干细胞基础与临床应用基础研究
干细胞合作协议书合同5篇
干细胞合作协议书合同5篇
篇1
甲方（干细胞研究单位）：____________________
地址：_____________________________________
法定代表人：_____________________________
联系方式：_______________________________
乙方（合作单位）：_______________________
地址：_____________________________________
法定代表人：_____________________________
联系方式：_______________________________
鉴于甲乙双方有意愿在干细胞研究与应用领域展开合作，为明确双方权益，达成以下协议： 第一条 合作事项
甲乙双方同意在干细胞领域开展技术合作，包括但不限于干细胞基础研究、干细胞治疗技术研发、干细胞临床应用等领域。具体合作事项包括但不限于以下内容：干细胞实验室建设与管理、科研人才培训与交流、科技成果转化与推广等。合作期限为____年。合作期限届满后，如需继续合作，双方应另行协商并签订新的合作协议。
第二条 合作目标
双方共同致力于干细胞技术的研发与应用，通过合作实现以下目标：提升双方在干细胞领域的科研水平与应用能力；推动干细胞科技成果的转化与推广；促进人类健康事业的发展。
第三条 合作经费及支付方式
本次合作所需经费由甲乙双方共同承担。具体经费数额及支付方式如下：甲方负责提供实验室建设经费及设备购置费用，乙方负责提供项目研发费用。甲方应按时支付乙方约定的研发费用，乙方需提供相应的发票和费用明细。此外，双方还可根据实际情况共同申请科研项目经费支持。 第四条 知识产权归属及保密条款
1. 双方在合作过程中产生的知识产权归属问题，按照以下原则处理：由双方共同完成的科研成果、技术成果等知识产权归双方共同所有；一方单独完成的科研成果、技术成果等知识产权归该方所有。
脐血技术基础和临床应用研究现状
・５６８ 生 型盘查 至 旦箜 鲞筮 塑 ｈｉｎ』ＩｎＩｅｒｎ Ｍｅｄ，Ａｕｇｕｓｔ ２００２，Ｖｏｌ ４１，Ｎ。．８
脐血技术基础和Ｉ临床应用研究现状
钱忠明 郭天欢 王玮 郭试瑜 袁其朋
干细胞技术是近年发展最为迅速的生物医学技术。由
于干细胞移植对许多疾病治疗的特殊意义，干细胞研究和应
用已成为目前医学界最为热门的课题。在干细胞技术的研
究应用中，造血干细胞移植的临床应用较早，始于２０世纪５０
年代后期，８０年代初有较大突破。由于脐血富含造血干细
胞，来源广泛，为研究人员所关注。１９８８年法国科学家为一
个患Ｆａｎｃｏｎｉ症的儿童进行了世界上第一例脐血移植获得成
功。至今，全球已有数千例患者接受了脐血移植，成功率高
达８０％。现就脐血技术的基础及临床应用研究现状作一
综述。
一、脐血生物学特点的基础研究
１．脐血细胞的特点：胎儿造血器官历经卵黄囊、肝、脾到
骨髓，第４月末开始骨髓造血期。到出生时，肝、脾产生全血
细胞的功能基本丧失，骨髓代之成为主要的造血器官，故脐
血是骨髓造血早期的血液。脐血含有丰富的造血祖细胞
（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ，ＨＰＣ），其数量相当甚至超过骨
髓所含的造血祖细胞，因此脐血是一个引人注目，很有潜力 可代替骨髓的造血祖细胞的来源。Ａｌｍｉｃｉ等 ｉ Ｊ分析了脐血
中祖细胞不成熟（ｉｍｍａｔｕｒｉｔｙ）的程度，他们发现脐血含有高比
例的未成熟祖细胞。三色分析（ｔｈｒｅｅ—ｃｏｌｏｒ ａｎａｌｙｓｉｓ）的结果证
实，大多数分化簇（ｃｌｕｓｔｅｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｃＤ ）ＨＬＡ—ＤＲ 细胞
亚群可检测到干细胞因子（ＳＣＦ）受体。甲基纤维素混合物中
加入ＳＣＦ可增加单核细胞（ＭＮＣ）和ＣＤ３＋４细胞的集落生长，粒
巨噬细胞系集落形成单位（ＣＦＵ—ＧＭ）和粒红巨噬巨核细胞系
集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）的增加最为显著。与骨髓相比，
生物医学中的干细胞库建设
生物医学中的干细胞库建设
近年来，干细胞技术的发展引起了人们的广泛关注。干细胞作为一种可以分化成各种不同类型细胞的细胞，对于医学研究和治疗有着重要的意义。在这种前沿领域，建设一个完善的干细胞库是非常关键和必要的。
一、干细胞库的定义和意义
干细胞库是指专门收集、保存和管理各种来源、种类和性质的干细胞的系统性机构。干细胞库将干细胞进行分型、鉴定、保存、管理和应用，在疾病防治、药物研发等方面的应用具有巨大的潜力。
当前干细胞库的建设可以围绕以下三个方面展开：
1.建设人类干细胞库
当前，人类干细胞库主要指的是由人类胚胎干细胞（human
embryonic stem cell, hESC）组成的库，其研究目标是解决疾病的基础问题，如正常细胞分化和不良细胞分裂。建设人类干细胞库能提供更多的干细胞样本，为干细胞学的进一步研究奠定基础。
2.建设动物干细胞库
动物干细胞库主要指的是建立各种动物的干细胞库。当前动物干细胞库主要应用于基础、应用科学研究领域。因为动物细胞具有与人类细胞相似的特点，因此制造一些基于动物实验的模型，可以根据结果反推出人体的细胞机制。
3.建设植物干细胞库
植物干细胞库则是指建立各种植物的干细胞库。当前植物干细胞库主要应用于基础、应用科学研究领域。植物细胞与动物细胞不同，但是建设植物干细胞库，可以通过研究植物细胞的能量转移机制，研究人体的细胞免疫系统等。
二、干细胞库的建设与发展
干细胞库的建设与发展比较复杂，需要在技术、法律和管理等多个方面进行探讨。
1.技术层面
干细胞库的技术难度比较大，包含了干细胞分离、鉴定、保存、分类等一系列工作。在建设干细胞库的过程中，需要高度关注技术创新，寻找出更好的干细胞储存和管理技术。
2.法律层面
干细胞库建设的法律问题，主要是在人类胚胎干细胞和干细胞的产生等方面。在伦理、法律等方面寻找行之有效的解决方案能够更好的推进干细胞库建设。
3.管理层面
谢立信：临床与基础研究，如何良好互动？
谢立信：临床与基础研究，如何良好互动？
苏暄;林萍
【期刊名称】《中国医药科学》
【年(卷),期】2014(000)007
【总页数】3页(P1-3)
【作 者】苏暄;林萍
【作者单位】中国医药科学;中国医药科学
【正文语种】中 文
“我是一名临床医生，每天都在做手术，因此经常会发现一些临床学科问题。要解决这些问题，就需要我们回到实验室去验证，这就形成了应用基础研究。应用基础研究的成果要转化整合，最后再回到临床中去实践，从而促进临床进步。我关注的领域主要是眼表重建的应用基础研究。眼表功能重建和视网膜功能重建，这是眼前节和后节领域很重要的两大问题，共同之处在于都涉及到了干细胞问题。”
3月14日，正是草长莺飞、迎春花粲然报春之时。
在这大好春光中，业界专家学者云集于北京大学英杰交流中心，参加第六届中国眼科学基础研究大会暨研究生导师论坛。中国工程院院士、山东省眼科研究所所长谢立信教授在开幕发言中指出了眼表重建领域应用基础研究的发展方向。
眼表（ocular surface）包括结膜上皮、角膜上皮及泪膜。眼表涉及的解剖部位除了角膜和结膜外，还有眼睑和泪腺组织。临床上，眼表疾病（ocular surface
disease，OSD）主要是指角膜上皮和结膜上皮的病变。角膜上皮的完整是维持角膜正常功能和视觉质量的关键，其稳定性受益于角膜缘基底部干细胞不断地增殖分化和向心性移动。当各种因素导致角膜缘干细胞的破坏，会引起角膜缘干细胞的衰竭。
谢立信院士认为，眼表疾病是眼科界面临的棘手疾病之一，其中角膜缘干细胞缺乏是引起众多眼表疾病的主要原因之一。角膜缘干细胞缺乏常会引起角膜上皮缺损、角膜新生血管、角膜结膜化、角膜溃疡甚至自溶，严重者还会引起睑球粘连、结膜囊闭锁，不但影响外观，有的甚至会引起失明。近年来，由于角膜缘干细胞理论和组织工程技术的完善和发展，眼表疾病的治疗也有了较大进展。目前眼表重建手术是治疗眼表疾病的重要手段，而干细胞移植则是眼表重建手术中的关键，包括自体或同种异体角膜缘干细胞移植、体外培养角膜缘干细胞移植以及口腔黏膜上皮细胞的培养移植。
细胞科学心得体会(精选15篇)
第 1 页 共 26 页 细胞科学心得体会（精选15篇）
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干细胞合作协议书合同6篇
干细胞合作协议书合同6篇
篇1
甲方（干细胞研究单位）：____________________
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乙方（合作单位）：________________________
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鉴于甲乙双方同意共同开展干细胞领域的研究与合作，本着平等互利、合作共赢的原则，经友好协商，达成如下协议： 第一条 合作事项
甲乙双方同意在干细胞领域开展科研合作，包括但不限于干细胞基础研究、临床应用研究、成果转化等。合作的具体内容和形式包括但不限于：共同开展科研项目，共同培养科研人才，共享科研成果等。
第二条 合作期限
本协议的履行期限为_____年，自双方签字盖章之日起生效。协议到期后，如需续签，双方应根据实际情况再行协商。
第三条 合作模式与分工
一、合作模式：甲乙双方共同组建联合实验室，共同开展干细胞研究与合作。联合实验室的设立、管理、运行等具体事宜，由双方协商确定。
二、分工情况：
1. 甲方负责提供干细胞研究的基础条件、科研设施及技术支持；
2. 乙方负责提供项目资金、人才支持及市场渠道等；
3. 双方共同开展科研项目的立项、研究、成果推广等工作。 第四条 经费与支付方式
干细胞外泌体在老年肿瘤治疗中的研究进展
国际老年医学杂志 ２０２１年３月 第４２卷第２期 ＩｎｔＪＧｅｒｉａｔｒ，Ｍａｒｃｈ２０２１，Ｖｏｌ．４２Ｎｏ．２２０２１国际老年医学杂志编辑部 ２０２１ｂｙｔｈｅＥｄｉｔｏｒｉａｌＯｆｆｉｃｅｏｆＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｒｉａｔｒｉｃｓ
广东省医学科学技术研究基金（Ｃ２０１６０６３）王媛媛和丁 宇为并列第一作者通讯作者：丁克祥，电子邮箱ｄｉｎｇｋｘｄｉｎｇｙｕ＠１２６ｃｏｍ；戴 萌，电子邮箱：檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏殏殏殏
ｄｍ４２２９８＠１２６ｃｏｍ综 述干细胞外泌体在老年肿瘤治疗中的研究进展王媛媛１ 丁 宇１ ＴｈａｍＳｅｎｇＫｏｎｇ２ 冷 芬１ 毛 娟１ 朱 玲１ 丁克祥３ 戴 萌１１南方医科大学南方医院，广州 ５１０５１５；２马来西亚阿尔卑斯医学中心，吉隆坡 ６３０００ 马来西亚；３南方医科大学公共卫生学院，广州 ５１０５１５ ［摘 要］ 老年肿瘤恶性程度高、转移速度快，且并发症和恶病质多见，特别是合并多种慢性疾病，临床治疗具有很大难度。目前，对老年肿瘤大多数采用姑息治疗、保守治疗、消极治疗、甚至放弃治疗，使患者错过了最佳治疗期。干细胞外泌体可以传递和运载某些治疗性核酸、蛋白和靶向药物等抗癌药物或制剂，是较为理想的肿瘤药物传递载体，且可选择性地结合肿瘤内皮细胞传递到癌组织。另外在某些方面，间充质干细胞对肿瘤生长有不同的作用，包括改变肿瘤细胞生长微环境、调控肿瘤细胞某些生物信息和遗传特性、抑制已形成肿瘤的进展、明显减少在治疗过程中对其他正常组织的副作用。不过，干细胞外泌体用于肿瘤临床治疗的应用研究仍处于基础医学与临床应用研究阶段。随着对干细胞外泌体的深入研究，其在未来可能对于肿瘤干细胞治疗、药物递送等领域发挥重要作用。 ［关键词］ 干细胞；外泌体；老年肿瘤；治疗；研究进展 ｄｏｉ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１６７４－７５９３２０２１０２０１４ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＳｔｅｍＣｅｌｌＥｘｏｓｏｍｅｓｆｏｒｔｈｅＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＣａｎｃｅｒｉｎＯｌｄｅｒＰａｔｉｅｎｔｓＷａｎｇＹｕａｎｙｕａｎ１，ＤｉｎｇＹｕ１，ＴｈａｍＳｅｎｇＫｏｎｇ２，ＬｅｎｇＦｅｎ１，ＭａｏＪｕａｎ１，ＺｈｕＬｉｎｇ１，ＤｉｎｇＫｅｘｉａｎｇ３，ＤａｉＭｅｎｇ１１ＮａｎｆａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５；２ＡＬＰＳＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＭａｌａｙｓｉａ，ＫｕａｌａＬｕｍｐｕｒ ５８２００，Ｍａｌａｙｓｉａ；３ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５ＡｕｔｈｏｒｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｄｅｑｕａｌｌｙｔｏｔｈｉｓｐａｐｅｒＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＤｉｎｇＫｅｘｉａｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｉｎｇｋｘｄｉｎｇｙｕ＠１２６ｃｏｍ；ＤａｉＭｅｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｍ４２２９８＠１２６ｃｏｍ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｃａｎｃｅｒｉｎｏｌｄｅｒｐａｔｉｅｎｔｓｉｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｈｉｇｈｍａｌｉｇｎａｎｃｙ，ｒａｐｉｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ｍｏｒｅｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓａｎｄｃａｃｈｅｘｉａ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｗｉｔｈａｖａｒｉｅｔｙｏｆｃｈｒｏｎｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ，ａｎｄｉｓｈａｒｄｔｏｔｒｅａｔ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｐａｌｌｉａｔｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｎｅｇａｔｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｅｖｅｎｇｉｖｉｎｇｕｐｔｒｅａｔｍｅｎｔａｒｅａｄｏｐｔｅｄｆｏｒｏｌｄｅｒｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃａｎｃｅｒ，ｗｈｉｃｈｍａｋｅｓｐａｔｉｅｎｔｓｍｉｓｓｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｔｒｅａｔｍｅｎｔｐｅｒｉｏｄ．Ｓｔｅｍｃｅｌｌｅｘｏｓｏｍｅｓｃａｎｄｅｌｉｖｅｒａｎｄｃａｒｒｙｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｔｕｍｏｒ－ｔａｒｇｅｔｅｄｄｒｕｇｓ．Ｔｈｅｙａｒｅｉｄｅａｌｃａｒｒｉｅｒｆｏｒａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙ，ａｎｄｃａｎｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｂｉｎｄｔｏｔｕｍｏｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｔｏｄｅｌｉｖｅｒｄｒｕｇｓｔｏｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅ．Ｓｔｅｍｃｅｌｌｓｃａｎｃｈａｎｇｅｔｈｅｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ｒｅｇｕｌａｔｅｓｏｍｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｆｏｒｍｅｄｔｕｍｏｒｓ，ａｎｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｏｎｏｔｈｅｒｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓｄｕｒｉｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｔｅｍｃｅｌｌｅｘｏｓｏｍｅｓｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃａｎｃｅｒｉｓｓｔｉｌｌｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｓｔａｇｅ．Ｗｉｔｈｔｈｅｉｎ－ｄｅｐｔｈｓｔｕｄｙｏｆｓｔｅｍｃｅｌｌｅｘｏｓｏｍｅｓ，ｔｈｅｙｍａｙｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙａｎｄｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅ． ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｓｔｅｍｃｅｌｌ；Ｅｘｏｓｏｍｅｓ；Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｔｕｍｏｒ；Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｒｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅ—４１１—国际老年医学杂志 ２０２１年３月 第４２卷第２期 ＩｎｔＪＧｅｒｉａｔｒ，Ｍａｒｃｈ２０２１，Ｖｏｌ．４２Ｎｏ．２王媛媛，等．干细胞外泌体在老年肿瘤治疗中的研究进展 老年肿瘤学是当今老年医学的重要内容，其恶性程度高、转移速度快、治疗耐受性差，而且老年肿瘤并发症和恶病质多见，特别是合并多种慢性疾病，在接受常规肿瘤治疗后，发生不良反应的概率大大提升。因此，目前临床治疗老年肿瘤患者均采用姑息治疗、保守治疗、消极治疗、甚至放弃治疗，使得肿瘤患者错过了最佳治疗期。当然，临床也有针对老年肿瘤患者的积极治疗策略，但每种治疗方法仍然存在这样或那样的问题、不足或缺陷。精准医疗是以老年肿瘤患者自身基因组信息为基础，结合蛋白质组、代谢组等相关信息，从基因组中分析和鉴别老年肿瘤患者的疾病差异，为老年患者提供最合理的治疗方案，在减少老年肿瘤患者不良反应的基础上，达到临床治疗效果有效性的最大化。其中，干细胞外泌体正是对老年肿瘤患者精准医疗研究新的方向之一，也是具有一定希望和应用前景的老年肿瘤临床亚细胞与分子靶向药物结合治疗的新技术之一。因此，本文综述干细胞外泌体在当前肿瘤治疗中的基础与临床研究进展，展望其在未来老年临床肿瘤治疗与干预中的应用。１ 干细胞及其外泌体概述 人类干细胞（ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＳＣｓ）的发现、分离制备及体外培养扩增及其基础与临床应用研究成果被全世界大多数科学家认为未来最有价值和希望用于临床多种疾病治疗和干预的理想种子细胞和明星万能细胞。干细胞是一类具有强大增殖、多向分化、再生修复及自我更新的原始细胞和种子细胞，可从多种组织或器官中分离制备，体外培养，它们是损伤组织修复与再生、更新和替代的重要细胞来源。干细胞不仅具有强大的增殖能力，而且具有多种生物活性和功能。然而，随后的研究结果表明，对损伤部位移植的干细胞的存活率和实际分化均较低，而且其维持时间也短暂［１］。特别是，实施移植的干细胞本身也难以穿过血脑屏障、血脊屏障和皮肤屏障等，因此，依赖干细胞移植存在着明显的技术瓶颈和局限性。但进一步研究发现，干细胞可以旁分泌的方式分泌多种生物活性因子，干细胞可以旁分泌的方式分泌多种生物活性因子才是干细胞移植治疗的“执行者”，也是其产生疗效的真正作用机制。尤其是干细胞旁分泌产生的外泌体，因其含有多种生物活性物质以及生物信息等，可参与细胞间物质交换、生物信息交流和细胞信号传递及通讯等作用。因此，研究人员推测外泌体是干细胞的旁分泌效应体，也是在某种状态和某些靶部位执行干细胞功能和生物学效应的新的活性细胞器，其实际作用和功能与干细胞基本相似，包括可以缩小心肌梗死面积、促进肾脏损伤的修复、调节免疫反应、参与肿瘤发生、发展等。１１ 干细胞外泌体的起源及产生１９８３年Ｐａｎ和Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ等首先在绵羊网织红细胞向成熟红细胞转化和演变的过程中发现了一种形态大小为纳米囊泡的分泌小体。以后将这些小泡称为外泌体［２］。后来进一步证实，这种细胞外泌体实际上可携带多种脂质、蛋白质、ＤＮＡ、ＲＮＡ等生物活性成分和细胞信号分子，广泛参与抗炎反应、免疫调节、对抗细胞凋亡、细胞损伤修复与再生、促进或者抑制肿瘤细胞生长等过程。尤其是２００７年，外泌体内含物ＲＮＡｓ和ｍｉＲＮＡｓ被发现，外泌体作为新的细胞间通讯介质受到高度关注。此后，许多类型的真核细胞被发现分泌外泌体，包括机体免疫细胞（Ｂ细胞和Ｔ细胞）、树突状细胞、巨噬细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、干细胞等，而这些外泌体被证明有重要的细胞间信息传递功能。虽然，干细胞外泌体的产生和分泌机制错综复杂，但可简单归纳为“内吞－融合－外排”３个步骤：①细胞内吞作用使其质膜向内凹陷成芽产生胞内小泡，进而融合形成早期核内体；②早期核内体继续通过胞膜内陷逐渐成熟为晚期核内体，并在囊泡分拣蛋白如转运必需核内体复合物（ｅｎｄｏｓｏｍａｌｃｏｍｐｌｅｘｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｔｒａｎｓｐｏｒｔ，ＥＳＣＲＴ）的作用下识别、分类、挑选外泌体内含蛋白生成多囊泡体或者在神经酰胺协助下生成多囊泡体，该过程分为ＥＳＣＲＴ参与的ＥＳＣＲＴ依赖途径及ＥＳＣＲＴ非依赖途径。晚期核内体形成过程中装载蛋白质、脂质、ＲＮＡ，形成多泡小体；③装载有母细胞蛋白质、脂质、ＲＮＡ等成分的多泡小体逐步驱动和迁移到细胞内膜边缘并外排至该细胞之外形成外泌体，最后外泌体将储存在囊泡内的生物信息和生物物质传递给靶细胞，靶细胞对外泌体的接收可以通过配体－受体相互作用、胞饮、吞噬或胞膜融合等方式来实现。研究发现，骨髓间充质干细胞培养基上清液中发挥损伤修复作用的物质可能是１种直径在５０～１００ｎｍ的磷脂膜包裹的小囊泡，首次从人外泌体来源的间充质干细胞条件培养基中分离并鉴定外泌体［３］。１２ 干细胞外泌体的形态、结构与特性细胞外泌体是真核细胞外囊泡的一种亚型，也是来源于细胞却是非完整细胞结构的亚细胞结构。干细胞外泌体作为该细胞产生并向其胞外分泌的一种具有脂质双分子层膜结构的生物活性柔性囊泡，其微粒直径大约为３０～１５０ｎｍ，而该微粒密度约为１１３～１１９ｇ／ｍｌ。干细胞外泌体最独特的功能可能是与靶向受体细胞的特异性相互作用，从而在体内广泛分开的区域之间实现细胞间的信息传递。从而参与了重要的生理和病理过程。这些功能依赖于外泌体内所包含的成分，特别是蛋白质和核酸。干细胞外泌体中的蛋白质成分并不保持恒定。—５１１—国际老年医学杂志 ２０２１年３月 第４２卷第２期 ＩｎｔＪＧｅｒｉａｔｒ，Ｍａｒｃｈ２０２１，Ｖｏｌ．４２Ｎｏ．２王媛媛，等．干细胞外泌体在老年肿瘤治疗中的研究进展在３个独立批次的干细胞外泌体中，分别检测到３７９、４３２和４２０个独特蛋白，其中仅有１５４个蛋白为常见的蛋白。根据这些蛋白的功能证明外泌体具有驱动许多生物学过程的能力，并与干细胞外泌体治疗多种疾病的疗效一致，蛋白酶体单元已被报道存在于干细胞外泌体中。此外，通过质谱分析干细胞外泌体，可以检测到２０Ｓ蛋白酶体的蛋白补体，２０Ｓ蛋白酶体负责细胞内氧化损伤蛋白的降解，部分参与了干细胞外泌体的心脏保护活性。在大多数情况下，干细胞外泌体作为载体的功能依赖于核酸ｍｉＲＮＡ，通过调节受体细胞促进肿瘤发展。一些研究人员发现，干细胞外泌体通过ｍｉＲＮＡ促进乳腺癌细胞增殖，如ｍｉＲ－２１和ｍｉＲ－３４３４ａ相互作用参与肿瘤的转移。其中大部分蛋白质是肿瘤支持因子，包括血小板源性生长因子受体（ＰＤＧＦＲ－β）和金属基质蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ－１和ＴＩＭＰ－２）［４］。随后，ｍｉＲＮＡ被认为是外泌体诱导反应的主要信使。Ｂａｇｌｉｏ团队对干细胞外泌体小型ＲＮＡ进行分析，发现除了ｍｉＲＮＡ外，干细胞外泌体还富含转运ＲＮＡ（ｔＲＮＡ），其作用与ｍｉＲＮＡ等同。１３ 干细胞外泌体的提取制备与分析鉴定目前，可用于提取制备干细胞外泌体的方法和技术很多，但目前国内外实验室大多采用超速离心法（简称超离法）、梯度密度分离法、超滤法或纳滤离心法、特异性免疫结合捕获法（使用抗ＥｐＣＡＭ包被的磁珠分离法）等。其中，普遍认为目前干细胞外泌体最常用和最简单提取方法是超速离心法，亦被称之为干细胞外泌体提取分离法的经典法和“金标准”。但超离法较易引起干细胞外泌体的黏附性聚集，且反复多次离心造成干细胞外泌体的丢失或破坏增加导致得率减少，加上超离法难以将样本中的微粒、微泡、细胞碎片和凋亡小体完全分离导致干细胞外泌体纯度有限［３］。为了提高干细胞外泌体提取分离的纯度和得率，有研究者在提取分离过程中采用２种或２种以上方法相结合及优势互补的优选技术流程，如在ＥＶ－ｆｒｅｅ缓冲液中洗涤后先进行超滤、再应用密度梯度离心法或色谱分析法［３，５］。另外，为了获得更好的得率和纯度，也可采用分子排阻色谱法和高分子量离心过滤，或使用中速微分超速离心法和剪切流过滤等［６］。虽然，超速离心法与蔗糖浓度梯度或蔗糖缓冲相结合的技术与方法可大大提供高度富集的干细胞外泌体［７］。但迄今为止，国内外对干细胞外泌体提取分离方法并无确定规范要求和统一标准，且仍没有能同时具备外泌体含量、纯度和生物活性都满意的最佳分离技术与方法。干细胞外泌体的提取、分离、纯化制备虽是其临床应用研究的前提和基础，在成功获得该干细胞外泌体后必须进行其相关生物特性的分析鉴定［８］。而科学和准确的干细胞外泌体分析鉴定则是其临床应用研究的关键保证。目前最低要求需要符合以下４种方式对细胞外泌体分析鉴定的结果：①干细胞外泌体形态学鉴定：外泌体通常具有完整的脂质双分子层膜包绕，微囊泡呈圆形、椭圆形、碟形、杯形等，隐约可见其内含有低电子密度物质；②干细胞的粒径及其分布检测：干细胞外泌体粒径在３０～１５０ｎｍ；③干细胞外泌体特征性蛋白的表达水平检测：如热休克蛋白（ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０）、ＧＴＰ酶（ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ２）和核内体标记蛋白（Ａｌｉｘ）以及肿瘤易感基因ＴＳＧ１０１等；④干细胞外泌体膜上特征性表面标志物分子检测：干细胞外泌体膜上特异性表达ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２等。用于分析鉴定干细胞外泌体的技术手段主要包括电子显微镜（扫描电子显微镜和透射电镜）、原子力显微镜、纳米粒子跟踪分析、流式细胞检测分析、免疫印迹试验和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ检测）［９］。干细胞外泌体被认为具有独特的蛋白质和脂质，因此其鉴定具有一定的特点。它们含有多种黏附分子，这些黏附分子在它们的细胞膜上表达，例如含有膜转运和融合蛋白（ＧＴＰａｓｅｓ、ａｎｎｅｘｉｎ和ｆｌｏｔｉｌｌｉｎ）、跨膜四蛋白（ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１和ＣＤ８２）、参与多泡体生物过程的蛋白（Ａｌｉｘ和ＴＳＧ１０１），以及与脂质相关的蛋白和磷脂酶，可通过流式细胞分析、免疫印迹试验和ＥＬＩＳＡ检测。２ 干细胞外泌体在肿瘤中的临床研究 干细胞、免疫细胞和肿瘤细胞旁分泌的外泌体在临床肿瘤研究中同样表现出某些相似的共性，却也表现出不同的个性和特点及干细胞外泌体与肿瘤关系的双重性。大多数免疫细胞旁分泌的外泌体通常可以通过激活或杀伤肿瘤细胞而发挥以抑制肿瘤生长为目的的主导作用；而肿瘤细胞旁分泌的外泌体则通常表现为抑制免疫激活、促进肿瘤恶性生物学行为的发展进程。肿瘤细胞外泌体在免疫调节作用方面通常表现为免疫促进或抑制作用，如肿瘤细胞旁分泌的外泌体通过抑制效应Ｔ细胞激活、抑制效应Ｔ细胞增殖、诱导Ｔ细胞凋亡、抑制效应Ｔ细胞杀伤功能、以及对ＮＫ细胞、单核细胞—巨噬细胞、树突状细胞的抑制和骨髓来源的免疫抑制细胞、调节性Ｔ细胞等，但在某些条件下也可使肿瘤细胞旁分泌外泌体的作用趋势主要表现为抗肿瘤免疫。干细胞外泌体在临床肿瘤中的研究，特别是在临床肿瘤治疗中，主要体现在它们充当肿瘤治疗药物的载体杀伤肿瘤细胞和通过改变或调整肿瘤细胞内微环境条件影响肿瘤细胞生存等发挥抗肿瘤的生物学作用。当然，也不排除干细胞外泌体与肿瘤关系的双重性，即具有抗肿瘤效应、也存在促进或—６１１—
神经干细胞的基础和临床研究
・３７４・
文章编号：１６７１—２８９７（２００２）０１—３７４—０２ 中华神经外科疾病研究杂志（Ｃｈｉｎ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｄｉｓ Ｒｅｓ）２００２；１（４
神经干细胞的基础和临床研究
杨忠旭 栾国明 （首都医科大学北京天坛医院神经外科，北京１０００５０）
关键词神经干细胞；研究
中国图书资料分类号Ｒ ３２９．２ 文献标识码Ａ
由于固有观念的束缚，直到最近神经干细胞（ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ
ｃｅｌｌｓ）的概念才开始应用于成熟的中枢神经系统研究中。
一、基础研究
１．神经干细胞的定义和特性：１９８９年，Ａｎｄｅｒｓｏｎ参照造
血系统干细胞的特性，提出了神经干细胞的概念：一类具有自
我更新能力、高增殖潜能以及多分化潜能的细胞。关于神经
干细胞的概念，目前尚无统一的定义。有人称之为神经祖细
胞（ｎｅｕｒａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌ１）或神经前体细胞（ｎｅｕｒａｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ
ｃｅｌ１）。但这３个概念还是存在一定差异的，神经干细胞是指
具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力，能
自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。祖细胞是相对
于干细胞而言，仅具有单潜能或双潜能分化能力或其干细胞
样特性只能维持较短的时间。而前体细胞则是一个不太严格
的术语，是指在发育进程中较另一种细胞处于更早阶段的细
胞，可统称干细胞和祖细胞。
自我更新是神经干细胞的一个基本属性，多分化潜能是
神经干细胞的另一基本属性。通常人们把不对称分裂看作是
干细胞的一个特性，但在神经干细胞则是例外。神经干细胞
的分裂，也有对称分裂。在对称分裂的情况下产生的两个子
代细胞可以均是干细胞，也可以均是祖细胞；而在不对称分裂
的情况下，则产生一个干细胞和一个祖细胞，这样既能维持干
细胞的自我更新又能不断产生祖细胞以补充分化的祖细胞。
对称分裂方式便于一些因子调控干细胞和祖细胞的相对比
例，而不对称分裂中干细胞池则保持相对稳定。此外，在神经
干细胞的旁分泌和自分泌功能——基础与临床研究的新视角
・１９６・
・综 述・ 生理科学进展２００８年第３９卷第３期
干细胞的旁分泌和自分泌功能
——基础与临床研究的新视角
刘秀华唐朝枢 （解放军总医院病理生理学研究室，北京１００８５３；北京大学医学部生理学与病理生理学系，北京１０００８３）
摘要 近年发现干细胞具有很强的旁／自分泌功能，本文综述干细胞所分泌的生长因子、细胞因子、 调节肽、细胞信号分子等生物活性因子，以及缺血、缺氧、生长因子、性别和其它激素对干细胞分泌
功能的调节；并分析干细胞分泌功能在血管生成、心脏、肝脏、肾脏和神经系统保护中的作用，认为 干细胞可通过其分泌功能影响靶器官结构、功能状态及其病理状态下的修复，是干细胞治疗改善靶
器官功能、抗凋亡、抗炎等作用的机制之一。 关键词 干细胞；旁分泌；自分泌；细胞保护
中图分类号Ｒ３６３．２
’Ｉｌｈｅ Ｐａｒａｃｒｉｎｅ ａｎｄ Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｏｆ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｆｒｏｎｔｉｅｒ ｏｆ Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＬＩＵ
Ｘｉｕ－Ｈｕａ，ＴＡＮＧ Ｃｈａｏ－Ｓｈｕ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ
１００８５３，Ｃｈｉｎａ；Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｔ ｉｓ ｆ０ｕｎｄ ｒｅｃｅｎｔｌｙ ｔｈａｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｐｏｓｓｅｓｓ ｐａｒａｃｒｉｎｅ／ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓ ｒｅｖｉｅｗ ｄｉｓｃｕｓｓｅｓ
ｔｈｅ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ，ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｅｐ・ ｔｉｄｅｓ，ｓｕｍｍａｒｉｚｅｓ ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ｓｕｃｈ ａｓ ｉｓｃｈｅｍｉａ（ｈｙｐｏｘｉａ）， ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ，ｓｅｘ，ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｈｏｒｍｏｎｅｓ．Ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｐａｒａｃｒｉｎｅ／ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ
间充质干细胞治疗椎间盘退变基础和应用研究
国际骨科学杂志２００８年７月 第２９卷第４期Ｉｎｔ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ，Ｊｕｌｙ ２５，２ ， ． ！， ．
间充质干细胞治疗椎间盘退变基础和应用研究
吴天亮徐宏光
摘要通过生物学治疗逆转椎间盘退变是目前研究的热点。近年对应用间充质干细胞（ＭＳＣ）治疗 椎间盘退变进行了众多研究，体内外研究结果均表明ＭＳＣ促进退变椎间盘内细胞再生，使髓核细胞分泌 的蛋白聚糖、Ⅱ型胶原等细胞外基质表达增加。如何调节ＭＳＣ向髓核细胞或类软骨细胞分化，目前认为 低氧、生长因子刺激和三维培养是其主要影响因素。ＭＳＣ治疗椎间盘退变的研究还不成熟，真正应用于 临床治疗仍需更深入的研究。 关键词 间充质干细胞；椎间盘退变；髓核细胞；类软骨细胞
椎间盘退变会导致脊柱节段性不稳，是颈腰椎问盘突
出、退变性椎管狭窄、腰椎滑脱和椎间盘源性腰痛等一系列
疾病的主要病因。单纯切除突出的椎间盘组织仅解除了压 迫症状，远期会导致椎间高度丢失，加速椎间盘退变；通过
前路或后路固定和融合病变节段会加重邻近节段椎问盘退 变的发生，同时存在融合失败、假关节形成及内置物失败等
并发症。因此，利用生物学手段直接或间接地注射细胞因
子、基因治疗、髓核移植等逆转椎间盘退变是当前研究的重
点和热点。随着组织工程学的快速发展，对问充质干细胞 （ＭＳＣ）在骨科的应用有了更深入的研究，但目前多应用于
关节软骨的修复 。本文就ＭＳＣ应用于干预和治疗椎问
盘退变的研究进展作一综述。 １椎间盘基本结构及其退变机制
椎间盘由髓核、纤维环和软骨终板构成，椎间盘细胞
包括脊索细胞、类软骨细胞和成纤维细胞。脊柱起源于
胚胎时期的中央脊索和间质，脊索形成椎问盘髓核，而周 围的间质形成纤维环。脊索细胞存在于幼儿的髓核内，
约１０岁后逐渐由类软骨细胞所替代，此时细胞会产生更
多的胶原纤维以增强脊柱稳定性。椎间盘细胞存在于椎 问盘三维环境中，由细胞外基质包绕，细胞外基质主要由
蛋白多糖家族（蛋白聚糖是最主要的成分）和胶原构成，