《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》典型教案分析【推荐下载】
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(公开课)
将稀释相同倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养 基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数 目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用 来判断选择培养基是否起到了选择作用。
（三） 样 品 的 稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 火◆分焰离旁不进同行的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、 适于计数的平板
题2 :微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的 细菌的分离与计数
课题背景
1、尿素的利 尿用素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成 氨2之、后细才菌能能被利植用物尿利素用。
的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们 能合成脲酶 CO(N + H2O脲酶 2NH+3 CO2 H2)2
结论：为获得不同类型的微生物，就需要按
不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对 性地提供选择培养的条件。
㈣.取样涂布
◆实验时要对培 养皿作好标记。 注明培养基类型、 培养时间、稀释 度、培养物等。
◆如果得到了至少2个菌落数目在30——300的平 板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落 的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数 相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。
合成脲酶的微生物才能分解尿 素，以尿素作为氮源。缺乏脲 酶的微生物由于不能分解尿素， 缺乏氮源而不能生长发育繁殖， 而受到抑制，所以用此培养基 就能够选择出分解尿素的微生 物。
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻 止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培 养基
22《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件共32页文档
二.实验的具体操作
㈠.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右，使用 前都要灭菌。
㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株
/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本 中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线 菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。
结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不
同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地 提供选择培养的条件。
㈣.取样涂布
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微 生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发 育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物。
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原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质)
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。
22《土壤中分解尿素的细菌的分离与 计数》课件
专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的
分离与计数
1、实例：
DNA多聚酶链式反应是 一种在体外将少量DNA 大量复制的技术，此项 技术要求使用耐高温 （930C）的DNA聚合酶。
教案专题2 课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
◆预习案1．不能氨和CO2，脲酶。
1．2 热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
1．3 是稀释涂布平板法。
除此之外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。
1．4 来源于样品稀释液中一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，选择菌落数在30～300 的。
1．5比活菌的实际数目低。
只是一个菌落。
因此，统计结果一般用菌落数来表示。
1．6设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
1．7对照实验是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。
方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。
方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。
2．实验设计2．1 实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。
2．2 土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～80％为细菌。
2．3 分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。
细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。
2．4 培养不同微生物往往需要不同培养温度。
细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。
2．5在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。
选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
2．6菌落的特征包括形状、大小、隆起程度、颜色等方面。
2．7 实验过程1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
2）应在火焰旁称取土壤10 g。
将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。
3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案一、学习目标1、了解从土壤中分离分解尿素的细菌的原理和方法。
2、掌握无菌操作技术和微生物培养的基本操作。
3、学会利用选择培养基分离微生物，并能对其进行计数。
二、学习重难点1、重点（1）从土壤中分离分解尿素的细菌的原理和方法。
（2）微生物培养的基本操作和无菌技术。
2、难点（1）选择培养基的配制和作用原理。
（2）微生物的计数方法和误差分析。
三、知识回顾1、培养基的类型和作用按物理性质可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。
按用途可分为选择培养基和鉴别培养基。
2、无菌技术包括消毒和灭菌。
消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）；灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3、微生物的接种方法平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
四、新课导入在农业生产中，尿素是一种常用的氮肥。
但尿素不能直接被农作物吸收利用，需要土壤中的细菌将其分解为氨，才能被植物吸收。
那么，如何从土壤中分离出能够分解尿素的细菌呢？这就是我们今天要学习的内容。
五、实验原理1、土壤中含有大量的微生物，其中就包括能够分解尿素的细菌。
这些细菌能够产生脲酶，将尿素分解为氨和二氧化碳。
2、在以尿素为唯一氮源的培养基上，只有能够产生脲酶的细菌才能生长繁殖，其他微生物则不能生长。
六、实验材料和用具1、实验材料土壤样品：从富含腐殖质的土壤中采集。
培养基：尿素固体培养基（尿素 10g、葡萄糖 05g、NaCl 05g、KH2PO4 02g、琼脂 20g、蒸馏水 100mL）。
2、实验用具无菌操作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、涂布器、移液管、显微镜等。
七、实验步骤1、土壤样品的采集在富含腐殖质的土壤中，用无菌小铲铲取表层土 5~10g，装入无菌信封中。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件
例2．在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是 A．调整期 B．对数期 C．稳定期 D．衰亡期
解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已经开始减少，pH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。
一是由于土样不同；
二是由于培养基污染（混入其他N源）或操作失误。
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
01
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
01
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。
标准
培养基类型
配制特点
主要应用
物理性质
固体培养基
加入琼脂较多
微生物的分离、计数等
半固体培养基
加入琼脂较少
观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌种等
液体培养基
不加入琼脂
工业生产，连续培养
化学组成
合成培养基
由已知成分配制而成， 培养基成分明确
菌种分类、鉴定
天然培养基
由天然成分配制而成， 培养基成分不明确
工业生产
A
C
D
4.下列说法不正确的是（ ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。 5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（ ） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐
课件13：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
思考：为什么下面的培养基能够分离出能分解尿素的细菌？
尿素培养基
KH2PO4
1.4g
Na2HPO4
2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖
10g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
用蒸馏水定容至 1000ml
基础培养基 对照
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏:
5.0g
蛋白胨：
10.0g
NaCl：
5.0g
琼脂：
20.0g
观
选择的土样不同
如何通过设置对照实验找出原因？
如何设置对照实验证明是培养基污染影响实验结果？
A同学的培养基不加土样培养（空白对照组）
结果
无菌落
有菌落
说明 培养基没有污染 培养基污染
1.A同学的培养基不加土样作为空白对照
如何设置对照实验证明土样不同还是操作有误影响实验结果？
其他同学取与A同学相同的土样进行实验（实验组） 对照组
数如下：
甲 230
乙
21
212
256 平均值：163？
丙 90
100
✔ 110 平均值：100
1.甲没有设置重复组。
2.乙涂布三个平板，但其中一个计数结果与另两个相差太远，应剔除。
3.丙的实验结果合理
04
设置对照
试分析以下同学的实验结果：
A同学 B同学
？ 150
50
C同学 52
D同学 53
培养基被杂菌污染了 原因 操作有误
去哪寻找这种酶？
原因：因为热泉温度70～ 80 ℃，淘汰了绝大多数微 生物，只有Taq细菌被筛 选出来。
2、实验室中微生物的筛选原理：
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书山有路勤为径；学海无涯苦作舟
《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》典型教案分
析
《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》典型教案分析
尿素 是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当
土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所
以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶
尿素最初是从人的尿液中发现的
筛选菌株
（1）实验室中微生物的筛选应用的原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时
抑制或阻止其他微生物生长。
（2）选择性培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种
类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
（3）配制选择培养基的依据
根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入
氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金
黄色葡萄球菌等。
统计菌落数目
（1）测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。
专注下一代成长，为了孩子