不同免疫剂量禽流感疫苗对蛋鸡产生的抗体效价影响
浅析影响鸡群疫苗免疫接种效果的因素及提高免疫接种效果措施
摘要：疫苗免疫接种是畜禽养殖生产中防控传染病有效手段。
但是一些因素影响了免疫效果，造成了免疫接种后机体不能产生抗体或者产生抗体数量有限不能达到对机体有效保护，进而导致鸡群抵抗力低、对疫病易感、生产性能下降等，给养殖业造成巨大经济损失。
因此生产过程中了解影响疫苗免疫接种效果的因素，尽量减少它们对疫苗免疫接种效果的影响，让机体产生正常的免疫应答反应，产生足够的抗体，达到保护机体、防控传染病的目的是非常必要的。
关键词：疫苗免疫接种影响因素免疫失败提高措施浅析影响鸡群疫苗免疫接种效果的因素及提高免疫接种效果措施韩淑梅1,2，李娜3，张晓云1,4*（1.河北征宇制药有限公司石家庄051430；2.河北省动物专用免疫增强剂技术创新中心石家庄051430；3.石家庄科为先饲料技术有限公司石家庄052100；4.河北省兽用免疫增强剂产业技术研究院石家庄051430）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.03.030收稿日期：2024-01-15基金项目：中央引导地方科技发展资金项目(216Z6601G)；石家庄市后补助奖励专项资金项目(225790347H)。
作者简介：韩淑梅（1979—），女，大学本科，执业兽医师，主要从事动物疫病防治工作。
E-mail:***************。
*通信作者：张晓云（1981—），女，大学本科，研究员，主要从事兽药、饲料新产品、新技术研究开发与应用推广，E-mail ：****************。
1疫苗免疫及其原理将病原微生物及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用转基因等方法制成疫苗，通过滴鼻、点眼、肌肉注射、刺种、雾化等方式给鸡群免疫，使鸡群自身的免疫系统产生对相应传染病的特异性免疫力。
疫苗免疫机理是把活的/死的病毒等病原微生物及其代谢产物提供给动物，产生特异性抗体并让免疫系统记住它（病毒、细菌、支原体、寄生虫等）的样子，以后一旦相同病原微生物再次出现，免疫系统就会更快产生抗体，对它发动精准攻击，从而保护不被同种病毒、细菌、支原体、寄生虫等伤害或降低伤害的程度。
鸡免疫禽流感（H5+H7）二价灭活苗后的抗体监测
2017年，按农业部的疫情通报，随着家禽高致病性的 H7N9流感病毒株的出现，陆续有鸡群感染高致病性H7N9流感 病毒引起大量的死亡，高致病性H7N9流感呈现出区域性流行 的态势。H5亚型高致病性禽流感的流行趋势总体平稳，未出 现大范围的暴发，但仍有局部散发疫情的发生。H5和H7亚 型禽流感在我国同时流行且流行毒株复杂多样，严重威胁着 我国家禽养殖和公共卫生的安全，使得疫病防控形势更加严 峻。
1 试验材料与方法
1.1 试验材料 1.1.1 试验疫苗
重组禽流感（H5+H7）二价灭活苗（H5N1Re-8株 +H7N9 H7-Re1株），批号 2017024，哈尔滨维科生物技术开 发公司。 1.1.2 试验鸡群分组及免疫次数情况
选 用 1 4 日 龄 右 江 区 本 地 土 鸡 1 0 0 只 ， 分 为 2 组 ， 其 中 颈部皮下注射2组，胸部肌肉注射2组。共4个组，试验 期 105 d，详见表 1。
免疫应答，进而产生高水平的免疫抗体。“（H5+H7）二价 灭活疫苗”在一免后 14 d可产生较高的抗体、35 d达到抗体 峰值，到 60 d仍维持较高的抗体水平。 2.2 不同免疫次数的抗体效价分布情况
通过表 2 可知，鸡二免后H5和 H7抗体合格率为 97.8% 和94.4%，而一免的只有 72.22% 和 67.56%，差异极其显著 （P<0.01）。通过比较不同免疫次数的抗体效价分布情况，发
只有阴性对照孔血清滴度不大于 22 ，阳性对照孔血清 误差不超过 1 个滴度，试验结果才有效。
HI 价小于或等于 22 判定 HI 试验阴性；HI 价等于23 为可 疑，需重复试验；HI 价大于或等 24 为阳性，判为免疫合格。
2 结果与分析
不同免疫次数对商品代麻花鸡禽流感免疫效果对比试验
不同免疫次数对商品代麻 花鸡 禽流感免疫效果对比试验
陈 小海 １ ， ， 简子 健 徐 敏 ２ ，
（． 疆农业 大 学动 物 医学学 院 ， １ 新 新疆 乌鲁木 齐 ８ ０ ５ ； ３ ０ ２ ２乌鲁木 齐市动物卫 生监督 所 ， ． 新疆 乌 鲁木 齐 ８０６ ； ３ ０ ３ ８０ ６ ） ３ ０ ３ ３乌 鲁木 齐市动 物疾病控 制 与诊 断 中心 ， ． 新疆 乌鲁木 齐
活 疫 苗 （ 组 ） ０３ Ｈ５ Ｈ９灭 活 疫 苗 （ 组 ）０５ｎＨ５ Ｈ９灭 活 疫 苗 （ Ｄ ； ．ｍｌ ＋ Ｅ ； ．ｒｌ ＋ Ｆ组 ） 。
Ｉ ｄ
Ｕｄ
ｑｂＯ
图 １ ３ 种 禽 流 感 灭 活 疫 苗 不 同 免 疫 剂 量 免 疫 抗 体 滴 度
图 ２ ３种 禽 流 感 灭 活疫 苗 不 同免 疫 剂量 免 疫 抗 体 滴 度 比较
２ １ 试验 设计方 案 ．
５－ ２
注 ：首免 日龄 为 １ ０日龄 ，二 免 日龄 为 首免 后 １ ｄ； ５ ３种
Ｈ Ｎ１ 活 苗 Ｋ 哈 维科 为哈 尔滨 维 科 生 物 技 术 开发 公 司 生 ５ 灭
产 、乾 元 浩 为 乾元 浩 生 物股 份 有 限 公 司郑 州 生 药 厂 生产 、 青 岛 易邦 为 青 岛 易邦 生 物 工程 有 限公 司 生产 。
的消长规 律 ，为制定 麻花 鸡合 理 的禽 流感 免疫程 序 提 供科学 依据 。 １ 试 验 材 料
１１ 试 验 鸡 群 ．
近 年来 ， 国对禽 流感 实施 高密度 的免疫 接种 ， 我 但 是在免 疫鸡群 中存 在抗体 效价不 整 齐 、持续 期短 等 问题 ，不能保 证禽类 养殖 期 间有效抵 御禽 流感病 毒 的侵袭 ， 乌鲁木 齐市 作为 首府城 市 ， 了保 障主要 为
蛋鸡场常用疫苗的作用与用途、用法与用量、休药期及有关规定
颈背部皮下注射。18～20周龄鸡1.2ml/只
休药期28d
2℃～8℃保存，有效期为6个月
21
鸡传染性支气管炎疫苗
鸡传染性支气管炎活疫苗（H120株）
滴鼻或饮水接种。用于初生雏鸡的首免，不同品种鸡均可使用，至1～2 月龄时，须用H52 疫苗
21
鸡传染性支气管炎疫苗
鸡传染性支气管炎活疫苗（H120株）
9
鸡新城疫活疫苗（CS2株）
用于预防鸡新城疫，专供已经鸡新城疫低毒力活疫苗接种过的鸡使用，免疫期为1年
按瓶签注明的羽份，用灭菌生理盐水或其他适宜的稀释液稀释，皮下或胸部肌肉注射1ml（应在在产蛋前或休产期进行接种）
①本疫苗系用中等毒力株制成，专供已经鸡新城疫低毒力活疫苗接种过的1月龄以上的鸡使用，不得用于初生雏鸡。②(-15)℃以下保存，有效期为75株）
用于预防鸡传染性法氏囊病
用于14日龄鸡饮水接种。将1000羽份疫苗稀释于15升饮水中，持续搅拌直至溶解后，用于接种1000只雏鸡。雏鸡可在7日龄时进行接种，但一般情况下应在14日龄时首免，可在4周龄时加强接种
2℃～8℃保存，有效期为36个月
20
鸡传染性法氏囊病活疫苗（CJ-801-BKF株）
①疫苗稀释后应放冷暗处，限4h内用完。②饮水接种时，忌用金属容器，饮水前应停止2h～4h。③用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理
23
鸡传染性支气管炎活疫苗（W93株）
用于预防嗜肾性鸡传染性支气管炎病毒感染。接种后5日产生免疫力，一次接种的免疫期为3个月，两次接种的免疫期为5个月
按瓶签注明羽份，用生理盐水稀释，每1000羽份加生理盐水30～50 ml，每只鸡滴鼻0.03～0.05 m1，饮水接种或在发病初期(越早越好)紧急接种时，接种量应加倍。饮水接种时，饮水量视鸡龄大小、品种、季节而定，5～10日龄5～10 m1；20～30日龄10～20 m1；成鸡，20～30 ml。炎热季节的饮水量应适当增加
家禽不同阶段注射禽流感疫苗抗体效价监测与对比
作者简介：申春玉（１９６８－ ），女，鸡西市鸡东县人，高级畜牧师，本科．
!"#$
养殖技术顾问 ２００７． ６
表 ２ 鹅不同日龄的抗体水平
ｌｏｇ２２
项
日龄
目 １ ６ １１ １６ ２４ ３４ ４４ ５４ ６４ ７４ ９４ １１４ １３４ １５４
Ｂ１ ５．１ ４．８ ４．１ ３．４ ３．８ ４．４ ５．７ ５．３ ４．６ ４．４ ４．２ ４．２ ３．８ ３．４
１．３ 试验方法
１．３．１ 动物分组与处理 将 ４００ 只鸡分为 Ａ１、Ａ２ 两 组，每组 ２００ 只；４００ 只鹅分为 Ｂ１、Ｂ２ 两组，每组 ２００ 只。全群分别在 １、６、１１、１６ 日龄随机抽血，每次每组 ２０ 只检测母源抗体。１４ 日龄 Ａ１、Ａ２、Ｂ１、Ｂ２ 四组全 部用 Ｈ５Ｎ１ 亚型油乳剂疫苗进行第 １ 次免疫，Ａ 组每 只鸡肌注 ０．３ 毫升，Ｂ 组每只鹅肌注 ０．５ 毫升，免疫后
牛结核病的防制
滕代平 （辽宁省盘锦市兴隆台区动物防疫监督所 １２４０１０）
摘要 牛结核病被世界动物卫生组织（ＯＩＥ） 列为 Ｂ 类动物疫病，是一种人兽共患传染病，其传播流行 影响着畜牧业的持续发展和人类的健康。要从根本上控制牛结核病的发生与流行，必须加强对本病的 检疫与监测工作，坚决淘汰阳性牛，制定有效的防制措施。 关键词 牛结核病；诊断技术；防制措施
后又呈下降趋势，Ａ２ 组在 １９４ 日龄（产生免疫力 １６０
研究与综述 !
天）抗体平均水平不合格；Ｂ２ 组在 １５４ 日龄（产生免 疫力 １２０ 天）抗体平均水平不合格。
Ａ２、Ｂ２ 组在加强免疫后的抗体水平除开始几天 内由于抗体相互作用较低外，其他各阶段均高于 Ａ１、 Ｂ１ 组，而且曲线递增幅度较大，下降缓慢，疫苗的免 疫期也相对较长，免疫效果较好，是目前应普遍采用 行之有效的免疫方法。因此，建议相关部门要大力加 强免疫监测力度，必须要求养禽户实施二次免疫，如 果饲养时间较长，还要进行三次免疫。
免疫增强剂提高禽用多联疫苗在蛋鸡的免疫效力
江西农业大学学报㊀２０１８，４０（５）：１０３０－１０３６ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ｊｘａｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＪｉａｎｇｘｉｅｎｓｉｓＤＯＩ：１０．１３８３６／ｊ．ｊｊａｕ．２０１８１２９陆吉虎，张雪花，梅梅，等．免疫增强剂提高禽用多联疫苗在蛋鸡的免疫效力［Ｊ］．江西农业大学学报，２０１８，４０（５）：１０３０－１０３６．免疫增强剂提高禽用多联疫苗在蛋鸡的免疫效力陆吉虎１，２，张雪花１，２，梅㊀梅１，２，侯继波１，２，唐应华１，２∗（１．江苏省农业科学院动物免疫工程研究所／国家兽用生物制品工程技术研究中心／农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，江苏南京２１００１４；２．江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州２２５００９）摘要：评价ＶＡ５免疫增强剂对禽用多联苗的免疫增强作用㊂将ＶＡ５与新城疫－传染性支气管炎－减蛋下降综合症－Ｈ９亚型禽流感（新－支－减－流）四联疫苗合用免疫海兰褐壳蛋鸡和罗曼蛋鸡㊁与新－支－流三联疫苗合用免疫海兰褐壳蛋鸡，评价免疫后的抗体效价和攻毒后的保护效力㊂海兰褐壳蛋鸡或罗曼蛋鸡免疫含ＶＡ５的四联疫苗㊁三联疫苗后的第２㊁第３和第４周，针对新城疫㊁传支㊁减蛋综合征和禽流感的血清血凝抑制（ＨＩ）抗体效价均持续高于不加增强剂的常规疫苗组，且第３和第４周ＨＩ抗体效价均差异显著（Ｐ＜０．０５）；针对新城疫㊁传支㊁减蛋综合征和禽流感的粘膜ＨＩ抗体效价均亦高于不加增强剂的常规苗组，且差异极显著（Ｐ＜０．０１）㊂免疫含ＶＡ５四联疫苗组的海兰褐壳蛋鸡，在新城疫强毒攻毒后，以临床症状判断，可以１００％保护；在禽流感Ｈ９变异株攻毒后，可完全抑制不排毒㊂对上述２种病毒的攻毒保护力均高于常规疫苗㊂结果表明，ＶＡ５免疫增强剂能够提高鸡新－支－减－流四联疫苗㊁新－支－流三联疫苗对蛋鸡的免疫效力，具有很好的应用前景㊂关键词：佐剂；免疫增强剂；多联疫苗；抗体效价中图分类号：Ｓ８５８．３１２．５㊀㊀文献标志码：Ａ㊀㊀文章编号：１０００－２２８６（２０１８）０５－１０３０－０７ＴｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＩｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｓｏｎＩｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅＥｆｆｉｃａｃｙｏｆＭｕｌｔｉｖａｌｅｎｔＶａｃｃｉｎｅｉｎＬａｙｉｎｇＨｅｎｓＬＵＪｉ⁃ｈｕ１，２，ＺＨＡＮＧＸｕｅ⁃ｈｕａ１，２，ＭＥＩＭｅｉ１，２，ＨＯＵＪｉ⁃ｂｏ１，２，ＴＡＮＧＹｉｎｇ⁃ｈｕａ１，２∗（１．ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ／ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＢｌｏｌｏｇｉｃａｌｓ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒ⁃ａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００１４，Ｃｈｉｎａ；２．ＪｉａｎｇｓｕＣｏ⁃ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｆｏｒＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｏｆＩｍｐｏｒｔａｎｔＡｎｉｍａｌＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＺｏｏｎｏｓｅｓ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ２２５００９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅａｉｍｓｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｉｓｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＶＡ５ｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｏｎｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｅｆｆｉ⁃ｃａｃｙｏｆｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｉｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｓ．ＴｈｅａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｉｃａｃｙｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄａｆｔｅｒｔｈｅＶＡ５ｗａｓｍｉｘｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅ，Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅ（ＮＤ）⁃ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓ（ＩＢ）⁃ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍｅ（ＥＤＳ）⁃Ｈ９ＳｕｂｔｙｐｅＡｖｉａｎＩｎｆｌｕｅｎｚａ（Ｈ９ＡＩ）ｖａｃｃｉｎａｔｅｄｉｎＨｙ⁃ｌｉｎｅｂｒｏｗｎａｎｄＬｏｈｍａｎｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｂｒｅｅｄｓ，ｏｒｗｉｔｈｔｒｉｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅ，ＮＤ⁃ＩＢ⁃ＡＩ（Ｈ９）ｖａｃｃｉｎａｔｅｄｉｎＨｙ⁃ｌｉｎｅｂｒｏｗｎｂｒｅｅｄｓ．Ｉｎｔｈｅｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｓｏｆ㊀㊀收稿日期：２０１７⁃１２⁃１２㊀㊀修回日期：２０１８⁃０５⁃０４基金项目：国家重点研发计划项目（２０１７ＹＦＤ０５００７０６）和江苏省农业科技自主创新项目（ＣＸ（１５）１０６３）ＰｒｏｊｅｃｔｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＫｅｙＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＰｒｏｇｒａｍｏｆＣｈｉｎａ（２０１７ＹＦＤ０５００７０６）ａｎｄＪｉａｎｇｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＦｕｎｄ（ＣＸ（１５）１０６３）作者简介：陆吉虎（１９７２ ），助理研究员，硕士，主要从事兽医微生物与免疫学研究，ｌｕｊｉｈｕ＠１６３．ｃｏｍ；∗通信作者：唐应华，副研究员，博士，ｔｙｉｎｈｕａ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ㊂㊃１３０１㊃第５期陆吉虎等：免疫增强剂提高禽用多联疫苗在蛋鸡的免疫效力ｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈＶＡ５ｏｒｔｒｉｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈＶＡ５，ｔｈｅｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒｓｏｆｓｅｒａａｇａｉｎｓｔＮＤ，ＩＢ，ＥＤＳａｎｄＨ９ＡＩｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｇｒｏｕｐｓｖａｃｃｉｎａｔｅｄｗｉｔｈｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈ⁃ｏｕｔＶＡ５ｏｒｔｒｉｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈｏｕｔＶＡ５ａｔ２⁃，３⁃，ａｎｄ４⁃ｗｅｅｋｐｏｓｔｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ（ｐｖ），ａｎｄｔｈｏｓｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＳｉｍｉｌａｒｔｏｔｈｅＨＩａｎｔｉｂｏｄｙｌｅｖｅｌｓ，ｔｈｅｍｕｃｏｓａｌａｎｔｉｂｏｄｙｌｅｖｅｌｓａｇａｉｎｓｔＮＤ，ＩＢ，ＥＤＳａｎｄＨ９ＡＩｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｉｎｔｈｅｇｒｏｕｐｓｏｆｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈＶＡ５ｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｏｎｌｙａｎｄｔｈｏｓｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０１）．ＴｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｗａｓａｌｓｏｉｍｐｒｏｖｅｄｂｙＶＡ５ｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｓ．ＤｕｒｉｎｇｔｈｅＮＤｖｉｒｕｓｃｈａｌｌｅｎｇｅｔｅｓｔ，ｂｉｒｄｓｄｉｄｍｏｔｓｈｏｗａｎｙｃｌｉｎｉｃａｌｓｙｍｐｔｏｍｓｉｎｔｈｅｇｒｏｕｐｏｆｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈＶＡ５ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｓｕｐｅｒｉｏｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｂｉｒｄｓｉｎｔｈｅｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｏｎｌｙｇｒｏｕｐ．ＩｎｔｈｅＨ９ＡＩｖｉｒｕｓｃｈａｌｌｅｎｇｅｔｅｓｔ，ｎｏｂｉｒｄｓｈｅｄｄｉｎｇｖｉｒｕｓｉｎｔｈｅｇｒｏｕｐｏｆｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｐｌｕｓＶＡ５，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｂｉｒｄｓｓｈｅｄｄｉｎｇｖｉｒｕｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｇｒｏｕｐｏｆｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈｏｕｔＶＡ５．Ｔａｋｅｎｔｏｇｅｔｈｅｒ，ｔｈｅＶＡ５ｈａｓｅｆｆｅｃｔｏｎｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｔｒｉ⁃ｏｒｔｅｔｒａ⁃ｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｉｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｓａｎｄｓｈｏｗｓｐｒｏｓｐｅｒｉｔｙｉｎａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｄｊｕｖａｎｔ；ｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｓ；ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅ；ａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒ随着禽类养殖集约化㊁规模化发展，疫病流行日趋复杂并使疫苗防控难度逐步加大㊂鸡新城疫（ＮＤ）㊁传染性支气管炎（ＩＢ）㊁减蛋综合征（ＥＤＳ）和禽流感（ＡＩ）均是由病毒引起的鸡的传染病，在养鸡业中比较常见和多发，严重威胁着养鸡业的健康发展㊂目前生产中主要采用接种灭活的油乳剂联苗进行防控㊂但是随着疫苗的推广使用，病原也在不断发生变异，给防控工作带来了一定的困难㊂免疫增强剂能提高动物机体免疫系统功能，增强机体免疫力，如ＰｏｌｙＩ：Ｃ［１］㊁ＣｐＧ［２，３］㊁ＬＰＳ［４］㊁脂多糖㊁囊素五肽（ＢＰ５）㊁神经酰胺㊁咪喹莫特等多种动物天然免疫受体的激动剂在动物的免疫应答过程中都发挥着重要的作用㊂免疫增强剂ＭＦ５９在人用流感疫苗中已经使用多年［５］，Ｉｎｔｅｒｖｅｔ公司的猪圆环病毒疫苗和繁殖与呼吸综合征病毒疫苗中都使用了ＤｉｌｕｖａｃＦｏｒｔｅ佐剂［６］，Ｓｅｐｐｉｃ公司的口蹄疫疫苗和新城疫疫苗分别添加使用了ＩＳＡ２０６和ＩＳＡ７０佐剂［７］㊂本试验室已经筛选获得可与疫苗配伍使用的系列复方免疫增强剂，并对该增强剂对禽流感疫苗以及禽用二联疫苗的免疫增强效果进行了评价［８⁃１０］，本研究主要评价该免疫增强剂对禽用三联或四联灭活疫苗在海兰褐壳蛋鸡或罗曼蛋鸡上的免疫增强效果，扩大该免疫增强剂的适用范围㊂１㊀材料与方法１．１㊀疫苗、试验鸡及检测抗原等材料鸡新城疫－传染性支气管炎－减蛋综合征－禽流感（Ｈ９亚型）四联油乳剂灭活疫苗（ＬａＳｏｔａ株＋Ｍ４１株＋ＡＶ１２７株＋ＨＬ株）（以下简称新－支－减－流四联疫苗或四联疫苗），鸡新城疫－传染性支气管炎－禽流感（Ｈ９亚型）三联油乳剂灭活疫苗（ＬａＳｏｔａ株＋Ｍ４１株＋ＨＬ株）（以下简称新－支－流三联疫苗或三联疫苗），均为市售商品化疫苗㊂１日龄海兰褐壳蛋鸡和罗曼蛋鸡均购自江苏海安某孵化场，普通环境中饲养㊂鸡新城疫㊁禽流感（Ｈ９亚型）和减蛋综合征检测抗原均购自哈尔滨维科生物技术公司，传染性支气管炎（Ｍ４１株）检测抗原购自荷兰ＧＤ公司㊂鸡新城疫Ｆ４８Ｅ８株㊁禽流感（Ｈ９亚型）ＳＤ０１株均为本实验室保存㊂ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＥＤＳ㊁ＡＩ（Ｈ９）阳性㊁阴性血清分别购自哈尔滨国生生物科技和哈尔滨威科生物技术公司㊂１．２㊀含ＶＡ５免疫增强剂疫苗的配制ＶＡ５免疫增强剂（以下简称ＶＡ５）为本实验室配制［８⁃９］㊂先将ＶＡ５与白油等按比例混合并充分乳化，然后与四联疫苗或三联疫苗按体积比为１ʒ９混匀即为含ＶＡ５免疫增强剂的疫苗㊂１．３㊀ＶＡ５对四联疫苗的免疫效力增强试验１．３．１㊀海兰褐壳蛋鸡免疫含ＶＡ５的四联疫苗试验㊀海兰褐壳蛋鸡饲养至１０日龄分为３组（３５只／组），第１组免疫四联疫苗，第２组免疫含ＶＡ５的四联疫苗，第３组为生理盐水对照组㊂颈背部皮下注射，０．３ｍＬ／只㊂免疫后第１㊁第２和第３周每组随机抽取５只鸡用ＰＢＳ缓冲液（１０ｍＬ／只）冲洗喉气管，㊃２３０１㊃㊀江西农业大学学报第４０卷收集冲洗液；免疫后第２㊁第３和第４周每组随机抽取２０只鸡采集翅静脉血并分离血清㊂分别检测上述冲洗液和血清针对新城疫（ＮＤ）㊁传支（ＩＢ）（Ｍ４１株）㊁减蛋综合征（ＥＤＳ）和禽流感（ＡＩ）（Ｈ９亚型）的血凝抑制（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，ＨＩ）抗体效价（ｎｌｏｇ２）（参照ＧＢ／Ｔ１６５５０－２００８，新城疫诊断技术），统计各组效价的几何平均值（Ｇｅｏｍｅｔｒｉｃｍｅａｎｔｉｔｅｒ，ＧＭＴ）㊂上述海兰褐壳蛋鸡免疫４周后分成２群，第１群（１５只／组）用鸡新城疫Ｆ４８Ｅ８株强毒肌肉注射０．２ｍＬ／只（含１．０ˑ１０５．０ＥＩＤ５０）（ｅｇｇｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｄｏｓｅ，ＥＩＤ５０鸡胚半数感染剂量），观察１４ｄ，记录鸡发病死亡情况，统计攻毒保护率［（攻毒总鸡数－发病或死亡总数）／攻毒总鸡数ˑ１００］；第２群（１５只／组），以禽流感（Ｈ９亚型）ＳＤ０１株（１．０ˑ１０７．０ＥＩＤ５０）进行滴鼻攻毒，攻毒后的第１㊁第３㊁第５和第７天采集试验鸡的喉气管㊁泄殖腔棉拭子㊂取每只鸡的２个拭子混合浸出液上清０．１ｍＬ接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚进行病毒分离，判定阳性率［１０］㊂１．３．２㊀罗曼蛋鸡免疫含ＶＡ５的四联疫苗试验㊀罗曼蛋鸡饲养至１０日龄时分为３组（２５只／组），分别免疫四联疫苗㊁含ＶＡ５的四联疫苗和生理盐水㊂颈背部皮下注射，０．３ｍＬ／只㊂免疫后第２㊁第３和第４周每组随机抽取２０只鸡采集翅静脉血并分离血清，检测针对ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＥＤＳ㊁ＡＩ（Ｈ９亚型）的ＨＩ抗体效价㊂１．４㊀ＶＡ５对三联疫苗的免疫效力增强试验选择海兰褐壳蛋鸡的母源抗体（针对ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＡＩ（Ｈ９亚型））ＨＩ效价ɤ２ｌｏｇ２时进行免疫㊂试验鸡分为３组，每组２０只㊂第１组免疫三联疫苗，第２组免疫含ＶＡ５的三联疫苗，第３组为生理盐水对照组㊂颈背部皮下注射，０．３ｍＬ／只㊂免疫后第２㊁３㊁４周采集鸡翅静脉血分离血清，检测针对ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＡＩ（Ｈ９亚型）的ＨＩ抗体效价，统计各组效价的几何平均值㊂２㊀结果与分析２．１㊀ＶＡ５免疫增强剂提高新－支－减－流四联疫苗对海兰褐壳蛋鸡的免疫效力海兰褐壳蛋鸡免疫四联苗后，第２㊁第３和第４周含ＶＡ５免疫增强剂组血清针对鸡新城疫抗原的ＨＩ抗体效价均高于常规疫苗组，且第３㊁第４周ＨＩ抗体效价与常规疫苗组相比，均差异显著（Ｐ＜０．０５）（图１Ａ）㊂可以看出，ＶＡ５可提高四联疫苗对ＮＤ的ＨＩ抗体效价㊂图１㊀四联苗对海兰褐壳蛋鸡的免疫效力Ｆｉｇ．１㊀Ｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅ（ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ－Ｈ９）ｉｎＨｙ－ｌｉｎｅｂｒｏｗｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｂｒｅｅｄｓ第５期陆吉虎等：免疫增强剂提高禽用多联疫苗在蛋鸡的免疫效力用鸡传染性支气管炎抗原检测血清ＨＩ抗体效价㊂结果显示，免疫后第２㊁第３和第４周含ＶＡ５免疫增强剂组血清ＨＩ抗体效价均高于常规疫苗组，且第３㊁第４周血清ＨＩ抗体效价与常规疫苗组相比，差异显著（Ｐ＜０．０５）（图１Ｂ）㊂可以看出，ＶＡ５可提高四联疫苗对ＩＢ的ＨＩ抗体效价㊂用鸡减蛋综合征抗原检测血清ＨＩ抗体效价㊂结果显示，免疫后第２㊁第３和第４周含ＶＡ５免疫增强剂组血清ＨＩ抗体效价均高于常规疫苗组㊂且第３㊁第４周血清效价与常规疫苗组相比，均差异显著（Ｐ＜０．０５）（图１Ｃ）㊂可以看出，ＶＡ５可提高四联疫苗对ＥＤＳ的ＨＩ抗体效价㊂用Ｈ９亚型禽流感抗原检测血清ＨＩ抗体效价，免疫后第２周含ＶＡ５免疫增强剂组的血清ＨＩ抗体效价高于７ｌｏｇ２，常规疫苗组第３周的血清ＨＩ抗体效价达到７ｌｏｇ２以上㊂含免疫增强剂免疫组第３㊁第４周血清ＨＩ抗体效价与常规疫苗组相比，均差异显著（Ｐ＜０．０５）（图１Ｄ）㊂可以看出，ＶＡ５可提高四联疫苗对Ｈ９的ＨＩ抗体效价㊂用新城疫㊁传支（Ｍ４１株）㊁减蛋综合征和禽流感（Ｈ９亚型）抗原分别检测免疫后鸡喉气管冲洗液的ＨＩ效价，结果显示免疫后第１㊁第２和第３周含ＶＡ５免疫增强剂组粘膜ＨＩ抗体效价均高于常规疫苗组，且第２㊁第３周含ＶＡ５免疫组针对ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＥＤＳ和ＡＩ（Ｈ９亚型）的粘膜ＨＩ抗体效价与常规苗组相比均差异极显著（Ｐ＜０．０１）（图２Ａ㊁２Ｂ㊁２Ｃ㊁２Ｄ）㊂可以看出，ＶＡ５可提高四联疫苗对ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＥＤＳ和ＡＩ（Ｈ９亚型）的粘膜ＨＩ抗体效价㊂图２㊀免疫四联疫苗的海兰褐壳蛋鸡的粘膜抗体效价Ｆｉｇ．２㊀ＭｕｃｏｓａｌＡｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒｓｏｆｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅ（ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ－Ｈ９）ｉｎＨｙ－ｌｉｎｅｂｒｏｗｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｂｒｅｅｄｓ２．２㊀ＶＡ５免疫增强剂提高禽用新－支－减－流四联疫苗对ＮＤＶ和Ｈ９亚型ＡＩＶ的攻毒保护力免疫４周后以鸡新城疫Ｆ４８Ｅ８株强毒肌肉注射（１．０ˑ１０５．０ＥＩＤ５０）攻毒，结果显示生理盐水对照组全部死亡，四联疫苗免疫组有２只鸡出现精神不振㊁鸡冠发紫等发病症状，保护率为８７％（１３／１５），含ＶＡ５的四联疫苗免疫组无发病和死亡，保护率为１００％（１５／１５）（表１）㊂由此可见，ＶＡ５免疫增强剂可以提高四联疫苗对鸡新城疫Ｆ４８Ｅ８株的攻毒保护力㊂以禽流感（Ｈ９亚型）ＳＤ０１株进行滴鼻攻毒，检测鸡喉气管和泄殖腔棉拭子样品㊂含ＶＡ５免疫增强剂的试验组均未检测到病毒，而四联苗免疫组在攻毒后第５天仍有２只鸡检测到病毒（２／１５），空白对照组在第７天有５只鸡可以检测到病毒（５／１５）（表１）㊂由此可见，ＶＡ５可以提高四联疫苗对禽流感（Ｈ９亚型）病毒的攻毒保护㊂㊃３３０１㊃㊀江西农业大学学报第４０卷表１㊀蛋鸡免疫四联疫苗后ＮＤＶ（ＩＢＶ／ＡＩＶ）的攻毒保护率Ｔａｂ．１㊀ＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔＮＤＶ（／ＡＩＶ）ｃｈａｌｌｅｎｇｅｐｏｓｔｉｎｊｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅ（ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ－Ｈ９）ｉｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｂｒｅｅｄｓ免疫原ＶａｃｃｉｎｅＮＤＶ攻毒保护率／％ＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｉｏｐｏｓｔＮＤＶｃｈａｌｌｅｎｇｅＨ９攻毒后排毒鸡数（排毒数／总数）ＶｉｒｕｓｓｈｅｄｄｉｎｇｐｏｓｔＨ９ＡＩＶｃｈａｌｌｅｎｇｅ（Ｎｏ．ｓｈｅｄｄｉｎｇ／Ｎｏ．ｔｏｔａｌ）１ｄｐｃ３ｄｐｃ５ｄｐｃ７ｄｐｃ含ＶＡ５的四联苗ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ－Ｈ９＋ＶＡ５１００（１５／１５）０／１５０／１５０／１５０／１５四联苗ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ－Ｈ９８７（１３／１５）６／１５４／１５２／１５０／１５生理盐水Ｓａｌｉｎｅｓｏｌｕｔｉｏｎ０（０／１５）１２／１５１２／１５８／１５５／１５㊀㊀ｄｐｃ，攻毒后天数㊀㊀ｄｐｃ，ｄａｙｓｐｏｓｔｃｈａｌｌｅｎｇｅ２．３㊀ＶＡ５免疫增强剂提高禽用新－支－减－流四联疫苗对罗曼蛋鸡的免疫效力分别用ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＥＤＳ㊁ＡＩ（Ｈ９亚型）的检测抗原检测罗曼蛋鸡免疫四联苗后第２周㊁第３周和第４周的血清，结果显示含ＶＡ５免疫增强剂组免疫后第３周㊁第４周血清针对ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＥＤＳ㊁ＡＩ（Ｈ９亚型）的ＨＩ抗体效价均高于四联疫苗免疫组并达到差异显著水平（Ｐ＜０．０５）（图３Ａ㊁３Ｂ㊁３Ｃ㊁３Ｄ）㊂可以看出，ＶＡ５可提高四联疫苗对罗曼蛋鸡的免疫效力㊂图３㊀四联疫苗对罗曼蛋鸡的免疫效力Ｆｉｇ．３㊀Ｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｔｅｔｒａｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅ（ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ－Ｈ９）ｉｎＬｏｈｍａｎｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｂｒｅｅｄｓ２．４㊀ＶＡ５免疫增强剂提高新－支－流三联疫苗对海兰褐壳蛋鸡的免疫效力海兰褐壳蛋鸡免疫三联疫苗后，含ＶＡ５免疫增强剂组第２㊁３㊁４周针对鸡新城疫抗原的血清ＨＩ抗体效价均高于常规疫苗组，且第３周和第４周血清效价与常规疫苗组相比，均差异显著（Ｐ＜０．０５）（图４Ａ）㊂ＶＡ５提高三联疫苗在海兰褐蛋鸡上对ＮＤ的ＨＩ抗体效价㊂免疫后第２㊁３㊁４周含ＶＡ５免疫增强剂组血清针对鸡传染性支气管炎抗原的ＨＩ抗体效价均高于三联疫苗组㊂且ＶＡ５免疫增强剂组第４周血清效价与三联疫苗组相比，差异显著（Ｐ＜０．０５）（图４Ｂ）㊂㊃４３０１㊃㊃５３０１㊃第５期陆吉虎等：免疫增强剂提高禽用多联疫苗在蛋鸡的免疫效力ＶＡ５能提高三联疫苗在海兰褐蛋鸡上对ＩＢ的ＨＩ抗体效价㊂免疫后第２周含ＶＡ５免疫增强剂组的血清针对Ｈ９的ＨＩ抗体效价高于三联疫苗组且达７ｌｏｇ２以上㊂含ＶＡ５免疫组第３㊁４周血清ＨＩ抗体效价与三联疫苗组相比，均差异极显著（Ｐ＜０．０１）（图４Ｃ）㊂ＶＡ５提高三联苗在海兰褐蛋鸡上对ＡＩ（Ｈ９亚型）的ＨＩ抗体效价㊂图４㊀三联疫苗对海兰褐壳蛋鸡的免疫效力Ｆｉｇ．４㊀Ｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｔｒｉｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅ（ＮＤ－ＩＢ－Ｈ９）ｉｎＨｙ－ｌｉｎｅｂｒｏｗｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｂｒｅｅｄｓ３ 讨论㊀㊀ＶＡ５免疫增强剂包含咪喹莫特㊁ＰｏｌｙＩ：Ｃ㊁神经酰胺㊁胞壁酰二肽（ＭＤＰ）等多种模式识别受体激动剂成分，并且不同单组分激动剂之间具有一定的协同效应，参与鸡体内的体液免疫和细胞免疫应答［１１］，可以提高针对禽流感（Ｈ５／Ｈ９亚型）的ＨＩ抗体效价㊁提高攻毒保护率并延长有效抗体持续期［８⁃９］；在新城疫－传染性法氏囊和新城疫－禽流感（Ｈ９亚型）二联灭活疫苗中添加ＶＡ５同样可以提高该二联苗对鸡的免疫效力［１０］㊂生产中为了减少免疫应激，降低免疫成本并提高养殖综合效益，多联疫苗的使用将会逐步增多㊂本试验从体液免疫和攻毒保护率２个方面比较了含免疫增强剂的禽用三／四联灭活苗与常规疫苗对蛋鸡的免疫效果㊂ＶＡ５免疫增强剂与新－支－减－流四联疫苗或新－支－流三联疫苗共同免疫海兰褐壳蛋鸡以及ＶＡ５免疫增强剂与新－支－减－流四联疫苗共同免疫罗曼蛋鸡后能明显提升针对ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＥＤＳ和ＡＩ（Ｈ９亚型）的血清ＨＩ抗体滴度，且第３和４周血清抗体滴度与常规疫苗组相比差异均显著（Ｐ＜０．０５）㊂该结果与在禽流感（Ｈ９或Ｈ５亚型）灭活疫苗㊁禽用二联灭活疫苗（新城疫－法氏囊二联灭活疫苗和新城疫－禽流感（Ｈ９亚型）二联灭活疫苗）中添加ＶＡ５免疫增强剂的免疫增强效果一致［８－１１］㊂含ＶＡ５免疫增强剂组针对ＮＤ㊁ＩＢ㊁ＥＤＳ和ＡＩ（Ｈ９亚型）的粘膜ＨＩ抗体效价也远高于不添加ＶＡ５的免疫对照组㊂这应该是ＶＡ５免疫增强剂中的咪喹莫特㊁ＰｏｌｙＩ：Ｃ等激动剂成分与巨噬细胞㊁树突状细胞等细胞表面的ＴＬＲｓ等受体结合后激活细胞，增强了机体的免疫应答［１，１１⁃１３］，从而诱导产生更高滴度的抗病毒抗体㊂毛光明等［１４］发现在免疫新城疫疫苗前后同时注射ＰｏｌｙＩ：Ｃ可以明显提高血清中抗新城疫病毒抗体；Ｚｈａｎｇ等［１５］把ＰｏｌｙＩ：Ｃ与ＰＲＲＳ灭活疫苗共同免疫动物也诱导产生高滴度的血清抗体㊂ＶＡ５中咪喹莫特㊁ＰｏｌｙＩ：Ｃ等不同单组分激动剂之间具有协同效应［１１］，因此在疫苗中添加ＶＡ５较单一使用某种激动剂具有更好的免疫增强效果㊂另外ＶＡ５免疫增强剂也能够提高鸡外周血淋巴细胞增值，提高ＣＤ４＋㊁ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞的比例，并诱导ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ细胞因子分泌［１１，１６⁃１７］，从而增强了机体的抗病毒感染的能力㊂因此在本试验中对免疫鸡用鸡新城疫强毒攻击，含ＶＡ５免疫增强剂组获得了１００％的保护；用禽流感（Ｈ９亚型）ＳＤ０１株攻毒后检测喉气管和泄殖腔棉拭子，含ＶＡ５免疫增强剂组均未检测到病毒，而四联苗免疫组在攻毒后第５天仍有鸡能检测到病毒㊂以上结果表明，含ＶＡ５免疫增强剂的新－支－减－流四联疫苗（或新－支－流三联疫苗）免疫后比常规新－支－减－流四联疫苗（或新－支－流三联疫苗）能够使机体提前产生抗体且抗体效价高从而缩短免疫后保护空白期，并提高了攻毒保护率㊂ＶＡ５免疫增强剂不仅能够提高禽流感单苗㊁禽用新法二联苗和新流二联苗的免疫效力，对禽用新－支－减－流四联疫苗（或新－支－流三联疫苗）也具有同样的免疫增强作用，具有广阔的应用前景㊂㊃６３０１㊃㊀江西农业大学学报第４０卷参考文献：［１］ＬｕｎｄｂｅｒｇＡＭ，ＤｒｅｘｌｅｒＳＫ，ＭｏｎａｃｏＣ，ｅｔａｌ．ＫｅｙｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎＴＬＲ３／ＰｏｌｙＩ：Ｃｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｂｙｈｕｍａｎｐｒｉｍａｒｙｃｅｌｌｓ：ａｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎａｂｓｅｎｔｆｒｏｍｍｕｒｉｎｅｃｅｌｌｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００７，１１０（９）：３２４５⁃３２５２．［２］ＭａｌｌｉｃｋＡＩ，ＰａｒｖｉｚｉＰ，ＲｅａｄＬＲ，ｅｔａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆａｖｉｒｏｓｏｍｅ⁃ｂａｓｅｄａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖａｃｃｉｎｅｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓｂｙｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎｇＣｐＧ⁃ＯＤＮ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，２０１１，２９（８）：１６５７⁃１６６５．［３］ＨｕｎｇＬＨ，ＴｓａｉＰＣ，Ｃｈｉｎｇ⁃ＨｏＷａｎｇＣＨ，ｅｔａｌ．ＩｍｍｕｎｏａｄｊｕｖａｎｔｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｐｌａｓｍｉｄｓｗｉｔｈｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｐｉｅｓｏｆａＣｐＧｍｏｔｉｆｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄｗｉｔｈａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖａｃｃｉｎｅｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，２０１１，２９：４６６８⁃４６７５．［４］ＬａｔｚＥ，ＶｉｓｉｎｔｉｎＡ，ＬｉｅｎＥ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＬＰＳｒｅｃｅｐｔｏｒｇｅｎｅｒａｔｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｓｆｒｏｍｔｈｅｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅ［Ｊ］．ＪＥｎｄｏｔｏｘｉｎＲｅｓ．，２００３，９（６）：３７５⁃３８０．［５］ＫｈｕｒａｎａＳ，ＣｈｅａｒｗａｅＷ，ＣａｓｔｅｌｌｉｎｏＦ，ｅｔａｌ．ＶａｃｃｉｎｅｓｗｉｔｈＭＦ５９ａｄｊｕｖａｎｔｅｘｐａｎｄｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｔｏｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｓｉｔｅｓｏｆｐａｎｄｅｍｉｃａｖｉａｎＨ５Ｎ１ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０１０，２（１５）：１５．［６］ＭａｒｔｅｌｌｉＰ，ＦｅｒｒａｒｉＬ，ＭｏｒｇａｎｔｉＭ，ｅｔａｌ．Ｏｎｅｄｏｓｅｏｆａｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ２ｓｕｂｕｎｉｔｖａｃｃｉｎｅｉｎｄｕｃｅｓｈｕｍｏｒａｌａｎｄｃｅｌｌｍｅｄｉａｔｅｄｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｕｎｄｅｒｆｉｅｌｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＶｅｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１１，１４９（３／４）：３３９⁃３５１．［７］ＤｕｐｕｉｓＬ，ＡｓｃａｒａｔｅｉｌＳ，ＡｕｃｏｕｔｕｒｉｅｒＪ，ｅｔａｌ．ＳＥＰＰＩＣｖａｃｃｉｎｅａｄｊｕｖａｎｔｓｆｏｒｐｏｕｌｔｒｙ［Ｊ］．ＡｎｎａｌｓｏｆｔｈｅＮｅｗＹｏｒｋＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，２００６，１０８１：２０２⁃２０５．［８］唐应华，陆吉虎，吴培培，等．免疫增强剂提高禽流感疫苗效力的研究［Ｊ］．江苏农业学报，２０１４，３０（２）：３４４⁃３４８．ＴａｎｇＹＨ，ＬｕＪＨ，ＷｕＰＰ，ｅｔａｌ．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｓｆｏｒｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａＶａｃｃｉｎｅ［Ｊ］．ＪｉａｎｇｓｕＪｏｆＡｇｒＳｃｉ，２０１４，３０（２）：３４４⁃３４８．［９］唐应华，陆吉虎，吴培培，等．免疫增强剂对禽流感疫苗免疫持续期㊁安全性和鸡淋巴细胞转化的影响［Ｊ］．江苏农业学报，２０１４，３０（４）：８２１⁃８２５．ＴａｎｇＹＨ，ＬｕＪＨ，ＷｕＰＰ，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｏｎａｎｔｉｂｏｄｙｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅｐｅｒｉｏｄ，ａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖａｃｃｉｎｅｓａｆｅｔｙａｎｄｃｈｉｃｋｅｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］．ＪｉａｎｇｓｕＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１４，３０（４）：８２１⁃８２５．［１０］陆吉虎，吴培培，张雪花，等．免疫增强剂提高禽用二联苗免疫效力的研究［Ｊ］．中国农业科技导报，２０１６，１８（１）：５８⁃６５．ＬｕＪＨ，ＷｕＰＰ，ＺｈａｎｇＸＨ，ｅｔａｌ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｉｍｐｒｏｖｉｎｇｂｉｖａｌｅｎｔｖａｃｃｉｎｅｅｆｆｉｃａｃｙｉｎｐｏｕｌｔｒｙ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，１８（１）：５８⁃６５．［１１］ＴａｎｇＹＨ，ＬｕＪＨ，ＷｕＰＰ，ｅｔａｌ．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈａｄｊｕｖａｎｔｓｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆｐａｔｔｅｒｎｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｒｅｃｅｐｔｏｒａｇｏｎｉｓｔｓｃｏｎ⁃ｆｅｒｓｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．ＶｅｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１４，１７２（１／２）：１２０⁃１２８．［１２］ＪｏｎｇｄａｅＬ，Ｔｓｕｎｇ⁃ｈｓｉｅｎＣ，ＶａｎｅｓｓａＲ，ｅｔａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｇｕａｎｉｎｅｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅａｎａ⁃ｌｏｇｓ：ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＴｏｌｌ⁃Ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ７［Ｊ］．ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ，２００３，１００（１１）：１９６⁃２００．［１３］陈苗苗，李志洁．咪喹莫特对哮喘小鼠Ｔｏｌｌ样受体７及ＩＬ⁃１２㊁ＩＬ⁃１３水平的影响［Ｊ］．中华老年学杂志，２０１１，３１（１７）：３３２７⁃３３２９．ＣｈｅｎＭＭ，ＬｉＺＪ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｍｉｑｕｉｍｏｄｏｎＴｏｌｌ⁃ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ７ａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＩＬ⁃１２／ＩＬ⁃１３ｉｎａｓｔｈｍａｔｉｃｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｃｈｉ⁃ｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（１７）：３３２７⁃３３２９．［１４］毛明光，尹立杰，王印庚，等．聚肌胞对雏鸡新城疫抗体水平的影响［Ｊ］．中国家禽，２００９，３１（１４）：２６⁃２８．ＭａｏＭＧ，ＹｉｎＬＪ，ＷａｎｇＹＧ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｐｏｌｙｉｎｏｓｉｎｉｃ⁃ｐｏｌｙｃｙｔｉｄｙｌｉｃａｃｉｄｏｎａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖａｃ⁃ｃｉｎｅｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎａＰｏｕｌｔｒｙ，２００９，３１（１４）：２６⁃２８．［１５］ＺｈａｎｇＬＬ，ＢａｉＪ，ＬｉｕＪ，ｅｔａｌ．Ｔｏｌｌ⁃ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒｌｉｇａｎｄｓｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏ⁃ｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓｉｎｓｗｉｎｅ［Ｊ］．ＶｅｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１３，１６４（３／４）：２５３⁃２６０．［１６］陆吉虎，吴培培，张雪花，等．免疫增强剂提高Ｈ９亚型禽流感灭活疫苗在ＳＰＦ鸡体细胞因子的免疫应答［Ｊ］．江苏农业学报，２０１６，３２（２）：４０８⁃４１３ＬｕＪＨ，ＷｕＰＰ，ＺｈａｎｇＸＨ，ｅｔａｌ．ＩｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｓｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｃｙｔｏｋｉｎｅｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄＨ９ｓｕｂｔｙｐｅａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖａｃｃｉｎｅｉｎＳＰＦｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．ＪｉａｎｇｓｕＪｏｆＡｇｒＳｃｉ，２０１６，３２（２）：４０８⁃４１３．［１７］ＬｕＪＨ，ＷｕＰＰ，ＺｈａｎｇＸＨ，ｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｓｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｏｉｌ⁃ｅｍｕｌｓｉｏｎ⁃ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖａｃ⁃ｃｉｎｅｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓ，ｄｕｃｋｓａｎｄｇｅｅｓｅ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯＮＥ，２０１６，１１（５）：ｅ０１５６５７３．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５６５７３．。
对蛋鸡禽流感免疫程序和抗体水平的研究
以上 ， 达 到 了群体 免疫 的效 果 。 通 过 对 Ｈ５免 疫 抗 体 滴
物， 病鸡 腿部 鳞 片有红 色或 黑 色出血 。下痢 ， 排 出黄绿 色稀便 。 产蛋 鸡 的产蛋 量下 降 ， 甚 至停 产 。 产 蛋下 降 的 同时可 见软 皮蛋 、 薄皮 蛋 、 畸形 蛋增 多 。病理 变化 主要 表现 为呼 吸 系统产 生 炎性 分 泌物 ， 黏膜 充 血 、 出血 ， 肺 淤血 ， 气 囊 内纤维 素性 渗 出 ， 内脏普遍 性 出血 。
一
关键 词 ： 蛋鸡 ； 禽 流感 ； 免疫 ； 抗 体 滴度
１ 禽 流感 的基 本概 念
流 行 性 感 冒是 由 流感 病 毒 引 起 的急 性 呼 吸 道 传 染病 。 而 禽流 感（ Ａ ｖ ｉ ａ ｎ ｈ ｉ ｎ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ ， Ａ ｌ １ 则是 由 Ａ型流 感病 毒 引起 的一 种 禽类 的疾 病综 合 征 。鸡 、 火鸡 、 鸭、 鹅 和
的 免 疫 保 护 产 蛋 期 的 免 疫 间 隔 以 １ ２ － １ ６周 为 宜
低 致 病 性禽 流感 是 由 Ｈ ９ Ｎ ２等血 清 亚 型 引起 的 。 该 型 的特 点是 潜伏 期 长 、 发病 比较缓 和 、 病 程 稍长 、 发 病 率 和死 亡 率较低 、差异 大 和疫 情 范 围逐 渐 扩大 ， 主
界 动物 卫 生组 织 （ Ｏ Ｉ Ｅ ） 规 定 的 Ａ类传 染 病 。现 时在 我
国鸡 群 流 行 的 禽 流 感 病 毒 主 要 为 Ｈ５亚 型 和 Ｈ ９亚 型 ．能 引起 感染 鸡 群 生产性 能 的 急剧 下 降乃 至 １ ０ ０ ％ 的急 性 死亡， 我 国将其 列 为一类 动 物疫病 。
蛋种鸡接种禽流感疫苗后雏鸡母源抗体水平的检测
（ ｕ ｉｎｃｔＤ ｓ ｉｔ ｉｇ ｕ ｎｍａ ｈ ａ ｈｓｐ ｒｉｏ ， ａ’ ａ ｇｕ ２ ３ ０ ） Ｈ ａ’ ｙ ｉ ｒ ｎ ｐ ｉ ｌ ｅ ｔ ｅｖ ｉｎ Ｈｕｉ ｎ ｉｎ ｓ， ２ ０ ２ ａ ｉ ｔｃ Ｑ Ａ ｌ ｕ ｓ ａＪ
Ａｂ ｔａ ｔ Ａ ｆ ｃ ｆｅ ｇｂ ｅ ｄ ｒｆ ｍ ｎ ｒｅ ｅ ｏ ｓ ａ’ｎ ｗｈ ｎｔ ｅ ｅｅ １ ｎ ２ ｗｅ ｋ ｏｄ ｓ ｒ ｃ ： ｏ ｋｏ ｇ ｒｅ ｅ ｏ ｏ ｅｂ ｅ ｄ ｒ ｕ ｅｉ Ｈｕ ｉ ， ｅ ｙｗ ｒ ａ ｄ３ － ｅ － ｌ， ｌ ｒ ｈ ｎ ａ ｈ ８ ｗｅｅｒｓ ｅ ｔ ｅｙｉｏ ｕａｅ ｔ ｕ ｔｐ ｎ ｆ ｉｎｉｆ ｅ ｚ ａ ｔ ｅ ｉ ｅ ｌｉｎ ｖ ｃ ｉｅ Ａｖａ ｒ ｅｐ ｃｉ ｌ ｃ ｌｔｄｗｉ ｓ ｂｙ ｅＨ５ ｄ Ｈ９ ａ ｎ ｕ ｎ ａｉ ｃｉ ｄｏｌ ｍｕｓｏ ａ ｃｎ ． ｉ ｖ ｎ ｈ ａ ｏ Ａｖ ｌ ｎ ｖ － ｎ
ｏｄ ｒａ ｄｏｄ ｒ Ｔ ｅｍａｅ ａ ｎｉｏ ｙｌｖ ｌ ｆ ｅｓ ｂｙ ｅＨ９ ｆ ｉｎｉ ｕ ｎ ａｓ ｓ ｉｅ ｏ ｔ ０ ｄ ｙ ， ｆ ｒ ｌｅ ｎ ｌｅ． ｈ ｔｒ ｌ ａ ｔ ｄ ｅ ｕ ｔ ａ ｎ ｂ ｅ ｏｔ ｈ ｐ ｏ Ａｖ ｌ ｆ ｎ ｅ ｚ ｕ ｔ ｎ ｄａ ｕ ａ ｓ ａｔ ａ ｂ １ ｅ
鸡 的禽流感 Ｈ 亚型的母源抗体持续期约为 ２ 天 ， ０ 并随 日龄增长而缓慢下降， Ｈ 亚型的母源抗体 而 ９
持 续期 约 为 １ ０天 ，０天之 后抗 体迅 速下 降 。 １ 关键词 ： 流感 ； 禽 疫苗 ； 体 水平 抗
Ｄｅｅ ｔ ｎｏ ｒａｉｎｏ ａｅｎ ｌ ｔ ｏ ｉｓｏ ｅ ｔｃｉ ｎ Ｖａ ｉｔ ｆ ｔｒ ａ ｉ ｄ ｅ ｆ ｈ ｏ ｏ Ｍ Ａｎ ｂ ｔ