马传染性贫血防治技术规范

马传染性贫血防治
技术规范
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三、马传染性贫血防治技术规范
马传染性贫血(Equine Infectious Anemia, EIA,简称马传贫),是由反转录病毒科慢病毒属马传贫病毒引起的马属动物传染病。

中国将其列为二类动物疫病。

为预防、控制和消灭马传贫,依据<中华人民共和国动物防疫法>及有关的法律法规,制定本规范。

1 适用范围
本规范规定了马传贫的诊断、疫情报告、疫情处理、防治措施、控制和消灭标准。

本规范适用于中华人民共和国境内从事马属动物饲养、经营,马属动物产品加工、经营,及从事动物防疫活动的单位和个人。

2 诊断
2.1 流行特点
本病只感染马属动物,其中,马最易感,骡、驴次之,且无品种、性别、年龄的差异。

病马和带毒马是主要的传染源。

主要经过虻、蚊、刺蝇及蠓等吸血昆虫的叮咬而传染,也可经过病毒污染的器械等传播。

多呈地方性流行或散发,以7~9月份发生较多。

在流行初期多呈急性型经过,致死率较高,以后呈亚急性或慢性经过。

2.2 临床特征
本病潜伏期长短不一,一般为20~40天,最长可达90天。

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根据临床特征,常分为急性、亚急性、慢性和隐性四种类型。

急性型高热稽留。

发热初期,可视黏膜潮红,轻度黄染;随病程发展逐渐变为黄白至苍白;在舌底、口腔、鼻腔、阴道黏膜及眼结膜等处,常见鲜红色至暗红色出血点(斑)等。

亚急性型呈间歇热。

一般发热39℃以上,持续3~5天退热至常温,经3~15天间歇期又复发。

有的患病马属动物出现温差倒转现象。

慢性型不规则发热,但发热时间短。

病程可达数月或数年。

隐性型无可见临床症状,体内长期带毒。

2.3 病理变化
2.3.1 剖检变化
急性型主要表现败血性变化,可视黏膜、浆膜出现出血点(斑),特别以舌下、齿龈、鼻腔、阴道黏膜、眼结膜、回肠、盲肠和大结肠的浆膜、黏膜以及心内外膜尤为明显。

肝、脾肿大,肝切面呈现特征性槟榔状花纹。

肾显著增大,实质浊肿,呈灰黄色,皮质有出血点。

心肌脆弱,呈灰白色煮肉样,并有出血点。

全身淋巴结肿大,切面多汁,并常有出血。

亚急性和慢性型主要表现贫血、黄染和细胞增生性反应。

脾中(轻)度肿大,坚实,表面粗糙不平,呈淡红色;有的脾萎缩,切面小梁及滤泡明显;淋巴小结增生,切面有灰白色粟粒状突起。

不同程度的
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肝肿大,呈土黄或棕红色,质地较硬,切面呈豆蔻状花纹(豆蔻肝);管状骨有明显的红髓增生灶。

2.3.2 病理组织学变化
主要表现为肝、脾、淋巴结和骨髓等组织器官内的网状内皮细胞明显肿胀和增生。

急性病例主要为组织细胞增生,亚急性及慢性病例则为淋巴细胞增生,在增生的组织细胞内,常有吞噬的铁血黄素。

2.4 实验室诊断
2.4.1 马传贫琼脂扩散试验(AGID)(见附件)。

2.4.2 马传贫酶联免疫吸附试验(ELISA)(见附件)。

2.4.3 马传贫病原分离鉴定(见附件)。

2.4.4 结果判定
具备马传贫流行特点、临床症状、病理变化,可做出初步诊断;
2.4.1或2.4.2或2.4.3结果阳性,即可确诊。

3 疫情报告
3.1 任何单位和个人发现疑似疫情,应当及时向当地动物防疫监督机构报告。

3.2 动物防疫监督机构接到疫情报告并确认后,按<动物疫情报告管理办法>及有关规定及时上报。

4 疫情处理
4.1 发现疑似马传贫病马属动物后,畜主应立即隔离疑似患病马
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属动物,限制其移动,并立即向当地动物防疫监督机构报告。

动物防疫监督机构接到报告后,应及时派员到现场诊断,包括流行病学调查、临床症状检查、病理解剖检查、采集病料、实验室诊断等,并根据诊断结果采取相应防治措施。

4.2 在马属动物饲养地,确诊为马传贫病畜后,当地县级以上人民政府畜牧兽医行政管理部门应当划定疫点、疫区、受威胁区;县级以上地方人民政府根据需要组织有关部门和单位采取隔离、扑杀、销毁、消毒、限制易感动物和动物产品及有关物品出入等控制、扑灭措施。

若呈暴发流行时,由当地畜牧兽医行政管理部门,及时报请同级人民政府决定对疫区实行封锁,逐级上报国务院畜牧兽医行政管理部门。

县级以上人民政府根据需要组织有关部门和单位采取隔离、扑杀等强制性控制和扑灭措施,并迅速通报毗邻地区。

4.2.1 划定疫点、疫区、受威胁区
疫点指患病马属动物所在的地点,一般是指患病马属动物所在的养殖场(户);散养时,是指患病马属动物所在的自然村(屯);或其它有关屠宰、经营单位。

疫区疫点外延3公里范围内的区域,包括病畜发病前3个月经常活动,可能污染的地区。

疫区划分时注意考虑疫区的饲养环境和天然屏障(如河流、山脉等)。

受威胁区是指疫区外延5公里范围内的区域。

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《高致病性禽流感防治技术规范》等14个动物疫病防治技术规范(详见附件):[修改版]

《高致病性禽流感防治技术规范》等14个动物疫病防治技术规范(详见附件):[修改版]

第一篇:《高致病性禽流感防治技术规范》等14个动物疫病防治技术规范(详见附件):《高致病性禽流感防治技术规范》等14个动物疫病防治技术规范(详见附件):一、高致病性禽流感防治技术规范二、口蹄疫防治技术规范三、马传染性贫血防治技术规范四、马鼻疽防治技术规范五、布鲁氏菌病防治技术规范六、牛结核病防治技术规范七、猪伪狂犬病防治技术规范八、猪瘟防治技术规范九、新城疫防治技术规范十、传染性法氏囊病防治技术规范十一、马立克氏病防治技术规范十二、绵羊痘防治技术规范十三、炭疽防治技术规范十四、J亚群禽白血病防治技术规范废止的动物疫病防治技术规范名单1.高致病性禽流感防治技术规范(农办牧[2002]74号)2.马传染性贫血防治技术规范(农办牧[2002]74号)3.马鼻疽防治技术规范(农办牧[2002]74号)4.布鲁氏菌病防治技术规范(农办牧[2002]74号)5.牛结核病防治技术规范(农办牧[2002]74号)6.猪伪狂犬病防治技术规范(农办牧[2002]74号)7.牲畜口蹄疫疫情防治技术规范(试行)(农牧发[2004]20号)8.亚洲I型口蹄疫防治技术方案(农医发[2005]13号)第二篇:23.高致病性禽流感防治技术规范高致病性禽流感防治技术规范高致病性禽流感(Highly Pathogenic Avian Influenza, HPAI)是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的以禽类为主的烈性传染病。

世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物传染病,我国将其列为一类动物疫病。

为预防、控制和扑灭高致病性禽流感,依据《中华人民共和国动物防疫法》、《重大动物疫情应急条例》、《国家突发重大动物疫情应急预案》及有关的法律法规制定本规范。

1 适用范围本规范规定了高致病性禽流感的疫情确认、疫情处置、疫情监测、免疫、检疫监督的操作程序、技术标准及保障措施。

本规范适用于中华人民共和国境内一切与高致病性禽流感防治活动有关的单位和个人。

马传染性贫血、马鼻疽监测计划

马传染性贫血、马鼻疽监测计划

马传染性贫血、马鼻疽监测计划
(一)监测目的
证明本市马传染性贫血、马鼻疽的无疫状态。

(二)监测对象
马、驴、骡等马属动物。

包括养马场、马术队、马术俱乐部、公园等场所马匹,以及驴、骡等马属动物。

(三)监测时间
每年5月、11月,开展两次集中采样检测。

(四)监测分工和数量
市、区动物疫病预防控制机构各自负责对辖区内所有马匹进行监测。

(五)监测方法
1. 马传染性贫血,用琼脂凝胶免疫扩散试验方法进行检测。

2. 马鼻疽,用变态反应试验(鼻疽菌素点眼法)进行检测。

(六)判定标准
按照《马传染性贫血防治技术规范》和《马鼻疽防治技术规范》确定。

马传染性贫血的诊断和防治措施

马传染性贫血的诊断和防治措施

畜牧兽医科技信息2020年第06期马传染性贫血虽然对人类健康没有威胁,但其对马类动物的威胁性很大,尤其是急性马传染性贫血,致死率很高。

马传染性贫血的传染途径很多,昆虫叮咬所导致的皮肤感染、病马的排泄物等、使用带有马传染性贫血病毒的针头或其他设备都会导致马传染性贫血的传播。

其中,昆虫叮咬所导致的皮肤感染是最主要的传播方式。

马传染性贫血最易暴发在夏秋季节,所以,在这两个季节里要格外重视疾病的预防。

1临床症状马传染性贫血对马类动物的威胁性较大,马、骡、驴患上马传染性贫血的可能性较大,该病分为急性、亚急性、慢性以及隐性,急性马传染性贫血可以转变为后三者,而慢性马传染性贫血也可以转变成亚急性甚至是急性。

这四种形式的马传染性贫血的潜伏周期以及发病症状都不相同。

其中,急性马传染性贫血的潜伏期最短,基本在30d 内就会发病,症状多表现为体温突然升高;在发病期间,马还是会进食,但消瘦很快;易出汗且体质很虚,眼结膜充血、黄染,随着病情的加重,眼结膜的颜色会变成黄白或苍白胸、腹下浮肿;血液中的白细胞会减少,血液稀薄,血沉快,致死率较高。

亚急性和慢性马传染性贫血的潜伏周期会渐渐变长,发病症状也会有所减轻,但亚急性和慢性马传染性贫血都常见于马传染性贫血暴发比较久的区域。

而隐性马传染性贫血可以潜伏很长时间,而且也没有任何临床症状,隐形马传染性贫血常见于驴的身上。

2诊断要点马传染性贫血分为急性、亚急性、慢性和隐性,其中,急性马传染性贫血暴发于初期,而初期的死亡率是最高的,初期过后就会逐渐转变成亚急性或慢性马传染性贫血,隐性马传染性贫血多见于驴的身上,马和骡患有隐性马传染性贫血的不多。

已经对急性马传染性贫血的临床症状进行了分析。

本文将对亚急性以及慢性马传染性贫血的症状进行分析。

亚急性和慢性马传染性贫血的症状表现与急性马传染性贫血的症状有些相似,都是马消瘦、贫血,脾和肝肿大,同时粘膜处还会出现少量的出血点,心脏的颜色出现变化并呈现煮熟状。

内蒙古兴安盟马传染性贫血的综合防控措施

内蒙古兴安盟马传染性贫血的综合防控措施

内蒙古兴安盟马传染性贫血的综合防控措施马彦博/内蒙古兴安盟农牧业科学研究所 137400 王巧玲 王强/内蒙古科右前旗动物疫病预防控制中心 137400摘 要:兴安盟从1960年开始发生马传染性贫血,尤其是1971年至1982年为疫情快速流行阶段,给兴安盟马属动物养殖造成了巨大损失;1983年至1991年为疫情稳定控制阶段,1991年最后一起疫情,之后经长期临床观察和开展血清学检查,20多年没有检测阳性畜。

历年来,兴安盟马传染性贫血防控工作在国家和自治区业务主管部门的大力支持下,经兴安盟几代兽医人员的艰辛努力取得了显著成效。

2016年8月26日,兴安盟代表内蒙古自治区接受农业部马传染性贫血考核组的检查验收,经考核认定兴安盟已达到马传染性贫血消灭标准,为内蒙古自治区争光。

2016年9月20日农业部发文,经考核认定内蒙古自治区已达到马传染性贫血消灭标准。

关键词:马传贫;综合防控1 背景介绍兴安盟位于内蒙古自治区东北部,地处大兴安岭向松嫩平原过渡带,东北、东南分别与黑龙江、吉林两省毗邻;南部、西部、北部分别与通辽市、锡林郭勒盟和呼伦贝尔市相连;西北部与蒙古国接壤,边境线长126公里。

总面积近6万平方公里,总人口164万,少数民族人口占49%,其中蒙古族人口占44%,是全国蒙古族人口比例较高地区。

1980年兴安盟恢复盟建制,现辖两市(乌兰浩特市、阿尔山市)三旗(科尔沁右翼前旗、科尔沁右翼中旗、扎赉特旗)一县(突泉县),其中,阿尔山市和科右前旗为边境旗市,乌兰浩特市为盟委行署所在地。

兴安盟畜牧业发展条件较好,马属动物养殖数量较多。

上世纪60年代至90年代初,马属动物仍是农村牧区主要役用和交通工具之一。

此后,随着农业机械化水平和现代交通工具普及程度的不断提高,马属动物的役用和交通工具的价值逐渐降低,主要转变为肉用、役用及旅游观赏价值,马属动物养殖数量也随之减少,如1960年兴安盟马属动物养殖数量为6.1万匹,到1990年达最高峰,养殖数量为34万匹。

大理州消灭马传染性贫血病技术方案

大理州消灭马传染性贫血病技术方案

大理州消灭马传染性贫血病技术方案根据《大理州畜牧兽医局关于印发大理州消灭马传染性贫血病实施方案的通知》和《云南省动物疫病预防控制中心关于下发云南省消灭马染性贫血技术方案的通知文件》(云疫控(函)[2014]22号文件精神,为确保大理州在2017年前顺利通过云南省消灭马传贫考核验收,特制定本技术方案。

一、工作任务(一)制定消灭马传贫实施技术方案各县(市)要结合本地实际,按照国家和省州消灭马传贫考核验收的相关要求,认真制定本县(市)消灭马传贫工作技术方案。

(二)流行病学调查各县(市)于2014年11月底前负责完成马属动物普查登记工作,建立到户养殖档案,档案记录内容要包含畜主、详细地址、联系电话、饲养的马属动物存栏数量、年龄、外观特征、用途、来源、去向等内容。

尽量详细便于联系和调查,以后每年采样前适时核实更新养殖档案,并要求以乡镇为单位制作电子档案,每年将辖区内马属动物实际存栏及抽样数、抽样百分率等情况以乡镇为单位报送州动物疫病预防控制中心备案。

(三)监测各县市务必按时按质按量完成州下达的年度马属动物血清样品采集抽样计划任务,每年各县市均按马属动物存栏量的2%抽样检测,抽样数不少于100匹,若存栏量不到100匹的则全部采集。

采样一定要有代表性,必须覆盖所有饲养马属动物的乡镇,抽样数量以实际存栏数按比例确定。

州中心对各县(市)送检的马传贫血清样品严格按照农业部《马传染性贫血防治技术规范》(农办牧[2002]74号)上的标准方法—琼脂扩散试验(AGID)进行检测,如果检出阳性马属动物,阳性的县(市)除按规定扑杀处理阳性马属动物外,应对疫区内的所有马属动物进行临床检查并采集血清送州中心检测,每隔3个月检查一次,直至连续2次血清学检测全部阴性为止。

(四)检疫监管动物卫生监督部门要加强马属动物的调运监管,异地调入的马属动物,必须来自非疫区。

所有从外地购入的马属动物,必须严格报批程序,并进行实验室检测,阴性的个体方可调入,调入到达目的地后还需进行至少30天的隔离饲养,并经实验室复检,阴性方可投入生产或混群饲养.调出马属动物的单位和个人,应按规定报检,经当地动物防疫监督机构进行检疫(包括血清学检测),合格后方可调出.马属动物需凭当地动物防疫监督机构出具的检疫证明运输。

军马传染性贫血病的防制概况

军马传染性贫血病的防制概况

血、 水肿、 黄疽和消瘦症状, 仅通过实验室琼脂扩 散沉淀试验可以进行阳性判定; ②马传贫的消化道 传播途径。 马传染性贫血病毒存在于病马的血液和
脏器 中,随分泌物和排泄物 ( 如乳、粪、尿、 精液、
眼分泌物、 鼻汁、 唾液血液等) 排出体外而散播传
染。由于长期无症状的马仍然带毒, 所以这些马往 往成为马群中不受注意但却极其危险的传染源 , 马
且使用过马的传贫疫苗 , 但由于传贫病毒的变异性 特点, 使用疫苗后的保护缺乏特异性。 此外, 鉴于 国内生产的疫苗是传贫弱毒疫苗, 且保护率不高, 接种马匹后其产生的抗体对于实验室运用琼脂扩散 实验进行传贫检测具有干扰性。目 , 前 我国许多单 位已经停止了马传贫弱毒疫苗的生产和使用。 国际 兽医局( I ) O E 推荐的动物疫病诊断方法和生物制品
传贫血清学检查; 来自马传贫疫区的, 必须隔离观 察三个月以上, 并做三次琼脂扩散沉淀试验检查,
每次间隔一个月,阴性方可接收; ④外 出执行任务 和运输的军马, 由团以上军马管理部门指定检疫人 员搞好疫情调查并审查非疫 区证明( 科级兽医部门 在一个月内签发的) 和血清学检疫证明或预防注射 证明( 团以上兽医部门在一个月内签发的检疫证明、 一年内的注射证 明) 发现可疑症状时, 即进行 , 立 复检或抽检 , 合格者实施放行 ; ⑤发现疑似病马 时,由团以上主管部 门组织力咬皮肤而传 播, 也可经消化道感染, 当健马采食被病马血液、
汗液、尿液和脏器污染的草料时, 也可发生感染 ; ③ 发生的季节性不明显。以前多认为由于吸血昆 虫叮咬进行病毒传播而多发生于夏秋, 现在研究发 现全年均可发生马传贫, 尤其是公共草场进行马匹 饲喂。 由于长期无症状的马仍然带毒, 所以这些马 往往成为马群中不受注意但却极为危险的传染源。 多年来建立和形成的积极的防制措施有效地控 制了马传染性贫血病对部队军马的威胁 , 使军马健 康得到保障, 对于提高部队军用动物战斗力奠定了

马传染性贫血


马传染性贫血
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病原学
➢ 马传染性贫血病毒(EIAV)为RNA病毒, 属于反 转录病毒科慢病毒属。病毒粒子呈圆形, 有囊膜, 以出芽方式成熟和释放。
➢ 病毒有群特异性抗原, 用补体结合反应和琼脂扩散 反应能够检出, 主要用于本病诊疗。另还有型特异 性抗原, 是各型毒株间不一样抗原, 存在于病毒粒 子表面, 可用病毒-血清中和试验检出, 主要用于病 毒型判别。本病最少有14个型。
马传染性贫血
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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临床症状
➢临床特征以发烧(稽留热或间歇热)为主,并 有贫血、出血、黄疸、心机能紊乱、浮肿 和消瘦等症状。
➢血相改变: 红细胞显著降低,血红蛋白降低, 血沉加速。白细胞降低,丙种球蛋白增高, 外周血液中出现吞铁细胞。在发烧期,嗜 酸粒细胞降低或消失,退热后,淋巴细胞 增多。
➢依据临诊表现,可分为急性、亚急性、慢 性和隐性四种病型。
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马传染性贫血
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➢ 马传贫病毒与艾滋病病毒主要遗传信息基因结构 完全相同, 所以, 只要找到马传贫病毒基因中有毒 部分, 就能够确定HIV中带毒基因位置;假如将 HIV这部分基因减掉后其毒性也随之消失话, 艾滋 病致人死地谜底就将被揭开。所以, 首当其冲是要 找到马传贫病毒中这段关键致病基因。此时, 保留 了20年马传贫疫苗几百代传代样本就派上了大用 场——各代病毒毒力是怎样减下来, 免疫原性是 怎样提上去, 这些信息对于艾滋病疫苗研制有着主 要指导作用。
➢ 病毒只在马属动物白细胞及驴胎骨髓、肺、脾、 皮肤、胞腺等细胞培养时才可复制。用马属动物 以外其它动物人工感染和进行细胞培养均未获成 功。
马传染性贫血

马传染性贫血综合防治措施


二类 动物 疫病 。广 西壮 族 自治 区来 宾 市经过 四十多 拱、 高桂 、 合群、 洛桥 了、 那沙等村屯。1 9 年采集 97
3个 4匹 结 年 的艰辛 努力 , 面 落 实监 测 、 疫 、 全 检 消毒 等 综 合 措 武 宣县境 内 1 村 屯 的 5 马 血 清送 检 , 果 全
n mi, I 是 由反 转 录病 毒 科 慢 病毒 属 马 传 贫 病 进种 马 , 栏 近 10 0匹 , e aE A) 存 0 整个 马场 2 纪 7 年 代 O世 0
毒 引起 的马 属 传 染 病 , 以反 复 发 热 、 血 、 贫 出血 、 黄 未见 有马 传 贫 发 生 。 17 该 场 改 制 为 现 在 的 武 99年 疸、 心脏 衰 弱 、 浮肿 、 消瘦 等 为 特征 。马 匹一 旦 感染 宣 县 种 畜场 , 再 饲 养 马 匹 。从 6 代 到 8 代 不 0年 O年 马传贫 病毒 血液 中将 终生 带 毒 , 且 可 传 染 给其 它 中期 , 并 武宣 县 农 村 几 乎 没 有 马 匹存 在 。8 0年 代 末 , 马 匹 。在 自然界 , 多 数 传染 是 由 于吸 血 马蝇 吸入 在 一些 边 远 的 山 区才 开 始 有 极 少 数 人 养 马 , 至 大 截
可疑 , 经兽 医大 学 的专 家 教 授 经 临床 症 状 、 理 变 器械 等进 行消 毒处 理 , 马体 、 病 对 环境 及 场地进 行 经常 化、 补体 结合 反应 等综 合诊 断 , 诊 为马传 贫 。立 即 性 的消除 蚊蝇工 作 ; 确 同时 , 隔两个 月对 疫 区存 栏 马 每 采取封 锁 、 隔离 、 扑灭病 马 、 严格 消毒 等措施 , 情得 进 行检疫 , 出的病 马或 疑似病 马 , 疫 检 均进 行无 害化处

马传染性贫血的流行、诊断和防治措施

马传染性贫血的流行、诊断和防治措施作者:赵建华,丁明霞来源:《现代畜牧科技》 2017年第5期摘要:马传染性贫血(简称马传贫),是由马传染性贫血病毒引起的一种慢性传染病。

主要表现有间歇热、贫血、出血、黄疸、心脏衰弱、浮肿、消瘦等临床症状,马、骡、驴易感。

该病初诊依据:吸血昆虫传播,夏秋流行,流行初期多急性,突发高温(40~41℃),仍有食欲,消瘦快,步样不稳,易出汗,眼结膜充血、黄染,黏膜有出血点,红细胞减少,血沉快,白细胞减少。

现简单介绍该病的诊断和防治方法。

关键词:马;传染性贫血;流行;诊断;预防;治疗中图分类号:S858. 21文献标识码:B文章编号:2095-9737(2017)05-0100-011 流行病学只有马属动物具有易感性,马易感性最强,骡、驴次之。

昆虫(虻、刺蝇、蚊、蠓)叮咬时可经皮肤感染。

慢性和隐性病畜能长期带毒,病马的分泌物和排泄物也是传染源。

被马传贫病毒污染的针头和医疗器械也能传播病毒,交配也能传染。

该病常呈地方性流行,在昆虫出现较多的夏秋季节(7~9月)发生较多,流行初期呈急性过程,死亡率也高,以后转为亚急性和慢性,转为慢性后能存活几年或十几年。

2 临床症状该病的潜伏期长短不一,人工感染的平均10~30天。

①急性:病程短的仅3~5天,最长不超过1月,多在流行初期出现。

病马体温突然升高至40~41℃甚至以上,呈稽留热。

心跳60~80次/min,呼吸也增数;虽出现高热也仍有食欲,消瘦很快,体力很差,用肩推病马可使其退让几步,精神不振,运步时步样不稳,易出汗。

眼结膜充血、黄染,随病程发展变为黄白或苍白;有时在眼结膜、阴道黏膜、舌下可见出血点或出血斑。

血液稀薄,血沉快,15 mln即达60刻度以上,60 min可达80刻度。

血检红细胞每立方毫米常在500万以下,白细胞减少(每立方毫米4000~5000),胸、腹下浮肿。

②亚急性:常发现于流行中期,病程较长,约1~2个月,体温39~40℃,常维持几天高温以后下降,经一阶段后体温又上升,而且出现温差倒转(即上午的体温比下午高)。

琼扩试验检测马传贫试验步骤

马传染性贫血琼脂扩散试验-马传贫防治技术规范(2008)1.琼脂板的制备称取琼脂糖1.0g,加到100m1磷酸缓冲液(PBS)中,加入1%硫柳汞溶液1m1,使用电磁炉/沸水浴/电炉煮沸等方式使其充分融化。

冷至45℃~55℃时,将洁净干热灭菌直径为90mm的平皿置于平台上,每个平皿加入15~18ml,加盖待凝固后,把平皿倒置以防水分蒸发,放普通冰箱(4℃)中保存备用(保存时间不超过2周)。

2.操作(1)打孔在制好的琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔(中间1孔,周围6孔),孔径5mm,孔距3 mm (2~5mm)(如实图),将孔内的琼脂用注射针头斜面向上从右侧边缘插入,轻轻向左侧方向将琼脂挑出,勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。

(2)封底用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂板底部刚刚要溶化(手背感觉微烫手)为止,封闭孔底部,以防侧漏。

(3)加样用微量移液器或带有6~7号针头的0.25ml注射器,吸取“标准抗原”滴入中间孔,“标准阳性血清”分别加入对称的两个孔中(例如1和4孔,或者2和5),被检马血清按编号顺序分别加入另外4个外孔。

每孔均以加满不溢出为度,每加一个样品应换一个滴头,避免污染。

(4)反应(扩散)加样完毕后,静置5~10min,然后将平皿轻轻倒置放入湿盒内,置于15-30℃条件下反应,逐日观察3天并记录结果。

3.结果判定(1)判定方法将琼脂板置日光灯或侧强光下观察,若标准阳性血清(图中1和4号孔)与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线,则试验成立。

阳性:当检验用标准阳性血清孔与抗原孔之间只有一条明显致密的沉淀线时,受检血清孔与抗原孔之间形成一条沉淀线;或者阳性血清的沉淀线末端向毗邻的受检血清的抗原侧偏弯者,此种受检血清判定为阳性。

阴性:受检血清与抗原孔之间不形成沉淀线,或者标准阳性血清孔与抗原孔之间的沉淀线向毗邻的受检血清孔直伸或向受检血清孔侧偏弯者,此种受检血清为阴性。

疑似:标准阳性血清孔与抗原孔之间的沉淀线末端,似乎向毗邻受检血清孔内侧偏弯,但不易判断时,可将抗原稀释2倍、4倍、6倍、8倍进行复试,最后判定结果。

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