临床免疫学检验-课件-第19章 生物素-亲合素系统及其在免疫检测技术中的应用
标记蛋白质氨基与醛基的活化生物素
醛基
2个6-氨基已糖分子
氨基 长臂
2. 标记蛋白质醛基的活化生物素
生物素酰肼(BHZ)：水合肼与生物素的合成物用于 标记偏酸性糖蛋白 。
肼化生物胞素(BCHZ) ：生物素与赖氨酸氨基连接 后与无水肼反应而成BCHZ还可标记氨基。
3. 标记蛋白质巯基的活化生物素 马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB) ：能特异地与 蛋白质巯基结合的活化生物素。 4. 标记核酸的活化生物素 (1)光敏生物素(photobiotin)： 侧链上连接的芳香基叠氮物基团，经光照后变为芳 香基硝基苯，与腺嘌呤N-7位氨基结合，形成生物素化 的核酸探针，用于DNA或RNA的标记。
(2)生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP）：作为 TTP的结构类似物，可ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ用缺口移位法通过DNaseⅠ 和DNA聚合酶Ⅰ的作用而掺入到双链DNA中。
(3) BNHS和BHZ：与核酸胞嘧啶分子中的N-4位 氨基结合，形成生物素标记的核酸探针，但对碱基 配对有影响。（不常用）
生物素标记蛋白质特点
亲合素(AV)
链霉亲合素(SA)
结构 分子量
pI 结合位 生物素
Ka 活性U
四亚基糖蛋白
68 kD 10.5 色氨酸
4 1015 13～15
四肽链蛋白 无糖基
65 kD 6 色氨酸
4 1015 15～18
SA的pI低，表面所带正电荷少，且不含糖基，非特异 性结合远低于AV，目前以SA标记的酶结合物更为常用。
1.活化生物素通过侧链与蛋白分子连接； 2.一个蛋白分子可被多个生物素标记-多价； 3.可标记生物活性大分子，如抗原、抗体。 BNHS多标记抗体，BHZ则多标记偏酸性抗原，标记后 抗原、抗体活性不变； 4.可对示踪物标记，碱性磷酸酶标记后活性将 降低。
第二节 亲合素和链霉亲合素的特性
讲授内容
一、亲合素 二、链霉亲合素
AV/SA能4价桥联生物素；一个Ab和酶 分子可连接多个B，多级放大效应。
两者结合呈不可逆反应；不受酸碱、 变性剂、蛋白酶等影响，稳定性极好。
可与多种标记技术结合，广泛应用于 临床和科研检测各种生物学反应体系。
可制成通用性制剂；效价高用量少， 成本低；有效期长；反应时间短等。
概述
1个亲合素与4个生物素化分子结合及1个大分子活 性物质能与多个生物素结合特点，使BAS产生多级放大 效应，极大地提高了免疫检测和分析的敏感性。
目前，BAS已广泛应用于整个生物学领域，是微量 抗原与抗体定性、定量检测及定位观察研究的常用技术 ，也是生物医学研究工作中最具使用价值和发展前途的 技术之一。
第一节 生物素的特性
讲授内容
一、生物素理化性质 二、活化生物素
一、生物素理化性质
生物素（biotin，B）为含硫水溶性维生素，又称 维生素H或辅酶R；
动植物组织中广泛分布，卵黄（α 型）和肝（β 型 ）含量高，亦可人工合成。
分子式：C10H16O3N2S；MW：244.31 Da。 其羧基修饰后成为活化生物素，既能与抗原、抗体 大分子生物活性物质结合，又能与各种示踪物（如酶、 荧光素等）结合。
一、生物素理化性质
Ⅰ环为咪唑酮环，与亲合素结合部位；
Ⅱ环为噻吩环，C2上戊酸侧链的未端羧基是结合 生物大分子的唯一结构。
咪唑酮环
Ⅰ
羧基
Ⅱ
噻吩环
二、活化生物素
生物素侧链末 端羧基经化学修饰 后制成带各种活性 基团的衍生物—活 化生物素。
二、活化生物素
活化生物素
标记蛋白质氨基的活化生物素
易与抗原、抗体 、酶及核酸分子
亲合素(avidin, A / AV) 和链霉亲合素 (streptavidin, SA)是生物素的天然特异性结合物。（ 实际应用中多用链霉亲合素）
二者均为大分子蛋白，目前所有用于标记的物质均 可与亲合素（AV）或链酶亲合素（SA）结合。
能与生物活性分子抗原、抗体结合，也能与示踪 物结合。多与酶、荧光素及胶体金偶联。
标记蛋白质醛基的活化生物素
中相应基团偶联 形成生物素化
标记蛋白质巯基的活化生物素
标记物。
标记核酸的活化生物素
1. 标记蛋白质氨基的活化生物素
O
NH2
C
CO
NHⅠNH
CH2
O EDC
CH CH
CH
CO
CH2 ⅡCH
2
CO
S (CH2)4COOHNH
OH
生物素
N-羟基 碳二亚胺 丁二酰胺
O
C CH2 N
C CH2 O
生物素N羟基丁二 酰亚胺酯 （BNHS）
BNHS分子可与蛋白质赖氨酸的氨基形成肽键。 BNHS适用标记抗体和中性或偏碱性的蛋白质。
生物素分子量小与大分子抗体或酶结合后会产生 空间位阻效应，对生物素与亲合素的结合以及 BAS的应用效果造成干扰。
如何减小空间位阻
长臂活化生物素（BCNHS）： 在生物素和N-羟基丁二酰亚胺之间添加两个6氨基已糖分子基团，形成连结臂，增加生物素与大 分子间的距离，减少位阻效应，更好发挥生物素的 活性作用。
第十九章 生物素-亲合素系统及其 在免疫检测技术中的应用
第19章 生物素-亲合素系统及其 在免疫检测技术中的应用
讲授内容
第一节 生物素的特性 第二节 亲合素和链霉亲合素的特性 第三节 生物素与亲合素结合反应的特点 第四节 BAS在免疫检测技术中的应用
教学目标
1．掌握生物素-亲和素系统的特点 2．掌握BAS在免疫检测技术中的应用 3．熟悉生物素-亲合素系统多级放大效应的原理 4．生物素和亲合素（链霉亲合素）的理化性质 5. 了解活化生物素的制备方法
亲合素 (Avidin, AV)
生物素 （Biotin, B）
AV/SA耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用，与生物素结 合后稳定性更好，每个亲和素能结合四个分子的生物素。
BAS-WB WB
第三节 生物素与亲合素结合反应的特点
一、特异性强 二、敏感性高 三、稳定性好 四、适用性广 五、其他
两者间亲和力、专一性极高，试剂能 高倍稀释，非特异性反应低。
概述
生物素-亲合素系统（biotin-avidin system，BAS ）是20世纪70年代末发展起来的一种新型生物反应放大 系统。
生物素与亲合素间高度亲合力，结合迅速、专一、 稳定。
既能偶联抗原、抗体、核酸等大分子生物活性物质 ，又能被酶、荧光素、胶体金、化学发光物及放射性核 素等各种示踪物标记。
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临床免疫学与检验--概论 ppt课件
临床免疫执行生理性免 疫防卫功能,当免疫反应调节异常或功能缺陷时,将 导致免疫性疾病。与免疫反应有关的各种免疫活性 物质的检测和免疫技术的应用,是医学检验专业学 习的主要目的,也为本书的重点及与《医学免疫学》 的区别。 为便于学生更好地学习，配合第4版《临床免 疫学与检验》教材同时出版了“习题集”和“多媒 体光盘”等辅助教材。希望广大师生在使用过程中 提出宝贵意见，以便在今后的教材修改中更趋完善。
Snell S, Dausset J, Benacceraf B
Milstein C, Kohler GE Jrena NK Tonegawa S Thomas ED, Murry J
Major histocompatibility complex
Monoclonal antibody Theory for immune regulation Gene re-arrangement in antibody production Transplantation immunology
识别阶段（recognition phase） 活化阶段（activation phase） 效应阶段（response phase）
执行效应功能
课件 12
抗原识别处理 传递信息 免疫细胞活化增殖产生 效应细胞、分子
补体 细胞因子 免疫球蛋白 浆细胞 B细胞
粒细胞 单核细胞
T细胞
巨噬细胞
课件
13
免疫应答效应大多为生理性，是机
课件 9
一、免疫学概念与免疫应答
宿主体内的免疫系统，能识别并清除从外环境中侵入的病 原生物及其产生的毒素、内环境中因基因突变产生的肿瘤 细胞、自身衰老残损的组织细胞或自身变性抗原，实现 免疫防御 (immunological defence) 免疫自稳 (immunological homeostasis)
Snell S, Dausset J, Benacceraf B
Milstein C, Kohler GE Jrena NK Tonegawa S Thomas ED, Murry J
Major histocompatibility complex
Monoclonal antibody Theory for immune regulation Gene re-arrangement in antibody production Transplantation immunology
识别阶段（recognition phase） 活化阶段（activation phase） 效应阶段（response phase）
执行效应功能
课件 12
抗原识别处理 传递信息 免疫细胞活化增殖产生 效应细胞、分子
补体 细胞因子 免疫球蛋白 浆细胞 B细胞
粒细胞 单核细胞
T细胞
巨噬细胞
课件
13
免疫应答效应大多为生理性，是机
课件 9
一、免疫学概念与免疫应答
宿主体内的免疫系统，能识别并清除从外环境中侵入的病 原生物及其产生的毒素、内环境中因基因突变产生的肿瘤 细胞、自身衰老残损的组织细胞或自身变性抗原，实现 免疫防御 (immunological defence) 免疫自稳 (immunological homeostasis)
医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
14
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
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2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
生物素-亲和素免疫放大技术
Faculty of Laboratory Medicine in Xinxiang Medical College
Dr. Wang Hui,
第四节 生物素 -亲和素系统的应用
生物素与亲和素间的结合亲和力高、特 异性强 , 且各自均可以与各型大小分子 偶联, 以及二者在结合反应时具有的多 级放大作用等优越性
Dr. Wang Hui,
Faculty of Laboratory Medicine in Xinxiang Medical College
一、生物素-亲和素系统基本类型及原理
BAS 在应用中的基本类型有二种 : 一类以游离 亲和素为中间物 , 分别连接包含生物素化大分 子的待检反应体系和标记生物素 , 称为 BAB 法 (biotin-avidin bind,BAB); 后来又在此基础上 发展了亲和素 -生物素化酶复合物技术 (avidinbiotin-peroxidase complex,ABC). 另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分 子反应体系进行检测的 BA 法, 或称标记亲和 素·生物素法 (labeled avidin-biotin,LAB)。
早在1916年Bateman第一個發現雞蛋蛋白 中有一種有毒物質，直到1927年Boas才發 現某種食物可以預防蛋白的毒性。之後 的研究，即將此種可抗蛋白毒性的物質--生物素分離出來。生物素的結構於1936 年被發明而出，也在1943年即能在實驗 室中合成此種物質。
Dr. Wang Hui,
Faculty of Laboratory Medicine in Xinxiang Medical College
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Dr. Wang Hui,
第四节 生物素 -亲和素系统的应用
生物素与亲和素间的结合亲和力高、特 异性强 , 且各自均可以与各型大小分子 偶联, 以及二者在结合反应时具有的多 级放大作用等优越性
Dr. Wang Hui,
Faculty of Laboratory Medicine in Xinxiang Medical College
一、生物素-亲和素系统基本类型及原理
BAS 在应用中的基本类型有二种 : 一类以游离 亲和素为中间物 , 分别连接包含生物素化大分 子的待检反应体系和标记生物素 , 称为 BAB 法 (biotin-avidin bind,BAB); 后来又在此基础上 发展了亲和素 -生物素化酶复合物技术 (avidinbiotin-peroxidase complex,ABC). 另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分 子反应体系进行检测的 BA 法, 或称标记亲和 素·生物素法 (labeled avidin-biotin,LAB)。
早在1916年Bateman第一個發現雞蛋蛋白 中有一種有毒物質，直到1927年Boas才發 現某種食物可以預防蛋白的毒性。之後 的研究，即將此種可抗蛋白毒性的物質--生物素分離出來。生物素的結構於1936 年被發明而出，也在1943年即能在實驗 室中合成此種物質。
Dr. Wang Hui,
Faculty of Laboratory Medicine in Xinxiang Medical College
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《免疫学检测技术》课件
免疫荧光技术（IFT）
原理：利用荧 光标记的抗体 与抗原结合， 通过荧光显微 镜观察荧光信
号
应用：检测细 胞表面抗原、 细胞内抗原、
细胞因子等
优点：灵敏度 高、特异性强、
可定量分析
缺点：操作复 杂、成本较高、 需要专业设备
免疫沉淀技术（IP）
原理：利用抗原-抗体特异性结 合，沉淀出目标蛋白
应用：蛋白质相互作用研究、 蛋白质组学研究等
细胞因子 检测：用 于诊断免 疫系统疾 病、肿瘤 等
免疫组化 检测：用 于诊断肿 瘤、感染 性疾病等
流式细胞 术：用于 检测免疫 细胞亚群、 细胞因子 等
免疫荧光 检测：用 于检测抗 原、抗体 等
免疫印迹 法：用于 检测蛋白 质、抗体 等
在生物制品检测中的应用
疫苗检测：检 测疫苗的有效
性和安全性
抗体检测：检 测抗体的浓度
检测方法：开发新 型检测方法，提高 检测灵敏度和准确 性
自动化：实现检测 过程的自动化，提 高检测效率
便携化：开发便携 式检测设备，方便 现场检测和快速诊 断
THANKS
汇报人：
例
Part One
单击添加章节标题
Part Two
免疫学检测技术概 述
免疫学检测技术的定义和分类
免疫学检测技术的发展历程
19世纪末，免疫 学检测技术开始 萌芽
20世纪初，免疫 学检测技术逐渐 成熟
20世纪中叶，免 疫学检测技术快 速发展
21世纪初，免疫 学检测技术进入 分子水平
免疫学检测技术的应用领域
优点：灵敏度高、特异性强、 操作简便
注意事项：选择合适的抗体、 控制反应条件、避免非特异性 结合等
流式细胞术（FC）
生物素-亲合素放大技术
标记核酸的活化生物素
光生物素(photobiotin)
侧链上连接的芳香基叠氮物基团, 经光照后,
变为芳香基硝基苯，可直接与腺嘌呤氨基结
合, 形成B（生物素）-核酸探针
生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP）
作为TTP（三磷酸胸苷）的结构类似物，可 采用缺口移位法掺入化 特 性
亲合素（A）
结构 四亚基糖蛋白 pI 10.5 结合位 色氨酸 生物素 4 K（亲和常数） 1015 活性(U) 13～15
链霉亲合素(SA)
四肽链蛋白 无糖基 6 色氨酸 4 1015 15～18
二、亲合素/链霉亲合素标记
标记物：酶、胶体金 异硫氰酸荧光素（FITC） HRP-AV(SA) 改良过碘酸钠法、戊二醛法 ABC/SABC 预制亲和素(AV)-Biotin、 链霉亲和素(SAV)-Biotin
BAS主要与免疫放射分析(IRMA)检测体系偶 联，用于对终反应的放大（BA法） BAS也可用于IRMA反应后B、F成分的分离
四、生物素-亲合素系统在分子生 物学中的应用
以生物素标记核酸探针进行的定位检测 用BAS制备的亲和吸附剂进行基因的分离 纯化 将免疫测定技术与PCR结合建立免疫PCR(immuno-PCR)用于抗原的检测。
可直接标记核酸， 但对碱基配对有影 响（影响氢键的形成）
二、生物素标记蛋白质
活化生物素通过侧链与蛋白分子连接 一个蛋白分子可被多个生物素标记－多价性 对BNHS多标记抗体, BHZ则多标记偏酸性抗原； 抗原、抗体标记后活性不变 可对标记材料（如酶）标记：碱性磷酸酶标记 后活性将降低
+ABC
Ab-Ag-Ab-B + ABC
Ab-Ag-Ab-B-ABC
生物素亲和素
分子式：C10H16O3N2S 分子量：244.31 等电点：PH=3.5 溶解特性：难溶于水，易 溶于二甲基甲酰胺(DMF) 两个环状结构： I环（咪唑酮环）为与亲 和素结合的主要部位； II环（噻吩环）为结合抗 体和其它生物大分子的部 位，C2上戊酸侧链的未端 羧基是结合生物大分子的 唯一结构
分子量：68 000
比活性：A≥12u/mgP
亲和常数：1015/mol
生物素酰肼(BHZ)：水合肼与生物素的合成物 主要用于标记偏酸性糖蛋白 肼化生物胞素(BCHZ) ：生物素与赖氨酸连接后， 再与无水肼反应而成。 除醛基外， BCHZ还可标记氨基
标记特点：BHZ与蛋白质中的 醛基结合而标记
马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB)：
能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素
活化生物素可克服以上缺点，既减少空间位阻 效应，又可扩大其结合的对象。
生物素侧链的末
端羧基经化学修
饰后制成带各种 活性基团的衍生
物－活化生物素
(生物素化衍生 物)
标记蛋白质氨基的活化生物素
N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS） 长臂活化生物素（BCNHS）
活化生物素易 与抗原、抗体 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物
注意事项：
选择活化生物素：依抗原或抗体分子所带可标记基 团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性；
控制生物素：蛋白质比例 生物素：IgG 用量比(mg/mg)宜为2:1，IgG应用浓度 0.5~5μg/ml；生物素1~3个/Ag，3~5个/Ab； 使用交联臂减少空间阻力
概念：是动物微生物中提取的一种含10%碳水化物的碱性糖 蛋白，可由蛋清中提取。 主要包括：卵白亲合素、链亲合素、卵黄亲合素及类亲合素 等。后两种因其特异性亲合力低，研究不多，前两种目前已 深入研究并得到广泛应用。 结构：4个相同亚基组成的四聚体糖蛋白，富含色氨酸，它 是与生物素结合的基团。
临床免疫学和免疫检验 ppt课件
Elispot
Elispot结果判断
方法学评价
Westernblot原理
Westernblot缺点
抗原表位可能被破坏而漏检
放射免疫沉淀试验原理
放射免疫沉淀试验
抗原表位不会破坏
酶联免疫斑点试验(enzyme linked immunospot , ELISPOT)
免疫印迹法(immunoblotting test, IBT)
放射免疫沉淀试验(radioimmunoprecipitation assay, RIPA)
IFA 和ICA
免疫渗滤测定 （IMMUNOFILTRATION ASSAY，IFA） 免疫层析测定 （IMMUNOCHROMATOGRAPHIC ASSAY，ICA）
免疫金标记技术
免疫金标记技术
免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主 要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处， 在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处 大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或 半定量的快速免疫检测。这一反应也可以通过银颗粒的沉积 被放大，称之为免疫金银染色（immunogold silver staining，IGSS）。
第八代
INSTANTCHEK HIV 1+2
第九~十二代
研制中
ICA技术的发展
1990年 ABBOTT公司 Unipath公司 胶体硒标记ICA CLEARVIEW 立明衣原体 彩色胶乳标记ICA Cardiac Reader TnT 定量 0.1~3 ng/ml 合成TnT质控点
ROCHE
半定量测定
IFA 穿流（FLOW
THROUGH）
临床免疫学检验-课件-临床免疫学检验-绪论
免疫病理与免疫性疾病 感染免疫 移植免疫 肿瘤免疫
是研究肿瘤相关抗原和肿瘤的免疫诊断、肿瘤的发 生发展与机体的免疫状况、机体对肿瘤的免疫应答和 抗肿瘤免疫效应机制的一门分支学科。
第三节 免疫学技术的发展与临床免疫检验
免疫学检验
是研究免疫学技术及其在医学检验 领域应用的一门学科，是医学检验专 业的重要学科之一。
第一章 绪 论
主要内容
• 免疫学基础简介 • 临床免疫学简介 • 免疫学技术的发展与临床免疫检验
第一节 免疫学基础简介
免疫的概念
是机体识别“自己” 或“非己” 物质， 排除抗原性异物的一种功能；其目的是 维持机体生理平衡与稳定。
免疫应答(immune response) 机体识别和排除抗原性异物的全过程。
Байду номын сангаас免疫学检验的内容
抗原或抗体的检测 淋巴细胞的类型、数量及功能检测
•免疫学检验的应用
检测具有免疫活性的物质
如抗原、抗体、补体等
检测体液中其他微量物质
如激素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、 微量元素等
检测环境中其他微量物质
各种蛋白质、酶、激素、药物和毒品等
特殊免疫学技术
•免疫学技术的发展趋势
将免疫检测条件控制、反应探测及结果 分析溶为一体的全自动免疫检测仪不断 涌现并朝着超微量、高灵敏和高精确度 的方向发展。
免疫学检验的地位
免疫学检验在基础医学、预防医学和临床 医学中都具有重要的作用。
免疫学诊断是指应用免疫学检测技术，通 过对免疫活性物质(如免疫细胞、免疫分 子等)的定性或定量的测定，协助诊断免 疫相关疾病的一种实验诊断方法。
免疫病理与免疫性疾病： 研究免疫相关疾病的发生、发展及机制的
临床免疫学检验技术
三、酶联免疫吸附试验（enzyme-
linked immunosorbent assay,ELISA）
• 4.捕获法 用于测定特异性IgM类抗体。被检 血清中针对某抗原旳特异性IgM和IgG常同步 存在，为防止IgG旳干扰，一般采用捕获法 来测定IgM。先将已知特异性抗体（如抗人μ 链）包被于固相载体上，加待测人血清样本， 其中旳IgM（IgM分子相对于固相抗μ链又是 一种抗原）被固相抗μ链抗体特异性捕获， 形成IgM-抗IgM复合物。洗涤除去血清中旳 其他Ig和杂质；加特异性抗原试剂，该抗原 只与固相上旳特异性IgM结合。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 5. 生物素—亲合素ELISA（avidin—biotin— peroxi—dase complex，ABC-ELISA）是将生 物素（biotin）和亲合素(avidin)或链霉亲合素 (streptavidin,SA)引入ELISA旳措施。生物素是 一种小分子物质，经活化后可高比度旳偶联 抗体或抗原等大分子。亲合素（或链霉亲合 素）与生物素旳结合力极强，一分子亲合素 可与4个生物素分子结合。在反应系统中引入 生物素和酶标识亲合素，可将ELISA旳反应多 级放大，明显提升检测措施旳敏感性。
临床免疫学检验技术
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学 检验领域应用旳一门学科。免疫检验技术 则要点论述各类免疫学技术旳基本原理、 措施类型和临床应用。19世纪末相继建立 了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等 三大经典血清学试验，用于检测病原微生 物旳抗原或抗体对传染病旳诊疗起到主要 作用。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
免疫学临床应用ppt课件
（1）鉴定病原菌：诊断疾病 （2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌 （3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定 （4）检测药物半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损