克林霉素诱导试验的必要性

克林霉素诱导试验的必要性【关键词】 ,克林霉素［摘要］目的：探讨对大环内酯类耐药的β溶血链球菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌对常用抗生素克林霉素的耐药性及可诱导克林霉素耐药的发生率。

方法：mic法检测2005年1月至9月我院582株阳性菌，其中404株葡萄球菌，175株β溶血链球菌；其他阳球菌3株；双纸片法检测可诱导克林霉素耐药试验。

结果：272株金黄色葡萄球菌中有248株为红霉素耐药，其中208株为持续性克林霉素耐药，余下的40株红霉素耐药克林霉素敏感(eryrclis)株中,有26株为可诱导性克林霉素耐药(mlbs)。

132株凝固酶阴性葡萄球菌中,106株为红霉素耐药，其中67株为持续性耐药，余下的克林霉素体外敏感红霉素耐药的39株中,16株为可诱导性克林霉素耐药。

175株β溶血链球菌中,红霉素耐药134株，持续克林霉素耐药84株，余下50株(eryrclis)中克林霉素诱导耐药21株，红霉素敏感株未见克林霉素诱导耐药。

结论：临床微生物实验室须加强可诱导克林霉素耐药的检测，一旦阳性必报克林霉素耐药，以指导临床合理使用抗生素。

［关键词］克林霉素；必要性；实验Necessary of Clindamycin Induction TestAbstract：Objective Investigate macrolide resistant isolates of betahemolytic streptococcisaureus and coagulase negative staphylococcus sppwhich is susceplible to clidamicy in vitro testand evaluate the effect of clidamycinand the postiverate rate of clidamycin induce test in our hospital.Methods Use mic to detect 582 isolates rademly collected from january to septemberin our hospitaldouble antimicrobial agents detect the cindamycin induce test.Results Among the 272 s.aureus isolates；248 isolates are resistant to erythromycin 208 isolates are constitutive resestance to clidamycin；among the 40 eryrclis isolates，18 isolates are inducible resistance to clidamycin；among the 132 coagulase negative staphylococcus spp；106 isolates are resitant to erythromycin；67isolates are constitutive resitaceto clidamycin ；among the 39 eryrclis isolates，16 isolates areinduceresitace to clidamycin；amongthe175isolates of betahemolytic streptococci，134 isolates are resistance to erythromycin；84 isolates are constitutive resistance to clidamycin；amongthe rest 50 eryrclisisolates，21 isolates are induce resistance to clidamycin；for all the erysclis isolates,clisdamycin induce tests are negative.Conclusion Clindamycin induction test must be done in clinical microbiologylaboratoriesonce the test is postivesuch isolate is presumed to be resistant to clidamycin which is cost effective in clinicalantimiccrobial agents use.Key words：Clindamycin; Necessary; Test目前，金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌是引起医院感染的重要致病菌；特别是MRSA比例的上升，使葡萄球菌对各种抗生素产生多重耐药［1，2］。

临床用于阳性球菌感染的常用药物为糖肽类抗生素、大环内酯类、林可霉素和链霉素等，特别用于治疗皮肤和软组织感染以及某些青霉素过敏病人。

常规药敏试验不能检测可诱导克林霉素耐药株MLSB，这样就会影响临床用克林霉素治疗的抗菌效果。

本实验通过双纸片法检测可诱导克林霉素耐药，了解我院可诱导克林霉素耐药发生率，以指导临床医生合理使用抗生素。

近年来大环内酯类在阳性球菌中的活性不断减低，其耐药机制主要有3类：由msrA基因编码的泵出机制、核糖体可诱导变异核糖体结构型变异（见表1）。

表1 大环内酯类在阳性球菌中的耐药机制耐药机制（略）注：S*需要诱导方可显示耐药；后两类均为erm基因编码，可使23SrRNA甲基化，第2类又称为MLSB耐药。

如何具体实施这组试验呢？第一步按常规mic法进行阳性球菌药敏，若红霉素耐药，林可霉素敏感则进入第二步“D试验”。

“D试验”又名克林霉素诱导试验。

做双纸片药敏试验，将常规用的红霉素纸片（15 μg/片）、林可霉素纸片（2 μg/片）贴在邻近的位置，间距（边沿到边沿）15 mm～26 mm；35 ℃温箱内培养18 h～24 h。

如果靠近红霉素纸片处林可霉素的抑菌环减小，即报告D试验（林可霉素诱导试验）阳性。

D试验阴性的阳性球菌可能是红霉素泵出型耐药。

克林霉素诱导型（MLSB）随地区而异。

美国报告619株表型为红霉素R/克林霉素S（eryrclis）的菌株中,50％为D试验阳性，即诱导型耐药MLSB；50％为D试验阴性的泵出型耐药。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 细菌收集2005年1月至9月我院分离阳性球菌共582株（其中金黄色葡萄球菌272株，凝固酶阴性葡萄球菌132株,β溶血链球菌175株，其他3株）。

1.1.2 抗生素纸片红霉素、克林霉素购于杭州天和微生物试剂有限公司。

Mic法所用微生物生化，药敏试验卡购于湖南天地人生物试剂有限公司。

1.1.3 培养基MuellerHinton (MH）琼脂培养基购于上海博赛科技发展有限公司。

1.1.4 质控菌株金葡萄球菌ATCC25923。

1.2 方法利用MIC测定法规［3］，采用获得卫生部批准湖南天地人公司生产的微生物生化，药敏试验卡进行。

双纸片扩散法：根据2004年NCCLS推荐，在MH琼脂平板上，分别贴红霉素（15 μg/片）纸片和克林霉素（2 μg／片）纸片。

2种纸片距离分别选择为15 mm、25 mm~26 mm；35 ℃培养16 h~18 h，用常规法量取2纸片边缘距离，若靠近红霉素纸片处克林霉素纸片抑菌圈缩小或呈“D”形状，则显示为诱导型耐药。

2 结果见表2。

由此可见，272株金黄色葡萄球菌中有248株为红霉素耐药，其中208株为持续性克林霉素耐药。

40株EryrClis株在纸片间距为15 mm时有26株为可诱导性耐药,间距在26 mm时有24株为可诱导性耐药，132株凝固酶阴性球菌中有106株为红霉素耐药，其中67株为持续性耐药，而39株EryrClis株中当纸片间距为15 mm 时有16株为可诱导性耐药，间距在26 mm时14株为可诱导性耐药；175株β溶血链中134株红霉素耐药其中84株持续克林霉素耐药，50株EryrClis在纸片15 mm时为17株，26 mm时为16株，其他3株，红霉素敏感株中均未检测到克林霉素诱导性耐药。

表2 可诱导克林霉素耐药检测结果阳性球菌578（略）3 讨论阳性球菌对大环内酯类抗生素耐药主要是msrA基因编码的泵出机制和染色体靶位的改变。

仅对大环内酯类耐药是由msrA基因编码的泵出机制,而由erm基因编码23 s rRNA甲基化引起的大环内酯类、林可霉素和B类链霉素耐药。

其耐药表现为持续型耐药和可诱导性耐药2种。

持续型耐药对所有大环内酯类、林可霉素和B类链霉素均耐药，一般通过药敏试验就可检测出来，可诱导性耐药须用纸片扩散法诱导试验检测。

本实验显示，纸片扩散法诱导试验中抑菌圈结果2纸片的间距在15 mm，较26 mm明显。

克林霉素和红霉素两纸片间出现“D”型抑菌圈预测细菌对大环内酯、林可霉素和B类链霉素耐药，并携带ermA 或ermC基因。

金黄色葡萄球菌中可诱导耐药发生率较高，本实验显示，金黄色葡萄球菌可诱导克林霉素耐药发生率为66%~77%，而凝固酶阴性球菌可诱导耐药发生率为41%，这与国外文献报道较一致。

克林霉素是治疗由葡萄球菌引起的皮肤和软组织感染较有效的药物，能有效穿透组织，对肾脏等不良作用较小［4，5］，它也是社区感染病人比较有效的口服药物，可作为青霉素过敏病人的首选药物。

及时、准确的抗生素药敏试验可作为临床医生合理用药的依据，克林霉素体外药敏试验可能会造成假的敏感率，只有通过红霉素和克林霉素双纸片法才能检测可诱导克林霉素耐药，所以临床微生物室必须开展这方面工作，以保证克林霉素耐药检出的准确性，以指导临床医生更合理的使用抗生素。

参考文献：［1］李智山，邓三季度.葡萄球菌医院感染及耐药谱分析［J］.中华医院感染学杂志，2004，6：9295.［2］赵先颖，徐元宏，江晓平.医院感染葡萄球菌菌种变迁与耐药性近况［J］.中国微生态学杂志，2003，1：6567.［3］葛平，潘之华，徐蓉.1998年美国nccls抗生素最小抑菌浓度测定法规［J］.上海医学检验杂志，1998，3：112115.［4］张丽霞.克林霉素治疗急性肾盂肾炎的临床分析［J］.中华医学丛刊，2003，9：113115.［5］高磊，侯杰，陈亦芳.国产磷酸克林霉素治疗细菌性感染安全性及有效性临床观察［J］.中国医药导刊，2000，3：102105.。