实验二 糖类的颜色反应
生物化学实验
⽣物化学实验实验⼀1、糖类的颜⾊反应1. α-萘酚反应糖在浓⽆机酸（硫酸或盐酸）作⽤下，脱⽔⽣成糠醛及糠醛衍⽣物，后者能与α-萘酚⽣成紫红⾊物质。
注意：因糠醛及糠醛衍⽣物对此反应均呈阳性，不是糖类的特异反应。
2. 间苯⼆酚反应在酸作⽤下，酮糖脱⽔⽣成羟甲基糠醛，后者再与间苯⼆酚作⽤⽣成红⾊物质。
此反应是酮糖的特异反应。
因为醛糖在同样条件下呈⾊反应缓慢，只有在糖浓度较⾼或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
2、还原作⽤许多糖类由于其分⼦中含有⾃由的或潜在的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等⾦属离⼦还原，同时糖类本⾝被氧化成糖酸及其他产物。
糖类这种性质常被利⽤于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。
本实验所⽤的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。
它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化⽽本⾝被还原成红⾊（颗粒⼤）或黄⾊（颗粒⼩）的Cu2O沉淀。
实验⼆脂肪碘值的测定碘值（价）是指100g脂肪在⼀定条件下吸收碘的克数。
碘值是鉴别脂肪的⼀个重要常数，可⽤以判断脂肪所含脂肪酸的不饱和程度。
脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸具有⼀个或多个双键，能与卤素起加成作⽤⽽吸收卤素。
常⽤碘与脂肪中不饱和脂肪酸的双键起加成作⽤。
脂肪的不饱和程度越⾼，所含的不饱和脂肪酸越多，与其双键起加成作⽤的碘量就越多，碘值就越⾼。
故可⽤碘值表⽰脂肪的不饱和度。
I2+－CH=CH－－CHI－CHI－本实验⽤溴化碘(Hanus试剂)代替碘。
⽤⼀定量(必须过量)溴化碘和待测的脂肪作⽤后，⽤硫代硫酸钠滴定的⽅法测定溴化碘的剩余量，然后计算出待测脂肪吸收的碘量，求得脂肪的碘值。
加成作⽤：IBr+－CH=CH－－CHI－CHBr－剩余溴化碘中碘的释放：IBr + KI KBr + I2再⽤硫代硫酸钠滴定释放出来的碘：I2 +2Na2S2O3 2Na2S4O6+2NaI思考题：何谓空⽩溶液和空⽩实验？空⽩实验有何意义？在各种分析⽅法中，为消除⼲扰，⽤与测定试样时完全⼀致的条件进⾏测定的溶液。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
实验二 检测生物组织中的糖类
实验二 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P 18）一．实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质 二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。
1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O 沉淀。
如：葡萄糖+ Cu ( OH ) 2葡萄糖酸 + Cu 2O ↓（砖红色）+ H 2O ，即Cu ( OH ) 2被还原成 2O ，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸 （该反应式了解） 注意反应条件，水浴加热。
2．非还原糖：淀粉遇碘变蓝色。
另外蔗糖也不是还原糖，所以不能用甘蔗、甜菜什么的来做还原糖的实验。
因为它们富含的糖是蔗糖。
3．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）。
4．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。
（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH 溶液中能与双缩脲试剂中的Cu 2+作用，产生紫色络合物。
） 三．实验材料1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。
（因目中实在要用菜叶子了，记得有一个步骤叫做“脱色”）2．做脂肪的鉴定实验。
应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。
3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。
我们用的蛋清液。
四、实验试剂1．斐林试剂（检测还原糖）甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH 溶液： 乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO 4溶液 2．苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液（检测脂肪） 3．双缩脲试剂（检测蛋白质）A 液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH 溶液B 液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO 4溶液4．其他试剂：体积分数为50%的酒精溶液（检测脂肪实验中用来洗去浮色）；碘液（检测淀粉液）；蒸馏水（制作标本时使用）五、方法步骤。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
实验二--糖类的颜色反应
实验二--糖类的颜色反应
实验目的：
通过观察糖类与不同试剂发生的反应，探究不同糖类的颜色反应特点。
实验材料：
- 试剂：
- 苏丹红溶液
- 亚硝酸银溶液
- 比色皿
- 样品：
- 葡萄糖溶液
- 果糖溶液
- 蔗糖溶液
实验步骤：
1. 准备好比色皿和标注好的糖类溶液，每种糖类的溶液取适量放入不同的比色皿中。
2. 分别向不同的比色皿中滴加一滴苏丹红溶液。
3. 观察每个比色皿中的溶液变化，并记录下来。
若出现颜色变化或沉淀的形成，进行详细描述。
实验结果：
- 葡萄糖溶液：
- 添加苏丹红溶液后，溶液呈现橙红色，并出现一些悬浮物。
- 果糖溶液：
- 添加苏丹红溶液后，溶液呈现橙红色，有微弱的变化，但
没有悬浮物的形成。
- 蔗糖溶液：
- 添加苏丹红溶液后，溶液变为淡黄色，并没有悬浮物的形成。
实验结论：
- 葡萄糖溶液反应最显著，产生了橙红色的颜色变化和悬浮物
的形成。
- 果糖溶液反应较葡萄糖溶液弱，呈现微弱的橙红色变化，但
没有悬浮物的形成。
- 蔗糖溶液反应最弱，只有溶液的颜色变浅而没有悬浮物的形成。
实验原理解释：
苏丹红溶液在酸性条件下呈现橙红色。
不同的糖类与苏丹红的反应程度不同，可以通过颜色变化的观察来判断其反应性。
葡萄糖是单糖，具有还原性，与苏丹红溶液发生剧烈的反应，表现为明显的橙红色和悬浮物的形成。
果糖也是单糖，但其还原性较弱，所以反应较葡萄糖溶液弱。
蔗糖是双糖，不具有还原性，所以与苏丹红溶液的反应最弱，只有溶液颜色变浅的情况。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的精品文档，你值得期待掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
2.检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
则不需要加热。 (4)现象不同：斐林试剂检测还原糖，产生砖红色沉
淀，双缩脲试剂检测蛋白质，产生紫色物质。
[高考实验对接]
（ⅰ）
（ⅱ） （ⅲ）
【模板应用分析】
实验材料选择：与教材 试验不同，但都是富含 目的有机物且白色或无 色的生物材料，与教材 实验要求相同。
[多维思考]
（1）如果本实验要检测脂肪，应该怎么做？ 提示：可将腐乳制成腐乳组织液，加入苏丹Ⅲ或 Ⅳ染液，观察组织液颜色变化。
（2）如果本实验出现了腐乳腐败现象，可能是由 于什么原因？ 提示：可能的原因是在制作腐乳过程中，无菌操 作出现失误，造成杂菌污染所致。
实验试剂的选择： 蛋白质与双缩脲试 剂反应，与教材实 验要求相同。
实验变量分析：是 对教材实验的拓展。 ①②③组的单一变 量是处理时间，③ ④组的单一变量是 温度
使酶失活 浅
蛋白酶
不变
【模板应用分析】
浅
（ⅴ）
氨基 转换
实验结果： 生物材料中 的目的有机 物含量越多， 颜色越深， 否则越浅。
糖类和脂质
一、实验原理
某些化学试剂能够使生物组织中的相关有机化合物 产生特定的颜色反应。
(1)还原糖＋ 斐林试剂 50℃～65℃温水浴砖红色
沉淀。
苏丹Ⅲ染液 →橘Байду номын сангаас色
(2)脂肪＋
苏丹Ⅳ染液 →红色 (3)蛋白质＋ 双缩脲试剂 →紫色。 (4)淀粉＋ 碘液 →蓝色。
二、实验步骤
1.还原糖的检测： 选材：含糖量较高、白色或近于白色的植物组织
↓ 制备组织样液
↓ 显色反应：
制浆
实验二糖类的颜色反应
实验二--糖类的颜色反应实验二--糖类的颜色反应一、实验目的1.学习和掌握糖类颜色反应的原理和实验操作方法。
2.通过实验观察不同糖类的颜色反应特点，加深对糖类性质的理解。
二、实验原理糖类物质分子结构中含有的羰基（C=O）和羟基（-OH）等官能团，在一定条件下可以与某些试剂发生化学反应，产生特定的颜色。
常见的糖类颜色反应有醛基的银镜反应、羟基的费林反应以及羧基的酸碱指示剂反应等。
三、实验步骤1.准备试剂和样品：本实验选用葡萄糖、果糖、麦芽糖、淀粉和纤维素等常见糖类物质作为样品，同时准备硝酸银溶液、氢氧化钠溶液、硫酸铜溶液、费林试剂等试剂。
2.银镜反应：取5滴硝酸银溶液和5滴氢氧化钠溶液，混合均匀后，分别取少量不同糖类样品加入试管中，再滴加混合好的硝酸银-氢氧化钠溶液，观察各样品是否产生银镜。
记录实验结果。
3.费林反应：取5滴费林试剂A和5滴费林试剂B，混合均匀后，分别取少量不同糖类样品加入试管中，再滴加混合好的费林试剂，观察各样品是否发生颜色变化。
记录实验结果。
4.酸碱指示剂反应：取少量不同糖类样品分别加入试管中，再滴加硫酸铜溶液，观察各样品颜色变化。
记录实验结果。
四、实验结果与分析1.银镜反应：实验结果显示，葡萄糖、果糖和麦芽糖在银镜反应中表现出明显的银镜现象，说明这些糖类具有醛基；而淀粉和纤维素未观察到银镜现象，说明它们不含醛基。
2.费林反应：实验结果显示，果糖和麦芽糖在费林反应中呈现阳性反应，颜色发生变化；而葡萄糖、淀粉和纤维素在费林反应中未观察到颜色变化。
这说明果糖和麦芽糖属于还原糖，而其他三种糖属于非还原糖。
3.酸碱指示剂反应：实验结果显示，葡萄糖、果糖和麦芽糖在酸碱指示剂反应中呈现出不同的颜色变化；而淀粉和纤维素未观察到明显的颜色变化。
这说明前三种糖具有酸性或碱性基团，而其他两种糖则不具有。
综合以上实验结果，我们可以得出以下结论：1.葡萄糖、果糖和麦芽糖具有醛基，属于还原糖；淀粉和纤维素不具有醛基，属于非还原糖。
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实验二糖类的颜色反应
一、实验目的
1．了解糖类某些颜色反应的原理。
2．学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。
二、实验原理
1.α-萘酚反应（Molisch反应）原理
糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。
2.间苯二酚反应（Seliwanoff反应）原理
在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮糖的特异反应。
醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。
三．材料与方法
1.α-萘酚反应（Molisch反应）
取5支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、0.1%糠醛溶液各1mL。
再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。
斜执试管，沿管壁慢慢加入浓硫酸1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。
浓硫酸在试液下形成两层。
在二液分界处有紫红色环出现。
观察、记录各管颜色。
2.间苯二酚反应（Seliwanoff反应）
取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液各0.5ml。
再向各管分别加入塞氏试剂5mL，混匀。
将3支试管同时放入沸水浴中，注意观察、记录各管颜色的变化及变化时间。
四．结果与分析
表1
表2
1.由表1可知，葡萄糖，果糖，蔗糖，淀粉，糠醛均可发生Molisch
反应，但产生的紫环颜色不同，反应后试样的颜色也不同，其中糠醛的紫环颜色最深，且试样颜色为深棕接近黑色。
加入浓硫酸后，糠醛溶液立刻发生变化，淀粉和蔗糖产生现象时间相当。
发生以上现象是因为糖类在浓硫酸作用下脱水形成糠醛及其衍生物，才能与α-萘酚反应，这需要一定的时间，不同种类的糖需要的时间不同，因此产生紫环现象的时间不同，而糠醛溶液可直接与α-萘酚反应，所以产生紫环现象的时间最短。
且不同的糖性质不同，导致紫环的颜色也不同。
2.由表2可知，果糖溶液最先变红，蔗糖溶液出现红色的时间与果糖几乎相同，葡萄糖溶液变红时间最晚，且颜色最淡。
果糖是酮糖，在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质，因此果糖反应最快。
而蔗糖是二糖，可水解为酮糖。
葡萄糖是醛糖，醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
五.讨论与结论
Seliwanoff反应试验中，1%的果糖和蔗糖均在2分40秒左右出现红色，葡萄糖在4分钟左右变色。
前人所做试验中1%的果糖和蔗糖有在2分钟时开始变色，有在3分钟时开始变色，1%的葡萄糖有在3分时变色，有在4分钟时变色。
因此我所做的试验结果与前人相似。
但有些试验中加热时间延长到20分钟，分别记录2分钟，5分钟，10分钟,20分钟时溶液的颜色，发现在2分钟时果糖有黑色沉淀生成，其他溶液均无沉淀。
加热至10分钟后，溶液均变为棕色或黑色。
加
热时间应在1~5分钟为宜，试样浓度在0.5%~1%最适宜。
本次实验我做的基本正确，通过实验验证了α-萘酚反应和间苯二酚反应，了解了糖类颜色反应的原理，操作和现象。
参考文献
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