气单胞菌MicrosoftPowerPoint演示文稿

嗜水气单胞菌致病因子
外毒素( exotoxin) 由于嗜水气单胞菌基因型的多 样性， 其外毒素的基因差异也很大， 包括气溶素、 溶血素、 溶血毒素和细胞毒性肠毒素等。虽然外毒 素名称各异，但这些毒素在结构和功能上都极为相 似：它们都是单一多肽分子，并且其生物学活性相 同，都具有溶血性、肠毒性和细胞毒性， 因此外毒 素属于同一基因家族。
气单胞菌可引起人肠道感染和肠道外感染 ,如 败血症、 伤口、 眼、 骨关节、 腹腔感染和 其它感染 ,其中嗜水气单胞菌是一种典型的人 -畜 -鱼共患病原菌 ,人类可因致病性嗜水气单 胞菌感染而发生腹泻、 食物中毒、 继发感染 等等。
分类与地位
1984年第 8版《伯杰氏系统细菌学手册 》 中列为弧菌科 , 气单胞菌属。 嗜水气单胞菌：嗜水气单胞菌嗜水亚种、 嗜水气单胞菌
嗜水气单胞菌致病因子
胞外蛋白酶有的具有直接致病性，有的则不具有直 接致病性 ， 但可以活化其他致病因子，外毒素是 以无活性的前体形式存在的， 必须经过蛋白酶将其 前体 C末端的蛋白降解后才具有生物学活性。
总之， 嗜水气单胞菌的致病因子繁多复杂，它们对 机体发挥毒性作用时也不是单个因子独立作用， 而 是相互协同作用于机体的 。
在嗜水气单胞菌的分离鉴定中， 除采用选择培养基R S培养 基及鉴别培养基嗜水气单胞菌( A H M)培养基外，还应借助 一些生化反应将其与假单胞菌、邻单胞菌、肠杆菌、弧菌及 其他气单胞菌进行区分。
蛋白酶是嗜水气单胞菌重要的毒力决定因子，与该菌的致病 性密切相关，凡蛋白酶阳性的嗜水气单胞菌均具致病性。蛋 白酶的检测除采用脱脂奶平板法外，还可采用斑点酶联免疫 试验。
在瓶装天然矿泉水中 ,甚至手术使用的医疗用品中 也能检出气单胞菌。
致病因素
在温血和冷血脊椎动物 (包括青蛙、 鱼、 爬虫、 蛇、 鸟和人 )中 ,气单胞菌与许多种类的疾病有关 , 对人感染主要有两类:
肠道感染和肠道外感染 (败血症、 伤口、 眼、 骨关节、 腹腔感染和其他感染 )。
毒力因子：外毒素、胞外蛋白酶、s蛋白、菌毛、 外膜蛋白、脂多糖等
培养与鉴定
28℃培养 24小时
普通营养琼脂平板 菌落为光滑、 凸起、 圆整、 无色或淡黄色 ,有特殊芳香气味。菌落大小因培养 时间温度而异 ,小如针尖 ,大的直径可达 2～3mm, 不产生色素。
血琼脂 某些菌株即使在 10℃也可产生清晰的β溶血环。
培养与鉴定
注：许多气单胞菌 ,如豚鼠气单胞菌蔗糖或乳糖利用
我中心的食品中气单胞菌药敏试验结果表明，气单胞菌对利 福平、氨苄青霉素的耐药率较高，对丁胺卡那、庆大霉素、 氟哌酸的敏感性高。
微生物特性
形态和染色特征
革兰荚膜 ,无芽孢 ,有时也可呈双球状或丝状。 单极鞭毛 ,固体培养基上的幼龄培养物可形成周鞭
胃肠道感染
腹泻病是气单胞菌感染最常见的临床表现 好发人群主要是 5岁以下儿童 ,成人也有报道 ,但很少引
起旅游者腹泻。 夏季发病率最高 主要由嗜水气单胞菌、 豚鼠气单胞菌和温和气单胞菌
引起气单胞菌相关性胃肠道感染 。 倾向于轻度的、自限性的水样腹泻。但也有出现血便和
粪便白细胞的严重病例 ,与志贺菌所致的痢疾非常相似。 少数情况下还可引起霍乱样腹泻。
本标准可用于嗜水气单胞菌的分离鉴定， 而且可区 分致病性菌株和非致病性菌株，有助于致病性嗜水 气单胞菌感染的确切诊断。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
致病性嗜水气单胞菌检验程序
嗜水气单胞菌的鉴定
检样：
水样的分离用孔径为0.2 μm的硝酸纤维素微 孔滤膜过滤水样,取出滤膜，置含有灭菌碱性 蛋白胨水的试管中。
置2 0 %脱脂奶中， 3 7 ℃封闭1 h 。 用含吐温- 2 0的磷酸盐缓冲液洗5次，每次 2 min。 置1：5 0 兔抗嗜水气单胞菌蛋白酶抗血清中， 3 7
℃作用 1 h。
斑点酶联免疫试验
用含吐温- 2 0的磷酸盐缓冲液洗5 次，每次2min ， 置1：1 0 酶标羊抗兔抗血清中， 3 7 ℃作用 1 h 。
鱼源气单胞菌的优势血清型主要为011、 019和034 引起。国内则多认为 05和 09是引起家养鱼类暴发 性流行病的优势血清型,而人源主要也是 011、 016、 034。
涂片 染色镜检
检验程序
标本
分离培养 （血平板、Mac）
血标本 增菌
氧化酶 TCBS生长
O/129 耐盐试验
可疑菌落 初步生化反应
自然栖息地
主要存在于水生环境包括食品、 地面水、 海水、 河水、 湖泊、 蓄水池和供水系统中 ,其生长密度较 低 ,可小于 1～1 000个细胞 /mL;
在废水、 处理过或未处理的污水、 家庭污水泥浆 中密度很高 ,可高达 1亿个细胞 /mL以上。
许多气单胞菌可在新鲜或储存食品中广泛存在 ,并 且数量很高。
气单胞菌检验及研究进展
概述 流行病学 微生物特性 嗜水气单胞菌的鉴定要点
概述
气单胞菌在自然界分布广泛 ,普遍存在于淡 水、 污水、 淤泥、土壤和人类粪便中 ,有致 病性菌株和非致病性菌株之分。致病菌株可 感染鱼类、 两栖类、 爬行类、 鸟类和哺乳 类等动物 。临床上以急性出血性败血症为主 要特征。
为阳性。
脱 脂 奶 平 板 试 验
脱 脂 奶 平 板 试 验
斑点酶联免疫试验
用铂金耳取A H M鉴别培养基表面菌落少许。接种 蔗糖胰蛋白胨肉汤, 2 8 ℃摇床( 3 0 r / mi n ) 培养4 8 h。1 0 0 0 0 r / mi n离心 1 0 mi n ， 取上清。
用微量加样器取5 μL点样于硝酸纤微素膜光面，3 7 ℃烘干。
嗜水气单胞菌致病因子
嗜水气单胞菌可以通过饮水、 皮肤创伤等途径感染 动物机体， 并在体内经过不同途径对机体的不同器 官进行破坏。
嗜水气单胞菌可产生多种致病因子 气溶素(aerolysin) 、 溶血素(hemolysin)、 溶血毒 素(hemolytic toxin ) 、 细胞毒性肠毒素( cytolyticenterotoxin ) 、 胞外蛋白酶 、Ⅳ型菌毛、 s层蛋 白及载铁体等。
毛。 杀蛙气单胞菌和中间气单胞菌幼菌株无运动性。
培养与鉴定
触酶和氧化酶均为阳性 还原硝酸盐为亚硝酸盐 发酵葡萄糖以及其他许多糖类产酸或产酸产气 生长温度范围广 (0℃～45℃) ,人分离菌株 (嗜常温菌株 )在
10℃～42℃ 间生长 ,而无运动性的嗜冷菌种生长的最高温度 为 37℃(如中间气单胞菌 )或更低一些 (如杀蛙气单胞菌 )。 在脑心浸液培养基 28℃培养条件下 ,可在 pH 4 . 5～9 . 0和 0% ～4%的NaCl浓度生长。 气单胞菌可在许多普通常规培养基上生长 ,如血、巧克力平 板及许多肠道鉴别培养基。
嗜水气单胞菌应为阳性
糖发酵试验
分别接种葡萄糖、 蔗糖、 阿拉伯搪、 七叶 苷及水杨苷等5 种糖发酵试验管, 嗜水气单 胞菌可发酵以上5 种糖类。
嗜水气单胞菌致病性鉴定
脱脂奶平板试验
用铂金耳取A H M鉴别培养基表面菌落少许, 接种划线于1 %脱脂奶蔗糖胰蛋白胨平板。
2 8 ℃培养2 4 h 若菌落周围出现清晰、透明的溶蛋白圈，判
药物敏感性
多数菌株产生β内酰胺酶 ，大多数气单胞菌对青霉素、 氨苄 青霉素、 替卡西林耐药 ，对广谱抗生素先锋霉素、 氨基糖 苷类、 碳青霉烯、 氯霉素、 四环素、 复方新诺明和喹诺酮 类敏感。
我国气单胞菌对抗生素的耐药比较普遍 , 气单胞菌主要 3个 种的耐药率比较 ,对头孢噻肟和头孢美唑的敏感率温和气单 胞菌明显高于嗜水气单胞菌和豚鼠气单胞菌,对其他抗生素的 耐药率各种之间无明显差异。
用含吐温- 2 0的磷酸盐缓冲液洗5 次，每次2 mi n 。 加 3 , 3 -二氨基联苯胺-过氧化氢中显色。 待斑点明显后，用去离子水终止显色。 设无菌肉汤作阴性对照。 以出现明显棕色斑点者判为阳性。
阳性 ,在选择性培养基上发酵乳糖 ,与肠道的常居菌群 不易鉴别。因此使用麦康凯等肠道选择性培养基来分 离气单胞菌时 ,一些菌株很容易被漏检。
碱性蛋白胨水是气单胞菌最有效的增菌培养基。
血清分型
气单胞菌血清学分型主要用于流行病学调查。 多年来的研究表明 ,嗜水气单胞菌、 温和气单胞菌
和豚鼠气单胞菌的分离频率在所有气单胞菌中占有 绝对优势地位 ,其中尤以嗜水气单胞菌为最 ,而其他 种类则极少从环境和腹泻患者中分离出 ,难以形成 种群优势。
菌落形态 嗜水气单胞菌在普通琼脂平板上，2 8 ℃
培养2 4 h后的菌落为光滑、微凸、圆整 、 无色或淡黄色，有特殊芳香气味。
革兰氏染色
嗜水气单胞菌应为革兰氏阴性短杆菌。
氧化酶试验 阳性
嗜水气单胞菌革兰染色
嗜水气单胞菌菌落特征（血平板）
嗜水气单胞菌菌落特征（MAC）
返回
嗜水气单胞菌电镜图
返回
全面生化反应 肠毒素测定
鉴定试验
与肠道杆菌、非发酵菌鉴别 与邻单胞菌属和弧菌属鉴别 气单胞菌属种间鉴别
。 致病性嗜水气单胞菌检验方法
GB/ T 1 8 6 5 2 -2 0 0 2
本标准在嗜水气单胞菌的鉴定中， 参考了《 伯杰氏鉴定细 菌学手册》 (第九版， 1 9 9 4 ) 中有关嗜水气单胞菌的内容。
AHM鉴别培养
用铂金耳挑取普通琼脂平板上氧化酶试验阳性的单 个菌落少许， 穿刺接种AHM鉴别培养基。 3 7 ℃培养2 4 h
结果：顶部仍为紫色，底部为淡黄色; 细菌沿穿刺 线呈刷状生长，即动力阳性; 部分菌株顶部呈黑 色。
AHM
吲哚试验
在长有细菌的A H M鉴别培养基顶部， 滴加3 -4 滴K o v a c s 试剂，若沿试管内壁出现红 色环者，表明产生吲哚，判为阳性。