植物激素定量分析方法研究进展.
2010年第55卷第33期:3163~3176
英文版见: Fu J H, Sun X H, Wang J D, et al. Progress in quantitative analysis of
plant hormones. Chinese Sci Bull, 2010, 55, doi: 10.1007/s11434-010-4243-8 评述
《中国科学》杂志社
SCIENCE CHINA PRESS 植物激素定量分析方法研究进展
符继红①②, 孙晓红②, 王吉德①, 褚金芳②*, 闫存玉②*
①新疆大学化学化工学院, 乌鲁木齐 830046;
②中国科学院遗传与发育生物学研究所, 国家植物基因研究中心(北京, 北京
100101
*联系人, E-mail: cunyuyan@; jfchu@
2010-07-13收稿, 2010-09-13接受
国家自然科学基金资助项目(90917017, 90817008
摘要植物激素是对植物生长发育具有重要调控作用的小分子化合物, 在低浓度下就
能发挥生理作用, 参与调控植物生长发育的每一过程. 植物激素的合成、运输、代谢和
分子作用机理的深入研究都需要对植物激素进行定量分析. 但是, 植物激素定量分析
受到低含量、次生代谢产物背景干扰严重等因素的影响, 一直是植物激素研究领域的瓶
颈. 近年来, 随着植物激素在提取、纯化和检测方法等方面的发展, 植物激素定量分析
取得一定进展. 固相萃取技术和色谱/质谱联用技术的发展为植物激素的高效提取纯化
和准确定量分析提供了可能, 成为植物激素定量分析领域广泛被接受的技术手段. 此
外, 液相萃取、免疫纯化、免疫分析和电化学分析等纯化检测方法在植物激素分析中也
有应用, 本文对各种纯化检测方法进行了比较和讨论. 随着植物激素调控机理和植物
激素互作研究的深入, 需要对原位、动态和多种植物激素同时检测, 这将是植物激素分
析领域的未来研究方向.
关键词
植物激素
提取方法
液相萃取
固相萃取
免疫纯化
免疫分析
电化学分析
色谱及色谱质谱联用
植物激素是植物体内合成的对植物生长发育有
显著作用的微量有机物, 能从产生部位转移到作用
部位, 在低浓度下就能调节植物的生长发育, 几乎参
与了调控植物生长发育的每一过程, 从影响细胞的
分裂、伸长、分化到影响植物发芽、生根、开花、结
实、休眠和脱落等[1], 主要包括乙烯(ethylene、生长
素(auxin、脱落酸(abscisic acid、赤霉素(gibbe-
rellins、细胞分裂素(cytokinins、茉莉酸(jasmonates、
油菜素内酯(brassinosteroids和水杨酸(salicylates等
(表1. 另外, 一些次生代谢产物, 如一氧化氮(NO
及近年来发现的独角金内酯(strigolactones等也被认
为在调节植物生长发育方面以类似激素的方式起作
用. 当植物受到病原体侵染、害虫及动物的啃咬、干
旱及盐胁迫等生物和非生物的伤害后, 植物激素在
植物启动防御反应的过程中也发挥着巨大的作
用[2~4]. 植物激素既可以通过调控作物生长发育等过
程而直接影响作物产量, 又可以通过参与调控作物
对各种不利条件的适应性而减少产量损失, 其研究
成果对提高作物产量起到了革命性的推动作用, 具
有较大的农业应用价值, 因而植物激素在植物体内
含量的准确测定越来越引起人们的重视. 植物体内
的激素含量极低, 性质不稳定, 容易受到其他次生代
谢产物的干扰; 同时, 部分用于植物生理学研究的植
物突变体材料非常珍贵, 材料量少, 因此要求检测的
方法必须十分灵敏和专一. 国家自然科学基金委员
会已经就植物激素研究设立了重大研究计划项目,
其中一个核心科学问题就是解决植物激素超微定量
检测的技术瓶颈.
植物激素的提取纯化与检测通常包括以下几个
关键的步骤: 首先, 在样品的收集过程中, 植物材料
应迅速用液氮冷冻, 以保证所分析的样品最大限度
保持植物的原始状态, 没有因为植物受伤而导致植
2010年11月 第55卷 第33期
3164
表1 主要植物激素及代表性化合物的分子结构和名称
代表性植物激素
类别
结构
名称
Auxins
Indole-3-acetic acid (IAA
Abscisic acid (ABA
S-(+-Abscisic acid (S-ABA
Jasmonates (JAs
(‒-Jasmonic acid ((
‒-JA
Gibberellins (GAs
Gibberellin A 1 (GA 1
Salicylates (SAs
Salicylic acid (SA
Cytokinins (CKs
trans -Zeatin (Z
Ethylene H 2C=CH 2 Ethylene
Strigolactones (SLs
2'-epi -5-Deoxylstrigol (epi -5DS
Brassinosteroids (BRs
Brassinolide (BR
物激素含量的失真, 并在液氮保护下研磨成粉末; 其次, 选择合适的提取溶剂对目标激素进行高效率的提取; 再次, 优化纯化方法, 对植物粗提物进行纯化和富集;
最后, 建立灵敏的测定方法, 对植物样品中的植物激素进行准确可靠的分析. 因此高选择性的
样品提取纯化方法和高灵敏的测定技术的开发将是植物激素检测的研究重点.
植物激素提取与检测技术的快速发展为研究激素在代谢、信号转导及互作网络机理等方面提供了直接的量化信息, 从而为进一步阐明植物激素的作用机理提供帮助.
评述
1 提取与纯化方法
植物激素作为特殊的植物次生代谢产物群体, 在植物体内的含量非常低, 通常只有普通植物次生代谢产物的万分之一甚至更低, 在0.1~50 ng·g−1鲜重范围内[5]. 同时, 植物提取物又是复杂的多组分混合物, 其所含的次生代谢产物会对植物激素的定性和定量分析产生严重的干扰. 因此, 为鉴别和定量测定植物激素, 必需建立和优化植物激素的提取和纯化流程, 尽量除去植物粗提物中影响植物激素分析的杂质, 富集目标化合物, 以得到充分纯化的待分析样品供最终分析测定.
1.1 提取方法
植物激素分析首要工作是从植物材料中将目标植物激素充分提取出来. 这取决于两个方面: 一是植物材料的处理, 通常选择液氮冷冻条件下的新鲜或冻干处理的
植物材料进行充分研磨; 二是选择合适的提取方法将植物激素从这些材料中提取出来.
目前, 溶剂提取法仍然是植物激素研究采用的最广泛的提取方法. 甲醇、丙酮、丙醇及其水溶液和中性、酸性缓冲溶液是较为常用的提取液[6~13], 有机溶剂与水的比例通常需要依据被检测植物激素的极性来确定, 极性很小的溶剂如乙醚通常不用来提取植物激素. 在这些有机溶剂体系中, 甲醇由于分子量小, 渗透性较强, 在提取过程中可以渗透到细胞中, 一直是植物激素提取的首选溶剂, 被广泛地用于植物激素的提取[14~23]. 在提取过程中, 部分植物激素化学性质不稳定, 容易受到提取环境的影响. 例如, 生长素类植物激素容易氧化或见光分解, 在分析提取过程中一定要避免光照、高氧和高温等外部环境, 因此需要在提取过程中加入抗坏血酸、铜试剂等电极电位较低的抗氧化剂, 保证其在提取过程中的稳定. 除了外部环境对部分目标植物激素稳定性的影响之外, 一些植物激素在提取过程中还会受到植物体内酶的影响. 例如, 在细胞分裂素的提取过程中, 植物体内的碱性磷酸酯酶会造成核苷酸型细胞分裂素的水解, 这种酶在80%甲醇提取液中仍保持一定活性, 采用该溶剂体系会对分析结果产生不利影响, 改进的方法是使用Bieleski试剂(MeOH:CHCl3:HCOOH:
H2O=12:5:1:2, 体积比, 它能有效降低核苷酸型细胞分裂素酶解为核苷[24]. 但该提取液极性偏小, 会将植物组织中的大量脂类物质提取出来, 对后续细
胞分裂素的进一步纯化造成困难, 不利于细胞分裂
素的定量分析[25,26]. 在此基础上, 通过对有机溶剂和
配比进行调整, 改良型Bieleski试剂(MeOH:HCOOH:
H2O=15:1:4, 体积比被应用于细胞分裂素和赤霉素
等多种植物激素的提取[27,28]. 尽管改良型Bieleski试
剂能够减少脂类物质的溶出, 简化后续的纯化富集
处理流程, 但在酸性条件下, 细胞分裂素核苷会发生
降解释放出游离的细胞分裂素, 对定量分析结果也
会产生影响.
所以, 提取溶剂的选择主要取决于目标植物激
素的物理化学性质和植物样品的性质, 并综合考虑
提取过程中提取环境和植物激素在植物体内存在的
形态等影响因素, 其基本原则是在不改变植物激素
成分变化条件下, 最大限度地提取出目标植物激素
并尽量降低干扰杂质的溶出.
1.2 纯化方法
一般而言, 通过有机溶剂提取的植物粗提物中
含有大量的植物次生代谢产物, 而植物激素在粗提
物中含量极低, 这些植物次生代谢物会对植物激素
的定量分析产生很强的干扰, 影响分析结果的准确
性, 因此植物粗提物并不适合直接进行植物激素定
量分析. 通过对植物粗提物进行一系列的后续处理,
能够将感兴趣的目标植物激素进行纯化和富集, 降
低或者消除植物组织中大量复杂的背景干扰, 从而
使样品适合定量分析. 随着对植物激素研究工作的
深入, 从经典的液相萃取到固相提取越来越多的新
生长素和salkowski显色原理
1 生长素和salkowski显色原理
生长素（Auxin）是一类植物激素，对于调控植物生长和发育具有重要作用。在植物学研究和教学中，常常需要检测生长素的含量，Salkowski试剂显色法是一种常用的生长素定量检测方法。
一、Salkowski试剂显色原理：
Salkowski试剂是由浓硫酸和碘化钾混合而成的，用于检测植物提取液中的生长素。其显色原理基于生长素分子中的 Indole 结构与碘化物离子反应，形成紫色的化合物。具体步骤如下：
1. 生长素提取：
首先，需要从植物组织中提取生长素。通常采用丙酮或乙酸乙酯等有机溶剂对植物组织进行提取。
2. 加入Salkowski试剂：
将提取液转移到含有Salkowski试剂的试管中。在酸性条件下（通常使用浓硫酸作为酸化剂），生长素会与碘化物离子反应。
3. 显色反应：
生长素中的 Indole 结构与碘化物离子结合后，会产生紫色的化合物，这种颜色变化可以用来定量分析生长素的含量。
4. 比色定量：
使用分光光度计在特定波长（通常在520-530nm）下测量溶液的吸光度，吸光度与生长素的浓度成正比。
二、注意事项：
反应条件：必须严格控制反应条件，特别是酸的浓度和反应时间， 2 这直接影响到显色的效果和准确性。
安全操作：由于涉及浓硫酸等强酸，操作时应在通风柜中进行，并采取适当的安全措施。
仪器校准：使用分光光度计前，需要校准仪器，确保测量准确性。
标准曲线：进行生长素定量分析时，通常需要制备一系列已知浓度的生长素标准溶液，建立标准曲线，以便根据测量吸光度计算样品中的生长素含量。
Salkowski试剂显色法是一种经典且有效的生长素检测方法，但由于其操作复杂性和对实验条件要求较高，可能会限制其在某些实验室中的应用。随着新技术的发展，如液相色谱-质谱联用（LC-MS）等技术，为生长素的定量分析提供了更为精确和方便的方法。
UPLC-MS MS测定油蒿叶片中4种内源植物激素
Botanical Research 植物学研究, 2015, 4, 1-7
Published Online January 2015 in Hans. /journal/br /10.12677/br.2015.41001
1
Determination of Four Endogenous
Phytohormones in Artemisia
ordosica Leaves by Ultra-Performance
Liquid Chromatography-Tandem Mass
Spectrometry
Wenhong Deng, Junqi Zhang
Analysis and Testing Center, Beijing Forestry University, Beijing
Email: dengwh@
Received: Dec. 16th, 2014; accepted: Jan. 5th, 2015; published: Jan. 19th, 2015
Copyright © 2015 by authors and Hans Publishers Inc.
This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). /licenses/by/4.0/
Abstract
Four endogenous phytohormones, indole-3-acetic acid, abscisic acid, gibberellins and jasmonic
acid in the leaves of Artemisia ordosica were examined by ultra performance liquid chromatogra-
酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量
.
精品 酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量
姓名：李希东 专业：植物学 学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：
一、实验目的：
掌握间接法测定植物激素的原理和方法；
了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。
二、实验原理：
酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。
间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：
A.间接酶联免疫原理示意图
示反应板（固相载体） 示激素特异抗体（一抗）
示激素（抗原） 示非特异二抗
示蛋白质·激素复合物 示标记酶
本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:
Ab十H十HP=AbH十AbHP .
大豆异黄酮研究进展文献综述1
大豆异黄酮开发及研究进展
[摘 要] 大豆异黄酮是大豆中的一类具有广泛营养学价值和健康保护作用的多酚化合物，引起了国内外学者的广泛关注。研究表明，大豆异黄酮作为一种植物性雌激素，具有类雌激素和抗雌激素双重作用，并且在抗肿瘤、预防绝经期妇女骨质疏松症以及预防心血管疾病等方面的作用也得到了流行病学和实验数据的有力支持。本文对近年来国内外大豆异黄酮的生理功能的相关研究报道进行了分析整理，同时对大豆异黄酮的结构、代谢以及发展前景做了介绍。大豆异黄酮是大豆生长过程中形成次生代谢产物，具有多种生物活性；近年来，大豆异黄酮已成为大豆最引人注目功能成分之一，也是食品与营养学研究热点之一。该文介绍大豆异黄酮的结构、性能、分布、提取分离、检测技术，糖苷水解方法及大豆异黄酮国内研究现状，且分析大豆异黄酮市场状况及研究前景。
[关键字] 大豆异黄酮；大豆异黄酮糖苷；大豆；功能性食品
1 大豆异黄酮概述
1.1 大豆异黄酮组成及结构
大豆含有大量活性成分，被人们称为“功能性成分宝库”。大豆异黄酮是大豆生长中形成一类次生代谢产物，属于黄酮类化合物中异黄酮类成分，主要是指以3–苯并吡喃酮为母核化合物。迄今为止，从大豆中共分离出12 种大豆异黄酮异构体，分为游离型苷和结合型糖两类，其中苷元占总量2%~3%，包括染料木素（Genistein）、大豆苷元（Daidzein）和黄豆黄素（Glycitein）三种。结合型糖苷由三种苷元衍生而成，占总量97%~98%，主要以染料木苷（Genistin）、大豆苷（Daidzin）和6”–O–丙二酰基染料木苷等九种形式存在（Philippe 等，2004；Chung
等，2005）。其中主要成分有三种，染料木素、大豆苷元和黄豆黄素，它们具有共同母核结构，染料木素为母核5、7、4 位被羟基取代三羟异黄酮，大豆苷元和黄豆黄素均为7、4 被取代二羟异黄酮，其中黄豆黄素母核6位存在甲氧基。在天然状态下，这三种异黄酮母核与葡萄糖以β–糖苷键连接，以异黄酮葡萄糖苷形式存在于大豆中，分别称为染料木苷（Genistin）、大豆苷（Daidzin）和6– 甲氧基黄豆苷（Glycitin）。大豆在加工、发酵或体外水解时，糖苷基脱离可释放出游离异黄酮糖苷配基〔1〕。Hosny等曾从大豆醇法提取乳清中分离鉴定出三种新的异黄酮，使大豆中异黄酮数量增加到15种。但由于它们不是从大豆中直接分离而出，是否是大豆特征成分还有待进一步证实〔2〕。
植物生理复习题
高级植物生理复习题
1 一、光合作用的气孔与非气孔限制，如何判断?气孔限制值的计算方法，优缺点。
气孔限制：由于不良环境造成的气孔关闭，使气孔阻力增大，从而导致叶片光合速率下降
非气孔限制：不是由于气孔关闭引起的，由于同化力不足，叶肉光合活性下降等原因引起的光合速率变化
气孔限制、非气孔限制的判据
Ci和Ls的变化方向：Ci下降和Ls上升表明气孔导度降低是主要原因
Ci上升和Ls下降表明主要原因是非气孔因素
气孔限制值计算
1、根据阻力值计算：测出CO2扩散的总阻力、气孔阻力和叶肉阻力，则可算Ls
Ls=1-Ci’/Ca’(Ls变化在0~1之间)。
缺点：只适用于CO2供应为限制因子的情况，即Pn—CO2曲线的直线上升阶段。
2、根据光合值的计算：
Ls=1-A/A0（A0为Ci’=Ca’）。
优点：计算值可以避免对气孔限制值的过分夸大。
缺点：必须测出Pn-Ca’与Pn-Ci’两条曲线，手续麻烦；逆境下光合很弱，Pn值太小，计算误差太大，甚至难以计算。
二、叶绿素荧光诱导动力学曲线，可以测定哪些叶绿素荧光参数？有何意义？
叶绿素荧光诱导动力学曲线是指：经过暗适应后的叶片从黑暗中转入光下叶片的荧光产量随时间而发生的动态变化称Kautsky效应，荧光的这种动态变化所描绘出的曲线即Kautsky曲线。
暗适应的植物叶片的荧光诱导动力学曲线（A：快相动力学 B：慢相动力学）
可以测定的参数有：
Fo：最小荧光（基础荧光或原始荧光），是PSⅡ反应中心处于完全开放时的荧光产量。
Fo’：光适应下初始荧光。
Fs：稳态荧光。
Fm：最大荧光，是暗适应的光合机构全部PSⅡ中心处于完全开放时的荧光产量。
Fm’：光适应下最大荧光。
Fv=Fm-Fo：可变荧光，暗适应最大可变荧光，反映QA的还原情况。
Fv’=Fm’-Fo’：光适应下可变荧光。
Fv/Fm：暗适应下PSⅡ最大光化学效率，反映PSⅡ反应中心最大光能转换效率。
植物激素的酶联免疫吸附测定法(ELISA)
植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）
免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。
植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式（见下图），一种是在固相载体上直接包被抗体（直接法，先包被二抗，再加一抗），另一种是包被抗原（间接法）。
直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。间接法的原理可用下式表示：
Ab+H+HP=AbH+AbHP
其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H量的多少。
材料、试剂及设备
1 材料
各种新鲜植物材料
2 仪器设备
研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。
3 试剂
(1) 包被缓冲液：称取１.５g Na2CO3, 2.93g NaHCO3, 0.2g NaN3（可不加）, 用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为9.6
(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 ·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法
植物激素是一类由植物自身合成并参与生长发育调控的活性物质，对植物的生长发育起着重要作用。因此，准确测定植物激素的含量对于研究植物生长发育调控机制具有重要意义。本文将介绍几种常用的植物激素测定方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）
高效液相色谱法是目前应用最广泛的植物激素测定方法之一。该方法基于植物激素在高效液相色谱柱上的保留时间和峰面积，通过与已知浓度的标准品比较，可以计算出待测样品中植物激素的含量。高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，但需要专用的仪器设备，操作较为复杂。
二、气相色谱法（GC）
气相色谱法是另一种常用的植物激素测定方法。该方法通过将待测样品中的植物激素转化为易挥发的衍生物，然后在气相色谱柱上进行分离和定量分析。气相色谱法具有测定灵敏度高、分离效果好的特点，但需要对样品进行预处理，并且对仪器的稳定性要求较高。
三、酶联免疫吸附法（ELISA）
酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学测定方法，也可以用于测定植物激素的含量。该方法通过将植物激素与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗进行检测，最后通过比色反应或发光反应来测定植物激素的含量。酶联免疫吸附法具有操作简便、成本较低的优点，但需要特异性较好的抗体。
四、放射免疫测定法（RIA）
放射免疫测定法是一种使用放射性同位素标记的植物激素进行测定的方法。该方法通过将放射性同位素标记的植物激素与待测样品中的植物激素结合，然后通过放射性计数来测定植物激素的含量。放射免疫测定法具有灵敏度高、测定范围广的特点，但需要使用放射性同位素，存在辐射危险。
五、质谱法（MS）
质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定微量的植物激素。该方法通过将待测样品中的植物激素通过质谱仪进行分子质量分析，从而测定植物激素的含量。质谱法具有高灵敏度、高分辨率的特点，但需要专用的仪器设备和较高的技术水平。
植物激素测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法和质谱法等。不同的测定方法适用于不同的植物激素，研究人员可以根据自己的需要选择合适的方法进行测定。随着科学技术的不断发展，植物激素测定方法也在不断更新，为研究植物生长发育调控机制提供了强有力的工具。
【论文】高效液相色谱法检测植物激素方法的建立
高效液相色谱法检测植物激素方法的建立
摘 要
植物激素是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的几类微量有机
物质。也被称为植物天然激素或植物内源激素。它们在细胞分裂与伸长、组
织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等
方面，分别或相互协调地调控植物的生长、发育与分化。由于它在植物体内
含量甚微，一般水平为1000 ng/g鲜重，建立一种有效，简便的检测方法
对于研究植物激素具有指导性意义。目前植物激素的定性和定量分析主要
以理化方法为主，理化测试法包括气相色谱法、液相色谱法、气象－质谱联用
等。
本次研究是利用高效液相色谱法来检测植物体内的酸性激素，即吲哚乙
酸IAA,吲哚三丁酸IBA，赤霉素GA3,以及脱落酸ABA。以HPLC进行分析测
试，非常适合用于分析那些不能汽化或者在易于裂解不稳定的物质，用HPLC分
析植物激素（IAA、IBA、GA3、ABA），采用二极管阵列检测器检测，本次研究
的前处理方法为固相萃取法。
通过本次实验，得到了一种简便易操作的前处理方法，找到了液相色谱
的最佳工作条件，并通过检测实际样品，证明了该方法是一种有效可行的
植物酸性激素的定性定量分析方法。
关键字：植物激素，提取，高效液相色谱。
I 高效液相色谱法检测植物激素方法的建立
Abstract
Plant hormone is several kinds of trace of organic matter that
synthesized in the plant,and it have significant effect on plant growth. They
separately or coordinatively regulate of plant growth, development and differentiation. Because it is a trace contect in plants and general level, 1000 ng / g in fresh weight. Therefore, the establishment of an effective and simple detection method for the study of plant hormones is very significant.Present plant hormones qualitative and quantitative analysis mainly based on physical and chemical methods,
GPC-HPLC-MS·MS测定植物组织中IAA与 ABA的方法
Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2017, 7(2), 131-138 Published Online May 2017 in Hans. /journal/aac https:///10.12677/aac.2017.72018
Determination of IAA and ABA in Plant
Tissue by the GPC-HPLC/MS/MS
Liu Yang1, Shuai Liu1, Zongyi Wang2, Qingqin Cao3, Jianli Wang1, Yu Xing1, Ling Qin1*
1Beijing Key Laboratory of New Technology in Agricultural Application, College of Plant Science and Technology, Beijing University of Agriculture, Beijing 2Beijing Key Laboratory of Safety Detection and Control on Harmful Microbes and Pesticide Residues in Agricultural Products, Beijing University of Agriculture, Beijing 3College of Biological Science and Engineering, Beijing University of Agriculture, Beijing Collaborative Innovation Center for Eco-Environmental Improvement with Forestry and Fruit Trees, Beijing University of Agriculture, Beijing Received: May 8th, 2017; accepted: May 24th, 2017; published: May 27th, 2017 Abstract The effectiveness and efficiency of the plant hormone detection is a prerequisite for plant re-search. The sample was purified with the GPC system, and the method employed HPLC-MS/MS for multiple reaction monitoring of concentrations of IAA, ABA, and deuterated IAA and ABA analogs. The condition of extraction and purification of hormones were optimized by orthogonal design. The results show that the composite of 0.5 g samples, 80% methanol extraction solvent, concentration temperature 35˚C and C18 cartridge column for solid-phase extraction (SPE), were optimal extraction procedure for each type of plant tissue. The contents of IAA and ABA as high as 20.34 ng/g and 789.3 ng/g were achieved by this method, respectively; the detectable limits were 2.36 ng/g and 31.95 ng/g; the recoveries were 70.43% and 80.17%; the RSD were 1.87% and 2.26%. Keywords
油菜素甾醇激素分析的研究进展
２０１ １年２川 Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０ｌ ｌ 色 谱 已 １青 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｖｏ１．２９ ＮＯ．２ ｌ０５～ｌｌ０
专论与综述 ＤＯＩ：ｌ０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．Ｉｌ ２３．２０１ １．００ｌＯ５
摘要：油菜素甾醇是一类具有高生理活性的甾体激素，在植物中含量低，所在基体复杂。目前，要实现该激素的高 效分离和准确定量分析仍存在很大的困难。本文综述了油菜素甾醇样品前处理方法及其分析检测技术的研究进 展 共引用文献４９篇 关键词：油菜素甾醇；植物激素；样品前处理；分析；综述 中图分类号：０６５８ 文献标识码：Ａ 文章编号：ｌ０００—８７１ ３（２０１１）０２—０ｌＯ５—０６
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｒａｓｓｉｎｏｓｔｅｒｏｉｄｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ａｓ ａ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｃｔｉｖｉ— ｔｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ。ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｍａｔｒｉｘ ｏｆ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｕｌｔｒａ—ｔｒａｃｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ＯＣ—
ｃｕｒｒｉｎｇ ｂｒａｓｓｉｎ０ｓｔｅｒＯｉｄｓ ｍａｋｅ ｔｈｅｉｒ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｖｅｒｙ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ．Ｔｈｉｓ ｒｅｖｉｅｗ
ｓｕｍｍａｒｉｚｅｓ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒａｓ— ｓｉｎｏｓｔｅｒＯｉｄｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｂｒａｓｓｉｎｏｓｔｅｒｏｉｄｓ；ｐｌａｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ；ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ；ａｎａｌｙｓｉｓ；ｒｅｖｉｅｗ
ｌ９７６年美国农业部研究组将大约６０种植物的
花粉提取物施于菜豆幼苗第二节间，发现有半数的