尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒去纤维蛋白酶(去纤酶)对家犬体内抗凝血作用
尖吻蝮(Deinagkistrodon-acutus)蛇毒中抑制回肠平滑肌收缩的蛋白组分(DA-1)
尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒中抑制回肠平滑肌收缩的蛋白组分(DA-1)的分离纯化及其生化与药理研究尖吻蝮蛇(Deinagkistrodon acutus)又称五步蛇,为蝰蛇科蝮亚科毒蛇,是我国十大毒蛇之一,主要分布于我国南方地区。
被该蛇咬伤的患者,常出现疼痛、出血、肿胀、肌肉坏死等血循毒症状,也有少数患者出现眼睑下垂、呼吸困难等神经毒症状,这暗示着尖吻蝮蛇毒中可能含有神经毒素,但是,有关该蛇的这类神经毒性的毒理学活性、结构与功能的关系以及作用机理等尚不清楚。
到目前为止,只见锯鳞蝰(Echis carinatus)蛇毒能抑制回肠平滑肌收缩的报道。
本研究首先确定尖吻蝮蛇毒是否具有抑制回肠收缩的活性,再从粗毒中分离纯化出具有该活性的目标蛋白组分,最后鉴定该蛋白的理化性质、生物学活性及药理活性等。
通过三步柱层析法(Sephadex G-50凝胶过滤层析,DEAESepharose Fast Flow 离子交换层析和Hitrap Capto DEAE离子交换层析),从尖吻蝮蛇毒中分离纯化出一种能抑制回肠平滑肌收缩的类神经毒性蛋白。
还原性和非还原性SDS-PAGE均检测为单一泳带,显示该蛋白是由单一肽链组成,命名为DA-1。
MALDI-TOF-TOF质谱测得其相对分子量为22,947.9 Da。
肽质量指纹图谱数据表明与其匹配度最高的蛋白为蛇毒金属蛋白酶。
生化实验表明,DA-1可明显水解牛纤维蛋白原的Aα-和Bβ-链,但对γ-链无作用,且DA-1也可水解纤维蛋白单体。
其纤维蛋白原水解活性可被金属螯合剂EGTA或EDTA完全抑制、β-巯基乙醇部分抑制,而丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对水解活性无影响。
小鼠背部皮下注射DA-1发现该蛋白具有明显的出血活性。
以上这些实验结果提示DA-1为一种出血性的金属蛋白酶。
其他生化实验结果表明,该酶具有促水肿活性和磷脂酶A2(PLA2)活性,而无溶血活性。
尖吻蝮蛇毒研究进展
作用；（３）诱导 细 胞 凋 亡。 目 前 在 尖 吻 蝮 蛇 毒 中 也 发 现 有 抗 癌 成 分 。段 涛 等 从 ［２０］ 广 西 尖 吻 蝮 蛇 毒 中 分 离 出 一 细 胞 毒 素
Ｉ３－Ｈ３，对体外 培 养 的 人 肺 癌 细 胞 株 （Ａ５４９）、人 胃 癌 细 胞 株 （ＢＧＣ）和人鼻咽癌细胞株（ＫＢ）有 较 强 抑 制 和 杀 伤 作 用。 章 良等 从 ［２１］ 皖南尖吻蝮 蛇 毒 中 分 离 出 两 种 抗 癌 成 分 ＡＣＴＸ－６ 和 ＡＣＴＸ－８，对 人 肺 癌 细 胞 株 （Ａ５４９）最 敏 感，且 热 稳 定 性 较 好 。雷 丹 青 等 从 ［２２］ 尖 吻 蝮 蛇 毒 中 分 离 出 一 种 小 分 子 多 肽 Ｋ 组分，具有抑制鸡 胚 尿 囊 膜 血 管 生 成 的 作 用，有 可 能 成 为 抗 肿 瘤 血 管 增 生 的 活 性 多 肽 。李 映 新 等 研 ［２３］ 究 该 Ｋ 组 分 对 体
溶 酶 ，为 纤 溶 酶 的 临 床 应 用 提 供 了 技 术 支 持 。 周 先 丽 通 ［１８］ 过实验证明，尖吻蝮蛇毒类凝血酶和 纤 溶 酶 均 具 有 明 显 的 溶 栓作用，但是溶栓 的 强 弱 有 别，纤 溶 酶 的 直 接 作 用 强 于 类 凝
毒中分离出２个促凝血成分，并对 动 物 创 伤 性 出 血 具 有 较 好 血酶，因此类凝血酶是一缓慢溶栓 剂，使 血 管 再 通 为 渐 进 性，
［７］ 李王娜，许云 禄．蛇 毒 中 的 抗 血 栓 物 质 ［Ｊ］．海 峡 药 学，２００６，１８ （４）：１４－１６．
［８］ Ａｔｏｄａ Ｈ．Ｍｏｒｉｔａ Ｔ．Ａ ｎｏｖｅｌ ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ⅸ／ｆａｃｔｏｒ Ⅹ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｃｏａｇａｌａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｖｅｎｏｍ ｏｆ Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｆｌａｖｏｖｉｒｉｄｌｓ（ｈａｂｕ ｓｎａｋｅ）：ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ－ ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ ＢＬｏｃｈｅｍ，１９８９，１０６（５）：８０８－８１３．
蛇毒
其中m/z 23523.6质谱峰为纤溶酶的[M+H]+ 峰，m/z 11752.9和m/z 47125.1分别为纤 溶酶双电荷峰及二聚体峰。 此外，还测到该酶一系列多聚体的存在。 测定的纤溶酶的精确分子量为29485.0士 15Da。
纤溶酶分子中的6个Cys残基均以二硫键的 形式存在，按序列相似的原则，推测： 纤溶酶的二级结构中含有4%一螺旋， 39.5%的β一结构，分子内缺少天冬酰胺连 接的糖化位点。 借助序列分析的方法，推断分子内部有一 个结合锌离子的活性中心，即所谓的“催 化性”锌结合位点，它位于一螺旋上，锌 原子的丧失几乎可导致分子螺旋结构的完 全消失，进一步证明了这一点。
蛇毒纤溶酶除降解纤维蛋白原和纤维蛋白很好的底物
专一性，这一特性使蛇毒纤溶酶具有较好
的安全性。蛇毒纤溶酶的另一特性是其热
稳定性较高。
从蝮蛇蛇毒中纯化的纤溶酶，在pH4一U范
围内95℃加热20分钟，对其活性没有很大
影响闷，这种对底物的专一性和对热的稳
2.分子结构
蛇毒纤溶酶是一组分子结构非常复杂的酶 类。按酶学特性可大致分为两大类:一类为 单链的锌金属蛋白酶;另一类为单链或双链 结构的丝氨酸蛋白酶。 与血纤溶酶不同，蛇毒纤溶酶不存在无活 性的酶原形式，因此不需要活化剂的活化。 分子量自22000至58000不等。
从江浙蝮蛇蛇毒中提取的纤溶酶属于锌金 属蛋白酶，具有纤溶活性，无出血毒活性。 是一条由203个氨基酸残基组成的多肽链。 用LDI一1700激光解吸电离飞行时间质谱仪 (从激光波长337nm，脉冲宽度3ns，真空度 1.3X10-3Pa，加速电压30kV，吸引电压 9.3kV，检测器电压一4.75kV，质谱信号单 次扫描累加50次，正离子谱测定见附图。
尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究
尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究黎肇炎;雷丹青;杨斌;唐双意【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2003(020)002【摘要】目的:从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non-hemonrrhgicfibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究.方法:应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE,用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量,用皮内出血实验测定其出血活性.结果:从蝮亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶,它的相对分子质量为25 000,没有出血活性,在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白,相对活性为粗毒的3.2倍.结论:从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25 000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性,而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶.【总页数】4页(P157-160)【作者】黎肇炎;雷丹青;杨斌;唐双意【作者单位】广西医科大学蛇毒研究所,南宁,530021;广西医科大学蛇毒研究所,南宁,530021;广西医科大学,药理学教研室,南宁,530021;广西医科大学,第一附属医院药剂科,南宁,530021【正文语种】中文【中图分类】Q959.6;Q55;R996.3【相关文献】1.纤维蛋白溶解酶I的纯化及其生物活性研究 [J], 徐国良;刘忆明2.尖吻蝮蛇毒抗血小板聚集活性蛋白的纯化和性质研究 [J], 黄春洪;吴杰连;孔毅;吴梧桐3.尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶对动物凝血功能的影响 [J], 黎肇炎;唐双意;杨斌;雷丹青4.浙江尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶纯化及促凝活性 [J], 赵伟;曹宇虹;徐宏江;宋伟;付辉;张喜全;方泰惠5.植物苯丙氨酸解氨酶的研究——Ⅱ 鹰嘴豆、无壳葫芦籽苯丙氨酸解氨酶的亲和层析纯化及其部分性质研究 [J], 孟延发;杨国玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒去纤维蛋白酶(去纤酶)对家犬体内抗凝血作用
尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒去纤维蛋白酶(去纤酶)
对家犬体内抗凝血作用
张洪基;肖昌华;熊郁良;叶智章;蔡景霞;何济之
【期刊名称】《动物学研究(英文)》
【年(卷),期】1980(1)2
【摘要】分别使用5微克/公斤、25微克/公斤、100微克/公斤的剂量,对15只家犬进行了尖吻蝮蛇毒去纤维蛋白酶(简称去纤酶)抗凝血作用的研究。
去纤酶可使三组实验狗(每组5只)血浆中纤维蛋白元非常显著(P<0.01)地降低。
由于纤维蛋白元的降低而产生的抗凝血作用亦是显著的(给药后5小时所取得的血样在37℃放置24小时以上不凝)这一显著的抗凝血作用至少可以持续24小时。
未观察到自发性出血现象或其他毒付作用。
表明去纤酶具有较为安全,显著的抗凝血作用。
【总页数】8页(P163-170)
【作者】张洪基;肖昌华;熊郁良;叶智章;蔡景霞;何济之
【作者单位】中国科学院昆明动物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R28
【相关文献】
1.尖吻蝮蛇毒中类凝血酶（TLE）单一成份含量及体内去纤效应（摘要）
2.皖南尖吻蝮蛇（Agkistrodon acutus）蛇毒出血毒素Ⅲ（AaHⅢ）的荧？…
3.尖吻蝮蛇毒去纤酶及其临床应用研究
4.皖南尖吻蝮蛇（Agkistrodon acutus）蛇毒出血毒素
Ⅲ（AahⅢ）的荧光…5.尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究——Ⅲ.蛇毒凝血酶止血效应的研究
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三种蛇毒类血凝酶对患者纤维蛋白原作用的临床观察
中国现代医药杂志2019年9月第21卷第9期 MMJC，Sep 2019，Vol 21，No.951 DOI：10.3969/j.issn.1672-9463.2019.09.013三种蛇毒类血凝酶对患者纤维蛋白原作用的临床观察李雄 肖小红 吴莹 陈伟 戴小辉蛇毒类血凝酶在临床上主要用于出血性疾病的治疗，特别是毛细血管的出血，可明显缩短患者的出血时间，减少出血量[1，2]。
因其具有高效、速效、长效、方便、安全、不被凝血酶抑制剂影响等优点而成为临床医生在处理出血性疾病时的主要选择[3~5]。
但随着蛇毒类血凝酶的广泛使用，其不良反应除过敏、呼吸困难、气促、胸闷、紫绀、心悸等，致低纤维蛋白原血症的报道也越来越多[6~9]。
血浆中正常的纤维蛋白原水平为2~4g/L，当纤维蛋白原水平降低时，增加了出血的风险。
低纤维蛋白原血症的出现，导致蛇毒类血凝酶的使用不仅达不到止血的目的，反而增加了出血风险，增加了患者的经济负担，对血液资源的供给更是一种挑战。
因此我们希望找到一种评估蛇毒类血凝酶适应证的方法，减少其致低纤维蛋白原血症的副作用，提高用药安全性。
本研究对我院常用的三种蛇毒类血凝酶对患者纤维蛋白原（FIB）影响进行观察，为临床合理用药提供参考。
1 材料与方法1.1一般资料 回顾性分析2017年1月~2018年12月我院487例使用蛇毒类血凝药物的病例资料，其中男315例，女172例，年龄18~92岁，平均（57.27±15.71）岁。
纳入标准：年龄≥18岁；用药当天或前一天监测FIB水平，停药当天或停药后第1天监测FIB水平；用药当天或入院时监测肝功能；患者有出血。
共收集有效病例487例，其中白眉蛇毒血凝酶组170例、蛇毒血凝酶组222例、矛头蝮蛇血凝酶组95例。
依据蛇毒类血凝酶制剂类别分为3组（矛头蝮蛇血凝酶、白眉蛇毒血凝酶、蛇毒血凝酶），分别比较患者用药前后的纤维蛋白原水平变化。
根据患者白蛋白（ALB）水平，将白眉蛇毒血凝酶组和蛇毒血凝酶组分别分为ALB≥35g/L组和ALB<35g/L组，分别比较各组间用药前后纤维蛋白原水平的变化。
尖吻蝮蛇毒去纤酶及其临床应用研究
尖吻蝮蛇毒去纤酶及其临床应用研究
肖昌华
【期刊名称】《蛇志》
【年(卷),期】1989(001)003
【摘要】Ottyang,C.等(1967)从尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒中分离纯化得到凝血酶样成分,分子量33500,由17种263个氨基酸组成,具有体内去纤作用,但未见用于临床的报道。
杉原久义等(1978)也从尖吻蝮蛇毒中分离纯化得到了一个促凝组分,分子量52000,具有精氨酸酯酶和凝血酶活性,未见体内血液学效应及临床应用的报道。
我们从1974年起,对尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶进行7较为系统的研究,并研制成“去纤酶注射液”,于1978年首先用于临床,1981年鉴定通过。
这是我国最先研制并用于临床的蛇毒酶制剂。
它由四个凝血酶样同工酶组成,其分子量分别是33500,68000,19500,30000;它们均由17种氨基酸组成。
【总页数】3页(P5-7)
【作者】肖昌华
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.620.6
【相关文献】
1.尖吻蝮蛇毒中类凝血酶（TLE）单一成份含量及体内去纤效应（摘要） [J], 李志忠;沈居仁
2.注射用去纤酶的体内去纤及抗凝作用 [J], 宋金斗;陈善;徐超斗
3.尖吻蝮蛇毒去纤酶对大鼠实验性DIC的影响 [J], 李麟仙
4.注射用尖吻蝮蛇凝血酶Ⅱa期临床应用研究 [J], 周俊杰;黄宗海;俞金龙;厉周;周广军
5.去纤酶治疗老年人脑梗塞血纤溶指标、血液流变学变化 [J], 许妍;田名扬;朱其;龚倩;胡麦赛
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蛇毒药理作用的探索方向
蛇毒药理作用的探究方向蛇毒是从毒蛇头部毒腺分泌的有毒液体，是一种重要的天然动物毒素，其主要成分是蛋白质，具有广泛的生物学活性，现已被应用于溶栓、抗癌、止血、止痛等方面。
传统上蛇毒分为神经毒、血循毒与混合毒。
尖吻蝮是我国十大剧毒蛇之一，其毒液主要作用于血液系统，引起出血、肿胀与局部组织坏死。
已经发现尖吻蝮蛇毒多属丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和磷脂酶Ａ２家族，部分蛋白质可能属于去整合素家族。
现就尖吻蝮蛇毒生理活性及药理应用等方面的研究进展综述如下。
１凝血作用研究表明，尖吻蝮蛇毒具有较好的凝血作用，我国研制的一类新药“苏灵”已应用于临床，该药是从我国特有的尖吻蝮蛇毒中分离的一种类凝血酶。
对尖吻蝮蛇毒类凝血酶的研究最早是１９６７年的ＣｈｅｎｇＨＣ和ＯｕｙａｎｇＣ等，他们于１９７１年和１９７２年相继分离出２个类凝血酶组分，并经动物实验表明均有不同水准抗凝作用。
何丽芬等从尖吻蝮蛇毒中分离出２个促凝血成分，并对动物创伤性出血具有较好的止血作用。
唐松山等经１２年的努力从尖吻蝮蛇毒中获得了５个新的类凝血酶，并对其实行了相关的研究。
刘敏涓等对从尖吻蝮蛇毒中分离的类凝血酶的凝血机制实行分析，证实该组分虽能迅速使人血浆凝固，但因为其不能激活因子，致使所形成的血块呈胶冻样。
因为该类凝血酶在正常血管内不完全发挥作用，而只促动出血部位血小板聚集作用，所以不引起正常血管内血栓，是一种安全有效的新型止血药，能够应用于临床。
２抗栓作用蛇毒中具有抗栓作用的有两类蛋白质，一类是能直接溶解纤维蛋白（原）的酶，称为纤维蛋白（原）溶酶（简称纤溶酶，ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅ，ＦＬＥ）。
它除了降解纤维蛋白和纤维蛋白原外，对人体内的纤溶酶原无激活作用，无水解其他凝血因子及血小板膜，具有明显的抗血栓作用。
另一类是通过抑制凝血酶原的激活来延缓凝血过程，不具有酶的活性。
这个类酶最早是由Ａｔｏｄａ等从日本黄绿烙铁头蛇毒中纯化得到，并对该抗凝血蛋白的抗凝机制加以探讨，证实是通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ｘ在钙离子的作用下形成１∶１的复合物而达到延长凝血时间的；后来，Ｌｕ等从皖南尖吻蝮（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中分离出一种抗凝血因子ＡＣＦＩ。
尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究 Ⅱ.酶学与血液学活性的研究
尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究Ⅱ.酶学与血液学活性的研究肖昌华;何丽芬;唐绍宗;杨筠茹【期刊名称】《动物学研究》【年(卷),期】1989(10)3【摘要】对四个凝血酶样成分(TLP)的酶学性质的比较研究表明,它们都具有凝结(血)活性和精氨酸酯酶活性。
其凝结活力TLP_4>TLP_3>TLP_1>TLP_2,Ca^(++)有激活作用,但不被肝素、EDTA所抑制;精氨酸酯酶活力以TLP_1、TLP_2较高,Ca^(++)、EDTA无明显的激活或抑制作用;TLP_1对热比较稳定,TLP_4对于酸碱变化比较稳定。
经动物体内试验表明,TLP_1、TLP_2具有较强的去纤抗凝作用,TLP_3、TLP_4不显示抗凝作用,而显示出较强的促凝血作用。
结果表明,尖吻蝮蛇毒与美洲矛头蝮蛇毒一样,同时含有去纤酶(Defibrase)和蛇毒凝血酶(Hemocoagulase)。
这一结果对该蛇毒的研究与应用是很有意义的。
【总页数】6页(P213-218)【关键词】尖吻蝮蛇;蛇毒凝血酶;凝血酶样酶【作者】肖昌华;何丽芬;唐绍宗;杨筠茹【作者单位】中国科学院昆明动物研究所【正文语种】中文【中图分类】R996.3【相关文献】1.尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究Ⅲ.蛇毒凝血酶止血效应的研究 [J], 何丽芬;肖昌华;董馥明2.尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究 II.酶学与血液学活性的研究 [J], 肖昌华;何丽芬3.尖吻蝮（Agkistrodon acutus）蛇毒凝血酶样酶的分离,纯化... [J], 刘广芬;王晴川4.湖南产尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒类凝血酶组份的分离纯化及性质 [J], 张贵平;管锦霞5.尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究——Ⅲ.蛇毒凝血酶止血效应的研究 [J], 何丽芬;肖昌华;董馥明;杨连玺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2种国产蝮蛇毒降纤酶的降纤作用比较
2种国产蝮蛇毒降纤酶的降纤作用比较
王爱平;郭洁
【期刊名称】《蛇志》
【年(卷),期】1999(011)004
【摘要】目的：比较尖吻蝮蛇毒降纤酶及白眉蝮蛇毒降纤酶降凝血因子Ｉ的作用。
方法：选用１个厂家生产的以尖吻蝮蛇毒为原料的降纤酶及２个厂家生产的以白眉蝮蛇毒为原料的降纤酶分别治疗１７例、４０例、３１例急性脑梗死。
用降纤酶１０ｕ加入０．９％生理盐水２５０ｍｌ中，静脉滴注，１ｈ滴完，每天１次，共３天，每次用药前用凝固法测定凝血因子Ｉ。
结果：２种白眉蝮蛇毒降纤酶降纤作用不明显，尖吻蝮蛇毒降纤作用明显且迅速。
用药前Ｆｇ
【总页数】2页(P49-50)
【作者】王爱平;郭洁
【作者单位】天津市第一中心医院神经内科,天津;天津市第一中心医院神经内科,天津
【正文语种】中文
【中图分类】R977.3
【相关文献】
1.降纤酶对高纤维蛋白原患者降纤作用的动态观察 [J], 石春国;王晓春
2.乌梢蛇血清对白眉蝮等3种蛇毒解毒作用初探 [J], 胡恺;万新华;刘岱岳
3.抗蛇毒IgY对尖吻蝮（Deinagkistrodon acutus）蛇毒主要活性的中和作用研
究 [J], 刘锦花;李恒;和七一;张迎锋;陈典成;罗聪;余晓东
4.眼镜蛇科和蝮亚科混合蛇毒中各蛇毒含量的检测 [J], 杨丽娟;王晴川;刘广芬
5.尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒凝血酶样成分的研究——Ⅲ.蛇毒凝血酶止血效应的研究 [J], 何丽芬;肖昌华;董馥明;杨连玺
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