猪流感病毒检测卡说明书(完整版)
三株H1N1亚型猪流感病毒M基因序列测定与进化分析
猪流感，是集约化养猪场普遍存在且难以根除的猪呼吸道疾病之一，也是世界上最常见的猪传染病之一，目前有10种血清亚型。
H1N1亚型SIV在中国日趋复杂和多变，与其他亚型流感病毒密切相关，并在其他谱系之间发生多重重组，其中基质蛋白位于流感病毒第7段，含有1 027个核苷酸，具有M1和M2两个相互重叠的编码区。
本试验通过对三株H1N1亚型SIV的M基因进行鉴定分析，为进一步防控猪流感病毒的流行和进化情况提供资料。
1 实验材料1.1 材料广东清远某养猪场采集的具有流感症状的猪的猪鼻腔拭子，置于－80℃冰箱保存。
SPF（无特定病原体）鸡胚购自广东新兴大华农禽蛋有限公司SPF实验动物中心。
基因工程菌为E.coil DH5α，感受态（T a KaRa，日本）；常规克隆T载体是pMD19-T Vector （T aKaRa，日本）。
1.2 实验相关试剂、试剂盒、培养基Ex T aq®（Catalog No. DRR001A）、dNTP Mix-ture（Catalog No. D4030RA）、pMD®19-T Vector （Catalog No. D102A）、E.Z.N.A.® Gel Extraction Kit （Catalog No. D2500-01），E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I（Catalog No. D6943-01）：（Omega公司产品）。
RNase inhibitor（T aKaRa，日本）、DNase Ⅰ（T aKaRa，日本）、Surface RNase Erasol（北京天恩泽基因科技有限公司，中国）、FastStart SYBR Green Master (Rox)（Roche，瑞士）、RNAiso Plus RNA提取试剂（Catalog No. D9108A）、PrimeScript® One Step RT-PCR Kit Ver. 2（Catalog No. DRR055A）。
猪瘟抗体检测卡说明书(完整版)
猪瘟抗体快速检测试剂盒——（胶体金法）使用说明书【名称】通用名称：猪瘟抗体快速检测试剂盒（胶体金法）英文名称：Rapid Anti-CSFV Test汉语拼音：Zhuwen Kangti Kuaisu Jiance ShijiHe(Jiaoti Jin Fa)【用途】用于检测猪血清/血浆/全血样品中猪瘟(Classical Swine Fever, CSF)抗体。
【实验原理】猪瘟抗体快速检测试剂盒（胶体金法），系采用胶体金免疫层析技术，检测样品（血清、血浆或全血）中猪瘟抗体的方法。
在玻璃纤维纸上预包被金标记灭活猪瘟抗原（Au-Agl），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被猪瘟抗原(Ag2)和兔抗猪瘟抗体。
当检测样品为阳性时，样品中猪瘟抗体与胶体金标记猪瘟抗原（Au-Ag1）结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的猪瘟抗原(Ag2)形成“Au-Ag1-猪瘟抗体-Ag2-固相材料”免疫复合物而凝聚显色，游离金标记抗原则在对照线处与兔抗猪瘟抗体结合而富集显色。
阴性样品则仅在对照线处显色。
操作简便，快速，结果直观、准确，灵敏度高，容易判定。
【试剂盒组成】1.猪瘟抗体检测卡50头份2.说明书1份3.一次滴管50根【操作方法】1.用1.5ml样品管，采血0.5-1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。
2.将检测卡平置于桌面上，用吸管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。
在室温下反应20分钟判定结果。
（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测）【结果判定】阳性：对照线区（C）和检测线区(T)各出现一条紫红色线。
检测线(T)的颜色越深，表明猪瘟抗体的滴度越高。
阴性：只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
无效：未出现紫红色线或只在检测区(T)出现紫红色线，对照线区(C)未出现紫红色线。
【诊断参考】被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。
猪细小抗体检测卡说明书(完整版)
猪细小抗体金标快速检测卡使用说明书
【原理】
猪细小病毒抗体检测试剂盒(胶体金法)，系采用国际最先进的胶体金免疫层析技术检测样本(全血、血清、血浆)中抗猪细小病毒抗体的方法。
整个试验只需10分钟，操作简便、快速、准确，灵敏度高、结果直观、容易判定。
【操作步骤】
1．在检测卡的加样孔内加入2滴(100ul)待检血清或血液样品。
2．将检测卡平放于桌面上，在室温下静置5－10分钟内判定结果。
超过30分钟的结果只能作为参考。
【结果判定】
1. 阳性：在观察孔内，检测线区(T)及对照线区(C)同时出现紫红色线。
猪细小病毒抗体滴度越高，检测线(T)颜色越深。
2. 弱阳性：在观察孔内，检测线区(T)及对照线区(C)同时出现紫红色线，但检测线区(T)出现的颜色很浅。
3. 阴性：在观察孔内，只有对照线区(C)出现一条紫红色线。
4. 失效：在观察孔内，对照线区(C)和检测线区(T)都不出现紫红色线；或仅检测线区(T)出现紫红色线。
【注意事项】
铝箔打开后，检测卡应尽快使用；受潮后检测卡将失效。
常温保存，保质期18个月。
【特点】
敏感：阳性检出率达到98%；
特异：不与其它常见猪病如蓝耳病、伪狂犬、猪瘟发生交叉反应，特异性97%；
方便：肉眼判断、无需仪器、操作简单；
快速：5－10分钟即可以出结果，有利于疫情的快速鉴别和免疫水平监测；用途：适合于各级防检部门、猪场、兽医站广泛使用。
一例仔猪猪流感、猪瘟、猪圆环病毒2型和增生性肠炎混合感染的诊断
一
—７ —— ９—
例仔猪猪流感 ◆ 猪瘟◆ 猪圃环病毒 ２型 和增生性肠炎混合感染的诊断
赵彦宗， 苏丹萍 ， 东生 贺
（ 南农 业 大学兽 医学院 ， 东 广 州 ５（４） 华 广 １６２ ）
摘 要： 外地 购进 的猪 苗 ， 从 由于 生存环 境 的改 变必 然 产生应 激 ， 使猪 体 的抵抗 力下 降 ， 同时母 源抗 体 的逐 渐 消 失 ， 致仔 猪 导
型和增生性肠炎混合感染 ， 利用以建立 的方法体 系进行鉴定 。
４１ 瘟 病 毒抗 原 检 测 ． 、 Ｊ 犬食或绝食 、 鼻镜发绀 冰凉 、 两耳 发绀边缘坏死 、 眼结膜苍 白、 皮肤苍 自腹 下有 血点 、 粪便酱 油 色、 体温不高处于濒死期 。
病， 本病的剖检病理变化 明显 ， 易做出诊断 。
一
月初广州连降小雨 ， 天气阴冷 ， 空气 湿度 加大 ， 加了仔 增
猪感染疾病 的机会。通过流行病学调查 、 临床症状 、 剖检病变 、 实
验室检测进行综合判断。
１ 环境 条件 和猪群情况
猪舍南北走向 ， － Ｉ供 出入。仔猪 ４ 只有－ ＇ １ ０多头 ， 体重 ２ ５
通讯作者 ： 贺东生 （９ ８ ）男， １ ６一 ， 副教授 ， 博士， 邮箱：ｈ ￣ ｃ ｕ ｅ ｕｃ ｄ ｅ ｓａ ． ｄ． ｎ 基 金 项 目 ：教 育部 “ 新 团 队 计 划 ” ２ ０— ８ 创 （ ７ ６ ）与 番 禺科 技 局 ０
（ ８ Ｚ ６ － ） ２ ０ 一 一 ０ １ 资助 ０
容 易发 病 。 近 某 实验 室从 外 地 购选猪 苗 用于 动物 实验 ， 发病 ， 过 流行 病 学调 查和 实验 室诊 断 ， 最 先后 通 确诊 为猪 流感 、 瘟 、 猪
猪流感的防控及检测样品采集方法
广西畜牧兽医2019年Vol.35(4)173措施，以免发展成为重度脱肛。
整复手术只是一个疗，调整母猪各项生理机能，才能确保母仔平安，将简单的外科手术，术后护理才是保证手术成功的关因脱肛造成的损失降到最低。
键，只有找出引起脱肛的根本原因并进行相应的治猪流感的防控及检测样品采集方法孔子荣】，李三木2,张书祥】，韩银华2,熊毅2*（1-广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005,2.广西壮族自治区动物疫病预防控制中心，广西南宁530001）中图分类号:S858.285.3文献标识码：B 1猪流感及其防控意义猪流感（swine influenza，SB）呈世界性分布，各地均有流行，发病率高［1］（猪流感能直接引起患病猪的死亡，并使患病猪的生长或生产不良，对养猪业的危害极大，研究表明康复猪和隐形感染猪是以后猪流感的传染染，猪流感作为一种主要的免疫抑制疾病，在猪场中普遍存在且难以根除［1，2］（猪在感染猪流感病毒（SIB）后，易导致呼吸系统疾病的并发或者混合感染，加剧流感病毒危害性，加大死亡率。
猪也是流感病毒“混合器”，极易产生流感病毒基因重排带来极其严重的公共卫生安全问题，因此猪流感的防控极其重要。
2防控措施2.1综合防控适当减小饲养密度，避免猪由于拥挤造成的应激，建议保育舍每头仔猪应有0.3m2~0.4m2的生活空间，育肥猪应有0.7m2以上的生活空间。
加强猪舍通风换气能力，应采用自然通风和机械排风，避免由于空气条件恶劣损伤猪呼吸道,导致其防御能力降低而发病。
改善营养条件，良好的营养条件可提高猪对疾病的抵抗能力。
针对不同阶段的猪群要合理配制饲料，注意补充保证猪免疫功能的微量元素，有研究表明架子猪饲料中添加维生素E和硒，增加猪对猪流感的免疫反应水平叫强化生物安全，除了猪场选址布局合理以及完善的废物处理和消毒措施外，由于SIB既感染猪又感染人，因此还应特别注意人携带猪流感病毒的传入，外来人员不应带入猪场内参观⑷，避免生物性传播造成病毒传入。
15022263_H1、H3亚型猪流感病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
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猪瘟ELISA抗体检测试剂盒说明书
猪瘟ELISA抗体检测试剂盒猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【简介】试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。
【用途】猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。
评估猪场猪瘟疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断。
【原理】本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪瘟病毒的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TM B底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD 值。
【试剂盒主要成分】1 包被抗原的微孔板 2块（96孔/块）2 阴、阳性对照血清各1管（0.5ml/管）3 羊抗猪酶标二抗 1瓶（20ml/瓶）4 20倍浓缩洗涤液 1瓶（30ml/瓶）5 底物A液、B液各1瓶（10ml/瓶）6 终止液 1瓶（10ml/瓶）7 样品稀释液 1瓶（50ml/瓶）8 血清稀释板 2块（96孔/块）9 说明书 1张【样品制备】取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液配制】使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5-10m in），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。
【样品稀释】在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。
注意：阳性对照和阴性对照1：40稀释，（234μl样品稀释液中加6μl对照血清）。
【注意事项】1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-8℃。
2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
猪瘟抗原检测卡说明书(完整版)
猪瘟抗原快速检测试剂盒——（胶体金法）使用说明书【名称】通用名称：猪瘟抗原快速检测试剂盒（胶体金法）英文名称：Rapid CSFV Test汉语拼音：Zhuwen Kangyuan Kuaisu Jiance Shiji He(Jiaoti Jin Fa)【用途】用于检测猪血清/血浆/全血样品中猪瘟病毒(Classical Swine fever virus, CSFV)抗原，用于猪瘟的辅助诊断。
【实验原理】猪瘟病毒抗原快速检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维纸上预包被金标记鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Au-Ab1），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Ab2）和羊抗鼠IgG，检测样品为阳性时，样品中的猪瘟病毒抗原（Ag）可与包被在试纸条前端的胶体金标记的鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Au-Ab1）结合，形成免疫复合物，由于层析作用，复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包被的鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Ab2）形成“Au-Ab1-Ag-Ag2-固相材料”免疫复合物而凝聚显色，游离金标记抗体在对照线处与羊抗鼠IgG体结合而富集显色。
阴性样品则仅在对照线处显色。
检测时只需将血清/血浆/全血加在检测卡的加样孔内，操作简便、快速，结果直观、准确，灵敏度高，容易判定。
【试剂盒组成】1.猪瘟抗原检测卡50头份2.说明书1份3.一次滴管50根【试验方法】1、将检测卡从铝箔袋中取出，水平放置并做好标记。
2、在检测卡的加样孔内加入2滴（70-100ul）待检血清/血浆/全血标本。
3、20分钟内观察并记录实验结果。
【结果判定】阳性：对照线区（C）和检测线区（T）各出现一条紫红色线。
阴性：只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
无效：未出现紫红色线或只在检测区(T)出现紫红色线，对照线区(C)未出现紫红色线。
【注意事项】1. 操作前请仔细阅读说明书；2. 检测样品可以是血清/血浆/全血；3. 检测卡从铝箔袋中取出后，应尽快进行试验，避免放置于空气中过长时间，试剂吸潮后将失效；4. 实验环境应保持一定湿度，避风，避免在过高温度下进行试验；5. 试剂盒在室温下保存，如在2-8℃冷藏，使用前应平衡至室温后方可打开铝箔袋进行检测操作。
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猪流感病毒检测试纸条使用说明书
【原理】
猪流感是由正粘病毒科A型流感病毒属的特定病毒引起的。
A型猪流感病毒可根据其血凝素和神经氨酸酶蛋白再进一步细分为H1N1,H1N2和H3N2等。
猪流感病毒（SIV）抗原快速检测卡采用了快速免疫层析检测技术，用于检测猪鼻腔拭子中的猪流感病毒抗原。
本检测卡对A型猪流感病毒的所有亚型都有极高的敏感性。
把待检样本加入到加样孔后，与胶体金标记的抗SIV单克隆抗体一起沿层析膜移动。
若样品中存在SIV抗原时，与检测线上的抗体结合而显示酒红色。
如果样品中不存在SIV抗原时，则不产生颜色反应。
【试剂组成】
1. 猪流感病毒快速检测卡50片/盒
2. 样本稀释液50管/盒
3．棉签50支/盒4．一次性手套5支
【操作方法】
操作流程
1）应采集急性、体温高的及未经处理的病猪鼻拭子。
棉签应插入鼻腔，并在内壁上反复旋转擦拭。
2）立即将棉签插入装有样品缓冲液的试管，将棉签在试管壁上反复用力旋转至少10次，并混匀溶液，使标本尽可能溶解在溶液中。
在液面上方的试管壁上挤压棉签，使液体尽可能被挤出，丢弃棉签。
3）从密封袋中取出检测卡。
将检测卡放置在平整表面，用吸管从试管内吸取上层清亮液体，缓慢、逐滴的准确滴加4滴到有“S”标记的加样孔内。
4）在室温下放置10-15分钟判断结果，超过15分钟结果无效。
【结果判定】
1. 阳性：在观察孔内，若对照线C显色，检测线T同时显色，判为阳性。
2. 阴性：在观察孔内，若对照线C显色，而检测线T不显色，判为阴性。
3. 无效：在观察孔内，若对照线不显色，则结果无效，建议重新测试。
【检测方法的局限性】
1. 检测线红色线条的颜色深浅直接与检测病毒多少相关。
当检测病毒含量很高时，检测线可能在出现后，红色又慢慢变淡，此时建议将样品数倍稀释后再进行检测，红色线条就可以稳定了。
2. 当检测线出现模糊的色迹，但不显示为清楚的线形时，判为阴性。
3. 本试剂是定性筛选试剂，一个明确的临床诊断结果应该由医生在考虑到所有的临床和实验室的现象后作出。
【注意事项】
1. 本品如果购买时发现过期、破损、污染、无效的产品，请在购买处进行更换。
2. 测试样品来自动物，可能有潜在感染性，样品和使用过的试剂应被看作微生物危险品处理。
3. 所有检测卡启封后马上使用，此前不要随意打开。
4. 本品为一次性产品，请勿二次使用；请勿使用非本品随附的稀释液。
【储存及有效期】
1. 保存于干燥阴凉处（2~30℃），有效期为12个月，生产日期见外包装盒。
2. 打开包装后，1小时内使用。