微生物实验-培养基配制和灭菌-new100
实验一培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。
配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。
2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。
由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。
3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。
用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。
4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。
培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。
2、培养基配制时的注意事项。
四、提交实验报告附：MS培养基配方。
微生物实验
①标 本
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
操作步骤如下: (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水
平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可 变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的 中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
实验一培养基的配置、灭菌与无菌操 作技术
1、明确培养基的配制原则，掌握配制培养基的一般方法 和步骤； 2、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法，了解玻璃器皿的灭 菌方法和原理； 3、了解几种常用灭菌方法的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，。
微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭 菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包 装方法均有一定的要求。清洁的玻璃器皿是实验 得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防 止污染杂菌。空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若 用湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎。
为什么要将培养基倒置培养？
显微镜概述 微生物的个体微小，必须借助显微镜才能观察到。因
此，显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工 具。所以，了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握 不同显微镜的使用方法是很有必要的。
显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。光学 显微镜有普通光学显微镜、相差显微镜、微分干涉差显微 镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜和荧光显 微镜。下面主要介绍普通光学显微镜。
一、目的要求 1.学习显微镜的结构、功能和使用方法。 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3.学习微生物涂片、染色的操作技术；
4.掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；
5.掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。
实验七 培养基的配制和灭菌
（二）培养基灭菌
培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便 可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证 灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后， 可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌 和干热灭菌。一般培养基和水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃 器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121℃，15-20分钟， 干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿 热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热 穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又 可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。
高压蒸汽灭菌步骤如下： 高压蒸汽灭菌步骤如下：
灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 1. 灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 接通电源， 2. 接通电源，进行加热 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开， 3. 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开，待排出大气后 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2 0.5kg/cm2时再 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 当压力达1.05kg/cm2 1.05kg/cm2时 此时灭菌器内的温度为121℃ 121℃， 4. 当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为121℃， 维持20min 对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、 20min。 维持20min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等 物时，应适当降低压力，延长时间。 物时，应适当降低压力，延长时间。 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时， 5. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖， 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品
实验一 微生物培养基的制备与灭菌知识讲解
实验一微生物培养基的制备与灭菌（8课时）一、目的要求1、学习配制微生物培养基的一般方法和步骤。
2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。
二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。
由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。
三、实验材料1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L的NaOH和1mol/L HCl溶液。
2、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。
3、其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净，然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。
（二）牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、培养基配制（1）称量：按培养基配方计算出各成分的用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中。
注意：称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。
称药品用的药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。
（2）溶解：用量筒称量所需体积的水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水），倒入烧杯中，用玻璃棒搅动溶解即可。
（3）调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH，可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl 溶液进行调节。
调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。
边加边搅拌，并不时用PH试纸测试，直至达到所需pH为止。
注意：pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
2、制备液体培养基（1）用量筒准确量取20ml培养基，倒入100ml三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。
微生物学实验-1培养基的制备与高压蒸汽灭菌
2. 放回内层锅，并装入待灭菌物品。 放回内层锅，并装入待灭菌物品。
3. 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的 加盖， 排气槽内。 排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相 对的两个螺 栓。
4. 通电加热，待冷空气完全排尽后，关上排气 通电加热，待冷空气完全排尽后， 阀。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维 当锅内压力升到所需压力时，控制热源， 持压力至所需时间。本实验用 持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa，121.5℃， ， ℃ 20min灭菌。 灭菌。 灭菌 5. 灭菌所需的时间到后，关闭电源，让灭菌锅 灭菌所需的时间到后，关闭电源， 内温度自然下降，当压力表降至“ 时 内温度自然下降，当压力表降至“0”时，打开排 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 6. 将取出的灭菌培养基放入 ℃温箱培养 将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h， ， 经检查若无杂菌生长，即可待用。 经检查若无杂菌生长，即可待用。
6. 加塞 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并保 证有良好的通气性能。 证有良好的通气性能。 7. 包扎 在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时 在棉塞外包一层牛皮纸， 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。注明培养 基名称、组别、配制日期。 基名称、组别、配制日期。 8. 灭菌 将上述培养基以 0.103 MPa 121℃ ， ℃ 20min高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌
实验目的
了解高压蒸汽灭菌的基 本原理及应用范围。 本原理及应用范围。 学习高压蒸汽灭菌的操 作方法。 作方法。
实验三 培养基的配制、灭菌及混合微生物的分离和纯化培养
试管培养：
1,准备干净试管 ；
2,培养基的配制及试管分装；
3,含培养基的试管灭菌；
4,灭菌后试管趁热摊斜面；
5,试管无菌接种
6,恒温箱中培养
7,菌种的保存
实验 三 微生物实的培验养 内容（3人为小组单位）
6X 培养皿 包扎，干热灭菌，160度，2h
实验要求
每人完成
培养皿 2 个，混合菌种划线分离用；
（ 一般每个皿可加10···15ml 的培养基）
试管 1 个，做试管斜面用；
实验 三 微生物的培养
实验过程及内容
一、器皿的准备（30 分钟内完成）
空白培养皿包扎，干热灭菌，160度，2 h
二、培养基的配制、分装及灭菌（ 75 分钟完成）
六、在一定温度下培养，几天后至可见菌落，镜检。
实验 三 微生物的培养
微生物实验室培养的基本操作程序
培养皿作为培养容器时： 1,空白培养皿包扎、灭菌 2,培养基的配制 3,培养基的灭菌 4,倒平板 5,平皿无菌接种 6,恒温箱中，倒置培养 7,菌种的保存
实验 三 微生物的培养
如何实现：烘箱160-170 ℃下加热1-2h，
实验 三 微生物的培养
常用灭菌、无菌技术
4,高温高压蒸气灭菌: 系指用高压饱和水蒸气加热杀灭微生物的方 法。能杀灭所有细菌繁殖体和芽孢，适用于耐 高温和耐高压蒸汽的所有药物制剂 、玻璃容 器、金属容器、瓷器、橡胶塞、滤膜过滤器等。
常用灭菌温度（蒸气表压）和时间： 含糖分高、或含氨基酸高的培养基 115℃、30min； 大多数，比较耐高温培养基 121℃、20min；
实验 三 微生物的培养
实验五微生物培养基配制与灭菌
过滤除菌法：
不能用加热灭菌的液体物质（如维生 素、血清），一般可用细菌过滤器进 行除菌。
培养基和玻璃器材的灭菌方 法
第三十二页，共七十三页。
培养基和玻璃器材的灭菌方法
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使 室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增 强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层 玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀 菌。
K2HPO4 KCl
2.0 g 1.0 g
0.5 g
MgSO4
FeSO4 蔗糖
0.5 g
0.01 g 30g
琼脂
自来水
pH
20 g
1000 mL
自然
第十七页，共七十三页。
LB(Luria-Bertani)培养基
1000mlLB培养基的配方
胰蛋白胨 (Tryptone)
10g
酵母提取物(Yeast extract) 5g
第一页，共七十三页。
微生物培养基的
配制与灭菌
第二页，共七十三页。
目的要求
1.明确培养基的配制原理和方法，掌握其配制的一般方法 和步骤。
2.了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽 灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方 法。（预习）
第三页，共七十三页。
消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天 平、工作台、手等
第四十三页，共七十三页。
（四）无菌操作
1、目的：
（1）是保证待检物品不被环境中微生物的污 染；
（2）是防止被检微生物在操作中污染环境或感染
培养基的配制
实验五微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。
培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。
它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。
所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。
培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。
培养基的种类：根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。
从培养基的物理状态来分：液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。
固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。
半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。
微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。
琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。
是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。
一、目的要求l. 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2. 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3. 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。
二、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。
2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。
3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。
实验二 微生物培养基的配制和灭菌共53页
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
实验二 微生物培养基的配制和灭菌
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处ห้องสมุดไป่ตู้始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
培养基的配制与灭菌的实验原理
培养基的配制与灭菌的实验原理1. 培养基的配制1.1 配制的基本概念好啦，各位小伙伴，今天我们要聊聊培养基的配制，听上去是不是有点小复杂，但别急，让我们一起来简单搞懂这玩意儿。
培养基呢，就是我们用来培养微生物的“餐桌”，给它们提供一切所需的营养，好让它们在实验室里像“锅里煮的饺子”一样，茁壮成长。
要想培养基配制得恰到好处，就得搞清楚它的成分，这些成分一般包括碳源、氮源、矿物质、维生素等等，基本上就是“食材”的大合集。
我们会根据不同的微生物选择不同的“食谱”，这样才能让它们在我们的“餐桌”上大快朵颐。
比如，细菌特别喜欢在“营养琼脂”这个大餐上打滚，而真菌则偏爱“马铃薯葡萄糖培养基”，就像你喜欢披萨，他喜欢汉堡一样。
1.2 配制步骤说到配制过程，可得细细说说。
这可不是随便往一盆里搅几下就完事儿的事儿。
首先，我们得准备好各种原料，按照规定的比例把它们混合在一起。
像是“调味料”，我们也得精确计算，比如要加多少克的氨基酸，多少克的糖类，精确得就像给蛋糕配方量糖一样。
混合好了之后，还得将它们溶解在水里，搅拌的时候可别急，慢慢搅拌，避免出现“结块”的情况。
然后，接下来就要将混合液加热，通常是用高温高压的方式来杀死液体中的所有微生物，这一步就像是在做“清汤”，得彻底干净。
2. 灭菌的必要性2.1 为什么要灭菌那么，为啥培养基在配制好后还得做一轮灭菌呢？这就好比是咱们在吃饭前，要把手洗干净一样。
灭菌的目的是为了杀死所有可能的细菌、真菌和其他微生物，确保它们不会在咱们的培养基里横行霸道，影响实验结果。
试想一下，如果咱们的培养基里还有其他微生物，那就像是餐桌上多了几个“讨厌的客人”，它们不仅抢走了微生物的“食物”，还可能把“餐厅”弄得一团糟。
灭菌的过程，就是通过高温、高压或化学药品，把所有可能的干扰因素一网打尽，确保微生物的培养环境是“干净整洁”的。
2.2 常用的灭菌方法谈到灭菌，常用的方法有几种。
最常见的就是高压蒸汽灭菌，这种方法就像是给培养基做“深层清洁”，通过高温高压杀死所有微生物。