实验三 病原性球菌 (2)
主管检验技师考试临床医学检验微生物检验讲义第13章病原性球菌及检验
病原性球菌及检验● 考点葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属生物学性状微生物学检查法临床意义（致病性、所致疾病）【内容讲解】普及共性，单记个性生物学性状形态与结构：革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。
培养特性：对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。
生化反应：特殊生化。
抗原：分类：致病性致病物质所致疾病微生物学检查：针对生物学性状和致病性。
一、葡萄球菌属一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。
（一）生物学特性1.形态与结构G+，球形，0.5～1.5μm，呈葡萄串状成堆排列（在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列），无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。
2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。
普皿：圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。
可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。
血琼脂平板：几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。
液体培养基：生长迅速呈均匀混浊状。
3.生化反应触酶试验（+）；多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气；分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶（多数致病性葡萄球菌）。
4.抗原（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。
存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。
（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。
5.分类（1）《伯杰系统细菌学手册》（2）古典分类法6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐。
是抵抗力最强的无芽胞细菌。
（二）临床意义葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。
（1）金黄色葡萄球菌致病物质：血浆凝固酶；葡萄球菌溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮溶解毒素；毒性休克综合征毒素。
病原性球菌知识点思维导图
（3）万古霉素耐药肠球菌感染，应实施隔离
革兰阴性球菌——奈瑟菌属
多为鼻、咽喉、口腔黏膜正常菌群，抵抗力下降时偶尔致病
（1）形态染色
①双球菌，成双排列 ②革兰阴性
1.生物学性状
（2）特殊结构
鞭毛：无 荚膜：有 菌毛：有
芽胞：无
营养：营养要求高
2.培养
培养基及菌落
巧克力色血琼脂平板，灰白色、圆形凸起、光滑菌落 为提高淋病奈瑟菌检出率，可用万古霉素、多黏菌素等选择性培养基
⑤青霉素为首选治疗药物
多数菌株不致病或致病力弱，少数菌株对人致病
（1）生物学性状
①形态染色
双球菌，菌体呈矛头状，宽端相对，尖端向外 革兰阳性
②特殊结构（同化脓性链球菌）
营养、气体、温度要求同“化脓性链球菌”
菌落与化脓性链球菌类似
（2）培养
培养基及菌落：血琼脂培养基（血平板）
有氧培养→菌落周围有α溶血环 厌氧培养→菌落周围β溶血环
①样本
感染性病灶：取穿刺液、脓液、分泌液、脑脊液、胸腹水、血液等 食物中毒：取剩余食物、呕吐物
②涂片→染色→镜检→通过形态、排列方式、染色初步诊断
③分离培养
触酶（+）
葡萄糖√
（7）微生物学检查（自学了解）
④生化实验
糖发酵试验：产酸不产气
乳糖√ 麦芽糖√
甘露醇：只有致病菌菌株可分解甘露醇
蔗糖√
⑤血浆凝固酶试验→区分金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌
病原性球菌（化脓性球菌）
一、葡萄球菌属
1.是最常见的化脓性球菌，是医院内感染的重要传染源
（一）概述
2.目前发现的葡萄球菌属细菌有32种，寄生人体的有16种
3.只有金黄色葡萄球菌能产生“血浆凝固酶”，又称血浆凝固酶阳性葡萄球菌。
医学微生物学习题及答案6-病原性球菌
医学微生物习题第8章病原性球菌一、名词解释1．SPA 2.血浆凝固酶 3..M蛋白 4.链道酶 5.链激酶二、填空题1.化脓性球菌主要包括革兰阳性球菌如、、和革兰阴性球菌如、、等.2. 试验阳性是致病性葡萄球菌的重要标志.3.病原性球菌中能引起毒素性食物中毒的是 .4.葡萄球菌所致疾病主要有侵袭性疾病和毒素性疾病两大类 ,其中毒素性疾病主要包括、、、 .5.按溶血现象链球菌可分为、、三大类.6.在鉴别甲型溶血性链球菌与肺炎球菌时常做、试验.7.培养脑膜炎球菌常用的培养基是 .8.脑膜炎球菌的致病因素有、、 .9.脑膜炎球菌的形态呈 ,在患者脑脊中多位于内,革兰染色 .10.检查流脑患者或疑是流脑患者可采取、、等标本,带菌者检查主要采取进行微生物学检查.11.脑膜炎球菌抵抗力极弱,对、、等均高度敏感.12.亚急性细菌型心内膜炎的病原体是 .13.在不形成芽包的细菌中, 抵抗力最强的是 .14.链球菌感染易于扩散 ,其原因是该菌能产生 ; 浓汁稀薄是因为该菌产生所致.15.淋球菌主要以方式传播, 引起 .16.能产生自溶酶的球菌有、 .17.SPA的生物学活性是: 可与分子的非特异性结合.18.金黄色葡萄球菌可引起及两大类感染.19.A群溶血型链球菌可引起化脓性感染、及 .20.甲行溶血型链球菌是及部位的正常菌群.21.胆汁溶菌试验可用来鉴别菌与菌.22.肺炎球菌的致病物质主要是 ,可引起 .23.奈氏菌属包括菌和菌.24.脑膜炎球菌初次分离培养时需在提供气体的配养基中生长 .25. 菌及菌不能耐受低温。
三 .单选题1.关于金黄色葡萄球菌 ,下列哪种说法是错误的A.耐盐性强B.在血平板上形成完全透明的溶血环C.引起局部化脓性感染时病变比较局限D.不易产生耐药性 ,抵抗力强E.革兰阳性菌2.下列哪项不是金黄色葡萄球菌的特点A.血浆凝固酶试验阳性B.产生溶血素C.分解甘露醇D.产生耐热核酸酶E.胆汁溶解试验阳性3.葡萄球菌致急性胃肠炎的致病因素是A.杀白细胞素B.溶血毒素C.肠毒素D.血浆凝固酶E.红疹毒素4.SPA在致病中的作用是A.抑制吞噬细胞的吞噬作用B.因其有抗原性C.是一种毒素D.能破坏吞噬细胞E.在菌体表面形成保护层5.葡萄球菌的培养特性是A.营养要求高 ,必须在血平板上才能生长B.均能产生金黄色色素C.分解菊糖产酸D.耐盐性强, 可在含10%～15%NaCL的培养基中生长E.专性需氧6.关于乙型溶血型链球菌 ,下列哪项是错误的A.是链球菌属中致病力最强的B.感染容易扩散C.可引起超敏反应性疾病D.产生多种外毒素 ,故可用类毒素预防E.对青霉素敏感7.用于辅助诊断风湿热的抗＂O＂试验原理是A.溶血反应B.凝集反应C.凝集溶解反应D.血凝抑制反应E.毒素与抗毒素中和反应8.肺炎链球菌的致病因素主要是A.内毒素B.外毒素C.荚膜D.菌毛E.侵袭性酶9.关于淋球菌 ,下列错误的是A.Gˉ肾性双球菌 B人是本菌唯一宿主 C.通过性接触传播 D.新生儿可经产道传播E.女性感染个者比男性严重10.链球菌感染后引起的变态反应性疾病是A.产褥热B.风湿热C.猩红热D.波状热E.以上都不是11.自鼻咽拭子中分离出一株细菌 ,其菌落周围有草绿色溶血环 ,胆汁溶解试验阳性 ,最可能是哪中细菌A.乙性溶血型链球菌B.甲型溶血型链球菌C.绿脓杆菌D.副溶血性弧菌E.肺炎链球菌12.下列哪种细菌感染一般不侵入血流A.葡萄球菌B.淋球菌C.脑膜炎球菌D.伤寒杆菌E.链球菌13.可与IgGFc段结合的细菌表面蛋白是A.M蛋白;B.Vi抗原;C.葡萄球菌表面蛋白A;D.炭疽杆菌荚膜多糖抗原;E.大肠杆菌K抗原14.能产生SPA的细菌是A.葡萄球菌B.乙性溶血型链球菌C.白喉杆菌D.百日咳杆菌E.肉毒梭菌15.目前葡萄球菌对青霉素的耐药性以达A.50%B.50%~60%C.70%~80%D.80%以上E.90%以上16.引起烫伤样皮肤综合症的微生物是A.回归热螺旋体B.衣原体C.产气荚膜梭菌D.肺炎球菌E.金黄色葡萄球菌17.可增强链球菌扩散能力的致病物质是A.DNA酶B.红疹毒素C.M蛋白D.多糖蛋白E.透明质酸荚膜18.根据抗原结构分类 ,链球菌分20个群 ,对人致病的90%属于A.A群B.B群C.C群D.D群E.E群19.亚急性新内膜炎是一种（）A.葡萄球菌引起的感染；B.衣原体引起的感染；C.大肠杆菌引起的感染D.甲型溶血性链球菌；E.乙型溶血性链球菌20.治疗链球菌引起的感染应首选的抗生素是（）A.链霉素；B.青霉素；C.灭滴灵；D.红霉素E.克林霉素四、问答题1.简述金黄色葡萄球菌的致病物质。
病原性球菌的检验
病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。
⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。
分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。
（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。
（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。
（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。
（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。
⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。
⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。
⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。
金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。
因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。
无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。
致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。
培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。
），在麦康凯琼脂平板不生长。
2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。
5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。
6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。
4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
实验四病原性球菌的检验
1、标本采集：脓液
2、检验程序：
脓液
↓
↓
直接涂片
分离培养
革兰染色镜检 （操作）（血琼脂平板）
↓
↓ 37℃ 18～24h
初报 挑取可疑菌落（性状、色素、溶血）
↓
鉴定试验及药敏试验
↓
↓
↓
↓
革兰染色镜检 生化反应鉴定 其他鉴定 药敏试验
↓
↓
↓
↓
↓37℃ 18～24h
报告
三、葡萄球菌属生物化学反应：
（一）触酶试验（操作）
规定时间内出现清晰凝集者为阳性，不出现凝集 者为阴性。
主要用于风湿热的辅助诊断：
风湿热患者ASO大多在250单位；
活动性风湿热患者ASO一般≥400单位。
『实验报告』
绘出化脓性球菌镜下形态图。 记录脓液标本的分离培养与鉴定程序。
实验四 病原性球菌的检验
病原性球菌，又称化脓性球菌，根据革 兰染色性的不同，分为两类： G＋球菌： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链 球菌等。 G- 球菌： 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 等。
『目的要求』
掌握：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜 炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的形态及染色特点；葡 萄球菌、链球菌的菌落特点及链球菌在血琼脂 平板上的溶血性；血浆凝固酶试验、触酶试验 的试验方法、结果及意义。
四、抗链球菌溶血素“O”的测定（乳胶法，示教）
1、原理：ASO高滴度的血清被适量溶血素“O”中 和后，失去了正常水平量的抗体，多余的抗“O” 抗体与ASO乳胶试剂反应，出现肉眼可见的，清 晰均匀的凝集颗粒（ASO乳胶试剂系羧化聚苯乙 烯乳胶与溶血素“O”共价交联的产物）。
2、方法：（略）3、结Fra bibliotek及意义：1、原理：
微生物免疫学实验报告
1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的：5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。
因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。
1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。
2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。
对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。
3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。
避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。
置于干燥处，以防受潮。
(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）一、实验内容：3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的：1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
医学微生实验 本科实验三细菌致病性及病原性球菌-PPT文档
平板划线分离及菌落观察
菌落形态观察： 菌落的色泽、大小; 表面光滑或粗糙、边缘整齐否; 隆起度、透明度等 不同形态菌落代表不同的细菌
斜面移种法及色素观察
观察细菌在斜面上所形成的菌苔。 绿脓杆菌产生水溶性色素，使整个培养基变绿。 金葡菌产生脂溶性色素，培养基不变色。
存在部位
细胞壁成分、细菌裂解释出
活菌分泌或细菌溶解散出
化学成分
脂多糖
蛋白质
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用
弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，等
强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现
抗原性
弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素
链球菌 G+链状 甲链 不完全溶血 条件致病菌 乙链 完全溶血 致病菌 丙链 不溶血 不致病
肺炎球菌 G+成双 不完全溶血 胆汁溶菌试验 胞外 、荚膜
镜下 培养 毒力及鉴别实验
脑膜炎 G-成双 巧克力平板 球菌 胞内 CO2
细菌生化反应结果分析
H2S产生试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
硫酸亚铁半固体
乙型副伤寒
黑色沉淀物
细菌生化反应结果分析
葡萄糖发酵试验 乙型副伤寒（产酸产气） 培养基红→黄色，有气泡 史氏痢菌（产酸不产气） 培养基红→黄色，无气泡
细菌生化反应结果分析
吲哚试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
内毒素检测方法——鲎试验
试剂：鲎试剂 内毒素、生理盐水 试验结果观察： 鲎试验(+)：出现凝固
外毒素的毒性作用
实验试剂：破伤风杆菌培养物 破伤风抗毒素 实验动物：小白鼠 试验结果观察： 细菌培养物→小鼠强直性痉挛
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金葡
金黄色
表皮葡萄球 菌 白色或 腐生葡萄球 柠檬色 菌
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2、血浆凝固酶试验
问：血浆凝固酶有几种？其作用机制如何？
试管法（示教）
玻片法（个人操作）
（1）标记后，生理盐水各1滴 （2）无菌操作，取菌苔少许，与N.S. 混 匀，观察有无自凝 （3）各加兔血浆1滴，混匀 （4）观察现象： S.a （5）得出结论：
第三次实验 病原性球菌
试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔分别放置在试 管架中间两行。器材使用以后，必须放回原处，依次摆整 齐。
实验室器材 整齐有序,值日生最后整理要求如图。
病原性球菌 Pathogenic cocci
• 葡萄球菌属 Staphylococcus • 链球菌属 Streptococcus
作业 • 绘图注意事项：
– – – – 用红蓝蜡笔绘图。 注意菌体大小合适 标出菌体颜色，显示肺炎双球菌典型排列方式 特殊结构， 荚膜：无色
脑膜炎球菌
金黄色葡萄球菌血平板
表皮葡萄球菌血平板
金黄色葡萄球菌
乙型溶血性链球菌血平板
鉴别致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌5大指标
甘露 醇发 酵 ＋ 血浆 凝固 酶 ＋ 耐热 核酸 酶 ＋
色素 致病性 葡萄球 菌 非致病 性葡萄 球菌
溶血 素 ＋
1、病原性球菌的形态染色镜下观 察与血平板培养特点
• 镜下示教片： – 革兰染色标本片：葡萄球菌、链球菌 – 荚膜染色标本片：肺炎链球菌 （大小、形状、排列、染色反应 ） • 血平板上菌落观察： – 金黄色和白色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌 （大小、形态、表面、边缘、透明度、色素、 溶血性）
链球菌 葡萄球菌
• 出现颗粒状凝集：＋ • 不凝集：－
S.e
3、透明质酸酶试验
（1）取家兔一只，将其背部两侧对应部位剪毛、 消毒 （2）0.5ml溶血性链球菌培养物滤液+1%台盘蓝 （实验组） 0.5ml生理盐水+1%台盘蓝（对照组） （3）于家兔背部两侧分别皮内注射混合物0.5ml （4）注射完毕立即测量两侧台盘蓝扩散直径，1h 后再次测量两侧台盘蓝直径 （5）观察结果，得出结论
– 金黄色葡萄球菌 S. aureas – 链球菌 – 肺炎链球菌 S. pneumoniae – 脑膜炎球菌 N. meningitidis – 淋病双球菌 N. gonorrhoeae
• 奈瑟菌属 Neisseria
1. 病原性球菌的形态染色镜下观察与血平板 培养特点（示教） 2. 血浆凝固酶试验 • 试管法（示教） • 玻片法（个人操作） 3.透明质酸酶试验（示教） 4.肺炎链球菌感染小白鼠，解剖小白鼠 肺炎链球菌荚膜染色（个人操作）
注射混合物后： 对照组 试验组
60分钟后： 对照组 试验组
4.肺炎链球菌感染小白鼠，解剖小白鼠
3. 肺炎链球菌Hiss荚膜染色（个人操作）
无菌棉签取小鼠腹腔液或心血涂片
涂片（均匀） 自然干燥
1%结晶紫2’
倾去多余染液
20%硫酸铜冲洗
吸干、镜检
染色结果：背景：紫色，菌体：紫色， 荚膜：无色