酶底物法工作原理
酶的作用机理
酶的作用机理
酶是生物体内的一类蛋白质，它在生物体中起着催化化学反应的作用。
酶通过降低活化能来加速化学反应的速率。
酶的作用机理包括以下几个方面：
1. 亲和力：酶与底物之间存在一定的亲和力。
酶通过特定的结构与底物结合形成酶底物复合物。
2. 底物定向：酶通过特定的位点与底物结合，并使底物分子在特定的构象或电荷状态下更有利于反应进行。
3. 酶的活性位点：酶分子通常具有一个或多个活性位点，此处对底物分子进行催化。
酶的活性位点通常通过氢键、离子键、范德华力等作用力与底物发生相互作用。
4. 亲合作用：酶通过与底物分子发生相互作用，使底物分子更有利于发生反应，提供更适宜的条件和环境。
5. 催化反应：酶通过改变底物分子的构象或电子状态来降低反应的活化能，从而加速化学反应的速率。
酶可以提供特定的酸碱环境、参与中间体的形成等，以促进化学反应的进行。
总的来说，酶的作用机理可以通过提供亲合作用、底物定向和酶的催化反应来加速化学反应的进行。
这些机理使得酶能够高效地催化各种生物体内的化学反应。
酶底物法在水中粪大肠菌群分析中的应用研究
酶底物法在水中粪大肠菌群分析中的应用研究粪大肠菌群是判断水体污染状况的重要指标，在环境质量评介、环境卫生监督等方面具有重要的意义。
它的主要来源就是粪便，粪便当中有诸多的病原微生物、病毒和原生动物蠕虫，上述污染源能够引起肠道传染疾病的广泛传播。
人们普遍应用粪大肠杆菌群来评价水体的污染状况，从而了解水质对人体健康的影响程度。
从检测角度来看，使用粪大肠杆菌群酶底物法进行水质监测，对科研探究有着及其重要的作用，其具有快速和方便等诸多优势。
酶底物法《HJ 1001 — 2018》适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。
本方法的检出限为10MPN/L。
以下将对它的重要的事项进行详细介绍。
1.方法原理在特定温度下培养特定的时间，粪大肠菌群能产生β-半乳糖苷酶，将选择性培养基中的无色底物邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）分解为黄色的邻硝基苯酚（ONP）。
统计阳性反应出现数量，查MPN表，计算样品中粪大肠菌群的浓度值。
2.干扰和消除活性氯具有氧化性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集时加入硫代硫酸钠溶液消除干扰。
重金属离子具有细胞毒性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集时加入乙二胺四乙酸二钠溶液消除干扰。
3.选择试剂和材料的注意事项ONPG-MUG培养基每100ml样品需使用培养基粉末2.7g±0.5g，可采用市售商品化培养基制品。
97孔定量盘：含49个大孔，48个小孔。
其中，每个小孔可容纳 0.186ml样品，大孔中48个大孔每个可容纳1.86ml样品，一个顶部大孔可容纳11ml样品。
也可采用经环氧乙烷灭菌的市售商品化成品。
一定选择标准阳性比色盘，无菌水的制备是取适量实验用水，经121℃高压蒸汽灭菌 20 min，备用。
4.仪器和设备的选择采样瓶选用具螺旋帽或磨口塞的100ml、250ml、500ml广口玻璃瓶。
如果在采集不存在或不考虑余氧、金属离子干扰的样品时，可以采用市售无菌采样瓶或无菌采样袋。
固定底物技术酶底物法技术参数
微生物固定底物技术酶底物法测定仪原理：科立得--DST酶底物法是可在24小时内快速定量和定性检测“总大肠菌群及大肠埃希氏菌及粪大肠菌群”，其原理是利用了MMO-MUG特异性培养基的呈色和荧光反应，该方法比传统的滤膜法和多管法的假阳性和假阴性发生率更低，培养时间更短。
技术特点：1、DST酶底物法试剂完全符合《生活饮用水标准检验方法》的MMO-MUG 培养基，采用固定底物技术（DST）酶底物法，Snap包装。
200个/包。
能够精确检出100ml水样中单个的活性总大肠菌群和大肠埃希氏菌，以及粪大肠菌群，假阴性率低。
每个单位试剂可抑制200万个异养细菌，假阳性率低。
能够消除传统方法中的主观判断影响，准确性高于滤膜法及多管发酵法。
2006年被列入到《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750.12-2006），是国标认可的MMO-MUG培养基；经美国环保署的认可作为24 小时检验出厂水与源水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群（粪大肠菌群）的方法；通过水与废水检验的标准方法分析化学工作者协会(AOAC) 、国际瓶装水协会(IBWA) 及欧洲瓶装水协会(EBWA)认证；中国、美国、加拿大、英国、德国、法国、日本、韩国、阿根廷、巴西、澳大利亚、新西兰、南非等50多国家及地区的饮用水，地表水，污水等检验标准。
年全球使用量超过数千万次，美国90%以上的实验室使用科立得试剂。
2、定量盘Quanti-tray或Quanti-tray 2000定量盘Quanti-tray（51孔定量盘），有50个标准孔格，1个大孔格。
无须稀释可检测200MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群Quanti-tray2000（97孔定量盘），有48个标准孔格，1个大孔格和48个小孔格，无须稀释可检测2419MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群3、无菌取样瓶含10%硫代硫酸钠10ml的无菌取样瓶，可定量100ml水样4、2009D程控定量封口机与符合《生活饮用水标准检验方法》固定底物技术（DST）酶底物法的MMO-MUG培养基配套使用的2009D程控定量封口机。
耐热大肠菌群粪大肠菌群快速检测（酶底物法）
耐热⼤肠菌群粪⼤肠菌群快速检测（酶底物法）1 适⽤范围本⽅法适⽤于⽣活饮⽤⽔及其⽔源⽔、地表⽔、污⽔、废⽔等⽔中粪⼤肠菌群（耐热⼤肠菌群）的定性检测、定量检测2 ⽅法原理固定底物酶底物法（DST）采⽤⼤肠菌群细菌能产⽣β-半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄⾊的原理，来判断⽔样中是否含粪⼤肠菌群（耐热⼤肠菌群），粪⼤肠的培养温度是44.5℃。
3 仪器设备3.1 程控定量封⼝机3.2电热恒温培养箱3.3 冰箱3.4 51孔定量盘、97孔定量盘3.5 100ml⽆菌⽔样瓶3.6 ⾼压蒸汽灭菌锅3.7 ⼲热灭菌器3.8 量筒3.9 吸管3.10 试管4 培养基和试剂4.1 科⽴得（固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基4.2 ⽆菌⽔5 样品的采集和保存5.1采样前准备：5.1.1 采样瓶：采⽤IDEXX公司科⽴得系统配套的灭菌100毫升消毒带刻度容器。
5.2 样品采样及注意事项5.2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，⽆论在什么条件下采样时，均要⼩⼼开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶⼦颈部受杂菌污染，并注意在使⽤船只或附带的采样绳等附加设备采样时可能造成的污染。
5.2.2 在采集江、河、湖、库、地表⽔样时，可握住瓶⼦底部直接将采样瓶插⼊⽔中，约距⽔⾯10~15厘⽶处，瓶⼝朝来⽔⽅向，使⽔样灌⼊瓶内。
如果没有⽔流，可握住瓶⼦⽔平前推，直⾄充满⽔样为⽌。
采好样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。
采样后，采样瓶内上部应留有⼀些空隙，以便检验前充分混匀⽔样。
5.2.3 ⽤采样器采样时，将⽆菌的⽔样瓶放⼊架内。
将采样装置放⼊⽔中。
到达预定深度后，打开瓶塞，待⽔样灌好后，松开瓶塞的软绳，盖上瓶盖。
再将整个装置提出⽔⾯。
5.2.4 从⾃来⽔龙头采集样品时，不要选⽤漏⽔的龙头，采⽔前可先将⽔龙头⽤酒精灯⽕焰灼烧灭菌或⽤70%的酒精溶液消毒⽔龙头及采样瓶⼝，然后将⽔龙头完全打开，放⽔数分钟后除去⽔管中的滞留杂质。
采⽔时控制⽔流速度⼩⼼接⼊瓶内。
水质中微生物菌落总数酶底物法测定
水质中微生物菌落总数酶底物法测定水质中微生物菌落总数的测定是评价水质指标的重要方法之一。
酶底物法是一种常用的测定方法，其原理是利用底物和微生物酶的反应产生的颜色或者光点来间接评估微生物菌落的数量。
本文将从实验原理、实验步骤和实验注意事项三个方面对酶底物法的测定方法进行详细介绍。
一、实验原理酶底物法测定水质中微生物菌落总数依赖于微生物菌落中的酶活性。
常用的酶包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、β-D-半乳糖苷酶等。
这些酶能够与底物反应产生颜色或产生显色物质，利用这些反应可以评估菌落数量。
二、实验步骤1.准备样品采集待测水样，并将其过滤，去除大颗粒杂质。
然后取一定体积的过滤液，通常为10 mL，作为实验样品。
2.酶底物添加将准备好的样品加入培养基中，然后添加相应的酶底物。
根据不同的酶选择相应的底物。
3.温育反应将培养基和底物混合均匀后，将培养皿孵育在适宜的温度下，通常为37摄氏度。
菌落中的酶与底物在一定时间内发生反应。
4.菌落计数在菌落与底物反应完成后，可以通过目视法或使用显微镜来对菌落进行计数。
三、实验注意事项1.样品的采集应当遵循卫生要求，避免外界污染。
2.过滤液的准备需要注意滤纸的选择，可以选择孔径较小的滤纸来去除大颗粒杂质。
3.酶底物的选择应根据微生物酶的特性进行合理选择，确保酶和底物之间有充分的反应。
4.温育反应的时间和温度需要根据菌落的特点进行调整，防止温度过高造成菌落损失。
5.菌落的计数需要有一定的经验和技巧，可以使用显微镜来提高计数的准确性。
总之，酶底物法是一种简单可行的测定水质中微生物菌落总数的方法。
通过选择合适的酶和底物，结合适当的温育条件，可以快速准确地评估水质中微生物菌落的数量。
在实际应用中，我们需要根据具体情况合理选择方法和参数，以获得准确可靠的测定结果。
酶底物法系统
西安立科环保科技有限公司水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍一、检测用途：酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。
可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。
二、检测原理：酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的β-葡糖醛酸酶分解代谢。
当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用β-半乳糖苷酶分解代谢ONPG，并使样品从无色变为黄色。
大肠杆菌使用β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时，能够发出荧光。
三、优势特点：酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。
相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。
以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。
表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计方法优势：1.无需在无菌室内操作。
2.手工操作时间小于1分钟。
3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。
4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。
已经列入1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。
产品特点：1.colitech酶底物法检测试剂，LK定量检测盘/定量孔板，LK定量瓶出厂前均已灭菌，客户可以直接放心使用。
2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基，假阳性和假阴性均优于传统方法。
酶活测定的原理
酶活测定的原理
酶活测定是一种用来确定酶活性的方法。
这种方法基于酶能够催化底物转化为产物的能力。
在这个过程中，酶与底物发生特定的反应，产生化学变化。
通过测定底物转化的速率，可以计算出酶的活性。
酶活测定通常使用底物测定法来进行。
在这种方法中，底物与酶反应，底物转化为产物。
产物的生成量与酶催化的速率成正比。
所以通过测定产物生成的速率，可以获得酶活性的信息。
酶活的测定可以通过不同的指标来评估。
常见的包括单位时间内产生的产物量、单位时间内消耗的底物量或单位时间内的酶动力学常数。
根据不同的酶活测定原理，可以选择不同的底物和反应条件。
一些酶活测定方法还会加入辅助试剂来增强反应速率或稳定酶的活性。
总之，酶活测定实质上是通过测定底物转化的速率来确定酶活性的方法。
通过选择合适的底物和反应条件，以及计算产物生成的速率，可以有效地评估酶的活性水平。
粪大肠菌群检测分析酶底物法
《资源节约与环保》2019年第4期1方法原理在特定温度下培养特定的时间，粪大肠菌群能产生酶底物法采用大肠菌群细菌能产生β-半乳糖苷酶，将选择性培养基中的无色底物邻硝基苯β-D-吡喃半乳甘糖分解黄色的邻硝基苯酚，在紫外灯照射下产生荧光。
统计阳性反应出现的数量，查MPN图表，在将其计算出样品中粪大肠菌群的浓度值。
其酶底物法检出限是10MPN/L。
2实验室用水实验室用水为无菌水，取来适量的纯净水，放在烧杯中，经过121摄氏度，高压蒸汽灭菌，需要20分钟。
3采样瓶的清洗准备（1）是新购买的500ml具旋帽或者是磨口塞得广口玻璃瓶，应在百分之二的盐酸中浸泡几个小时，还需要用自来水冲洗干净，再用纯净水清洗1-2次，控干，备用。
（2）将清洗干净干燥的采样器，用专用的纸包裹起来，放入恒温干燥箱内，将温度设置到121摄氏度，灭菌20分钟，烘干。
灭菌完成后，还需要关闭实验室电源待温度降到50摄氏度以下时，方可开门取样品瓶，不然，玻璃瓶会因为操作不当爆裂。
4样品的采集及保存（1）单独采样，优先采样。
使用已经准备好的采样瓶，采样。
在采样的过程中产样瓶不用再进行冲洗。
（2）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行采样，以免不同层次的搅扰。
（3）水样的保存条件及时间：水样应在10摄氏度以下冷藏保存；应尽快分析，最长时间不能超过6个小时。
（4）化验员接样后，不能立即检测，应将样品与4摄氏度以下冷藏并在2小时内检测。
5分析样品5.1样品稀释需要根据样品污染程度确定接种量，避免接种样品培养后97孔定量盘出现全部阳性或全部阴性。
在接种量小于100ml的时候，应稀释样品后再进行接种试验，接种量为10ml的时候，取10ml样品加入到90ml无菌水的三角瓶中混合均匀制成1:10的稀释样品，其他接种量的稀释样品依次类推。
在未知样品，可选用多个接种量进行检测。
5.2接种量取100ml样品或是稀释样品与灭菌后的三角瓶，再加入2.7克+-0.5克培养基粉末，在充分搅拌混匀，等完全溶解，在将其全部倒入97孔定量盘内，以手扶平97孔定量盘背面，赶出孔内气泡，然后，用程控定量封口机封口。
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酶底物法检测工作原理
还在为大肠菌群酶底物检测试剂烦恼么？
小编为你解忧，采用酶底物法对地表水水样进行不同倍数的稀释后进行培养检测,观察地表水结果变化。
结果表明:地表水水样稀释倍数越小,结果越准确。
采用酶底物法测定地表水中的粪大肠菌群具有快速、简便的特点,准确掌握水样稀释倍数对测定结果就越准确。
【工作原理】
加入含有总大肠菌群细菌的水样，放入程控定量封口机中，目标细菌在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃培养，总大肠菌群细菌产生的特异性生物酶β一半乳糖苷酶能分解MinimalMedium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养呈现黄色；同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。
同样原理，耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现黄色。
程控定量封口机9900Z SEALER PLUS:
智能程控定量封口机配合51孔定量盘或97孔定量盘提供简单、快速、准确的定量检测总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪（耐热）大肠菌群、肠球菌和绿脓假单胞菌的实验方案。
捷骋牌51孔定量盘和97孔定量盘是基于传统方法最大可能数(MPN) 统计模型而设计的半自动定量方法。
·通过9900Z sealer PLUS程控定量封口机自动将样品／试剂混合液分配到独立孔中。
·培养结束后，阳性孔数可以转化为MPN 值。
·51孔定量盘可检测每100 mL 水样中1-200MPN 值。
·97孔定量盘可检测每100 mL 水样中1-2,419 MPN 值。
·整个检测过程手工操作时间小于1 分钟。
【使用方法】
定性测试：
第一步、在100ml水样中加入试剂，溶解，36℃培养24h；
第二步、结果判读
无色=阴性
黄色=总大肠菌群阳性
黄色+荧光=大肠埃希氏菌群阳性
注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色为阳性
定量检测
第一步、在100ml水样中加入试剂，溶解；
第二步、倒入51孔定量检测盘（定量孔板）或97孔定量检测盘（定量孔板）中；
第三步、用程控定量封口机对定量检测盘（定量孔板）进行封装，36 ℃培养24h；
第四步、51孔定量检测盘（定量孔板）结果判读：
无色=阴性
黄色格子=总大肠菌群阳性
黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性
查对照MPN表计数
注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数。
97孔定量检测盘（定量孔板）结果判读
无色=阴性
黄色格子=总大肠菌群阳性
黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性
查对照MPN表计数
注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数。