细胞生物学实验及研究方法 (2)
细胞生物学的研究方法
细胞生物学的研究方法
细胞生物学是研究细胞的结构、功能和生理过程的科学。
在细胞生物学的研究中，有许多常用的方法。
以下是其中一些常见的研究方法：
1. 细胞培养：将细胞从其天然环境中分离出来，并在实验室中以适当的培养基中培养细胞。
细胞培养使得研究人员能够对细胞进行控制和观察。
2. 显微镜观察：使用光学显微镜或电子显微镜观察细胞的形态、结构和运动。
光学显微镜可以用来观察活细胞，而电子显微镜则能够提供更高分辨率的细胞图像。
3. 免疫细胞化学：使用特异性抗体与细胞中的特定蛋白质结合，然后通过染色或荧光探针，观察并分析这些蛋白质在细胞中的分布和表达水平。
4. 分子生物学技术：包括PCR、DNA克隆、基因测序和蛋白质表达等技术，可以用于研究细胞中的基因和蛋白质。
5. 细胞色素分析：利用生物化学检测方法，测定细胞内特定生物分子的含量和代谢活性，以研究细胞功能和代谢过程。
6. 分离和纯化细胞器：通过细胞破碎和离心技术，将细胞内不同的细胞器分离和纯化出来，以研究它们的结构和功能。
7. 基因编辑技术：如CRISPR/Cas9，可以对细胞中的基因进行精确编辑和改变，以研究基因对细胞功能的影响。
8. 活体成像：利用荧光探针或标记的蛋白质，观察和记录活细胞的动态变化，如细胞分裂、运动和细胞内信号传导等。
以上只是细胞生物学研究中的一些常见方法，实际研究中可能还会使用其他特定的技术和方法，具体取决于研究的目的和需要。
细胞生物学的实验方法和技术
细胞生物学的实验方法和技术细胞生物学是研究细胞结构、功能和生命活动的学科，可以帮助我们了解生命的起源和本质。
在细胞生物学领域，实验是非常重要的，因为只有通过实验才能获取丰富的数据和信息。
接下来，我们将介绍一些常用的细胞生物学实验方法和技术。
1. 细胞培养细胞培养是一种将细胞放置在含有营养物的培养基上的实验方法。
这种方法可以被应用于很多方面，例如研究基因表达、病理生理学和新药发现等领域。
细胞培养通常要求细胞处于可能生长和分裂的特定生长条件下，培养基的配方和组成要根据细胞类型进行调整。
2. 免疫荧光染色免疫荧光染色是一种将抗体特异性地与待检测蛋白质结合，然后用荧光染色剂标记抗体的实验方法。
这种方法被广泛应用于检测蛋白质的组织学定位、蛋白质相互作用和细胞信号传导等方面的研究。
3. 细胞色素c释放实验细胞色素c释放实验是通过检测细胞色素c的释放来检测细胞凋亡状况的实验方法。
这种实验需要将细胞暴露在合适的刺激条件下，然后收集细胞，用针头机械破碎并分离出线粒体，接着用色素c检测试剂。
此方法可以被应用于癌症治疗、新药研发和基础细胞生物学研究等领域。
4. 网格溶解实验网格溶解实验是一种检测细胞侵袭和扩散能力的实验方法，常用于研究细胞恶性生长、转移和肿瘤治疗等领域。
这种实验需要在培养皿中放置一层含有孔的膜，将预处理好的细胞悬浮在孔上方的区域，然后留置一段时间等待细胞穿过孔隙层次，最后收集并处理细胞样本，通过各种方式检测细胞侵袭和扩散的情况。
5. 蛋白-蛋白相互作用实验蛋白-蛋白相互作用实验是一种检测蛋白质互相作用的实验方法。
这种实验有几种方法，包括酵母对二杂交法、共免疫沉淀法和化学交联法等。
这些方法可以帮助我们了解蛋白质相互作用的机制，为研究信号转导、基因表达和疾病机理等领域提供参考资料。
以上是几种常用的细胞生物学实验方法和技术。
每一种方法都有自己独特的适用范围和步骤，研究者们需要根据具体的实验内容选择合适的方法。
细胞生物学实验实验报告
细胞生物学实验班级：生科142姓名：旷江学号：10143131组号： 2小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞华东理工大学应用生物学系摘要本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。
关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构AbstractThe cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life.Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur目录第一章综述 (1)1.1实验目的 (1)第二章实验原理 (2)2.1实验流程和应用实验方法 (2)2.2细胞器活体染色与显微观察 (2)2.3细胞骨架的观察 (3)2.4细胞冻存复苏 (3)2.5细胞冻存复苏活力检测 (3)2.6哺乳动物细胞的基因转染 (4)2.7细胞凋亡诱导和分析 (4)第三章实验仪器及试剂 (6)3.1实验仪器 (6)3.2实验试剂 (6)第四章实验步骤............ 错误！未定义书签。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告动物细胞融合【实验目的】⒈了解动物细胞融合的常用方法。
⒉学习化学融合的基本操作过程。
⒊观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融合和电激诱导融合。
⒈病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。
这类病毒的被膜中含有融合蛋白，可介导病毒和宿主细胞融合，同时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
⒉化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是被广泛使用的化学融合剂。
⒊电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验用品】⒈材料鸡血红细胞。
⒉试剂50%PEG、Hank’s溶液(pH7.4)、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
⒊器材正置显微镜、离心机、离心管、载玻片、盖玻片、滴管、注射器等。
【实验步骤】⒈鸡血红细胞的制备和保存用无菌注射器先吸入Alsevers溶液1ml，再从鸡翼下静脉取血0.5~1ml，取出后放入刻度离心管中，再加入2~3mlAlsevers溶液，使总量为4~5ml，混匀并封口，置于4℃冰箱内。
细胞生物学的基本实验技术和方法
细胞生物学的基本实验技术和方法细胞生物学是现代生命科学的一个重要分支，研究细胞的结构、功能、遗传和分子机制，对于理解生命的本质、疾病的发生和治疗具有重大意义。
本文将介绍一些细胞生物学的基本实验技术和方法，包括细胞培养、荧光显微镜、免疫染色、蛋白质电泳和PCR等。
一、细胞培养细胞培养是细胞生物学中最基本的实验技术之一，它是将细胞放入含有营养物质、生长因子和抗生素等的培养基中，使其在适当温度、湿度和CO2浓度下生长、增殖、分化或转化的过程。
细胞培养的方法非常丰富，可以根据细胞来源、类型、培养条件等进行分类，常用的有原代培养、细胞系、肿瘤细胞和原生动物等。
细胞培养可以用于研究细胞形态、生长特性、细胞周期、信号转导和基因调控等方面，也是制备疫苗、生产蛋白质和细胞治疗等方面的基础技术。
二、荧光显微镜荧光显微镜是一种利用荧光探针和激光光源来照射样品并检测荧光信号的显微镜，在细胞生物学中起着至关重要的作用。
荧光探针可以有机会或无机盐的形式存在，它们可以与细胞的生物分子如蛋白质、核酸等结合并发生光学反应，发射出荧光信号。
荧光显微镜具有高分辨率、高灵敏度、多重标记和实时成像等优点，可以用于研究细胞形态、结构、功能、互作和代谢等方面，还可以用于细胞追踪、基因表达、蛋白质定位和药物筛选等方面。
三、免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原相结合来检测或定位生物分子的技术，在细胞生物学和免疫学中广泛应用。
抗体是由 B 细胞产生的一类蛋白质，它可以通过特异性与异物（如细胞表面抗原、蛋白质、核酸等）结合，从而实现对它们的检测和定位。
免疫染色有直接和间接两种方法，前者是将荧光染料或酶标记直接连接在一级抗体上，后者是将荧光染料或酶标记连接到二级抗体上，再与一级抗体结合来增强信号。
免疫染色可以用于鉴定细胞类型、检测蛋白质表达、定位细胞器、分析信号通路和检测抗体反应等方面。
四、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种利用电场和凝胶电泳技术来分离和检测蛋白质的方法，在细胞生物学和生物化学中起着重要作用。
细胞生物学研究方法
细胞生物学研究方法细胞生物学是生物学的重要分支，它研究细胞的结构、功能和活动特征。
而现代细胞生物学的研究方法却是非常多样化的。
一、细胞培养技术细胞培养技术是现代细胞生物学最重要的实验手段之一。
它可以用来研究细胞的生长、分裂、分化和死亡等基本生物学过程，同时也可以用来筛选和测试新药物。
在细胞培养方面，流行的方法包括传统的水平指向法、悬浮式培养法、三维培养法等。
其中，三维培养法是比较新的技术，它可以用来模拟体内的三维环境，提高细胞培养的成功率。
二、显微镜技术显微镜是细胞生物学研究中必不可少的工具。
根据不同的研究目标，可以使用不同的显微镜。
光学显微镜用于观察细胞表面结构和细胞内分子分布，而电子显微镜用于观察细胞的内部结构和纳米级别的分子组成。
与传统显微镜相比，近年来兴起的超分辨率显微镜则更加革命性。
超分辨率显微镜可以在纳米级别下观察细胞内部的生物活动，这种技术又被称为“光学雷达”。
三、基因编辑技术基因编辑技术是一种能够修改基因的方法，它可以用于研究某些基因在细胞生物学中的作用。
最著名的一种基因编辑技术是CRISPR/Cas9，它可以精确地切割DNA序列，进而实现基因的精准编辑。
基因编辑技术的核心技术是分子生物学，分子生物学技术的快速发展促进了基因编辑技术的加速发展。
同时，这些技术也正在被用于战胜某些遗传疾病。
四、蛋白质组学技术蛋白质组学技术是一种研究细胞内蛋白质分布、结构和功能的技术。
目前，主要的蛋白质组学技术包括蛋白质电泳、蛋白质质谱和蛋白质芯片技术等。
在这些技术中，蛋白质质谱技术是一个较为常用的技术。
蛋白质质谱技术可以快速而准确地识别和定量细胞内蛋白质。
它可以被用作生物医学和生命科学的研究手段，推动蛋白质研究的发展。
总之，在现代细胞生物学研究中，许多方法都得到了迅速发展。
这些方法的应用广泛，它们推动着细胞生物学的不断前进。
未来，我们相信这些工具将继续提高我们对细胞结构、功能及疾病机制的认识。
细胞生物学的实验方法与技巧
细胞生物学的实验方法与技巧细胞生物学是研究细胞结构和功能的科学领域。
在细胞生物学中，实验方法和技巧是非常关键的。
细胞生物学的实验技术涉及到多种技术和方法，包括细胞培养、细胞分离、荧光显微镜、分子生物学等等。
在本文中，我们将会详细讨论细胞生物学中的实验方法和技巧。
一、细胞培养技术细胞培养技术是研究细胞生长、增殖、衰老等生理状态的一种重要的实验技术。
细胞培养技术通常需要使用一个适宜的培养基，该培养基还需要添加适当的营养物质和培养物质。
在培养细胞时，需要注意适宜的温度、湿度、和二氧化碳含量等因素，这些因素可以影响细胞的状态和生命活动。
另外，在细胞培养中，不可避免地会遇到一些问题，例如细胞的寿命、细胞的死亡、菌污染等问题。
为避免这些问题，需要在实验中采取一些必要的预防措施。
例如，可以使用无菌操作技术，采用CDMF等杀菌剂消毒培养器、培养器中的培养物料，这样可以有效防止细胞因菌污染而死亡。
二、细胞分离技术细胞分离技术是研究细胞的单个特性、形态和功能的一种技术。
在实验中需要利用细胞分离技术来获得一定数量的单个细胞。
细胞分离技术有多种方法，包括分离器分离、离心分离、胶体分离和酶消化等，每种方法都有其优缺点。
其中，酶消化是一种比较常见的细胞分离方法，通过加入一定量的酶，将组织内的胶原纤维、纤维素及其他基质物质消化掉，从而获得单个细胞。
在酶消化实验中，需要根据不同细胞类型、不同组织、不同生长状态等因素进行调整，以获得最佳效果。
三、荧光显微镜技术荧光显微镜技术是一种广泛用于生物学和生命科学中的高级显微镜技术。
在细胞生物学研究中，荧光显微镜技术是最常用的技术之一，因为它可以用来标记和检测细胞内的各种生物大分子，如蛋白质、核酸、酶等。
在荧光显微镜实验中，使用的荧光探针要与待检测的细胞相匹配，例如，使用荧光染料DPH来探测细胞内外膜分子的相互作用。
同时，还需注意荧光显微镜的光源选择、荧光图像的采集和分析等问题，以获得高质量的研究数据。
细胞生物学实验报告(3篇)
细胞生物学实验报告（3篇）细胞生物学实验报告（精选3篇）细胞生物学实验报告篇1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100_）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
吖啶橙染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。
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研究生课程考核试卷（适用于课程论文、提交报告）科目：细胞生物学实验及研究方法教师：宋关斌姓名：学号：专业：生物学类别：学硕上课时间：年月至年月考生成绩：卷面成绩平时成绩课程综合成绩阅卷评语：阅卷教师(签名)重庆大学研究生院制重庆大学生物工程学院2014级硕士生《细胞生物学实验及研究方法》课程考核1.试结合你感兴趣的领域，以某种细胞为研究对象，依据本学院的实验条件设计一个1年期的小课题。
请简述立题依据和拟选取的研究内容和研究方法。
（20分）答：目前癌症的发病率越来越高，其中肺癌的发病率更是居高不下，因而以人肺癌细胞A549为研究对象。
立题依据：核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是一种作用十分广泛的真核细胞转录因子。
近年来的研究显示核因子-κB （nuclear factor-κB，NF-κB）的活化能够调节肿瘤细胞的侵袭和转移。
基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）由肿瘤细胞分泌，能够分解细胞外基质中的Ⅳ型胶原。
肿瘤细胞在侵袭的过程中必须穿过富含Ⅳ型胶原的细胞外基质，才能扩散到身体其他部位，因此MMPs 在肿瘤细胞的侵袭和转移中发挥重要的作用。
但是对于NF-κB 活性的改变对肺癌细胞株A549 细胞侵袭能力是否也有影响，目前尚无相关研究报道。
研究内容：用表达IκBα的真核表达质粒pcDNA3.1（+）/IκBα转染体外培养的A549 细胞，以抑制A549 细胞的NF-κB 活性，观察NF-κB活性降低A549 细胞侵袭能力以及对MMPs 表达的影响。
研究方法：①构建表达NF-κB 抑制物α同分异构体（inhibitor of NF-κB，αisoform，IκBα）的真核表达重组质粒pcDNA3.1（+）/IκB α。
②体外培养A549 细胞，分为未转染组（不转染质粒）、转染pcDNA3.1（+）组、转染pcDNA3.1（+）/IκBα组，分别转染相应的质粒。
③应用RT-PCR、Western blot检测各组细胞IκBα的表达情况，应用凝胶电泳迁移率改变实验（electrophoreticmobility shift assay，EMSA）检测各组细胞NF-κ B 的活性，应用Transwell 侵袭小室检测各组细胞的侵袭能力，应用RT-PCR 方法检测各组细胞MMP-2、MMP-9 的mRNA 水平，应用明胶酶谱法检测各组细胞基质金属蛋白酶-2 （matrixmetalloproteinase-2，MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）的活性。
2.你认为近几年在细胞生物学研究领域有哪些值得关注的新技术？简述其原理和应用价值？（20分）答：①在蛋白质的检测方面，2012年年底《Nature Method》中提到了一种基于质谱的定向蛋白质组学技术-SATH（Sequential Windowed Acquisition of all Theoretical fragment ions,SWATH）技术。
原理：SWATH技术根据待分析的目标蛋白氨基酸序列，选择对应的蛋白质特异性肽段及蛋白质特异性肽段对应的高响应子离子，最后用高响应子离子的信号强度来反映该蛋白质的表达丰度。
此方法将原来用的普通三重四级杆质谱仪进行改造，用一个高分辨率的TOF质量分析器代替第三个低分辨率的三重四级杆（即四级杆飞行时间杂交质谱仪），并连续运行32个25Da 宽的离子分离窗口，对每个窗口内的离子进行全碎裂。
利用碎片离子谱图库来挖掘，碎裂多肽二级谱中特定多肽的特征碎片离子，进而实现了对多肽的同时鉴定和定量。
应用价值：SWATH技术是一种不依赖数据采集的质谱分析技术，质谱仪在不需要考虑信号强度的情况下也可以对复杂的肽段离子进行分选，然后再与数据库中已有的肽段数据进行比对就可以得出特定肽段的信息。
因此，此技术可以摆脱免疫方法对抗体的依赖，同时连续运行32个25Da 宽的离子分离窗口使得其具有高通量和高灵敏度。
②RNA干扰技术。
原理：简单的说是利用一些小的双链RNA（DsRNA）来高效特异性阻断体内特异基因的表达，并促使mRNA降解，从而诱使细胞表现出特定基因表型的缺失。
首先dsRNA 经过一种核酸酶III类似的RNA 内切酶Dicer 作用, 把dsRNA 链酶切成长约21到25nt 的dsRNA 链，即siRNA, siRNA 和另一些尚未完全确认的蛋白结合形成复合物-RNA 诱导沉默复合物( RNA- inducing silence complex, RISC) 。
RISC再识别, 结合与siRNA 中的反义链互补的mRNA。
RISC 具有核酸酶的功能, 在结合部位切割mRNA，被切割后的断裂mRNA 随即降解, 从而使该基因的表达受抑。
应用价值：依据RNA 干扰现象, 科学家建立了RNA 干扰技术, 即人为设计合成针对某特定基因序列的dsRNA来关闭或抑制该基因的表达。
它可有效地将靶基因的表达水平降到一个低的水平, 甚至于完全的清除。
RNA 干扰技术开辟了基因治疗的新思路。
③基因定点修饰技术中CRISPR/Cas9 介导的基因组定点编辑技术。
原理：它主要是基于细菌的一种获得性免疫系统改造而成。
首先，CRISPR 的高度可变的间隔区的获得，指外来入侵的噬菌体或是质粒DNA 的一小段DNA 序列被整合到宿主菌的基因组，整合的位置位于CRRSPR 的5' 端的两个重复序列之间(repeats)而获得CRISPR 的高度可变的间隔区(spacer)。
其次是CRIPSR 基因座的表达(包括转录和转录后的成熟加工)，再次是CRISPR/Cas 系统活性的发挥或者是对外源遗传物质的干扰，最终实现基因组的精确修饰。
应用价值：CRISPR 系统能够区分自身DNA 和外源DNA 避免发生自身免疫。
CRISPR/Cas9 突变型的切口酶来介导同源重组修复突变的血红蛋白基因，再将修复的iPS 细胞定向诱导分化为造血干细胞移植到病人体内．这种方法既能提高同源重组效率，又能避免使用ZNF、TALEN 和CRISPR/Cas9 时的脱靶效应造成的潜在危险。
④诱导多能干细胞技术。
原理：通过外源导入与多能性相关的转录因子来激活体细胞中多能性基因，诱导体细胞核发生重编程, 从分化状态转变成多能性干细胞。
应用价值：iPS 细胞为研究临床疾病的发病机制、发现新药物和新治疗方法以及开展个性化治疗方面提供了重要的技术支撑。
制备疾病特异性干细胞长期以来都是再生医学领域的目标，而iPS 细胞的出现使得该目标变成了一项常规操作。
将各种患者来源的细胞（神经系统的帕金森病、血液系统的可尼贫血与镰刀细胞型贫血、代谢系统的I型糖尿病）诱导成IPS细胞，这些细胞模型为深入研究疾病的发病机制、体外药物筛选、治疗效果评价方面提供了一个非常有用的技术平台。
在细胞替代治疗方面，iPS 细胞由于不存在异体移植免疫排斥以及后续必须应用抗排斥反应药物的问题，具有广阔的临床应用前景。
3. 某实验室合成了一种水溶性的抗肿瘤药物A，欲在细胞水平上检测其药效，拟以人肝癌细胞HepG2为研究对象评价A药物的抗肿瘤效果。
请设计相关实验方案并简要说明其原理。
（20分）答：要了解此种抗肿瘤药物A对人肝癌细胞的抗肿瘤效果，即是通过细胞给药后观察肿瘤细胞的增值和凋亡状况，从而判断A药物的抗肿瘤效果。
药品处理与细胞的培养因为A药物是水溶性的，所以用生理盐水充分将A药物溶解，微孔滤膜(0. 22μm)除菌，使用时以培养液稀释至所需浓度。
人肝癌细胞HepG2用含10% 小牛血清的RPMI1640 完全培养基，在37℃、5% CO 2 的培养箱中培养。
种板前取对数生长期的细胞用0. 05% 胰蛋白酶消化后离心，用4g/L 台盼蓝染色后计算细胞数和活率( > 98% )，并将细胞密度调整为 1. 5 ×10 5 /ml备用。
体外抗肿瘤活性测定四氮唑蓝比色法(MTT 法)----其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
通过比较各加了药物的孔里细胞的数量来判断药物A对人肝癌细胞HepG2的抑制作用，进而判断其抗肿瘤效果。
取对数生长期的HepG2肝癌细胞以每毫升 1. 5 ×10 5 个接种于96 孔培养板中，每孔200μl，每组重复 3 孔。
实验组加入不同剂量的药物A , 对照组加入等体积含0. 01% 丙二醇的RPMI- 1640 溶液(贴壁细胞预培养24h 贴壁后加药)。
药物作用48h 后加入MTT(5mg/ml)，继续培养4h 后，小心吸弃上清液，加入DMSO 150μl 振荡溶解完全后酶标仪检测(570nm)，根据下列公式计算抑制率。
并通过显微镜观察细胞形态。
抑制率(%) =(1 －实验OD 值/对照OD 值) ×100%流式细胞仪检测凋亡率取对数生长期的HepG2肝癌细胞以 1. 5 ×10 5 /ml 接种于 6 孔板，实验组加入不同剂量的药物A，对照组加入等体积含0. 01% 丙二醇的RPMI- 1640 溶液。
作用48h 后收集各组细胞按下列步骤处理细胞。
①冷PBS 洗涤细胞 2 次(2000rpm 离心5min);收集 1. 5 ×10 5 /ml。
②加入500μl 的BindingBuffer 悬浮细胞。
③加入5μlAnnexin V-FITC 混匀后，加入5μl PI，混匀。
④室温，避光、反应15min。
⑤在1h 内进行流式细胞仪检测。