茜草双酯片溶出度测定的方法学验证

２００８年５月第５卷第１３期・药物研究・ＣＨＩＮＡＭＥＤＩＣＡＬＨＥＲＡＬＤ中国医药导报［作者简介］彭刚（１９７８￣），男，本科，助理工程师，从事药品的质量标准、生产工艺、指纹图谱等研究工作。

茜草双酯片属化学药品，具有抗肿瘤、调节免疫功能、促进白细胞增生等作用，如联合放化疗方案使用，可改善放化疗所致的白细胞降低，提高其疗效。

因此在临床应用中较为普遍。

对于药品质量控制来说，体外溶出度试验主要有两个作用：一是作为药品质量控制手段，二是制定药品标准。

崩解度合格的同一制剂的不同产品，药物溶出度的不同将严重影响药物的生物利用度，而且不同厂家的产品，其溶出度都可能不同，因此溶出度试验被列为质量控制的重要内容，在茜草双酯片的研究中，我们主要针对溶出度检查［１］进行了方法学系统验证工作，并将自制产品与市售产品进行了比较。

１仪器与试药ＺＲＳ－８Ｇ智能溶出仪（天津大学精密仪器厂制造）；ＵＶ２２０１紫外分析仪（日本岛津）。

茜草双酯对照品（购于中国药品生物制品检定所，批号：１１０４１８－２００４０１）；茜草双酯片（方法学研究用样品，自制，批号：２００４０４０１、２００４０４０２、２００４０４０３）；市售产品（山东方明药业股份有限公司，批号：０４０２０４）。

所用试剂均为分析纯，水为去离子水。

２溶出度测定的方法学验证２．１检测波长的选择取茜草双酯对照品，精密称定，用３０％乙醇制成浓度为５．０１μｇ／ｍｌ的溶液，在１９０￣４００ｎｍ波长范围内扫描，结果显示，在２１９、２６４和３６２ｎｍ波长处有最大吸收，参照茜草双酯片的质量标准，选择２６４ｎｍ作为溶出度测定的检测波长。

２．２干扰试验取供试品，加３０％乙醇制备浓度为５μｇ／ｍｌ溶液，作为供试品溶液；取茜草双酯对照品，精密称定，用３０％乙醇制成浓度为５．０１μｇ／ｍｌ的溶液，作为对照溶液；另按处方配制阴性制剂，加３０％乙醇制备对应浓度的溶液，作为阴性对照溶液。

在１９０￣４００ｎｍ波长范围内扫描，结果表明，阴性对照在２６４ｎｍ波长处无吸收，表明本品中辅料不干扰茜草双酯的含量测定。

２．３线性关系考察精密称取茜草双酯对照品约１６．７ｍｇ，置１００ｍｌ棕色量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取１，２，３，４，５ｍｌ，分别置１００ｍｌ棕色量瓶中，加３０％乙醇稀释至刻度，摇匀；照分光光度法（《中国药典》２００５年版二部附茜草双酯片溶出度测定的方法学验证彭刚１，杨伟权２，曾芳２，康志英３（１．广东大翔药业有限公司，广东广州５１０３８５；２．中山大学附属第一医院黄埔院区，广东广州５１０７００；３．广州市香雪制药股份有限公司，广东广州５１０５３０）［摘要］目的：对自制茜草双酯片的溶出度检查进行方法学验证，同时与市售产品进行对比研究。

方法：根据《中国药典》２００５年版二部附录ⅩＣ第二法对其溶出度进行检查。

采用紫外分光光度法，在２６４ｎｍ波长处测定茜草双酯的吸收度，建立溶出度测定方法，同时进行了方法学验证。

结果：采用该方法测定茜草双酯片，以浓度对吸收度进行线性回归，得回归方程为Ａ＝０．０８９９Ｃ－０．００２，相关系数为０．９９５３。

茜草双酯在１．６７￣８．０５μｇ／ｍｌ范围内浓度与其吸收度呈良好的线性关系。

重复性试验的ＲＳＤ为０．５１％；平均回收率为９９．９７％，ＲＳＤ为１．０４％。

结论：经与市售产品比较，我们自制的产品质量与市售产品一致，且溶出度测定方法能有效控制该产品的质量。

［关键词］茜草双酯片；溶出度测定；方法学研究［中图分类号］Ｒ９１７［文献标识码］Ａ［文章编号］１６７３－７２１０（２００８）０５（ａ）－０２７－０３ＭｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙｏｆＲｕｂｉｄａｔｕｍＴａｂｌｅｔｓＰＥＮＧＧａｎｇ１，ＹＡＮＧＷｅｉ－ｑｕａｎ２，ＺＥＮＧＦａｎｇ２，ＫＡＮＧＺｈｉ－ｙｉｎｇ３（１．ＧｕａｎｇｄｏｎｇＤａｘｉａｎｇＰｈａｒｍａｃｙＣｏ．ＬＴＤ．，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０３８５，Ｃｈｉｎａ；２．ＨｕａｎｇｐｕＢｒａｎｃｈ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｕｎＹａｔ－ｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０７００，Ｃｈｉｎａ；３．ＧｕａｎｇｚｈｏｕＸｉａｎｇｘｕｅＰｈａｒｍａｃｙＣｏｒｐ．，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５３０，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｖａｌｉｄａｔｅｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙｏｆｓｅｌｆ－ｍａｄｅＲｕｂｉｄａｔｕｍＴａｂｌｅｔｓａｎｄｔｏｍａｋｅｃｏｍｐａｒｉｓｉｏｎｗｉｔｈｓｉｍｉｌａｒｐｒｏｄｕｃｔｓｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｌｙａｖａｉｌａｂｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｆｏｌｌｏｗｉｎｇｔｈｅｐｒｏ－ｃｅｄｕｒｅｄｅｓｃｒｉｂｅｄｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｍｅｔｈｏｄｉｎａｐｐｅｎｄｉｘⅩＣ，ｓｅｃｏｎｄｐａｒｔｏｆ２００５ｅｄｉｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ．Ｔｈｅｓｏｌｕ－ｂｉｌｉｔｙｏｆＲｕｂｉｄａｔｕｍＴａｂｌｅｔｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙａｔ２６４ｎｍ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ，ｗｅｅｓｔａｂ－ｌｉｓｈｅｄａｐｒｏｃｅｄｕｒｅａｎｄｖａｌｉｄａｔｅｄｉｔｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ｗｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｌｉｎｅａｒｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｃｏｎ－ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（Ｃ）ａｎｄＵＶａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ（Ａ）ａｓｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｎｄｄｅｐｅｎｄｅｎｔｖａｒｉａｂｌｅｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｗａｓｃａｌ－ｃｕｌａｔｅｄａｓＡ＝０．０８９９Ｃ－０．００２，ｒ＝０．９９５３．Ｗｉｔｈｉｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｎｇｅｏｆ１．６７￣８．０５μｇ／ｍｌ，ｅｘｃｅｌｌｅｎｔｌｉｎｅａｒｒｅｌｅｖａｎｃｅｗａｓｗｉｔｎｅｓｓｅｄｂｅｔｗｅｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ．ＲＳＤｏｆｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙｔｅｓｔｗａｓ０．５１％；ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９９．９７％ｗｉｔｈＲＳＤｏｆ１．０４％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｓｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｌｙａｖａｉｌａｂｌｅ，ｏｕｒｐｒｏｄｕｃｔａｒｅｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｏｆｔｈｅｓａｍｅｑｕａｌｉｔｙ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｓｅｆｆｅｃｔｉｖｅ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ＲｕｂｉｄａｔｕｍＴａｂｌｅｔｓ；Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｙ２７２００８年５月第５卷第１３期・药物研究・中国医药导报ＣＨＩＮＡＭＥＤＩＣＡＬＨＥＲＡＬＤ样品中含茜草双酯量（ｍｇ）０．４７２８０．４９０８０．５０３９０．４６６２０．４９３７０．４８８４１２３４５６０．０７８９０．０８１９０．０８４１０．０７７８０．０８２４０．０８１５编号取样量（ｇ）加入茜草双酯量（ｍｇ）０．５０１０．５０１０．５０１０．５０１０．５０１０．５０１实测茜草双酯总量（ｍｇ）０．９７７５０．９８９４１．００３８０．９７５００．９９３００．９８２２回收率（％）１００．７３９９．５２９９．７８１０１．５６９９．６６９８．５６平均回收率（％）９９．９６ＲＳＤ（％）１．０４录ⅤＡ），在２６４ｎｍ波长处测定吸收度，以吸收度（Ａ）对浓度（Ｃ）进行线性回归，得回归方程为Ａ＝０．０８９９Ｃ－０．００２，ｒ＝０．９９５３。

试验结果表明，茜草双酯在１．６７￣８．０５μｇ／ｍｌ范围内浓度与其吸收度呈良好的线性关系。

２．４精密度试验取线性试验项下浓度为５．０１μｇ／ｍｌ的对照品溶液，照分光光度法（《中国药典》２００５年版二部附录ⅣＡ），在２６４ｎｍ波长处测定吸收度，连续测定６次，平均吸收度为０．４３６，ＲＳＤ为０．２３％。

试验结果表明，本法精密度良好。

２．５溶液稳定性试验取供试品，加３０％乙醇制备浓度为５μｇ／ｍｌ溶液，分别在避光放置０，１，２，４，６ｈ时测定吸收度，平均吸收度为０．４２５，ＲＳＤ为０．７３％。

试验结果表明，供试品溶液在避光条件下６ｈ内稳定。

２．６重复性试验避光操作，取茜草双酯对照品，加乙醇制备浓度为５μｇ／ｍｌ对照品溶液；取供试品适量（约相当于茜草双酯５０ｍｇ）６份，分别精密称定，置１００ｍｌ量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液１ｍｌ，置１００ｍｌ量瓶中，加３０％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

照分光光度法（《中国药典》２００５年版二部附录ⅣＡ），在２６４ｎｍ波长处测定吸收度。

测得结果平均含量为１００．２１％，ＲＳＤ为０．５１％。

２．７加样回收率试验精密称取已知含量为１００．２１ｍｇ／片（批号２００４０４０１）的样品适量（约相当于茜草双酯５０ｍｇ）６份，分别精密称定，置１００ｍｌ量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液１ｍｌ，置２００ｍｌ量瓶中，分别精密加入０．１６７ｍｇ／ｍｌ茜草双酯对照品溶液３ｍｌ，加３０％乙醇至刻度，摇匀。

照分光光度法（《中国药典》２００５年版二部附录ⅣＡ），在２６４ｎｍ波长处测定吸收度，计算回收率。

结果见表１。

平均回收率为９９．９７％，ＲＳＤ为１．０４％。

结果表明本法回收率良好。

２．８溶出介质的选择避光操作，取本品，照溶出度测定法（《中国药典》２００５年版二部附录ⅩＣ第二法）测定［２］，分别以水、０．９％盐酸溶液、ｐＨ６．８磷酸盐缓冲液、２０％乙醇和３０％乙醇各６００ｍｌ为溶剂，转速为１２０转／ｍｉｎ，依法操作，经３０，４５，６０，７５，９０ｍｉｎ时，取溶液６ｍｌ（同时补加同温相应的溶液６ｍｌ），滤过，精密量取续滤液２ｍｌ，用水稀释至５０ｍｌ，作为供试品溶液；取茜草双酯对照品，制备浓度为５μｇ／ｍｌ对照品溶液。

照分光光度法（《中国药典》２００５年版二部附录ⅣＡ），在２６４ｎｍ波长处测定吸收度，计算溶出量。

结果见表２。

表２溶出介质选择试验结果表以上结果表明，选用３０％乙醇做为溶出介质，可满足溶出度试验要求。

２．９溶出介质体积的选择供试品规格较小，参考茜草双酯片质量标准，溶出介质体积选用为６００ｍｌ。

表１加样回收率的测定结果４５ｍｉｎ５．２５．１８．４４４．７７２．３水０．９％盐酸溶液ｐＨ６．８缓冲液２０％乙醇溶液３０％乙醇溶液４．１３．８４．３４１．３６４．５溶出介质３０ｍｉｎ６０ｍｉｎ５．７５．９１２．２４６．２７３．６７５ｍｉｎ５．７６．０１２．３４６．６７５．８９０ｍｉｎ５．６５．２５．３４７．９８１．４各时间点溶出度（％）２．１０转篮法与桨法的选择避光操作，取本品，分别照溶出度测定法（《中国药典》２００５年版二部附录ⅩＣ第一法和第二法）测定，以３０％乙醇６００ｍｌ为溶剂，转篮法转速为１００转／ｍｉｎ，桨法转速为５０转／ｍｉｎ，依法操作，经１５，３０，４５，６０，７５，９０ｍｉｎ时，取溶液６ｍｌ（同时补加同温３０％乙醇溶液６ｍｌ），滤过，精密量取续滤液２ｍｌ，用水稀释至５０ｍｌ，作为供试品溶液；取茜草双酯对照品，制备浓度为５μｇ／ｍｌ对照品溶液。