耐60度高温乳酸菌的驯化及鉴定
乳酸菌繁殖的适宜温度
乳酸菌繁殖的适宜温度
乳酸菌繁殖的适宜温度一般在20℃-45℃之间，具体温度要取决于不同的乳酸菌株。
例如，乳杆菌属的乳酸菌适宜温度介于30℃-40℃，而链球菌属的乳酸菌适宜温度范围为40℃-45℃。
拓展：
乳酸菌，是指在糖的发酵过程中产生乳酸的细菌。
这种细菌在人体的肠道内大量存在，属于有益菌种，对人体的肠道有重要作用。
有益作用主要有：调节肠道菌群，杀灭对肠道有坏处的腐败菌，以及它们所产生的毒素，清理肠道等等；另外还能有效降低人体胆固醇、降低血压。
乳酸菌在食品发酵和益生菌制剂中也有重要作用。
例如，在制作酸奶时，需要将容器的温度维持在30-40℃，这是乳酸菌生活的适宜温度，有利于乳酸菌的繁殖。
乳酸菌含有三大属：①乳杆菌属（例如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌、瑞士乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌等）；②双歧杆菌属（如青春双歧杆菌、两岐双歧杆菌等）；③嗜热链球菌属。
从发酵类型来看乳酸菌又分为：①以奶或奶制品等动物性食源为培养基发酵而成的动物性乳酸菌，其特点为高热量、抗热抗酸性差，只进行初级代谢发酵培养，产品中含有乳酸及乳酸菌，不含对人体有重要作用的菌的次级代谢产物。
②以纯天然粮食作物或果蔬类为培养基发酵而成的植物性乳酸菌，其特点为低热量、抗热抗酸性强，是以乳酸和乳酸菌的初级代谢或者次级代谢发酵为主，两者皆有。
乳酸菌的适宜温度
乳酸菌的适宜温度
乳酸菌是非常重要的微生物，由于其在生物制品、乳制品、乳酸饮料
中起着重要作用，因此它的适宜温度也受到人们广泛关注。
一、乳酸菌的适宜温度类型
1. 乳酸菌有很多种，其温度能力也各不相同。
一般来说，它们可以分
为热和温型、温区型、冷型和超温型四类。
1) 热和温型：它们喜欢在40~45℃的温度范围内生长，热型的乳酸菌
可以继续在50℃左右仍保持活性，但温型乳酸菌在这样的高温下就已
经到了死亡状态。
2) 温区型：它们在20~45℃的范围内均可正常生长，但总体而言，这
类微生物最适合在低于40℃的温度下进行生长。
3) 冷型：它们生长的最佳温度范围是15~25℃，在低于15℃或高于35℃时就会失去其活性。
4) 超温型：它们属于热耐受微生物，可以在60~70℃的温度范围内正
常生长，在100℃的短暂温度还可以继续存活。
二、根据不同的产品需求选择最适宜的乳酸菌
1. 要想选择最恰当的乳酸菌型，首先要考虑生产酸性乳制品还是热处
理乳品，以及对产品质量的要求。
2. 当制作酸性乳制品时，可以使用温型、温区型乳酸菌；而制作热处
理乳品的话，就应选择热型、超温型乳酸菌，这样才能提高产品的稳
定性。
3. 另外，如果想制作特殊性的乳制品，在分类乳酸菌之前，还需要考虑抗菌作用、胞外酶等现象对产品形质、口感的影响。
总之，由于乳酸菌的温度能力不同，根据不同的产品需求，应选择最适宜的乳酸菌，以达到最佳的生产效果。
乳酸菌生存条件
乳酸菌生存条件乳酸菌是一种常见的益生菌，它们对于人体的健康具有重要的作用。
为了保证乳酸菌能够正常生存和发挥作用，需要提供适宜的生存环境。
本文将从温度、酸碱度、营养物质和氧气需求等方面介绍乳酸菌的生存条件。
一、温度条件乳酸菌对温度有一定的适应范围。
一般来说，乳酸菌的最适生长温度在30℃左右，但不同种类的乳酸菌对温度的要求有所差异。
例如，某些乳酸菌在25℃以下也能良好生长，而另一些乳酸菌则对高温更为适应。
因此，在培养乳酸菌时，需要根据不同菌株的特性选择适宜的温度条件。
二、酸碱度条件乳酸菌是一类耐酸菌，对酸度有较强的适应能力。
一般来说，乳酸菌对于PH值在4.0-6.5之间的环境较为适宜。
这是因为乳酸菌能够利用碳源来产生乳酸，从而降低周围环境的酸碱度。
当环境酸度过高时，乳酸菌的生存和繁殖能力会受到一定的影响。
三、营养物质条件乳酸菌的生存和繁殖需要适宜的营养物质供给。
乳酸菌主要靠碳源来进行能量代谢和生长，常见的碳源包括葡萄糖、乳糖、果糖等。
此外，乳酸菌还需要适量的氮源、无机盐和维生素等营养物质来维持其正常的生理功能。
在培养乳酸菌时，可以通过添加适宜的营养物质来提供所需的养分。
四、氧气需求乳酸菌属于厌氧菌，对氧气的需求较低。
乳酸菌在缺氧条件下能够进行正常的代谢和生长。
相反，氧气的存在会对乳酸菌的生存和繁殖产生不利影响。
因此，在培养乳酸菌时，需要采取相应的措施，如使用密闭容器或添加抗氧化剂等，以减少氧气的接触。
乳酸菌的生存和繁殖受到温度、酸碱度、营养物质和氧气需求等因素的影响。
为了保证乳酸菌能够正常生长和发挥其益生作用，需要提供适宜的生存环境。
通过控制温度、调节酸碱度、提供适宜的营养物质和限制氧气接触，可以为乳酸菌提供一个良好的生存条件。
这对于乳酸菌的培养和应用具有重要的意义，也有助于人们更好地利用乳酸菌来改善健康。
乳酸菌在豆奶中的驯化及生长特性
在纯豆浆 中的生长状况做了测定 。
１ 材料 与方 法
１ ． １ 材 料
黄豆 ：吉林 省 ；脱脂奶 粉 ：完 达 山牌 ；Ｎ ａ Ｈ Ｃ Ｏ ，
２ ０ ． ０ ｇ ，蒸 馏 水 １ ０ ０ ０ ｍ Ｌ ，ｐ Ｈ值 ７ ． ２ 。
１ ＿ ３ 方 法
很好的生长。为 了解决这个 问题 ， 该研究将 鼠李 糖乳杆菌 、嗜热链球菌 、两歧 双岐杆菌和保加 利
亚乳 杆 菌 ４种 乳酸 菌 ，接种 在 豆浆 中驯 化 ，逐 渐 提 高驯 化培 养基 中的豆浆 比例 ，使 这 ４种乳 酸菌 适应 豆浆 的生长 环境 。最 后 ，再 对 驯化后 这 ４ 种乳 酸 菌
（ 食 品级 ） ：市售 ；鼠李糖乳酸杆菌 、嗜热链球菌 、 两歧双岐杆菌和保加利亚乳杆菌均为实验保藏菌种。
１ ． ２ 仪 器与设 备
Ｓ Ｇ ２ ８ ０ Ｄ Ｉ 豆浆机 ：苏泊 尔牌 ；Ｌ ＭＬ ８ ５ ０ Ａ胶体
磨 ：温 州市 七 星乳 品设 手提 式 压 力 蒸 汽 灭 菌 器 ：上 海华 线 医用 核 子 仪 器 有 限 公 司 ；Ｄ Ｈ Ｐ １ ２ ０ 恒 温培 养箱 ：上 海试 验仪器 厂 。
０ ． １ ５ ｇ ，Ｚ ｎ Ｓ Ｏ ・ ７ Ｈ ： Ｏ ０ ． ２ ５ ｇ ，Ｆ ｅ Ｃ １ ， ０ ． １ ｇ ，半 胱 氨 酸盐 ０ ． ５ ｇ ，调 ｐ Ｈ值 ６ ． ５ ，１ ２ １℃灭 菌 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
２ 结果与 讨论
２ ． Ｉ 鼠李糖 乳杆 菌在 ８ ０ ％豆浆 中的驯 化结 果
由图 １ 和图 ２ 可 知 ： 鼠李糖 乳 杆 菌在 ８ ０ ％ 豆浆
乳酸细菌分类鉴定及实验方法
乳酸细菌分类鉴定及实验方法乳酸细菌是一类重要的微生物，其活性与生物工程、食物保健、辅助治疗理疗有着密切关系。
乳酸细菌不仅仅可以帮助人们生产优质的乳制品和酒精，还可以作为工业微生物用于环境保护和环境污染控制。
为了深入了解这类细菌的系统发育、分类学特性和生物学特性，必须对其进行有效的分类鉴定和实验方法。
一、乳酸细菌分类鉴定1、形态特征乳酸细菌是一种椭圆形或球形的细菌，其长度介于0.3微米至1微米之间，它们呈卵形或椭圆形，直径约为0.5微米，有一个或多个鞭毛粒子，但不产生酸液，具有非常强的耐高温性能。
2、生理生化特征乳酸细菌具有显著的乳酸发酵能力，它们能够发酵果糖、葡萄糖、果糖醛和蔗糖，发酵乳酸的代谢产物主要有乳酸、乙醇、乙酸、乙酸乙酯和二氢乙酸等。
乳酸细菌还具有抗酸性和耐热性，在PH值约为4.5-5.5时，可抵抗3h50°C-5°C的热治疗，并能够在较低温度下(4°C-7°C)抑制有害细菌的生长。
二、乳酸细菌实验方法1、细菌生长试验乳酸细菌生长试验通常使用拉克特拉-培养基，以检测乳酸细菌的生长情况。
目的是检测体外细菌在拉克特拉培养基中的生长情况，以及其对不同pH和温度条件下的反应情况。
细菌生长曲线检测乳酸细菌的数量，可以从细菌在恒定温度和恒定pH条件下的生长趋势中获取信息。
2、基因鉴定基因鉴定是另外一种常见的乳酸细菌实验方法，其目的是利用PCR（聚合酶链反应）技术，通过测定乳酸细菌的基因组组成来识别和鉴定乳酸细菌的种类及特性。
聚合酶链反应可以获得细菌的基因组序列，从而判断其种类。
3、蛋白质分析乳酸细菌蛋白质分析通常采用SDS-PAGE方法，可用于分析细菌产生的蛋白质种类和浓度。
SDS-PAGE可用于对细菌的蛋白质进行鉴定，以及研究细菌的蛋白质组成的差异性。
经过上述实验，可以获得乳酸细菌的形态特征、生理生化特性、基因组特征以及蛋白质组成，进而分类鉴定乳酸细菌的种类及特性。
实验一 乳酸杆菌的分离及初步鉴定
一、实验目的1、学习掌握食品中乳酸杆菌的常规分离方法并作初步的鉴别。
2、学会十倍系列稀释和倒平板的方法。
二、实验原理乳酸杆菌为厌氧和微好氧菌，革兰氏染色阳性，可以发酵葡萄糖或乳糖产生乳酸，并将培养基中的碳酸钙溶解。
有些菌如保加利亚乳杆菌在15℃时不生长，在45℃甚至50℃时生长，最适生长温度为40—43℃；而有些菌如植物乳杆菌在15℃生长，45℃时一般不生长，最适生长温度为30℃左右。
通常我们利用这些特点可作初步的鉴别。
二、实验原理三、实验材料和仪器1、酸牛奶1瓶，泡菜汁1管，9ml生理盐水5管，MRS培养基100ml，灭菌CaCO3 3克（用纸包）。
2、40℃和30℃恒温箱，振荡器，超净工作台，1ml 无菌吸管5支，培养皿6套，革兰氏染色液1套。
四、实验方法与步骤1. 将酸奶和泡菜汁分别制成10倍系列稀释液。
2. 取适当稀释度之稀释液0．5或1ml于培养皿中。
3. 以无菌操作把无菌CaCO3 加入融化了的MRS培养基中，于自来水中迅速冷却培养基至45℃左右。
轻摇使CaCO3混均，但不得产生气泡。
立即倒入培养皿中，摇匀。
4. 待培养基凝固后，倒置放于40℃和30℃恒温箱中培养（酸牛乳样品在40℃下培养；酸泡菜汁样品在30℃下培养）五、实验结果观察24或48小时后取出检查。
（1）泡菜汁样品中，菌落周围产生CaCO3圈，菌落直径为1～3mm，乳白色偶有浓色或暗黄色。
用接种环挑少许涂片。
革兰氏染色镜检为G+，菌体大小约0.9～1.2×3～8μm，单生，成对或短链。
五、实验结果观察24或48小时后取出检查。
（2）酸牛奶样品中菌落直径1～3mm，无色素，呈白色至淡灰色。
通常菌落表面粗糙，革兰氏染色镜检为G+，细胞宽2μm，细胞较长有时呈线形，幼龄培养物中单生或成对。
五、实验结果观察六、思考题1、融化后的培养基为什么要迅速冷却到50℃左右倒平板？2、培养基中加入CaCO3的目的是什么？谢谢。
乳酸细菌分类鉴定及实验方法
乳酸细菌分类鉴定及实验方法乳酸细菌是一类可以发酵果糖或蔗糖产生乳酸的革兰氏阳性细菌。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、动物肠道、植物表面等环境中，并且在食品加工、乳制品、膳食补充剂等领域具有重要的应用价值。
分类鉴定乳酸细菌的方法主要包括传统分离鉴定和分子生物学方法，而实验方法主要包括培养、生理生化鉴定和分子鉴定等。
1.传统分离鉴定传统分离鉴定是通过培养、生理生化特性的观察和细菌形态学特征的分析来进行分类鉴定的方法。
一般的步骤包括：1.2分离：采用适当的培养基，如MRS培养基等，在适当条件下进行分离培养。
可以采用不同的稀释度和培养温度来增加分离率和适应性。
1.3纯化：从培养出的菌落中选择纯净的菌落进行纯化。
1.4形态学观察：观察细菌的形态学特征，如菌落形态、细胞形态、孢子形态等。
1.5生理生化特性鉴定：通过生理生化实验，如氧需氧性、产气、产酸、碱性产蛋白酶等特性的鉴定来进一步确定细菌的分类。
1.6比较分析：将鉴定结果与已知的乳酸菌进行比较分析，以确定菌株的分类。
2.分子生物学方法分子生物学方法是一种快速、准确的分类鉴定方法，可以通过检测细菌的DNA序列来进行鉴定。
常用的分子生物学方法包括PCR、16SrRNA测序和随机扩增多态性DNA(RAPD)等。
2.1PCR：PCR是通过扩增细菌DNA的特定区域来进行鉴定的方法。
首先，从培养的细菌中提取DNA。
然后，使用特定引物扩增目标区域的DNA，并通过凝胶电泳分析PCR产物的大小。
比较PCR产物的片段大小和带型模式，可以确定乳酸菌的分类。
2.216SrRNA测序：细菌的16SrRNA序列是一个高度保守的基因序列，可以用来进行细菌分类鉴定。
通过提取DNA，扩增16SrRNA基因片段，并进行测序，然后将测序结果与已知的乳酸菌序列比对，可以确定细菌的分类。
2.3RAPD：RAPD是一种无须事先了解目标序列的技术，它利用随机引物扩增细菌DNA的多态位点，通过凝胶电泳分析不同样品间的DNA带型模式，来进行菌株分类。
乳酸菌的筛选与鉴定
• 片球菌属（Pediococcus）
– 形态：细胞呈球形，成对或四联排列。 – 运动性：不运动。 – 营养类型：化能异养型。 – 需氧情况：兼性厌氧型。
乳酸菌的筛选
• 乳酸菌的分布
– 乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧菌，营 养类型为化能异养型。生长繁殖于厌氧或微好 氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体 如下：
• 与动物相关：乳汁、消化道、粪便等； • 与植物相关：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部 位等； • 自然水体； • 发酵食品：酸奶等。
• 筛选方法
– 利用碳酸钙溶解圈法筛选。
改良乳酸细菌培养基（MRS）
• • • • 蛋白胨10.0 g，牛肉膏8.0 g，酵母膏4.0 g， 柠檬酸二铵2.0 g，葡萄糖20.0 g， 吐温-60 1.0 mL，乙酸钠5.0 g， 磷酸氢二钾2.0 g，硫酸镁0.2 g，硫酸锰0.05 g， 琼脂20.0 g，碳酸钙30 g，
乳酸菌蛋白酶活性试验
• 在添加了15%脱脂乳或0.5%干酪素的MRS 固体培养基中, 分别滴入0.2ml一定稀释度 的试验菌液涂布均匀后,37℃ 恒温培养。当 牛乳中酪蛋白分解时, 菌落周围会出现透明 圈。
耐盐性试验
• 在添加质量分数为0%、2%、4%、6%、 8%食盐的MRS平板, 划线接种分离菌种， 在37 ℃ 培养24h后观察菌落生长情况。
分解脂肪的能力
• MRS固体培养基中添加15%的猪脂肪和甲 基红指示剂，稀释平板法接入供试菌后， 于37'C培养48 h，观察各种菌种有无红色 斑点出现。
• 乳杆菌属（Lactobacillus）
– 形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状， 一般成链状排列。 – 运动性：通常不运动，有的能够运动，具有周 生鞭毛。 – 营养类型：化能异养型。 – 需氧情况：微好氧型。
酸菜源耐高糖乳酸菌筛选及驯化
乳酸片球菌的最适生长温度
乳酸片球菌的最适生长温度1.引言1.1 概述概述:乳酸片球菌（Lactococcus lactis）是一种常见的乳酸菌，广泛存在于乳制品、植物、土壤等多种环境中。
它是一种革兰氏阳性球菌，被广泛用于食品工业中的乳酸发酵过程，如乳酸菌酸奶、发酵乳等的生产。
乳酸片球菌在发酵过程中可产生乳酸，并具有促进食品消化、增强免疫力、抗菌作用等多种益生功能。
因此，研究乳酸片球菌的生长特点以及影响其生长的因素对于乳酸菌应用领域的发展具有重要意义。
本文主要关注乳酸片球菌的最适生长温度。
通过研究乳酸片球菌在不同温度条件下的生长行为，可以确定其最适生长温度范围。
同时，了解乳酸片球菌在不同温度条件下的适应性和生长表现，有助于合理控制发酵过程中的温度参数，提高发酵效果及产物质量。
本文将从乳酸片球菌的生长特点和影响其生长的因素入手，探讨乳酸片球菌的最适生长温度，并对其应用前景进行展望。
通过对乳酸片球菌生长温度的深入研究，将为乳酸菌的相关领域提供更多有益的数据支持，促进乳酸菌产品的研发和应用。
1.2 文章结构：本文主要包括四个部分：引言、正文、结论和参考文献。
下面将会对每个部分的内容进行简要介绍。
引言部分将对乳酸片球菌的最适生长温度进行概述，以及文章的目的和结构进行说明。
正文部分将首先介绍乳酸片球菌的生长特点，包括其生态环境、形态特征和代谢特点等方面的内容。
接着，将详细探讨影响乳酸片球菌生长的因素，其中包括温度、pH值、营养物质和菌株间的相互作用等。
结论部分将总结本文的主要观点和发现，重点强调乳酸片球菌的最适生长温度，并探讨其在实际应用中的潜在前景。
最后，参考文献部分将列出本文所引用的相关文献，为读者提供进一步了解乳酸片球菌最适生长温度的参考资料。
通过以上四个部分的有机组合，本文旨在全面探讨乳酸片球菌的最适生长温度，为相关领域的科研工作者和从业人员提供理论指导和实践依据。
1.3 目的目的：本文的目的是研究乳酸片球菌的最适生长温度，通过对乳酸片球菌生长特点和影响因素的探究，确定其最适生长温度，并对其应用前景进行分析。
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METCHNIKOFF(俄国 )在 1907年最先发现了乳 酸菌能增强机体免疫力 , 从而引起了广泛的关注 。 在 肠道的正常菌群中 , 乳酸菌为优势菌群 , 能与肠黏膜 紧密结合 , 阻止食物抗原 、病毒 、细菌的进入 , 从而维 持肠道内微生态平衡 [ 1] 。 乳酸菌在畜 牧业 、食品 加 工业 、医药行业等领域应用广泛 [ 2] , 但现阶段的一个 难题是发酵中迅速产生的高温对其生长的抑制以及 巴氏消毒法对乳酸菌的杀灭作用 。而目前国际上通 用的低温巴氏消毒法是将牛奶加热到 60 ～ 65 ℃, 保 持 30 min。 因此对耐 60 ℃高温乳酸菌的选育有利于 解决巴氏消毒和发酵过程中存在的问题 。
中国微生态学杂志 2011年 4月第 23卷第 4期
3 29
产酸产气培养基 , 葡萄糖和葡萄糖酸盐 , 碳水化合物 发酵产酸试验培养基 , 甲醇试验 (V-P试验 )培养基等 均为市购商品培养基 。 1.3 染料 革兰结晶紫 , 碘液 , 沙黄 。 1.4 仪器 多功能显微镜 BL-410, 日本奥林巴斯公 司 ;恒温培养箱 HH.B11, 上海跃进医疗器械厂 ;原子 力显 微 镜 SPI3800N-SPA400, 日 本 精 工 公 司 , 应 用 AFM的气相模式 , 100 μm Scanner, 其参数为 :X:115 μm、Y:115 μm、Z:29.97 μm, 表示应用的 Scanner在 X轴 、Y轴方向上的扫描移动范围最大值为 115 μm, 在 Z轴方向上移动范围最大值为 29.97 μm, Triangle 200 nm的 cantilever。 1.5 耐 60 ℃高温乳酸菌的驯化过程 将乳酸杆菌 接种于改良的 MRS液体培养基中 37 ℃培养至对数 生长期 , 即培养 24 h后转移至 45 ℃环境中继续培养 24 h, 又转种于 MRS液体培养基中 , 45 ℃环境 中培 养 , 同时用 MRS固体培养基计数其存活率 。 45 ℃环 境中反复传代 5 ～ 10代 , 使其连续 2 ～ 3代的存活率 达到 90%以上时 , 就将其环境 温度提升 5 ℃, 直 至 60 ℃。其中经历的温度为 37、45、50、55和 60 ℃。 1.6 耐 60 ℃高温驯化后的乳酸菌的鉴定 1.6.1 定性测定 ———纸层析法 以 1.5%乳酸为标 准溶液对驯化前后的乳酸菌发酵液进行纸层析实验 , 即将发酵菌液稀释至原浓度的 10-1 ～ 10-5 , 用 滴管 将 1滴稀释菌液点在纸上 , 重复点样几次 , 每次点之 前吹干 。展开剂为乙醇︰浓氨水︰水 =80︰ 5︰ 15 (体积比 );以 0.04%的溴甲酚绿酒精溶液为显色剂 , 待层析液挥发之后 , 向层析滤纸喷洒显色剂 , 测定菌 液移动的距离 。 并计算 Rf值 , Rf值 =Rf发酵 菌液 移动
【关键词 】 耐高温乳酸菌 ;诱导 ;原子力 显微镜 【中图分类号 】R378.992 【文献标识码 】A
Acclimationandidentificationof60 ℃ thermotolerantLacticacidbacteria
ZHAORong-rong1 , HEJuan2
(1.DepartmentofFoudamentalNursing, NrsingSchlool, theThirdMilitaryMedicalUniversity, Chongqing400038, China;2.DepartmentofClinicalLaboratorySciences, CollegeofMedicalLaboratory, theThirdMilitaryMedicalUniversity, Chongqing400038, China)
距离 /展开剂移动距离 。
1.6.2 酸度测定 移液管准确量取 2 mL发酵菌液 , 加入 75 mL去离子水 , 摇匀后向发酵菌液中加入 2 ～ 3滴酚酞指示剂 , 用 0.1 mol/LNaOH进行滴定 , 至微 红色 30 s不褪色即可 。 酸度计算公 式 :酸度 (以乳 酸
计 )=C(v-V)×0.09 ×100/W, C:为消 耗 NaOH溶 液的 摩尔
DO I :10.13381/j .cnki .cjm.2011.04.005
32 8
ChineseJourபைடு நூலகம்alofMicroecology, Apr.2011, Vol.23 No.4
文章编号 :1005-376X(2011)04-0328-04
耐 60℃高温乳酸菌的驯化及鉴定
【论 著 】
赵戎蓉 1 , 贺娟 2 (1.第三军医大学护理学院 基础护理学教研室 , 重庆 400038;2.第三军医大学医学检验系塈药学院 临床检 验学教研室 , 重庆 400038)
【收稿日期 】2010-12-21 【作者简介 】赵戎蓉 (1982-), 女 , 讲师 , 从事 护理教育 和危重症 护理的
研究 , Email:zhaorongr@;贺娟 , 通讯作 者 , Email: hejuan0215@
1 材料与方法 1.1 菌株 乳酸杆菌 ATCC4356。 1.2 培养基 (1)改良的 MRS液体培养基 :蛋白胨 10.0 g, 酵 母提取 物 5.0 g, 牛肉膏 10.0 g, 葡 萄糖 20.0 g, 乙酸钠 5.0 g, 磷酸氢二钾 2.0 g, 柠檬酸二铵 2.0 g, 吐温 -80 0.1 mL, 七水硫酸镁 0.58 g, 四水硫酸 锰 0.025 g, 蒸 馏水 1 000 mL。 调 pH 6.2 ～ 6.4, 121 ℃灭菌 20 min。 (2)改良的 MRS固体培养基 :在 液体培养基中添加 1.8%的琼脂 。 筛选时加入 3.0 g 无水碳酸钙 , 121 ℃灭菌 20 min。 (3)鉴定培养基 :乳 酸纸层析培养基 :蛋白胨 5.0 g, 牛肉膏 5.0 g, 酵母膏 5.0 g, 吐温 -80 0.5 mL, 葡萄糖 10.0 g, 蒸馏水 1 000 mL, 1.6%溴甲酚紫 1.4 mL。调 pH6.8 ～ 7.0, 121 ℃ 灭菌 20 min。 (4)鉴别培养基 :H2S试验培养基 , 石蕊 牛奶培养基 , 明胶液化试验培养基 , 淀粉水解培养基 ,
浓度 ;v:为标定时所消耗 NaOH标准溶液的体积 ;V:为空白实 验中所消耗的 NaOH标准溶液 体积 ;W:为 样品重 量 ;0.09:为 换算为乳酸的系数 , 即 1 mmolNaOH相当于乳酸的克数 。
1.6.3 菌落特征 、形态特征及革兰染色特征的观察 取驯化前后的乳酸菌株发酵菌液离心后用生理
【摘要 】 目的 对本实验室 保存的 ATCC4356菌株进 行温度 梯度诱 变 , 从 而获得 1株耐高 温乳 酸菌 。 方 法 采用温度梯度方法诱变菌株 ;通过革兰染色和原子力显 微镜观察诱变前后菌株革兰染色特 性和形态 及表面结构 的 变化 ;通过生理生化特性鉴定 , 判断诱变前后菌株是否 发生种 属变化 。 结 果 在 45 ～ 60 ℃诱变过 程中 , 随温度 升 高传代次数递增 , 但最终均能成功驯化和稳定传代 。 驯化前后菌 株在产酸能力 、形 态特征 、革兰染色 和生理生化 特 性方面无显著性变化 , 表明该诱导菌株未发生种属变 化 ;原 子力显 微镜观 察结果 表明诱导 前后菌 株表面 形态存 在 差异 。结 论 温度梯度诱变技术能够成功驯化耐 60 ℃高温乳酸菌 , 从 而扩大其应用范围 。
【Abstract】 Objective TogainathermotolerantLacticacidbacteriafromthestrainATCC4356 bythetemperature gradientmethod.Method ThetemperaturegradientmethodwasusedtomutateLacticacidbacteria.Beforeandaftermutagenesis, theGram staincharacteristics, morphologyandsurfacestructurewereobservedbyGramstainandAtomicForce Microscope(AFM);Physiologicalandbiochemicalcharacterizationwereusedtodeterminewhetherthestrain′sspecieshad anychanges.Result Duringthemutagenesisprocess45 ～ 60 ℃, thepassageofthestrainswasincreasedalongwiththe risingtemperature, andfinallythestrainswereacclimatedsuccessfullywiththeabilitytopassagestably;Theacidproductioncapacity, morphologicalcharacteristics, Gram stain, andphysiologicalandbiochemicalcharacteristicsofthestrains hadnosignificantchangesafteracclimation.Atomicforcemicroscopyresultsshowedthatthestrainsbeforeandafterinductionhadagreatdifferenceinthesurfacestructureandmorphology.Conclusion Mutagenesisoftemperaturegradient methodcansuccessfullydomesticate60 ℃ thermortolerantLacticacidbacteria, thusexpandingitsscopeofapplication.