小鼠肾脏移植模型具体步骤及说明
小鼠肾细胞实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握小鼠肾细胞培养的方法。
2. 观察小鼠肾细胞的形态和生长特点。
3. 了解小鼠肾细胞培养过程中的注意事项。
二、实验材料1. 实验动物：8周龄健康雌性小鼠。
2. 实验试剂：不含Ca2+和Mg2+的1PBS、青霉素、链霉素、0.1%明胶、0.1%胰蛋白酶溶液、DMEM培养液、胎牛血清、成纤维细胞生长因子、庆大霉素、青霉素、链霉素、抗细胞角蛋白抗体、抗角蛋白抗体、抗波形蛋白抗体、抗结蛋白抗体、抗-平滑肌肌动蛋白抗体。
3. 实验器材：眼科剪、眼科镊、无菌消毒手术器械、网筛、离心管、T25培养瓶、倒置显微镜、培养箱等。
三、实验方法1. 取材：将小鼠处死后，无菌条件下迅速取出肾脏，用生理盐水冲洗干净，剥离肾被膜。
2. 切取肾皮质：将皮质组织剪成2-3mm的细条。
3. 消化处理：将肾皮质组织在100目不锈钢网筛上轻轻研磨，并用生理盐水冲洗，收集滤液。
将滤液再用150目的网筛过滤，收集网筛上富含肾小管的间质碎片。
4. 培养细胞：将收集到的间质碎片加入含有0.1%胰蛋白酶溶液的培养皿中，在37℃、5%CO2的培养箱中消化5-10分钟。
待细胞变圆后，用吸管吹打细胞，使其悬浮。
5. 制备细胞悬液：将消化后的细胞悬液用无菌离心管离心，弃去上清液，加入适量的DMEM培养液重悬细胞。
6. 细胞接种：将细胞悬液接种于T25培养瓶中，放入培养箱中培养。
7. 细胞观察：在倒置显微镜下观察细胞的生长情况，并拍照记录。
四、实验结果1. 细胞形态：接种后，细胞逐渐贴壁生长，呈上皮细胞样、成纤维细胞样和淋巴母细胞样等多种形态。
2. 细胞生长特点：细胞生长迅速，2-3天内即可铺满培养瓶底部。
3. 细胞鉴定：通过细胞角蛋白、角蛋白、波形蛋白、结蛋白和-平滑肌肌动蛋白等抗体检测，确认细胞为小鼠肾细胞。
五、实验讨论1. 小鼠肾细胞培养的成功率为80%左右，说明实验方法可靠。
2. 在细胞培养过程中，要注意无菌操作，避免污染。
小鼠肿瘤模型的原理和方法及流程
小鼠肿瘤模型的原理和方法及流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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小鼠肾细胞分离制备及培养方法2
小鼠肾细胞分离制备及培养方法2小鼠肾细胞分离制备及培养方法实验目的：原代肾细胞作为一种常用的肾脏毒理学研究对象，其分离方法主要有机械研磨分离法和酶消化法,酶消化法因对细胞损伤小、分离效果好而优于机械研磨分离法。
酶消化法主要是胰蛋白酶消化法和胶原酶消化法,，本实验为了达到更好的效果，决定将这两种消化法结合使用,。
体外培养肾细胞是一种可以精确模仿体内肾脏活动的简单系统。
通过研究肾细胞体外培养可以解决临床上供体肾短缺问题，为治疗慢性肾功能衰竭等疾病，提供了肾脏移植基础条件。
实验材料：○1实验动物：小鼠○2主要仪器及试剂：高压蒸气灭菌锅"离心机"烘干箱"水浴锅"超净工作台""1460 培养基"小牛血清"胰蛋白酶和IV型胶原酶"75% 乙:醇" .○3胶原酶消化液：含0.05%IV型胶原酶,24mg/ml Hepes,3.9mg/ml NaCl,0.5mg/ml KCl, 0.7mg/ml CaCl2.2H2O;胰蛋白酶消化液:含0.05%胰蛋白酶,0.02%EDT A,8.0mg/ml NaCl,0.4 mg/ml KCl,0.06mg/ml Na2HPO4.H2O, 0.06mg/ml KH2PO4, 0.35mg/ml,0.35mg/mlNaHCO3。
○4RPMI1640培养液:含10%胎牛血清,100U/ml青霉素,100Ug/ml链霉素;MEM培养液:含10%胎牛血清,100U/ml青霉素,100Ug/ml链霉素。
实验步骤：○1肾细胞分离将大鼠脱颈椎处死,无菌取肾,剪取肾皮质部分,移入小烧杯内,剪成1mm3左右的组织块,用生理盐水反复冲洗,吸弃上清液,将沉淀用于以下试验。
○2胶原酶、胰蛋白酶两步消化法：将组织碎块中加入足量胶原酶消化液,37水浴振荡消化5分钟后,用吸管吹打数次,吸取:上清存于4e冰箱内,剩余组织块继续加入胶原酶消化液37e水浴振荡消化,每隔5分钟,用吸管反复吹打,收集上清,直至组织块消化完全。
小鼠体内实验的原理及步骤
小鼠体内实验的原理及步骤
小鼠体内实验是一种常用的动物模型，用于研究人类疾病的发生机制、新药的疗效以及毒理学研究等。
以下是小鼠体内实验的一般原理和步骤：
原理：
小鼠模型可以模拟人类疾病的发生和发展过程，并且小鼠的遗传背景和生理学特点与人类有高度的相似性。
通过在小鼠体内进行实验，可以观察和分析病理生理变化或药物作用，深入了解机制。
步骤：
1. 实验设计：制定研究目的、假设和实验方法。
选择合适的小鼠品系、性别和年龄，确保实验结果的可靠性和可重复性。
2. 小鼠饲养：提供适宜的饲料和水源，维持小鼠健康的饲养环境，包括适宜的温度、湿度和光照条件。
3. 模型建立：根据研究目的，采用不同方法建立疾病模型，如基因敲除、药物诱导或移植等。
4. 实验操作：根据具体实验方法，进行小鼠的操作，如给药、注射、取样、手术等。
需要进行安全有效的操作，以保证实验的正确性和可行性。
5. 观察记录：观察并记录小鼠的行为、生理指标、疾病表型等变化。
可以利用图像学、生化学和遗传学等方法进行定量分析。
6. 数据分析：对实验结果进行统计学分析，验证假设并得出结论。
可以采用图表、统计学指标和图像等形式呈现结果。
7. 论文撰写：将实验结果进行整理、分析和总结，撰写研究论文，并在相关学术期刊上发表或进行学术交流。
需要注意的是，在进行小鼠体内实验时，要遵守动物实验伦理规范和有关法律法规，确保对小鼠的福利和尊重。
C3肾小球肾炎 小鼠模型
所有年龄组都受到影响，DDD的平均年龄低于C3GN
大多数患者的血清C3水平较低
MPGN Ⅲ
C3肾小球肾炎-肾脏病理
C3肾小球病是一种组织病理学诊断
该疾病的定义是在肾活检样本中，免疫荧光染色存在
唯一(或至少显著) C3阳性，其强度至少比任何其他免疫
荧光高两个数量级
光学显微镜结果多种多样，范围从无肾小球细胞增生
American Society of Nephrology (ASN), 2021(1).
B
多处肾小球病变，包括膜增生性肾小球病（图C）、系膜细胞肥大
（图D）、节段性至整体性肾小球硬化（图E）、纤维蛋白沉积伴坏死
和白细胞浸润（图F和G）以及上皮新月体（图G）。
C3 hu/hu小鼠表现出BUN（肾小球滤
可能表现为边界不清的内皮下(膜内和/或上皮下)包涵体
动物模型Ⅰ-C3人源化小鼠（C3hu/hu）
• C3hu/hu小鼠具有许多与人类C3GN相似的病理学特征，是一种理想的C3GN模
型。 C3hu/hu小鼠的表型可能源于人C3蛋白与多种小鼠补体蛋白的相互作用
失调，导致通过旁路途经（AP）的C3激活不受调节。
过的标志物）显著升高，表明肾衰竭
（图A）。尿白蛋白显著升高，表明肾
小球损伤（图B）
动物模型Ⅱ-补体H因子敲除小鼠（
−/−
Cfh ）
C3 and C9 in 2-month Cfh–/– mice
雄性Cfh−/−敲除小鼠表现出更低的死亡率和更高的成模率；2月龄小鼠免疫荧光结果显示肾脏
有明显的C3和C9沉积，和少量IgG。
C3肾小球肾炎
一种简易小鼠皮肤移植模型的建立
一种简易小鼠皮肤移植模型的建立皮肤移植模型是一个监测T淋巴细胞反应快速和简便的方法，是探讨免疫排斥反应及鉴定近交系小鼠的基本方法之一，较其他器官移植更便于观察移植物的存活。
根据移植皮片的来源不同，常用的小鼠皮肤移植方法有背-背法、耳-背法、尾-背法等[3]。
不同的来源的皮肤有其不同的优缺点，在参考相关文献基础上，我们建立了小鼠尾部来源皮片进行背部移植的方法。
材料与方法一、实验材料1.实验动物：昆明小鼠18只。
8～12周龄，雄性，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。
2.器材和药品：显微镊，齿状镊，剪刀，培养皿，刀片，创可贴，棉签，生理盐水，10 g/L戊巴比妥，体积分数为75%乙醇，络合碘，医用生物蛋白胶，医用脱脂纱布，灭菌医用棉签。
二、实验方法1.麻醉：腹腔注射10 g/L戊巴比妥（0.1 ml/10 g）麻醉小鼠，观察5min，待麻醉生效后再操作。
2.获取尾部皮肤：以体积分数为75%乙醇和络合碘分别消毒小鼠尾部，用刀片进行断尾，断尾长度可以根据所需皮肤多少进行调整，一般在中部或尾部1/3处。
左手用齿状镊固定断尾端，右手持刀片从两根尾静脉之间划开皮肤，暴露出皮下白色肌腱。
用弯镊将断尾端皮肤从切口处拨开，齿状镊固定尾骨，弯镊夹紧皮肤剥下。
将剥下的皮肤放入盛有无菌生理盐水的小皿中，小皿置于冰上，组织面朝下，剪下0.5 X 1.0 cm2 皮肤待用。
3. 皮肤移植：将进行自体移植的小鼠背部朝上，确定移植床部位。
移植床大多选择胸部背侧或两侧，该部位有肋骨支撑，血液循环丰富，利于存活，且胸廓可限制术后包扎的力度。
将确定移植床部位的毛发用75%乙醇湿润，用新刀片将移植床部位剥皮，络合碘消毒后，齿状镊夹住皮肤，剪下略大于0.5 X 1.0 cm2的皮肤，即为移植床。
取供者皮片，轻放在移植床上（组织面朝下），剪去除多余皮片，使其平整地覆盖在移植床上。
用1ml注射器针头轻挑医用生物蛋白胶，轻轻点在皮肤接缝处表面位置，切忌蛋白胶不可完全渗透入接缝处，避免蛋白胶将供体与受体皮肤隔离，影响血管和神经重建。
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤原型物种人来源黑色素瘤B16细胞导致的肿瘤肝转移及肺转移模式动物品系SPF级C57BL/6小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为18g~20g。
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期4-6 weeks建模方法恶性黑色素瘤(malignant melanoma MM)的发病率较低, 但恶性度高, 转移早而广泛，且对常规放疗有较强抗性，临床治疗颇为棘手，目前尚无有效的治疗方法，其常规治疗主要有免疫治疗、化疗、生物治疗、近距放射疗法和外束放射疗法等。
近年恶性黑素瘤发病率和死亡率明显上升，肿瘤侵袭及转移是其治疗失败的主要原因，很大一部分肿瘤病人在初治时已有微小的或潜在的转移病灶。
为了能彻底治愈癌症，控制肿瘤侵袭和转移是治疗的关键。
黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部的自发性肿瘤，C57BL/6小鼠的B16移植瘤和转移瘤模型是肿瘤研究的常用模型之一。
小鼠成瘤实验：取对数生长的细胞，胰酶消化后培养基重悬收集细胞，用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)调整细胞密度备用。
选用C57BL/6J 小鼠建立B16 细胞肿瘤转移模型，每组10 只。
试验组小鼠尾静脉注射浓度为5×10 6 /L 的B16 细胞悬液0.1ml，每组于接种细胞次日起腹腔注射药物，10 日后改为隔日注射一次。
于第21天，处死动物，取肝脏及肺组织，解剖镜下计数转移的结节数量，数码相机拍照，并对各组小鼠肺转移结节的数目进行统计学分析。
应用肿瘤转移疾病模型模型评价各组小鼠尾静脉注射接种肿瘤细胞后，生长良好，体重无明显变化，组间无明显差异。
第21 天时处死小鼠，取肝脏及肺组织，解剖镜下观察，可发现肝脏及肺组织有明显转移的结节。
解剖镜下计数转移的结节数量，可见给药组小鼠肝脏及肺结节数目明显低于阴性对照组。
取材：1.实验结束后每组取肝组织、肺组织和肿瘤组织，每个组织从瘤体中央分为2份，一份置于甲醛固定；另一份液氮冷冻置于-80度保存，用于分子生物学和WB检测等等。
关于器官的实验报告
一、实验目的1. 了解器官移植的基本原理和过程。
2. 掌握器官移植实验的基本操作方法。
3. 分析器官移植的优缺点及适用范围。
二、实验原理器官移植是指将一个健康或功能正常的器官移植到患者体内，以替代其受损或功能丧失的器官。
器官移植分为自体移植、同种移植和异种移植三种。
本实验主要研究同种移植，即供体和受体为同一种族，但非同一生物体。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠、兔等。
2. 实验器材：解剖显微镜、手术器械、移植器官保存液、消毒液等。
3. 实验试剂：抗生素、抗凝剂、生理盐水等。
四、实验方法1. 供体器官的采集：选择健康的小鼠作为供体，采用戊巴比妥钠麻醉后，无菌操作下取出心脏、肝脏、肾脏等器官。
2. 受体器官的预处理：将小鼠麻醉后，无菌操作下切除相应器官，并立即置于移植器官保存液中。
3. 器官移植：将供体器官与受体器官进行吻合，采用静脉吻合和动脉吻合两种方法。
4. 术后护理：术后给予受体小鼠抗生素、抗凝剂等药物治疗，观察移植器官的功能恢复情况。
五、实验结果与分析1. 实验结果显示，小鼠心脏、肝脏、肾脏移植成功率较高，移植器官功能恢复良好。
2. 静脉吻合组小鼠移植器官功能恢复较快，术后7天基本恢复正常生理功能；动脉吻合组小鼠移植器官功能恢复较慢，术后14天基本恢复正常生理功能。
3. 术后观察，移植器官周围无明显的排斥反应，移植器官与受体器官吻合良好。
4. 实验结果说明，同种器官移植在动物实验中具有可行性，且移植成功率较高。
六、实验讨论1. 器官移植在临床医学中具有重要意义，能够挽救许多患者的生命。
本实验通过动物实验验证了同种器官移植的可行性，为临床器官移植提供了实验依据。
2. 器官移植过程中，移植器官的保存和吻合技术是关键。
本实验中，采用移植器官保存液和无菌操作，提高了移植器官的保存质量，降低了术后排斥反应的发生。
3. 器官移植术后，抗排斥治疗是关键环节。
本实验中，给予受体小鼠抗生素、抗凝剂等药物治疗，有效降低了术后排斥反应的发生。
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小鼠肾脏移植模型具体步骤及说明
动物案例
57BL/6、BALB/C
造模方法
血管吻合采用供受体腹主动脉和下腔静脉端-侧连续缝合，尿路重建采用供受体输尿管端-端吻合
供体手术
腹部正中切口，选择左肾作为供肾，显露左肾及血管，游离左肾血管下方1.0～1.2cm处的腹主动脉及下腔静脉，结扎并剪断其侧支和左侧精索动静脉、左肾
上腺动静脉，游离左肾及输尿管，阻断远心端腔静脉和腹主动脉，于左肾血管上方分别结扎阻断腹主动脉和下腔静脉，并在左肾血管下方约5mm处剪断下腔静脉，以使灌注液从此处流出，6号套管针穿刺腹主动脉远端，拔取针芯，低压、匀速(0.8～10ml/min)注入10～15ml4℃的H-CA液，直至从下腔静脉流
出清凉的灌注液和左肾变为黄白色为止。
灌注完毕，在结扎线以上剪断腹主动脉和腔静脉，在左肾输尿管中段剪断输尿管。
此时左肾、血管及输尿管均已完
全游离，将左肾及其附带的血管、输尿管放入4℃H-CA液中保存。
受体手术
腹部正中切口，肠管右置，盐水纱布覆盖，充分暴露左肾及血管。
将4℃肝素盐水2ml(50U/ml)注入右侧腹膜后进行全身肝素化。
以5/0的线结扎肾蒂，行包膜下肾切除。
游离左肾动脉下方1.0～1.2cm处的腹主动脉和下腔静脉，并结
扎其所有的侧支，在腹主动脉的预计吻合口处，仔细剪去部分血管外膜，以备血管吻合。
在受体大鼠腹部左侧，将供肾放在两层冰棉片之间，维持供肾的低温状态。
分别在左肾血管下方和髂血管水平处用阻血夹阻断下腔静脉和腹主动脉的血流。
判断确无血液回流后，将下腔静脉和腹主动脉分别纵向剪开一与供
体血管口径相吻合的小口，长约4～6mm。
在6～10倍手术显微镜视野下，先吻合动脉后吻合静脉，第1针从12点的位置开始，用9/0线做连续吻合血管右侧壁直至6点位置，然后连续吻合左侧壁，每侧缝6～7针，以同样的方法吻合下腔静脉。
吻合结束后，开放阻血夹，可见供肾迅速转红，肾动脉有明显搏动，肾静脉充盈。
如果吻合口有渗血，轻压2～3min，不要随便加针，以免造成吻合口狭窄。
尿路重建
血管吻合成功后，观察2～3min，见供肾输尿管蠕动并有清亮的尿液流出时开始重建尿路。
在平受体左肾下极水平处锐性游离受体输尿管并剪断，修剪供体输尿管至合适长度，肝素盐水冲洗断端。
25倍显微镜视野下，用11/0的显微手术缝线两定点法间断1～2针吻合输尿管前壁，以两定点牵引线翻转至输尿管后壁，间断1～2针吻合供受体输尿管后壁，完成尿路重建后，观察吻合口有无狭窄和血栓，若输尿管蠕动正常，将肠管左置，肾包膜下行受体右肾切除。
关腹
腹腔无出血渗血及棉球滞留后，将肠管复位。
将肝素盐水2～4ml注入腹腔，以补充受体体液丢失并防止血栓形成。
用1/0线腹壁分层连续缝合关腹。
造模周期
约1h一对
模型成功率
90%。