主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验 第九章 酶免疫技术
第九章酶免疫技术第一节酶免疫技术的特点酶免疫技术是将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。
它是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原，此结合物既保留了抗体或抗原的免疫学活性，同时又保留了酶对底物的催化活性。
在酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应完成后，加入酶的相应底物，通过酶对底物的显色反应，对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析。
它通过利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高了抗原抗体反应的敏感性。
它具有检测灵敏度高、特异性强、准确性好、酶标记试剂能够较长时间保持稳定、操作简便、对环境没有污染等优点，而且容易与其他技术偶联衍生出适用范围更广的新方法。
一、酶和酶作用底物（一）酶的要求1.酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。
2.易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。
3.作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。
4.酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好。
5.酶、辅助因子及其底物对人体无害，酶的底物易于配制、保存，酶及其底物应价廉易得。
（二）常用的酶1.辣根过氧化物酶（HRP）2.碱性磷酸酶（AP）3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）（三）常用的底物1.辣根过氧化物酶的底物（1）邻苯二胺（OPD）0PD均以片剂或粉剂供应，临用时再溶解于相应的缓冲液中。
（2）四甲基联苯胺（TMB） ELISA中应用最广泛的底物。
（3）其他：5-氨基水杨酸（5-ASA）和2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）也是HRP常用的底物。
2.碱性磷酸酶（AP）的底物3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）常用对-硝基苯磷酸脂（p-NPP），p-NPP经AP作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为405nm。
常用4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU），酶作用后，生成高强度荧光物4-甲基伞形酮（4-MU），其敏度性较HRP高30～50倍，但测量时需用荧光计。
二、酶标记抗体或抗原酶标记抗体或抗原是指通过化学反应或免疫学反应，让酶与抗体或抗原形成结合物，也称酶标志物或酶结合物。
（一）酶标记抗体或抗原的制备用于制备酶标志物的抗原要求纯度高，抗原性完整（半抗原应先与大分子载体蛋白交联）。
抗体则不仅需要特异性好、效价高、亲和力强以及比活性较高，而且还需要能批量生产和易予分离纯化。
目前常根据具体方法要求选用单克隆抗体、多克隆抗体经纯化的Ig组分、Ig的Fab'和F（ab’）2片段等。
1.戊二醛交联法2.改良过碘酸钠法目前用于HRP标记抗体或抗原的最常用方法（二）酶标志物的纯化标记完成后应除去反应液中的游离酶、游离抗体或抗原。
常用的纯化方法有葡聚糖凝胶C-200／G-150过柱层析纯化和50%饱和硫酸铵沉淀提纯。
（三）酶标志物的鉴定质量鉴定包括酶活性和抗体（抗原）的免疫活性鉴定。
常用免疫电泳或双向扩散法，出现沉淀线表示酶标志物中的抗体（抗原）具有免疫活性。
沉淀线经生理盐水反复漂洗后，滴加酶的底物溶液，若在沉淀线上能显色，则表示酶标志物中的酶活性仍保留。
三、固相载体（一）固相载体的要求结合抗体或抗原的容量大；可将抗体或抗原牢固地固定在其表面，经长期保存和多次洗涤也不易脱落；不影响所固定的抗体或抗原的免疫反应性，而且为使反应充分进行，最好其活性基团朝向反应溶液，固相方法简便易行，快速经济。
（二）固相载体的种类和选择1.塑料制品2.微粒3.膜载体（三）包被与封闭1.包被将抗原或抗体结合在固相载体上的过程称为包被。
2.封闭需用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清再包被一次，消除非特异性显色，此过程称为封闭。
第二节酶免疫技术的分类酶免疫技术按实际应用目的可分为两大类：酶免疫测定（EIA）：液体标本中抗原或抗体的定性和定量。
酶免疫组织化学技术：组织切片或其他标本中抗原的定位。
根据抗原抗体反应后是否需将结合和游离的酶标志物分离，EIA一般可分为均相和异相两种类型。
EIA反应原理简示如下（标记抗体过量）：Ag十Ab—E→AgAb—E+Ab—EAg为待检测抗原，AgAb-E为被结合酶标抗体，Ab-E先游离酶标抗体。
异相EIA为抗原抗体反应后；需先将AgAb-E与Ab-E分离，然后再测定AgAb-E或AbE催化底物显色的活性，最后推算样品中Ag的含量。
EIA可分为液相EIA和固相EIA：前者反应原理同放射免疫分析，试剂抗原（抗体）和待测抗体（抗原）均为液体，免疫反应在液体中进行，最后需用分离剂将游离与结合标志物分离后测定。
固相EIA则是先需制备一种固相的试剂抗原（抗体），再与样品待测抗体（抗原）以及酶标抗原（抗体）反应，经洗涤去除未结合的游离标志物后，即可对结合于固相载体的抗原抗体复合物进行测定。
EIA均相法反应原理如下：均相法则是利用Ab-E结合Ag形成AgAb-E复合物后，标记酶（E）的活性会发生改变，可以在不将AgAb-E 与Ab-E分离的情况下，通过直接测定系统中总的标记酶活性改变，即可确定AgAb-E的形成量，并进而推算出样品中待检Ag的浓度。
均相酶免疫测定：均相酶免疫测定主要用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定。
均相法的优点是适合于自动化测定。
最早取得临床实际应用的均相酶免疫试验是酶放大免疫测定技术（EMIT）。
前最为成功的是克隆酶供体免疫测定（CEDIA）。
（一）酶放大免疫测定技术（EMIT）基本原理是半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的活性。
当酶标半抗原与抗体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性中心受到影响而活性被抑制。
反应后酶活力大小与标本中的半抗原量呈一定的比例，从酶活力的测定结果就可推算出标本中半抗原的量。
（二）克隆酶供体免疫分析（CDEIA）DNA重组技术可分别合成某种功能酶（如β-D半乳糖苷酶）分子的两个片段，大片段称为酶受体（EA），小分子称作酶供体（ED），两者单独均无酶活性，一定条件下结合形成四聚体方具酶活性。
克隆酶供体免疫测定（CDEIA）的反应模式为竞争法。
标本中的抗原和酶供体（ED）标记的抗原与特异性抗体竞争结合，形成两种抗原抗体复合物。
ED标记的抗原与抗体结合后由于空间位阻，不再能与酶受体（EA）结合，而游离的ED标记的抗原上的ED可和EA 结合，形成具有活性的酶，加入底物测定酶活性，酶活力的大小与标本中抗原含量成正比。
二、异相酶免疫测定异相酶免疫测定是目前应用最广泛的一类标记免疫测定技术。
依据测定方法是否采用固相材料以吸附抗原或抗体，又分为液相和固相酶免疫测定两类。
（一）液相酶免疫测定主要用于检测样品中极微量的短肽激素和某些药物等小分子半抗原，近年来的发展使其灵敏度可达ng 至pg水平，与放射免疫测定相近。
（二）固相酶免疫测定如常用的酶联免疫吸附试验（ELISA）。
第三节酶联免疫吸附试验一、基本原理1.把抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
2.将抗原或抗体与某种酶连接成酶标记抗原或抗体，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性。
3.测定时将受检样品（含待测抗原或抗体）和酶标记抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物。
4.用洗涤的方法将固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
5.加入底物后，底物被固相载体上的酶催化变成有色产物，通过定性或定量检测有色产物量即可确定样品中待测物质含量。
特点：由于酶催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的灵敏度。
二、方法类型及反应原理三个必要的试剂：①固相的抗原或抗体；②酶标记的抗原或抗体；③酶反应的底物。
抗原测定：蛋白大分子抗原用得最多的是双抗体夹心法。
只有单个抗原决定簇的小分子，则使用竞争抑制法。
抗体测定：通常使用间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法等。
（一）检测抗原的方法属于非竞争结合测定，是检测抗原最常用的方法，适用于检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原。
1.双抗体夹心法双抗体夹心：固相抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物。
双抗体夹心法只适用于二价或二价以上的较大分子抗原的测定，不能用于小分子半抗原的检测。
临床上常用于乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等的检测。
2.双位点一步法针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的决定簇的两种单克隆抗体，即包被使用一种单抗，酶标记使用另一种单抗。
测定时将含待测抗原标本和酶标抗体同时加入进行反应，两种抗体互不干扰，经过一次温育和洗涤后，即可加入底物进行显色测定。
当待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应（hook effect），显色降低，严重时可出现假阴性结果。
3.竞争法主要用于测定小分子抗原。
原理为先用抗小分子的特异性抗体包被固相，然后同时加入待测样本和酶标记的小分子，待测样本中的小分子与酶标小分子竞争与固相上的抗小分子的特异性抗体结合，温育一定时间后洗涤，加入酶底物显色。
竞争法的特点：酶标记抗原与样品中的非标记抗原具有相同的与固相抗体结合的能力。
反应体系中，固相抗体和酶标抗原是固定限量，且前者的结合位点少于酶标记和非标记抗原的分子数量和。
免疫反应后，结合于固相载体上复合物中被测定的酶标抗原的量（酶活性）与样品中非标记抗原的浓度成反比。
（二）检测抗体的方法1.间接法将抗原包被在固相载体上，加入待测样本，使样本中待测抗体与固相载体上的抗原结合；加入酶标二抗，在固相上即形成固相抗原-待测抗体-酶标抗抗体复合物，加入底物后根据显色的深浅确定待测抗体含量。
检测抗体最常用的方法，属非竞争性结合试验。
间接法测抗体在目前应用最多的是丙型肝炎病毒抗体、人免疫缺陷病毒抗体和梅毒螺旋体抗体等的检测。
2.双抗原夹心法临床上乙型肝炎表面抗体的测定常用此法。
3.竞争法乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）的检测。
4.捕获法又称反向间接法。
主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定，目前最常用的是病原体急性感染诊断中的IgM型抗体。
如：甲型肝炎HAV-IgM抗体和乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体的检测。
第四节酶免疫测定的应用均相酶免疫测定主要用于药物和小分子物质的检测非均相免疫测定中的ELISA广泛用于传染病的诊断，如肝炎病毒（甲肝抗体、“乙肝两对半”、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒\结核分枝杆菌、幽门螺杆菌等。
也用于一些蛋白质检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等）。
酶免疫技术
安徽理工大学医学院（教案续页）基 本 内 容辅助手段和时间分 配 第十章 酶免疫技术 第一节酶免疫技术的特点一、概念：免疫技术： Ag+Ab → AgAb标记的免疫技术： Ag*+Ab → Ag*Ab标记物的作用有二：一是便于观察反应结果，二是提高测定的敏感性二、标记免疫技术一般分为两类：免疫组化技术（ immunohistochemical technique ） 免疫测定（ immunoassay ） 三、根据标记标记物不同分类： 荧光抗体技术酶免疫技术 放射免疫分析 发光免疫技术生物素 - 亲和素免疫技术 金免疫技术第二节 酶免疫化学技术的分类一、酶免疫技术的定义： 二、酶免疫技术的分类：均相酶免疫测定1 、酶扩大免疫测定技术 （ enzyme-multiplied immunoassay technique ，EMIT ）：克隆酶供体免疫测定（cloned enzyme donorimmunoassay,CEDIA ） 异相酶免疫测定1、异相液相酶免疫测定2、固相酶免疫测定第三节 酶联免疫吸附试验Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA) 一、基本原理二、方法类型及反应原理抗原测定方法：双抗体夹心法 ( 双位点一步法 ) 、竞争法 抗体测定方法： 间接法、双抗原夹心法、竞争法0.6学时0.8学时在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗原或抗体，即“免疫吸附（immunosorbent）（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）（3）酶反应的底物。
（一）双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法（二）双位点一步法：应用两个单克隆抗体作双抗夹心法测定，两步抗原抗体反应同时进行且不互相干扰。
注意：1 、该法仅适用于具有两个或两个以上表位的抗原的检测。
2 、当待测抗原相当高时，出现“钩状现象”（三）双抗原夹心法：（四）间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法 .其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。
其他主治系列-临床医学检验【代码：352】-临床免疫学和免疫学检验(一)酶免疫技术
其他主治系列-临床医学检验【代码：352】-临床免疫学和免疫学检验（一）酶免疫技术[单选题]1.酶免疫技术用于样品中物质的定量测定（EIA）是基于A.酶标记物参与免疫（江南博哥）反应B.酶催化免疫反应，复合物中酶活性与样品测值呈正比C.含酶标记物的免疫复合物中的酶可催化底物成色，其色泽与待测物量相关D.固相化技术的应用，使结合和游离的酶标记物能有效的分离E.酶与抗原或抗体的特异结合正确答案：C参考解析：酶免疫技术是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
[单选题]2.下列对血清中酶活力的测定的描述哪一项是错误的A.可测定产物生成量B.可测定底物消耗量C.需最适pHD.需最适温度E.与底物浓度无关正确答案：E参考解析：酶促反应中需要最适pH、温度及过量的底物，反应速度可用一定时间内产物生成量或底物消耗量来反映。
[单选题]3.酶免疫技术中的酶结合物是指A.酶标记抗原B.酶标记抗体C.酶标记抗原或抗体D.结合在固相载体上的酶E.酶与底物的结合正确答案：C参考解析：酶结合物是指用酶标记后的抗原或抗体。
[单选题]4.用于酶免疫技术的HRP，其RZ值应大于？A.1.0B.2.0C.3.0D.4.0E.5.0正确答案：C参考解析：辣根过氧化物酶（HRP）的纯度用RZ表示，它是以HRP分别在403nm 和275nm处的吸光度比值来表示的。
用于酶免疫技术的HRP，其RZ值应大于3.0。
[单选题]5.在ELISA定性检测中，当弱阳性室内质控物检测为阴性时，以下处理当天的检测结果的方式最为正确的是A.阳性结果可以发出，找到失控原因后，对阴性样本重新进行检测B.先将结果发出，再查找原因C.报告一律不发，找到失控原因后，对所有样本重新进行检测D.阴性结果可以发出，找到失控原因后，对阳性样本重新进行检测E.发出全部报告，下次检测时更换质控品正确答案：A参考解析：由于是弱阳性结果为阴性，主要存在假阴性反应，即有阳性结果定为阴性的可能性。
最新主管检验技师考试临床医学检验学化学讲义第9章心肌损伤的生化标志物
心肌损伤的生化标志物一、酶学标志物（一）肌酸激酶（CK）1.概述：人体三种肌肉组织（骨骼肌、心肌和平滑肌）中都含有大量CK；CK在骨骼肌、心肌、脑组织大量存在，常用于这些疾病的诊断。
2.参考值：采用连续监测法。
男：80～200U/L女：60～140U/L3.临床意义：（1）当发生AMI时，CK活性在3～8h升高，血中半寿期约为10～12h，峰值在10～36h之间，2～4d 后回复至正常水平。
AMI时CK升高一般为参考值的数倍，但很少超过30倍。
（2）若AMI后及时进行溶栓治疗出现再灌注，则CK活性成倍增加，达峰时间提前。
如在发病4h内CK 即达峰值，提示冠状动脉再通的能力为40%～60%。
（3）施行心律转复、心导管和无并发症的冠状动脉成形术等均会引起CK值的升高。
（4）心脏手术和非心脏手术后都将导致CK活性的增高，且增高的幅度与肌肉的损伤范围的大小以及手术时间的长短密切相关。
心肌炎时CK可轻度增高。
（5）生理性增高：运动后12～20h达到峰值，并维持36～48h。
（6）各种肌肉损伤（如挫伤、手术、肌肉注射、癫痫发作）和疾病（如多发性肌炎、肌炎、横纹肌溶解症、进行性肌营养不良、重症肌无力、甲状腺功能减低出现黏液性水肿）时，CK极度升高。
（7）在急性脑外伤、恶性肿瘤时CK也可增高。
（8）长期卧床，CK可有下降。
4.注意事项：（1）AMI诊断时注意CK-MB与CK的时效性。
24hCK测定意义最大，如小于参考值上限，可排除AMI。
（2）血清、血浆、脑脊液以及羊水等均可作为CK分析的标本。
常用的抗凝剂为肝素。
（3）CK测定过程中，主要的干扰物质是腺苷酸激酶（AK）以及肌激酶，它们在红细胞中含量尤为丰富，可导致结果偏高，故标本应避免溶血。
（二）肌酸激酶同工酶：1.概述：此外在线粒体中还存在一种同工酶（CK-MiMi）。
CK-MB含量随心肌不同部位而不同：前壁＞后壁，右心室＞左心室。
2.参考值：CK-MB活性：10～24U/L，cutofflimit（诊断限）：＞25U/L（免疫抑制-酶动力学法）＜6%totalCK，cutofflimit：＞6%totalCK（琼脂糖凝胶电泳法）MB质量（mass）：男：1.35～4.94ng/ml；cutofflimit：＞5ng/ml（免疫学法）女：0.97～2.88ng/ml；cutofflimit：＞5ng/ml（免疫学法）3.临床意义：（1）CK-MB是诊断AMI最有价值酶学生化指标。
酶免疫检验
1.酶免疫组织化学技术
用于检测组织切片或细胞涂片中的抗原或抗体。 可指示待测反应物的存在和定位。
2.酶免疫测定技术
用于检测液体样本中可溶性抗原或抗体。 根据呈色物的有无和呈色深浅作定性或定量观察。
酶免疫技术的分类
根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的和游离的 酶标记物，可分为：
活性高 有可结合的基团，不影响抗原抗体的免疫活性 反应产物易于判定或测量，方法简单,敏感,重
复性好 酶活性不受样品中其他成分的影响,在均相酶
免疫测定抗原抗体反应后酶活性可被抑制或激 活 本身及产物无危害,性质稳定,价廉易得
常用酶及酶的底物
DH2 + H2O2 → D + 2H2O
底物
受氢体 E 有色物质
② 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标 抗原或抗体，且既保留其免疫活性又保留 酶的活性。
③ 标本中的抗原或抗体、标记抗原或 抗体能按一定的次序与固相载体表面的抗 体或抗原反应。用洗涤的方法使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开。 最后结合在固相载体上的酶量与标本中受 检物质的量成一定的比例。
④加入酶底物，底物被酶催化变为有色产 物，产物的量与标本中受检物质的量直接 相关，故可根据颜色反应的深浅对标本中 的抗原或抗体定性或定量分析。
常用酶
底物
加终止液前颜色 加终止液后颜色
辣根过氧化物酶 邻苯二胺（OPD） （HRP）
橙黄色
RZ>3.1
四甲基联苯胺 （TMB）
蓝色
碱性磷酸酶（AP） 对硝基苯磷酸酯 （p-NPP）
黄色
棕黄色 黄色 黄色
交联法
交联法是以一可同时与酶和抗体（抗原）结合的 交联剂作为“桥”，分别连接酶与抗体（抗原）的方 法，此类方法中目前最常用的是戊二醛交联法，形成
《酶免疫检验》PPT课件
标记免疫技术
广东药学院公共卫生学院 赵晓蓉
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1
基本概念
一、免疫标记与标记免疫的概念
免疫标记技术： 标记物与免疫活性物质的联接技术
标记免疫技术： 以标记免疫物质检测相应靶物质的技术
标记的目的…….?
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2
二、常用的免疫标记物质
类别
标记物
荧光素
FITC、RB200、TRITC
④加入酶底物，底物被酶催化变为有色产
物，产物的量与标本中受检物质的量直
接相关，故可根据颜色反应的深浅对标
本中的抗原或抗体定性或定量分析完整。版ppt
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方法类型及基本原理
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
双抗体夹心法 双位点一步法 间接法 竞争法 捕获法 双抗原夹心法 中和法
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一、双抗体夹心法
属于非竞争结合测定。它是检测抗原最常用的ELISA，适 用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，而 不能用于小分子半抗原的检测。
用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品中被检 测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原酶标抗体免疫复合物。
由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待测抗原 是过量的,因此复合物的形成量与待测抗原的含量成正比。 测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物质量 (OD值)，即可确定待测抗原含量。
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酶免疫技术的分类
根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的和游离的 酶标记物，可分为：
1. 均相法：不需要分离结合和游离的酶标记物，直接 进行测定。
2. 异相法：需要分离结合和游离的酶标记物后才能进 行测定。 固相酶免疫：ELISA 液相酶免疫
酶免疫技术
酶活（高比活性）：RZ值 与酶活性无关，酶活性单 位比RZ值更为重要 .
辣根过氧
化物酶
RZ值：403nm（辅基） 与275nm（主酶）OD值之比
底物为H2O2：催化物无色 还原型染料生成有色氧化
型染料
1.3 酶和酶作用底物
辣根过氧化物酶（HRP）的底物
HRP
DH2+H2O2
D+2H2O
H2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很高
酶
辣根过氧化物酶 （HRP）
底物
邻苯二胺 四甲基联苯胺 氨基水杨酸 2,2‘-胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺 酸-6)铵盐 (ABTS)
显色反
应
橘红色 黄色 棕色 蓝绿色
测定波长 （nm）
492 460 449 642
碱性磷酸酯酶（AP） 4-硝基酚磷酸盐(PNP) 萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐
葡萄糖氧化酶
通过化学反应或免疫学反应，让酶与抗体或 抗原形成的结合物
2.1 酶标记抗原或抗体条件
抗原或抗体
❖ 抗原要求纯度高，抗原性完整。 ❖ 抗体需要特异性好、效价高、亲合力强以
及比活性较高，能批量生产，易纯化。
制备方法要求 ❖ 技术方法简单、产率高，重复性好。 ❖ 标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性。 ❖ 酶标记物稳定 ，不形成聚合物 。
ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰
β-Ｄ－半乳糖苷酶
甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG) 硝基酚半乳糖苷(ONPG)
黄色 红色 黄色 深蓝色
荧光 黄色
400 500 405 420
360,450 420
2. 酶标记抗原或抗体
酶免疫技术的核心组成部分
医学免疫学检验-酶免疫技术2精品PPT教学课件
敏感性、特异性、精确性及应用范围
2020/12/6
2
免疫荧光技术 放射免疫技术 免疫酶技术 免疫电镜技术 免疫胶体金技术 发光免疫测定
2020/12/6
3
2020/12/6
免疫标记技术
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酶免疫技术 Enzyme Immunoassay（EIA）
一、概述
抗原抗体反应＋酶催化反应
肉眼、光学显微镜、电子显微镜、分光 光度计
同一部位呈不同 程度显色
非特异性染色 细胞或间质均匀染 色或更强 无特定部位，无结 构性 无分布规律，某一片 均匀着色
2020/12/6
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非特异性染色：非抗原抗体反应出现的 阳性染色。
原因：非特异性蛋白吸附于高电荷的胶 原或结缔组织上。
2020/12/6
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2、鉴定 免疫活性鉴定：免疫电泳/双扩/ELISA 酶标记率测定：分光光度法
2020/12/6
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（五）固相酶免疫测定仪（酶标仪）
比色 测定波长、吸光度范围、光学系统、检
测速度、震板功能、温度控制、定性和 定量的软件，自动洗板、温育、加样 450nm、492nm、620nm、630nm、 650nm、405nm
液相：待测抗原+酶标抗原+抗体，一次性温育
待测抗原+抗体，温育，加酶标抗原，温育
2固020/相12/6：固相预先吸附抗原或抗体，在其表面反应18
二 、酶免疫组织化学技术
Enzyme Immunohistochemistry
Technique（EIHCT）
(酶)免疫组织化学（免疫细胞化学）： 指带显色剂（酶）标记的特异性抗体或 抗原在组织细胞原位通过抗原抗体反应 和组织化学的呈色反应，对相应抗原或 抗体进行定性、定位、定量测定的技术。
临床医学检验主管技师考试试题和答案（2）
临床医学检验主管技师考试试题和答案（2）临床医学检验主管技师考试试题和答案试题二：1、与特发性血小板减少性紫癜实验室特征不符合的是A、血小板计数明显降低B、骨髓巨核细胞增多C、急性型患者以颗粒型巨核细胞增多为主D、血小板寿命缩短E、血小板相关抗体及补体增高2、血涂片主要所见白细胞为A、单核细胞B、嗜酸性粒细胞C、中性晚幼粒细胞D、中性杆状核粒细胞E、中性分叶核粒细胞3、Ⅰ型超敏反应是由于A、免疫复合物沉积在局部组织引起免疫反应B、IgG沉积在局部组织引起免疫反应C、补体C3沉积在局部组织引起免疫反应D、变应原与固定在细胞表面受体上的特异性IgE结合引起免疫反应E、IgM沉积在局部组织引起的免疫反应4、下列关于继发性血小板减少性紫癜的说法，正确的是A、凝血功能通常减低B、是一种遗传性疾病C、血小板减少并伴有出血D、是一种独立性疾病E、一般没有明确的病因5、正常人血清中的胆红素主要是A、结合胆红素B、胆红素-Y蛋白C、未结合胆红素D、胆红素葡萄糖醛酸酯E、胆绿素6、以下哪项不符合急性淋巴细胞白血病(ALL)的特征A、白血病细胞有明显的质和量异常B、白血病细胞胞质中不见Auer小体C、白血病细胞可进入周围血液D、白血病细胞易浸润肝、脾和淋巴结E、白血病细胞PAS染色可呈阴性反应7、关于外源性代谢途径错误的是A、处理饮食摄入的胆固醇B、处理饮食摄入的三酰甘油C、发生部位在小肠中合成D、发生部位在肝脏E、在小肠中合成CM8、糖尿病酮症会引起A、代谢性碱中毒B、代谢性酸中毒C、呼吸性碱中毒D、呼吸性酸中毒E、复合型酸中毒9、在急性肝炎时，哪一项LDH同工酶活性增高A、LDH1B、LDH2C、LDH3D、LDH4E、LDH510、下列哪种IL可刺激T细胞生长，被称为T细胞生长因子A、IL-1B、IL-2C、IL-5D、IL-8E、IL-1011、患者，男，40岁，有进行性全身淋巴结肿大，反复发热腹泻，体重减轻，查出有卡氏肺囊虫性肺炎并伴有神经系统疾病，疑为AIDS 患者，其HIV病毒的筛选试验是A、免疫扩散法B、免疫印迹法C、ELISA法D、免疫散射比浊法E、淋巴细胞转化试验12、骨髓活检的适应证不包括A、怀疑骨髓纤维化B、全血细胞减少，反复骨穿为“骨髓稀释”C、原因不明的持续发热，血涂片检查不能确诊D、晚期妊娠的'孕妇E、低增生性白血病13、大多数慢性淋巴细胞细胞白血病异常增生的细胞是A、T辅助细胞B、T抑制细胞C、B细胞D、NK细胞E、淋巴系祖细胞14、由A群链球菌引起的疾病不包括A、猩红热B、风湿热C、亚急性细菌性心内膜炎D、蜂窝织炎E、急性肾小球肾炎15、引起出血性肠炎和溶血性尿毒综合症的细菌是A、ETECB、EHECC、EPECD、EIECE、EAggEC16、乙酰胆碱受体的自身抗体与上述有关的自身免疫病是A、重症肌无力B、毒性弥漫性甲状腺肿(Gravesdisease)C、慢性活动性肝炎D、原发性小血管炎E、抗磷脂综合征17、下列哪种是最严重的Ⅰ型变态反应A、呼吸道过敏反应B、皮肤过敏反应C、过敏性皮炎D、全身超敏反应E、消化道过敏反应18、链球菌感染后肾小球肾炎常发生何型变态反应A、Ⅰ型B、Ⅱ型C、Ⅲ型D、Ⅳ型E、Ⅶ型19、Ⅳ型超敏反应根据发病机制，又可称为A、速发型超敏反应B、免疫复合物型超敏反应C、细胞毒型超敏反应D、迟发型超敏反应E、Ⅵ型超敏反应20、吞噬细胞功能的检测选择A、溶血空斑形成试验B、硝酸四氮唑蓝还原试验C、淋巴细胞转化试验D、炭粒廓清试验E、酶释放试验21、选择ELISA的标记酶，必须具备的特异性不正确的是A、具有可与抗原和抗体结合的集团B、标记抗原后，酶活性保持稳定C、当酶标记抗原与抗体结合后，酶活性可出现激活D、酶催化底物反应生成的信号易于测定、重复性好E、标记抗原后，不影响抗原的免疫活性22、下列关于沉淀反应第一阶段的说法，不正确的是A、抗原、抗体特异性结合B、几秒钟至几分钟即完成C、可用散射比浊测定反应结果D、出现肉眼可见的沉淀线或沉淀环E、肉眼见不到免疫复合物23、关于辣根过氧化物酶描述错误的是A、辣根过氧化物酶由无色糖蛋白主酶和亚铁血红素辅基结合成的复合物B、测定辣根过氧化物酶的RZ值，可判断酶活性的高低C、作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分影响D、HRP是目前酶联免疫试验中应用最广标记酶E、RZ值与酶活性无关24、关于酶免疫技术的特性，正确的是A、酶标记物催化抗原反应，使其结果放大，提高了检测的灵敏度B、酶活性易受理化因素的影响，酶标记物稳定性差C、底物以酶催化后的成色，使酶标的免疫反应结果得以放大D、选择高度质量的标记用酶是建立酶免疫技术最重要的前提E、酶免疫技术检测方法较为繁琐25、AB0血型抗原属于A、异种抗原B、同种异体抗原C、独特型抗原D、隐蔽的自身抗原E、异嗜性抗原26、流感病毒最易变异的成分是A、核蛋白B、M蛋白C、甲型流感病毒的HAD、乙型流感病毒的HAE、RNA多聚酶27、补体旁路激活途径首先激活的那-部分是A、C1B、C2C、C3D、C4E、C928、颗粒性抗原在适当电解质参与下与相应抗体结合出现凝集称为A、正向间接凝集反应B、反向间接凝集反应C、直接凝集反应D、协同凝集法E、间接凝集抑制反应29、甲状腺激素的生理生化功能不正确的是A、提高基础代谢率B、增加氧耗和产热C、抑制胆固醇代谢为胆汁酸D、促进骨骼的增殖E、促进中枢神经系统的发育30、细胞内液中的主要阳离子是A、钠离子B、镁离子C、钙离子D、钾离子E、氢离子1、【正确答案】 C【答案解析】急性型患者以幼稚型巨核细胞增多为主。
免疫学检验中的酶免疫技术分析
基础研究免疫学检验中的酶免疫技术分析高 波1 高司晗21吉林省吉林市船营区妇幼保健计划生育服务中心检验科 吉林省吉林市 1320112吉林省吉林市船营区青岛保健院检验科 吉林省吉林市 132011【摘 要】目的：分析免疫学检验中酶免疫技术的应用价值。
方法：选取我院诊治的42例乙型肝炎患者作为研究组，另选取42例健康体检者作为对照组，所有人员均应用酶免疫技术进行免疫学检验，对比两组患者的检验结果。
结果：在研究组的重复性检测结果中，+20%浓度临界值的阳性率≥95%，-20%浓度临界值的阳性率≤5%，检测结果呈阳性者41例，灵敏度为97.2%。
对照组检测结果呈阴性者41例，灵敏度为97.2%。
结论：在免疫学检验中，酶免疫技术具有较高的应用价值，可在临床上推荐。
【关键词】免疫学检验；酶免疫技术；乙型肝炎乙型肝炎是因乙型肝炎病毒感染所致，我国是乙型肝炎流行区域。
一项调查数据显示，我国的乙型肝炎病毒感染者约达10%，对人们的身心健康造成了一定的影响[1]。
乙型肝炎的免疫学检验对其防治与疗效判断具有非常重大的意义。
目前我国进行免疫学检验的方法有很多，酶联免疫技术分析法（enzyme linked Immunosor bent assay，ELISA）是常用方法之一。
本研究为了进一步分析免疫学检验中酶免疫技术的应用价值，选取了我中心（院）2016年2月到2017年2月诊断的42例乙型肝炎患者与健康体检者的临床资料进行回顾性分析，报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料选取我中心（院）诊治的42例乙型肝炎患者作为研究组，所有患者均符合2010年中华医学会肝病学分会与感染病学分会联合修订的《中国慢性乙型肝炎防治指南》诊断分型标准[2]。
患者中，男25例，女17例；年龄22～67岁，平均（38.2±4.8）岁；慢性乙肝携带者15例，慢性活动性乙肝13例，急性乙肝7例，乙肝合并肝硬化5例，肝癌2例。
另选取42例健康体检者作为对照组，对比两组人员的性别、年龄等一般资料，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
2024年检验士、检验师、主管检验师职称考试真题及答案
2024年检验士、检验师、主管检验师职称考试真题及答案一、选择题（每题2分，共40分）1. 以下哪个不是医学检验的基本类型？A. 生物化学检验B. 微生物学检验C. 影像学检验D. 免疫学检验答案：C2. 在进行血液学检验时，以下哪项指标是评估贫血程度的重要指标？A. 血红蛋白浓度B. 白细胞计数C. 血小板计数D. 红细胞比容答案：A3. 以下哪种病原体是引起细菌性痢疾的主要病原体？A. 沙门氏菌B. 志贺氏菌C. 柠檬酸杆菌D. 肠道沙门氏菌答案：B4. 以下哪种方法不属于免疫学检验技术？A. ELISAB. 免疫荧光C. Western blotD. 红细胞沉降率答案：D5. 以下哪种生物活性物质主要参与炎症反应？A. 组织胺B. 皮质醇C. 肾上腺素D. 乙酰胆碱答案：A6. 以下哪个不属于临床生物化学检验范畴？A. 血糖测定B. 肝功能检测C. 尿液分析D. 心电图答案：D7. 在微生物学检验中，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的主要区别是？A. 细菌大小B. 细菌形状C. 细菌细胞壁结构D. 细菌繁殖速度答案：C8. 以下哪种病毒是引起流行性感冒的主要病原体？A. 肠道病毒B. 流感病毒C. 腺病毒D. 呼吸道合胞病毒答案：B9. 以下哪个不属于医学检验的常规项目？A. 血常规B. 尿常规C. 肝功能检测D. 心电图答案：D10. 以下哪个是用于检测病毒抗体的常用方法？A. 红细胞凝集试验B. 免疫荧光技术C. 酶联免疫吸附试验D. 聚合酶链反应答案：C二、填空题（每题2分，共20分）1. 在医学检验中，______是评估肾功能的重要指标。
答案：血肌酐2. 免疫荧光技术中，荧光素标记的抗体与抗原结合后，可形成______。
答案：荧光复合物3. 在微生物学检验中，革兰氏染色法主要用于区分______和______。
答案：革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌4. 血液学检验中，______是评估贫血程度的重要指标。