配制时，先用冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。
112℃灭菌20分钟。
冷却后，倒制平板数个。
初筛培养基：改良高氏一号培养基（在原来配置的高氏一号琼脂培养基灭菌后，再分别加入青霉素终浓度为10-5，10-4，10-3的药剂），倒制平板数个2.样品采集分别从土壤中（将表层5cm左右的浮土除去，取5～25处的土样10～25，装入事先准备好的塑料袋内扎好，给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。
一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡），废水（分别取流动处和静止处，并记录相关数据）3 制备稀释液：（1）. 称取土壤1g（或量取1nl水样），放入99mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－2的土壤悬液。
（2）. 另取装有无菌试管5支，用记号笔编上10－3、10－4、10－5、10－6 、10－7 。
在每只试管中用无菌吸管加入无菌水。
（3）.取已稀释成10－2的土壤液，振荡后静止，用无菌吸管吸取土壤悬液加入10－3的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－3土壤稀释液。
同法依次连续稀释至10-4→10 -5→ 10-6土壤稀释液。
在土壤稀释过程中，应用一支吸管由浓到稀，稀释到底，稀释方法见图（1）4：平板涂抹：取无菌培养皿，将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸取对号放入平板上，用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。
（图2）5：培养：将接种后的培养基静置10min后，倒置于28～30℃条件下培养3～4d，计数菌落，并计算出每g土壤中放线菌的数量。
（每毫升样品中微生物细胞数=每皿菌落平均数*稀释倍数*1/取样体积数）6：初筛：选取菌落生长良好，排布均匀的培养基，用接种环分别均匀（3至5处）挑取培养基中的菌落，在无菌条件下分别接种于初筛培养基中，倒置于28～30℃条件下培养3～4d。
抗生素产生菌复筛一：实验目的1.掌握紫外光谱定性检测青霉素的方法2.了解青霉素的抗菌谱二实验原理青霉素是指从青霉菌培养液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，青霉素在氢氧化钠介质中水解为具有还原性的青霉素噻唑酸后，在沸水加热的条件下，于L 硫酸介质中，利用磷钼酸被还原为钼兰的水相显色反应，在720nm处测定其吸光值。
青霉素为β内酰胺抗生素对革兰阳性菌及某些革兰阴性菌有较强的抗菌作用，金黄色葡萄球菌(金葡菌)、肺炎球菌、淋球菌及链球菌等对本品高度敏感；脑膜炎双球菌、白喉杆菌、破伤风杆菌及梅毒螺旋体也很敏感青霉素高活性的β-内酰胺环与敏感细菌胞浆膜上靶分子青霉素酶结合蛋白（penicillin binding protein,PBPs）结合，呈现抑制转肽酶的转肽作用，阻碍黏肽合成的交叉联结过程，造成细胞壁缺损，由于敏感菌体内渗透压高，使水分不断内渗以至菌体膨胀，促使细菌裂解而死。
三：实验材料四：实验内容青霉素产出定性检测1.培养基配制发酵培养基：10%葡萄糖，%-5%麸皮，%% 苯乙酸，硝酸钾1g,氯化钠，K2HPO4 ?3H2O ，MgSO4?7H2O ，FeSO4?7H2O ，水1000ml ~。
分装入三角瓶中，112℃灭菌20分钟。
2.青霉素标液制备准确称取注射用青霉素钾无菌水中，然后移入250ml容量瓶中，无菌水定容至刻度，即得每毫升含毫克的青霉素标准溶液。
2.接种选取经初筛后，生长状态良好的单菌落，在无菌条件下，用接种环挑取菌落接种于发酵培养基中，于25℃培养24h。
3.纯培养菌落获得：取经过24h发酵后的生长状态良好的菌株，接种到高氏一号改良培养基中保存。
青霉素定性检测标准样品制备：吸取青霉素标准溶液1ml于试管中，加入L的Na(OH)溶液，LH2SO4溶液，5％钼酸铵，8％，加入发酵培养基至20ml，摇匀，于沸水中加热20min。
取出冷却，摇匀。
试验品制备：取出L的Na(OH)溶液，LH2SO4溶液，5％钼酸铵，8％于试管中，标号。
加入经过发酵后的发酵培养基至20ml，摇匀，于沸水中加热20min。
取出冷却，摇匀。
空白样品制备：取出加入L的Na(OH)溶液，LH2SO4溶液，5％钼酸铵，8％，加入发酵培养基至20ml，摇匀，于沸水中加热20min。
取出冷却，摇匀。
分光检测：分别以空白样品和标准样品作为对照，在720nm处测定吸光度。
青霉素抗菌谱检测1.培养基配制：高氏一号筛选培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1g,氯化钠，K2HPO4 ?3H2O ，MgSO4?7H2O ，FeSO4?7H2O ，琼脂20g，水1000ml，～。
配制时，先用冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。
112℃灭菌20分钟。
冷却后，向其中加入经发酵培养后的培养液10ml，摇匀，倒制平板数个。
2.敏感菌种接种：在无菌条件下.用接种针（环）将大肠杆菌，葡萄球菌，乳酸菌，酵母菌，短小芽孢杆菌（根据实验室条件）分别用划线法接种在高氏一号筛选培养基中，记号。
于28~30℃培养3-4d。
3.结果观察:观察在实验条件下培养下，敏感菌生长状态。
抗生素产生菌鉴定一：实验目的1.掌握放线菌鉴定的方法。
2.学会使用《伯杰细菌手册》二：实验原理根据放线菌在特定培养基中培养时生长的形态，菌落特征。
以及通过对放线菌进行革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色并观察其运动性，测试其生理生化反应，然后根据实验结果对照《伯杰细菌手册》判断试验中所能够产生抗生素的放线菌的属（类）三：实验材料四：实验内容菌体特征的观察培养基配制：LB固态培养基：950 ml去离子水中加入:蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g待溶质溶解. 琼脂20g，用5mol/LNaOH调pH至.用去离子水定容至℃蒸汽灭菌20min冷却后倒制平板。
PDA固态培养基：马铃薯 200克，葡萄糖 20克，琼脂 15~20克，自来水 1000毫升，自然PH，.120℃蒸汽灭菌20min冷却后倒制平板。
LB液体培养基和PDA液体培养基除琼脂外，成分同上接种培养：分别在LB、PDA 平板上划线接种, 28 ℃培养24～48h。
分别在LB、PDA 液体培养基上接种, 28 ℃摇床振荡(180r/ min) 培养24～48h。
2.菌体形态观察革兰氏染色1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
2）芽孢染色1）将培养的复筛放线菌作涂片、干燥、固定。
（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。
加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。
这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。
（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。
（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色荚膜染色（1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。
（2）干燥：将涂片放在空气中晾干或用电吹风冷风吹干。
（3）染色：在涂面上加复红染色液染色3—5min。
（4）水洗：用水洗去复红染液。
（5）干燥：将染色片放空气中晾干。
（6）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴苯胺黑，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触苯胺黑，使苯胺黑沿玻片后缘散开（夹角30度），然后推向另一侧，使黑素在染色涂面上成为一薄层，并迅速风干。
（7）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。
鞭毛染色A液：% 石炭酸 10 ml b.鞣酸 2 g c. 饱和硫酸钾铝10 mlB液：结晶紫酒精饱和溶液。
应用液：A液10份，B液1份，混合过滤后室温存放a.使用新的载片,因含游离碱较多，所以要用2％盐酸浸泡几小时，用自来水冲洗干净，然后再用蒸馏水洗净，沥干后放于95％乙醇中浸泡24后，取出后烧去酒精，即可使用。
b.b.一张玻片滴蒸馏水2滴，（制两个涂片）；c.c.取幼龄菌菌落少许，将细菌点在玻片上蒸馏水顶部，不要搅动，以免鞭毛脱落，使其自然扩散；d.d.室温自然干燥。
e.e.把 10 份A液与 1 份B液混合过滤后，取染液覆盖于菌膜上，染色15min以上，蒸馏水缓缓冲去染液；f.f.自然干燥后镜检。