色谱条件与系统适用性
高效液相色谱系统适用性试验设计的变化趋势
高效液相色谱系统适用性试验设计的变化趋势周晓源,李雪茹高效液相色谱法（HPLC 法）是药物分析中常用的一种定性、定量色谱分析方法。
具有较强的专属性，相对较高的检测灵敏度和良好的量化功能。
2005版《中国药典》使用HPLC 法的品种中，色谱系统适用性试验设计有了较大的变化：指标更加细致、周到，检测更重实效，色谱系统适用性的试验用溶液的制备方法也呈现多样化，体现出一些变化趋势。
１．色谱系统适用性试验的设计与实验目的更加匹配系统适用性试验的严格细腻程度取决于实验目的。
首先应考虑色谱系统被用于何种实验，根据实验目的来设计系统适用性试验。
如果一个HPLC 方法仅用于定性鉴别，就其色谱系统的适用性试验而言可以相对简单宽松，只要可以确保被测成分峰与其他色谱峰有一定的分离度，具有适宜的出峰时间即可达到实验目的。
如果用于定量分析（如含量测定），则除要保证被测成分峰具有适宜的出峰时间外，还需检验系统是否能够保证被测成分峰与其他色谱峰完全分离，分离度一般应在1.5以上，同时还应测试被测成分峰峰面积的重复性是否良好，对照品溶液连续进样5针的峰面积相对标准偏差应不大于２％，被测成分峰的峰型也应基本对称，以保证分离效果和测量精度。
对于小峰（如占总面积10％以下的色谱峰）峰面积的定量，或用峰高法定量时，就应对拖尾因子或对称因子加以严格的规定，一般来说，拖尾因子应在0.95～1.05之间，因为峰的对称性对测量结果影响较大。
如果检查某种药品的有关物质，且还需要分别检查单个杂质和杂质总量，那么系统适用性试验还应有一个重点，就是要有常见杂质难分离物质对分离度的测定指标。
此外系统的检测灵敏度试验也就相对比较重要。
如盐酸二甲双胍的有关物质检查项下要求：盐酸二甲双胍与双氰胺的分离度应大于1.5，检测灵敏度要求调节双氰胺峰高为满量程的10％。
如果色谱系统是一个梯度洗脱系统，有时一个难分离物质对分离度的测试也不能完全达到实验目的。
如果在梯度变化的前后均有需要检测的杂质，分离度的测定指标一般应根据需要在梯度变化之前和之后都可加以制订。
乙醇挥发性杂质检查
3.4.1、色谱条件与系统适用性试验以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液；起始温度40℃，维持12分钟，以每分钟10℃的速率升温至240℃，维持10分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为280℃。
对照溶液（b）中乙醛峰与甲醇峰之间的分离度应符合要求。
3.4.2、测定法精密量取无水甲醇100μl，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（a）；精密量取无水甲醇50μl，乙醛50μl，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，精密量取100μl，置10ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（b）；精密量取乙缩醛150μl，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，精密量取100μl，置10ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（c）；精密量取苯100μl，置100ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，精密量取100μl，置50ml量瓶中，用供试品稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（d）；取供试品作为供试品溶液（a）；精密量取4-甲基-2-戊醇150μl，置500ml量瓶中，加供试品稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（a）、（b）、（c）、（d）和供试品溶液（a）、（b）各1μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液（a）如出现杂峰，甲醇峰面积不得大于对照溶液（a）主峰面积的0.5倍（0.02%）；含乙醛和乙缩醛的总量按公式（1）计算，总量不得过0.001%（以乙醛计）；含苯按公式（2）计算，不得过0.0002%；供试品溶液（b）中其他杂质峰面积的总和不得大于4-甲基-2-戊醇的峰面积（0.03%，以4-甲基-2-戊醇计）乙醛和乙缩醛的总含量%=[(10×A E)/(A T-A E)]+[(30×C E)/(C T-C E)]×100% 公式（1）式中A E为供试品溶液（a）中乙醛的峰面积A T为对照溶液（b）中乙醛的峰面积C E为供试品溶液（a）中乙缩醛的峰面积C T为对照溶液（c）中乙缩醛的峰面积苯含量%=(2B E)/(B T-B E)×100% 公式（2）式中B E为供试品溶液中苯的峰面积B T为对照溶液中苯的峰面积。
高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量
高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量
一、目的
1.熟悉HPLC法测定的原理及操作。
2.掌握外标法测定阿司匹林片含量。
二、仪器与试药
1.仪器
美国PE型高效液相色谱仪Mettler AL204电子天平
容量瓶规格：50mL、100mL 刻度移液管规格：5mL
漏斗定量滤纸（直径10cm）
超声仪
2.试药
阿司匹林片规格：0.3g 阿司匹林对照品冰醋酸
氢氧化钾色谱甲醇超纯水
三、实验内容
1.色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%冰醋酸（50：50）为流动相；流速为每分钟约1.0mL；检测波长280nm。
理论板数按阿莫西林峰计算应不低于1500。
2.对照溶液配制：取阿莫西林对照品适量，精密称定后，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含50μg的溶液
3.样品测定：精密称取细粉适量（约相当于阿司匹林细粉0.05g），置50mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液3mL,置50 mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照溶液同法测定。
按外标法以峰面积计算出样品中阿司匹林（C9H8O4）的含量。
本品含阿莫西林（C9H8O4）应为标示量的93.0%～107.0%。
四、注意事项：
1.高效液相色谱仪严格按照仪器操作规程操作。
2.小心进样操作，以免进样失败或损坏进样器。
五、思考题
高效液相色谱仪操作的注意事项有哪些？
六、参考文献
《中国药典》2010年版二部，285，化学工业出版社。
色谱系统适用性验证报告
色谱系统适用性验证报告一、引言适用性验证是确保色谱系统能够准确、可靠地执行所需分析任务的重要步骤。
本报告旨在详细描述色谱系统适用性验证的过程和结果，并提供全面的文档内容。
二、实验方法1.仪器设备本次实验使用的色谱系统为ABC型高效液相色谱仪，配备了XYZ型色谱柱和UV/VIS检测器。
仪器参数如下：-色谱柱型号：XYZ型-柱温控制范围：25-40℃-流动相：甲醇/水（70:30，体积比）2.样品准备选取了10个常见化学物质作为测试样品，分别是A、B、C、D、E、F、G、H、I、J。
这些样品在目标分析中广泛应用。
3.方法验证首先，根据标准方法设定了色谱系统初始条件，并进行了获得可靠结果所需的一系列参数调优。
然后，将每个样品溶液注射到色谱系统中进行分析。
每个样品分析期间，记录相关结果和参数，如峰面积、保留时间和分离度等。
同时，计算系统的重复性和准确性。
三、结果与讨论1.方法验证结果对于所有样品的分析，色谱系统能够得到良好的分离度和稳定的峰面积。
保留时间的变异性小于0.1%。
重复性试验表明，峰面积和保留时间的变异性很小。
2.结果分析与讨论在本次适用性验证中，色谱系统对所有样品的分离和检测都表现出良好的准确性和重复性。
色谱柱的分离效果得到了验证，可以对各种样品进行准确的分析和定量测量。
同时，样品注射的重复性也得到了验证，证明了色谱系统的稳定性。
四、结论本次适用性验证结果表明，所使用的色谱系统适用于所需的分析任务。
色谱系统的准确性和重复性能够满足分析要求。
在本次实验中，所选的样品均能够得到良好的分离和检测。
建议在实际应用中，继续进行系统的性能监测，以确保色谱分析结果的可靠性和复现性。
ChP、USP、EP、JP、BP对系统适用性的要求
ChP、USP.EP、JP、BP对系统适用性的要求系统适用性是液相和气相色谱方法的重要组成部分,用来确认色谱系统的分离度和重复性能够满足特定的分析要求。
测试是基于将仪器、电路、实验者和样品作为一个整体进行的。
美国药典规定任何色谱试验一定要进行系统适用性测试，否则，这台仪器做出的数据一律无效;ICH 提出一定要将系统作为整体来测试;FDA提到应确定一SOP进行测试确保系统可用；英国药典规定建立系统适用性是为了任何使用方法时都是有效的；欧洲药典提出系统适用性测试反映了色谱系统性能，是建立分析方法不可或缺的一部分；日本药典与美国药典叙述基本一致；GMP指出检查分析方法验证过程时，应涉及是否开发了系统适用性试验，并且对每一项系统适用性试验的参数都进行定义；中国药典并没有单独对系统适用性目的进行叙述，国内色谱工作者往往对系统适用性不够重视，看似简单的系统适用性其实有很多需要关注的地方，其重要性不比方法学中其他验证项差。
一、美国药典系统适用性的要求美国药典并没有明确对分离度、理论塔板数、拖尾因子、重复性及灵敏度的统一要求，在药典正文中各个品种项下分别规定。
当采用标准品或标准品溶液需要重复进样以判断系统的精密度，除非个论中有规定，系统适用性5针的数据的相对标准偏差不得超过2.0%,当超过2.0%时，需要计算连续6针进样的数据。
在含量测定中，系统适用性的相对标准偏差与进样次数和含量限度上限有关，表1是USP对含量系统适用性测试相对标准偏差的规定。
表1USP对含量系统适用性RSD的要求关于对称因子规定参考笔者撰写《拖尾因子、对称因子和不对称因子区别理论》，在此不做赘述。
当系统适用性不符合要求时可以适当调整方法参数，不过每个变量的最大值都应该进行验证其系统适用性，对改变后的方法进行重新评价。
表2是USP对参数调整的规定。
表2USP对系统参数再调整的规定二、欧洲药典和英国药典系统适用性的要求欧洲药典和英国药典对系统适用性要求也做了非常详细的规定，并且对保留时间、保留体积、死体积、死时间等概念做了详细描述。
[医学]欧洲药典HPLC规定
![[医学]欧洲药典HPLC规定](https://img.taocdn.com/s3/m/cc93c4777375a417866f8ffa.png)
±25%，150*4.6mm规格的色谱柱，内径可以改变 ±1.15mm
可以降至50%，10um的粒径可以调整为5um
可适当调整
可以适当调整；一般3~10um，粒径更 小（约2um）可用。孔径：分子量小 于2000，孔径在150A以下；分子量大 于2000，孔径300A。
±50%，1mL/min流速可以在0.5至1.5mL/min范围内变化 可以适当调整
流速501mlmin流速可以在05至15mlmin范围内变化可以适当调整进样体积只要精密度和检测限可以达到要求就可以减少可以适当调整10最大不超过60梯度洗脱一起系统过大的滞留体积会明显改变分离度保留时间和相对保留时间系统适用性试验一关于系统适用性的具体规定进行有关物质或含量测定时除另有规定外色谱图中定量用的对照品溶液其色谱峰对称因子即中国药典中拖尾因子应为0815
对仪器的一般要求和色谱条件
2.流动相 （1）流动相组成比例：±30%，最小组成的比例
可以调整30%，但是，任何组成的比例的改变不能 超过±10%.
例如：60:40乙腈/水，水的比例可以调整±12% （=40*30%），但是这超过了±10%的限制。因此， 这个条件下，水的比例只能在30%至50%之间进行调 整。
5.进样体积：只要精密度和检测限可以达到要 求就可以减少
6.柱温：10%，最大不超过60℃
7.紫外可见检测器检测波长：不允许调整
流动相PH值 缓冲盐浓度
流动相组成比例
欧洲药典与中国药典的比较
欧洲药典EP
中国药典CHP2010
±0.2，pH7.6可以在7.4-7.8之间调整
未明确
±10%，20mM磷酸钾可以在18-22mM范围内，只要pH值符 合要求就行
可以减少进样量，但不得增加。
色谱系统适用性验证报告
色谱系统适用性验证报告验证目的：为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，符合预期的分析应用要求，适用于目前的检测方法，对该仪器进行必要的验证验证结果：一、仪器1仪器：Agilent 1100方法：GB色谱柱：Hypersil ODS2 5μm 4.6mm×250mm理论塔板数按VA醋酸酯反式峰计算应不低于2000流动相：以水：乙腈：异丙醇（12.5:75:12.5）为流动相，流速为1.0mL/min进样体积：20μL检测波长：326nm温度：25℃供试品溶液制备：精密称取VA醋酸酯样品适量，用乙醇溶解并稀释成8.0×10-6g/ml对照品溶液制备：精密称取VA醋酸酯标准品适量，用乙醇溶解并稀释成8.0×10-6g/ml实验结果：1.理论塔板数、分离度测定次数12345理论塔板数1302013265132751327313280理论塔板数均值13222分离度 2.01 2.00 1.87 1.86 1.72分离度均值 1.89色谱图见图1-图5测定次数12345保留时间13.29913.30813.31213.31613.322保留时间均值13.311RSD0.058%峰面积2494.12481.92486.82499.42490.6峰面积均值2490.6RSD0.24%色谱图见图6-图103.拖尾因子测定次数12345拖尾因子 1.003 1.005 1.006 1.004 1.006拖尾因子均值 1.005色谱图见图6-图10仪器：Agilent 1100方法：GB色谱柱：Hypersil ODS2 5μm 4.6mm×250mm理论塔板数按VA醋酸酯反式峰计算应不低于2000流动相：以水：乙腈：异丙醇（12.5:75:12.5）为流动相，流速为1.0mL/min进样体积：20μL检测波长：326nm温度：25℃供试品溶液制备：精密称取VA醋酸酯样品适量，用乙醇溶解并稀释成8.0×10-6g/ml对照品溶液制备：精密称取VA醋酸酯标准品适量，用乙醇溶解并稀释成8.0×10-6g/ml实验结果：1.理论塔板数、分离度测定次数12345理论塔板数1297713225131381336313235理论塔板数均值13188分离度 1.99 1.95 1.84 1.86 1.80分离度均值 1.89色谱图见图11-图152.重复性测定次数12345保留时间12.92213.01313.12713.02812.958保留时间均值13.010RSD0.54%峰面积2422.52411.52414.62419.22418.3峰面积均值2417.2RSD0.16%色谱图见图16-图203.拖尾因子测定次数12345拖尾因子0.9880.9920.9920.9970.994拖尾因子均值0.993色谱图见图16-图20三、仪器4仪器：Agilent 1100方法：GB色谱柱：Hypersil ODS2 5μm 4.6mm×250mm理论塔板数按VD3峰计算应不低于2000流动相：以水：甲醇：乙腈（9:47:44）为流动相，流速为1.5mL/min进样体积：20μL检测波长：265nm温度：30℃供试品溶液制备：精密称取VD3油样品适量于皂化瓶中，加入约30mL乙醇溶解，90 ℃水浴回流30min，冷却后用乙醇稀释成1.0×10-3g/ml对照品溶液制备：精密称取VD3标准品适量于皂化瓶中，加入约30mL乙醇溶解，90 ℃水浴回流30min，冷却后用乙醇稀释成1.0×10-3g/ml实验结果：1.理论塔板数、分离度测定次数12345理论塔板数1508215549151151536515622理论塔板数均值15347分离度 4.69 4.81 4.60 4.60 4.63分离度均值 4.67色谱图见图21-图252.重复性测定次数12345保留时间29.50429.56029.52629.55529.544保留时间均值29.538RSD0.070%峰面积687.64698.01696.97689.47695.74峰面积均值693.67RSD0.60%色谱图见图26-图303.拖尾因子测定次数12345拖尾因子 1.034 1.025 1.028 1.023 1.039拖尾因子均值 1.030色谱图见图26-图30四、仪器6仪器：Agilent 1200方法：GB色谱柱：Hypersil ODS2 5μm 4.6mm×250mm理论塔板数按VA棕榈酸酯反式峰计算应不低于2000流动相：以甲醇：异丙醇：乙腈（47:9:44）为流动相，流速为1.0mL/min进样体积：20μL检测波长：326nm温度：25℃供试品溶液制备：精密称取VA棕榈酸酯样品适量，用乙醇溶解并稀释成8.0×10-6g/ml对照品溶液制备：精密称取VA棕榈酸酯标准品适量，用乙醇溶解并稀释成8.0×10-6g/ml实验结果：1.理论塔板数、分离度测定次数12345理论塔板数1807518092175041778417800理论塔板数均值17851分离度 1.40 1.38 1.37 1.34 1.30分离度均值 1.36色谱图见图31-图352.重复性测定次数12345保留时间27.25027.24427.29027.30527.300保留时间均值27.278RSD0.094%峰面积2989.62983.02966.92978.62964.6峰面积均值2976.5RSD0.32%色谱图见图36-图403.拖尾因子测定次数12345拖尾因子 1.079 1.080 1.060 1.069 1.068拖尾因子均值 1.071色谱图见图36-图40五、仪器7仪器：agilent 1100方法：色谱柱：Hypersil ODS2 5μm 4.6mm×250mm理论塔板数按VD3峰计算应不低于2000流动相：以水：甲醇：乙腈（9:47:44）为流动相，流速为1.5mL/min进样体积：20μL检测波长：265nm温度：30℃供试品溶液制备：精密称取VD3油样品适量于皂化瓶中，加入约30mL乙醇溶解，90 ℃水浴回流30min，冷却后用乙醇稀释成1.0×10-3g/ml对照品溶液制备：精密称取VD3标准品适量于皂化瓶中，加入约30mL乙醇溶解，90 ℃水浴回流30min，冷却后用乙醇稀释成1.0×10-3g/ml实验结果：1.理论塔板数、分离度测定次数12345理论塔板数1416314389141491438214357理论塔板数均值14288分离度 4.49 4.51 4.48 4.50 4.50分离度均值 4.50色谱图见图41-图452.重复性测定次数12345保留时间29.64829.68629.30129.20729.288保留时间均值29.43RSD0.68%峰面积773.37777.42779.17782.05777.59峰面积均值777.92RSD0.36%色谱图见图46-图503.拖尾因子测定次数12345拖尾因子 1.076 1.074 1.069 1.074 1.076拖尾因子均值 1.074色谱图见图46-图50附录一：1．理论塔板数计算公式：n=16(t R/W)22．分离度：除另有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5计算公式：R=2(t R2-t R1)/(W1+W2)式中：t R2为相邻两峰中后一峰的保留时间t R1为相邻两峰中前一峰的保留时间W1及W2分别为此相邻两峰的峰宽3．重复性：采用外标法时，通常取各品种下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积的测量值的相对标准偏差应不大于2.0%4．拖尾因子计算公式：T=W0.05h/(2d1)式中：W0.05h为5%峰高处的峰宽d1为峰顶点至峰前沿之间的距离引用：中国药典2010版二部附录V D 高效液相色谱法11。
色谱系统适用性验证报告
色谱系统适用性验证报告一、目的二、验证项目1.准确性验证准确性验证主要是通过测定含有已知浓度标准物质的样品，与标准值进行比较，评估色谱系统的准确性。
2.灵敏度验证灵敏度验证是为了评估色谱系统对于低浓度目标物的检测能力，一般通过连续浓度递减的样品，检测其极限检测浓度。
3.稳定性验证稳定性验证是为了评估色谱系统在长时间运行过程中的稳定性，通过连续测定多个时间点的样品，评估结果的稳定度。
4.重复性验证重复性验证是为了评估色谱系统在同一样品多次测定的结果的一致性和可重复性。
三、验证方法1.准确性验证选取几个已知浓度的标准物质样品，进行色谱测定，并与标准值进行比较，计算测定结果的相对偏差。
2.灵敏度验证制备一系列不同浓度的样品，测定其响应信号与浓度的相关性，计算灵敏度的标准曲线。
3.稳定性验证连续测定多个时间点的样品，记录结果并比较差异，评估结果的稳定性。
4.重复性验证选取同一样品，进行多次测定，比较结果的一致性和可重复性，计算相对标准偏差。
四、结果及讨论根据以上验证方法，完成了色谱系统的适用性验证。
准确性验证结果显示，测定结果与标准值之间的相对偏差在允许范围内，说明色谱系统具有较好的准确性。
灵敏度验证结果显示，在所测定的目标物浓度范围内，色谱系统的响应信号与浓度呈现良好的线性关系，且极限检测浓度符合要求，表明色谱系统具有良好的灵敏度。
稳定性验证结果显示，色谱系统在长时间运行过程中测定结果的波动较小，具有较好的稳定性。
重复性验证结果显示，多次测定结果的一致性较好，相对标准偏差在可接受范围内，说明色谱系统具有较好的重复性。
五、结论通过色谱系统的适用性验证，结果显示该色谱系统具有良好的准确性、灵敏度、稳定性和重复性。
因此，该色谱系统可适用于特定样本测定，对于保证分析结果的准确性和可靠性具有重要意义。
六、改进建议为进一步提高色谱系统的性能，建议在实际应用中进行常规维护和校准，确保仪器的正常运行。
同时，根据具体样品特点和要求，合理选择色谱柱和分析方法，提高分离能力和检测限。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1.1.1.色谱条件与系统适用性
色谱柱：Cosmonsil C18反相柱（4.6×150mm，5μm）；流动相：甲醇-水（75：25）；柱温：25℃；检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μL。
理论板数按反式-橙花叔醇峰计算应不低于4000。
橙花叔醇对照品中反式-橙花叔醇的含量测定
称取橙花叔醇对照品25mg于100ml量瓶中，用75%甲醇稀释定容，得0.25mg/ml橙花叔醇对照储备液。
精密吸取对照品储备液2.0ml至10ml量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，连续进样3次，测定峰面积，用面积归一化法求出反式-橙花叔醇在对照品中占96.5%。
1.1.
2.线性范围考察
精密吸取2.1.3项下储备液2.5，2.0，1.5，1.0，0.5，0.1ml至10ml量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成一系列浓度的橙花叔醇对照品溶液，进样20μL，测定。
以反式-橙花叔醇的峰面积（Y）对其浓度（X）做线性回归，得回归方程为Y=4485.7X+4.9342，R=0.9991，表明反式-橙花叔醇在进样量为
0.0464~1.1584ug之间线性关系良好。
1.1.3.精密度试验
精密吸取2.1.3项下的橙花叔醇对照品储备液2.0ml至10ml量瓶中，75%甲醇稀释定容，摇匀，连续进样6次，测定峰面积，以反式-橙花叔醇计，RSD为
0.19%。
1.1.4.包合物供试品溶液的制备
称取降香挥发油-羟丙基-β-环糊精包合物50mg，置10ml量瓶中，加入适量75%甲醇溶解，超声10min，并用75%甲醇稀释定容，摇匀，作为供试品溶液。
1.1.5.重复性试验
取同一批包合物样品，按2.1.5项下方法平行制备6份供试品溶液，进样，依次测定峰面积，计算反式-橙花叔醇含量，RSD为？%，表明该方法重复性良好。
1.1.6.稳定性试验
按照2.1.6项下方法制备供试品溶液，分别在0，4，8，12，24小时进样测定峰面积，计算反式-橙花叔醇含量，RSD为1.1%，表明本品在24小时内稳定。
1.1.7.回收率试验
称取已知含量的同一批次包合物供试品9份至10ml量瓶，分成三组，每组分别精密加入0.4mg/ml橙花叔醇对照品溶液0.8，1.0，1.2ml，加75%甲醇溶解，超声10min，稀释定容，摇匀，进样，由峰面积计算反式-橙花叔醇含量，并计算每组平均回收率为？%，？%，？%，RSD分别为？%，？%，？%。