三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶多克隆抗体的制备及鉴定
第２７卷第６期 ２０１３年１２月 高校化学Ｘ－程学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ Ｎ０．６、，０１．２７ Ｄｅｃ． ２Ｏｌ３
文章编号：１００３．９０１５（２０１３）０６—１０３９—０６
三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶多克隆抗体的制备及鉴定
李晔 ，一，危 晴１ ７金丽华１ ７王晓杰１ｔ辛秀兰 ，苏东海 ，袁其朋
（１．北京电子科技职业学院生物技术系，北京１０００２９；
２．北京４ｋ；－Ｙ－大学生命科学与技术学院，北京１０００２９）
摘要：对三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶（ＣａｒＲＡ）进行抗原表位分析并制备兔多克隆抗体。运用ＧＯＬＤＥＮＫＥＹ分子 生物学软件对三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ结构蛋白的抗原表位及其二级结构进行了分析比较，结合现有的抗原表位选取原 则从中筛选了一段显示表位特征的氨基酸残基序列，应用固相合成法合成三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ多肽，然后将其与 ＫＬＨ偶联制成免疫原，应用于动物免疫及多克隆抗体的制备，对该多抗与三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ的反应性进行了检 测。获得了三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ的多抗，该抗体经间接酶联免疫吸附测定法检测其效价为１：３２０００，Ｄｏｔｂｌｏｔ检测在 三个稀释度下都出现了目的条带，证实该抗体具有较好的反应性和特异性。成功制备了三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ多抗， 为进一步明确发酵促进剂的作用机制及其对三孢布拉氏霉菌代谢网络的影响，对ＣａｒＲＡ进行定量以及对其相关功能进 行深入研究提供了有利条件。 关键词：三孢布拉氏霉菌；ＣａｒＲＡ；多肽合成；多克隆抗体；制备；鉴定 中图分类号：Ｒ３９２．１１ 文献标识码：Ａ ＤＯｈ １０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００３—９０１５．２０１３．０６．Ｏ１９
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｌｙｃｌｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｇａｉｎｓｔ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ ＣａｒＲＡ
ＬＩ Ｙｅ ， ，ＷＥＩ Ｑｉｎｇ ，ＪＩＮ Ｌｉ—ｈｕａ ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｊｉｅ ，ＸＩＮ Ｘｉｕ—ｌａｎ ，ＳＵ Ｄｏｎｇ．ｈａｉ ，ＹＵＡＮ Ｑｉ．ｐｅｎｇ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２９，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＬｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １ ０００２９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｆ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ ＣａｒＲＡ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｐｒｅｐａｒｅ ｉｔｓ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｐｉｔｏｐｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ，ｔｈｅ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ ＣａｒＲＡ ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｂｉｏ—ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ ＧＯＬＤＥＮＫＥＹ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔ ｉｔｓ ｅｐｉｔｏｐｅｓ．Ｔｈｅ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ ＣａｒＲＡ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｗａｓ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｂｙ ｓｏｌｉｄ—ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｗａｓ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｙａｎｉｎ（ＫＬＨ），ａｎｄ ｔｈｅｎ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｅｒｅ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｉｓ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｉｔｅｒ ｉｓ ａｓ ｈｉｇｈ ａｓ １：３２０００．Ｔｈｒｏｕｇｈ Ｄｏｔ ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ，ｉｔ ｗａｓ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｔ ｗｉｔｈ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ ＣａｒＲＡ．Ａｌｌ ｔｈｅｓｅ ｐｒｏｖｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈａｓ ｗｏｎｄｅｒｆｕｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ．Ａ ＣａｒＲＡ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｄｄｆｕｌｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｌａｙｓ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｎｅｔｗｏｒｋｓ， ＣａｒＲＡ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣａｒＲＡ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ； ＣａｒＲＡ； ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ；ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ， ｊｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｊｏｎ
ｌ前 言
三孢布拉氏霉菌（Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ）隶属真菌接合菌纲毛霉目笄霉科，生长迅速，生物量高。由于其
收稿日期：２０１２．０３ ３０。修订日期：２０１２ ０７．１８ 基金项目：国家自然科学基金（２１１７６０１８，２１３０６００２）；北京电子科技职业学院院内重点课题（ＹＺＫＢ２０１３００９）；北京高等学校“青年英才计划“（ＹＥＴＰ１８０１）：科 研基地建设——科技创新平台项目——酶制剂研发基地建设项目ＰＸＭ２０１４０１４３０６００００６４。 作者简介：李晔（１９８２一），女，河北石家庄人，北京电子科技职业学院讲师，博士。通讯联系人：袁其朋，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕａｎｑｐ＠ｍａｉｌ．ｂｕｔｔ ｅｄｕ．
ｃａ 高校化学工程学报
菌体内甲羟戊酸途径代谢流量大，故能够生成大量类胡萝卜素，使之成为目前工业化大量生产类胡萝卜
素的重要微生物Ｉｌ｝２ｌ。番茄红素是三孢布拉氏霉菌代谢产物之一，由于其具有多种优越的生理功能，目前
备受人们关注。番茄红素环化酶ＣａｒＲＡ是其代谢过程中的关键酶，直接影响到番茄红素的产量。因此，
对该酶功能进行深入研究，对下一步利用其改造三孢布拉氏霉菌代谢途径和提高番茄红素产量具有重要
的指导意义。为对ＣａｒＲＡ的定量及功能进行研究，必须得到它的特异性抗体。到目前为止国内外均未见
文献报道关于三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ特异性抗体的制备工作。
制备抗体的传统方法是用纯度较高的天然蛋白作为抗原，加佐剂后免疫动物。此方法虽然成功率很
高，但提取和纯化作为抗原用的纯蛋白却非常困难，在某些情况下甚至是不可能的【３】。还有一种制备抗
体的常用的方法就是用基因工程的手段对目标蛋白进行重组表达，纯化蛋白后免疫动物，进而多抗。但
是该方法不适用于三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ，因为此蛋白的基因中存在很多大肠杆菌稀有密码子，将其进
行重组表达后转入大肠杆菌中并不能观察到ＣａｒＲＡ的表达，故无法纯化到足量的蛋白进行下一步免疫。
然而用抗原肽免疫动物来制备抗体是可行的，这种方法为大量制备具有和天然蛋白呈特异反应的多克隆
抗体开辟了新的途径，并有着广阔的应用前景。
用合成多肽作为抗原来制备抗体的特点是合成某一天然蛋白上的一段氨基酸多肽，并作为抗原来免
疫动物。选择这一段氨基酸序列的原则是除它有很强的免疫原性外，在溶液中还应具有和原天然蛋白上
的这段氨基酸序列有相同的空间构象，且应当是水溶性的。抗原表位是抗原分子上与抗体结合的部位，
分为线性表位和空间表位［４础】。运用多种参数和模块分析软件综合分析预测线性表位准确性在８６％以上
］。为了加强这段氨基酸多肽的免疫原性，应把它和某一蛋白载体偶联，一般常用的载体有ＢＳＡ和ＫＬＨ。
本研究引用ＧＯＬＤＥＮＫＥＹ分子生物学软件对三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ的抗原表位及二级结构进行了
分析比较，结合现有的抗原表位选取原则从中筛选了一段显示表位特征的氨基酸残基序列；应用固相合
成法合成１４个氨基酸残基的三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ多肽，并考虑到偶联可行性，在羧基端外加１个半
胱氨酸合成抗原肽，形成了１５个氨基酸残基的三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ多肽，并对其免疫学特性进行了
鉴定。
２材料和方法
２．１材料
新西兰雄性大白兔（２只，２．５ 左右，二级），购自北京市实验动物中心；ＰＤ一１０层析，购于Ｓｉｇｍａ
公司；Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ．２５，购于Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司。二甲基甲酰胺（ＤＭＦ１，邻苯二胺（ＯＰＤ），而甲基亚砜（ＤＭＳＯ１，
顺丁烯酰胺苯甲酸一Ｎ一琥珀酸酯（ＭＢＳ），弗氏完全佐￣Ｕ（ＣＦＡ），不完全佐剂（ＩＦＡ）均购于Ｓｉｇｍａ公司；辣
根过氧化物酶标羊抗兔抗ＩｇＧ购于上海英基生物技术公司；其余试剂均为国产分析纯。
２．２方法
２．２．１ 三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶抗原表位的预测及合成
首先查找Ｇｅｎｂａｎｋ，登陆号为 ３７７２９０２８ｌｇｂｌＡＡ０４６８９５．１Ｉ，搜索出三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶
氨基酸序ｙｌＪ（ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ ＬＣ）。以ＧＯＬＤＥＮＫＥＹ蛋白质分析软件，采用多参
数分析，预测Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ的ＬＣ抗原表位的免疫原性ｆＮ．Ｍｅｔ）、疏水 （ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ）、柔韧性
（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ）、二级结构（Ｂｅｔｒａ＿Ｔｕｍ）及可及 ｔｆｌ！（ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）。预测的抗原肽段交由上海英基生物公司合成。
肽段合成后，经冷冻干燥获得粗肽，得到的多肽粗品先用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１５凝胶住脱盐，经ＨＰＬＣ分析其纯
度ｒ＞９６％，视为合格），用ＨＰＬＣ进行氨基酸组成分析，并确定其组成与设计肽段是否一致。
２．２．２合成多肽与载体蛋白的偶连
本实验选取血蓝蛋（￣（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ，ＫＬＨ）为载体蛋白，用ＭＢＳ方法进行偶联。将２．４ ｍｇ
ＫＬＨ溶于０．１２ ｍＬ ０．１ ｍｏ１．Ｌ～ｐＨ６．８的磷酸钠缓冲液中，加１２ ｇＬＭＢＳ／ＤＭＦ溶液（ＭＢＳ／担体蛋白的摩尔
比为２７：１１，室温下温和搅拌３０ ｍｉｎ。加样到ＰＤ．１０柱上，上柱前用１０ ｍＬ的０．１ ｍｏｌ・Ｌ～ｐＨ６．
８的磷酸钠
布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备与鉴定
布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备与鉴定
目录
1. 内容概括................................................2
1.1 研究的背景与意义.....................................2
1.2 布鲁氏菌的概述.......................................3
1.3 LPS的研究现状........................................4
2. 布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备.............................5
2.1 抗体的制备原理.......................................6
2.1.1 免疫反应的基本原理...............................7
2.1.2 抗体的选择性与特异性.............................7
2.2 抗体的制备步骤.......................................8
2.2.1 抗体的细胞株选择.................................9
2.2.2 免疫动物的程序..................................10
2.2.3 噬菌体的筛选....................................10
2.2.4 抗体的鉴定......................................12 2.3 抗体的扩展纯化和应用................................13
2.3.1 弗洛里希二步法..................................14
四环素多克隆抗体的制备、鉴定及ELISA检测
四环素多克隆抗体的制备、鉴定及ELISA检测
武玉香;刘志国;周志春;杨高山;杜静;吕玲肖
【期刊名称】《中国兽药杂志》
【年(卷),期】2007(41)9
【摘 要】采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四环素-BSA完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法鉴定出多抗中含有四环素的特异性抗体,特异性抗体效价最高达1:320 000,抑制率为50%(IC50)时的四环素浓度为92.6 μg/mL,四环素的最低检测限为6.25 μg/mL,四环素和金霉素的交叉反应率达到78%,该方法灵敏度高,为试纸条法快速检测四环素类的残留奠定了基础.
【总页数】4页(P13-16)
【作 者】武玉香;刘志国;周志春;杨高山;杜静;吕玲肖
【作者单位】武汉工业学院生物与制药工程系,湖北武汉,430023;武汉工业学院生物与制药工程系,湖北武汉,430023;武汉工业学院生物与制药工程系,湖北武汉,430023;武汉工业学院生物与制药工程系,湖北武汉,430023;武汉工业学院生物与制药工程系,湖北武汉,430023;武汉工业学院生物与制药工程系,湖北武汉,430023
【正文语种】中 文
【中图分类】S859.84
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番茄红素的发酵生产及功能研究进展
第４０卷第３期 ２０１１年７月 发酵科技通讯
番茄红素的发酵生产及功能研究进展
赵兰坤１邢芳芳１ 张春宇
（１．阜丰集团有限公司，北京１００１７６；２．山东阜丰发酵有限公司，山东临沂２７６６００）
摘 要：番茄红素是一种功能性天然色素，具有抗氧化、防病抗癌、增强机体免疫力等生理功能。 综述了微生物发酵生产法的研究进展，简要介绍了其研究进展。
关键词：番茄红素 发酵生产 功能研究
Ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｌｙｃｏｐｅｎｅ Ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ
ＦｏｕｎｃｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ 、
Ｚｈａｏ Ｌａｎ－Ｋｕｍ’Ｘｉｎｇ ｆａｎｇ－ｇａｎｇ’Ｚｈａｎｇ Ｃｈｕｎｙｕ２
（Ｆｕ￣ｎｇ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ，Ｌｔｄ．Ｂｅｉｊｉｎｇ，１ ００ １ ７６；２．Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ Ｆｕ￣ｎｇ Ｆｅｒｍｅｔａｔｉｏｎ Ｃｏ，Ｌｔｄ．Ｌｉｎｙｉ ２７６６００） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｉｓ ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｎａｔｕｒａｌ ｃｏｌｏｒａｎｔｓ，ｉｔ ｈａｓ ｍａｎｙ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ， ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ，ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒｒ，ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ＳＯ ｏｎ．Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｂｒｉｅｆｌｙ ｆｅｒｍｅｎｔ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｂｙ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ ｉｔｓ ｆｏｕｎｃｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｌｙｃｏｐｅｎｅ；ｆｅｒｍｅｎｔ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ；ｆｏｕｎｃｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ
番茄红素（１ｙｃｏｐｅｎｅ）是一种类胡萝卜素
（ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ），广泛存在于自然界中。番茄红素作为
一种功能性天然色素，具有淬灭活性氧、消除人体
番茄红素的功效
番茄红素的功效及其分离
摘要：综述了番茄红素的功效，重点介绍了番茄红素的提取方法，并对其在现实生活中的应用进行了展望。
关键词：番茄红素；提取；功效
一、什么是番茄红素
番茄红素植物中所含的一种天然色素，呈红色，是一种重要的类胡萝卜素，主要存在于茄科植物番茄的成熟果实中，最早在番茄中发现并提取，故名。1910年，Willstaller和Escher在对其的研究中首次确定了它的分子式为C4OH56，分子量为536.85。1930年，Karrer等人提出，番茄红素是一种化学结构式中含有11个共轭双键及2个非公个双键的非环状平面多不饱和脂肪烃，经过环化可形成β—胡萝卜素。天然的番茄红素是反式结构，但通过高温下的蒸煮、油炸等加工方式可使番茄红素由反式构型向顺式构型转变，而动物体内的番茄红素则以顺式结构为主，研究表明顺式结构的番茄红素预防疾病的作用比反式结构的番茄红素强，并且顺式异构体的熔点低，摩尔小光系数小，极性强，不易结晶，更易溶解，而且在放置过程中可能会回复到全反式状态。
二、番茄红素的功效
1、对防治前列腺疾病、前列腺癌、肺癌、胃癌、乳癌有奇效。
2、有效抑制癌细胞的扩散和复制，被西方国家称为“植物黄金”。
3、保护细胞DNA免受自由基损害，防止细胞病变、突变、癌变。
4、含强力抗氧化生物活物质。
5、能促使细胞的生长和再生，美容祛皱，延缓衰老，维技皮肤健康。
三、几种提取方法
1．溶剂提取法
番茄红素是脂溶性色素，一般亲脂性有机溶剂提取番茄红素，但也有用极性溶剂乙醇或水来制备番茄红素，。有机溶剂浸提是番茄红素工业化生产最常用的方法，虽然产品有溶剂残留，但经过脱溶和调配，就能获得合格产品。对于干物料，用乙醚、乙酸乙酯、己烷、氯仿、苯等不与水混溶的溶剂，通常在粉碎后立即进行提取。对于新鲜物料，含水量很高，通常用己烷、丙酮与甲醇、乙醇的混合物来提取。影响浸提效果的因素有提取溶剂的种类、原料与提取溶剂的比例、浸提时间、温度、pH等。提取工艺为：番茄制品→干燥→有机溶剂浸提→提取液浓缩→粗品→精制→产品。用有机溶剂提取番茄红素存在提取时间过长的缺点，主要是因为有机溶剂渗透穿过物质的细胞壁和细胞膜的能力较差，不能很好地将提取物从细胞壁溶出。采用微波辐射萃取可以提高其萃取效率且溶剂用量较少，邓宇、张卫强采用微波辐射技术萃取番茄红素以提高萃取效率，但目前微波法萃取只适用于实验室，进行工业化生产难度较大。采用超声波辅助有机溶剂提取番茄红素油树脂，利用超声波的空化和振动作用，使得植物细胞壁破裂，而且整个破裂过程在瞬间完成，避免样品因暴露在空气中和光照下的时间过长而导致番茄红素的降解，不仅加速植物中有效成分的溶出，而且有利于活性成分的保留。超声波辅助萃取番茄红素的效果呢在提取前期较明显，但后期目的物损失加大，总回收率不高。
三唑磷多克隆抗体的制备及鉴定
三唑磷多克隆抗体的制备及鉴定
黄魁英;雷红涛;孙远明
【期刊名称】《现代食品科技》
【年(卷),期】2011(027)012
【摘 要】采用活泼酯法将三唑磷半抗原(TZPM-Hap)与牛血清蛋白(BSA)和卵血清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原(TZPM-A-BSA)和包被抗原(TZPM-A-OVA),经紫外扫描证明人工抗原合成成功.用免疫抗原TZPM-A-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,获得了特异性的三唑磷多克隆抗体.以所获得的抗体建立间接竞争酶联免疫吸附分析法,三唑磷多抗的IC50值为0.01 μg/mL;交叉反应表明,三唑磷的特异性多抗与其他有机磷农药结构类似物无明显的交叉反应.
【总页数】3页(P1469-1471)
【作 者】黄魁英;雷红涛;孙远明
【作者单位】华南农业大学食品学院广东省食品质量安全重点实验室 广东广州510642;广州市微生物研究所 广东广州510663;华南农业大学食品学院广东省食品质量安全重点实验室 广东广州510642;华南农业大学食品学院广东省食品质量安全重点实验室 广东广州510642
【正文语种】中 文
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三孢布拉氏霉菌生产番茄红素的研究进展
三孢布拉氏霉菌生产番茄红素的研究进展
三孢布拉氏霉菌生产番茄红素的研究进展
杨润蕾;陈川
【期刊名称】《科技信息（学术版）》
【年(卷),期】2008(000)024
【摘要】番茄红素是一种非常重要的类胡萝卜素,具有许多重要的生理功能.利用三孢布拉氏霉菌发酵生产番茄红素是工业化生产的理想途径.本文从菌种选育、发酵条件优化、产物提取等方面综述了利用三孢布拉氏霉菌生产番茄红素的研究进展.
【总页数】1页(7)
【关键词】番茄红素;三孢布拉氏霉菌;发酵
【作者】杨润蕾;陈川
【作者单位】河北大学生命科学学院;河北大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】TQ46
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环化酶抑制剂对三孢布拉霉产生番茄红素的影响
・３７２・ 中国抗生索杂志２００６年６月第３ｌ卷第６期
文章编号：１００１．８６８９（２００６）０６．０３７２．０４
环化酶抑制剂对三孢布拉霉产生番茄红素的影响
徐娜郑珩 许激扬 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９）
摘要： 考察了三孢布拉霉（Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ）发酵产生番茄红素过程中，添加番茄红素环化酶抑制剂对番茄红素生物合成的影 响。试验表明，该类抑制剂可阻断番茄红素进一步环化转化为Ｂ一胡萝１－素，较大幅度提高番茄红素的积累量。抑制剂的最佳加入时间 为４８ｈ。不同阻断剂作用效果的比较表明，咪唑、烟碱、Ｎ一甲基吗啉、吡啶及哌啶均可促进三孢布拉霉累积番茄红素。但前三者的效果 优于吡啶和哌啶，发酵产物中ｐ．胡萝１－素和 一胡萝１－素较少。考虑到工业生产成本，本试验还考察了废弃烟渣水抽提物对此菌产生 番茄红素的影响，结果表明在一定条件下，加入废弃烟渣水提物可使番茄红素的积累量从对照的１．４２ｍｇ／Ｌ增加到１６０．３ ｍｇ／Ｌ，具 有良好的工业应用前景。 关键词： 番茄红素；三孢布拉霉； 阻断剂；酶抑制剂； 生物合成 中国分类号ｉ ＴＱ９２０．Ｉ 文献标识码：Ａ
Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｙｃｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｃｏｐｅｎｅ
ｂｙ ｍａｔｅｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ
Ｘｕ Ｎａ， Ｚｈｅｎｇ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｅｎｇ ａｎｄ Ｘｕ Ｊｉ—ｙａｎｇ Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｃｙｃｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｉｎ Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｃｙｃｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｏｕｌｄ ｂｌｏｃｋ ｔｈｅ ｐａｔｈｗａｙ ｆｒｏｍ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｔｏ ３－ｃａｒｏｔｅｎｅ，ｔｈｕｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｃｏｐｅｎｅ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ａｄｄｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗａｓ ａｔ ４８ ｈｏｕｒｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
三孢布拉氏霉菌
通过三孢布拉霉中添加氧载体来提高生产的番茄红素和β-胡萝卜素
徐芳，袁启平，朱燕
生物工程081班 108043017 杜晓阳
摘要
氧载体，N -正己烷和正十二烷，分别加入三孢布拉霉的培养中，番茄红素和β-胡萝卜素的产量增加，这是由于增加了溶解氧浓度。培养基中添加1％（V/V）正己烷或正十二烷，在控制下，番茄红素的产量分别高出51％或78％，而β-胡萝卜素的产量分别为44％或65％。在1％（V/V）N -十二烷和0.1％（W/V）Span20两者的条件下，得到最高产量的番茄红素和β-胡萝卜素分别为533毫克/升和596毫克/L，其中分别是对照的2.1倍和1.8倍。
关键词：番茄红素 β-胡萝卜素 三孢布拉氏霉菌 Span 20
1、简介
番茄红素和β-胡萝卜素，两个重要的脂溶性胡萝卜素，是人类饮食中必需的营养物质，因为它们可以防止心血管疾病，调节免疫系统，被认为是抗致癌剂和抗氧化剂。古代，类胡萝卜素的天然来源是水果，蔬菜和微生物。接合菌，三孢布拉霉，用于工业规模生产β-胡萝卜素，而一个半工业化的进程也已为番茄红素生产发展。
三孢布拉氏霉菌是好氧微生物，氧气供应充足，可以提高细胞的生长和类胡萝卜素的合成。然而，发酵液中，三孢布拉霉交织的菌丝生长和在溶液中的高粘度使氧气在水中的溶解度低，最终导致发酵培养基中的溶解氧缺乏。如何增加在介质中的溶解氧浓度在三孢布拉氏霉菌的生产工艺中是非常重要的的。来实现更好的氧气供应的一种方法是添加氧载体。它可以增加氧气的表观溶解度。氧载体是疏水液体，氧气在其中比在水中有更高的溶解度。血红蛋白，全氟化合物和碳氢化合物一般被用作生物技术氧载体。碳氢化合物在大规模发酵中更受青睐，因为它们比血红蛋白和全氟化合物更便宜。在本文中，对两个氧载体--正己烷和正十二烷在三孢布拉氏霉菌生产的番茄红素和β-胡萝卜素效果进行了研究，以提高发酵效率。
2、原料和方法
2.1 微生物和培养基
番茄红素提取工艺探讨
专题论述 食品研究与并发
Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｏｍｅｎｔ ２０１３年３月 第３４卷第６期
ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００５－６５２１．２０１３．０６．０３３
番茄红素提取工艺探讨
柴星星，鲍波
（广东医学院病理生理学教研室，广东湛江５２４０００） １２１－－－－
摘要：番茄红素的提取方法主要包括直接粉碎法、有机溶剂浸提法、超声波提取法、微波提取法、发酵法、超临界流 体萃取法以及化学合成法和酶反应法等。本文介绍了番茄红素的天然分布、理化性质及生理功能，并就目前番茄红素
提取的常用工艺作一简要综述。 关键词：番茄红素；生理功能；提取工艺
Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｙｃｏｐｅｎｅ
ＣＨＡＩ Ｘｉｎｇ－ｘｉｎｇ，Ｂａｏ Ｂｏ
（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ ５２４０００，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｍａｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｆｏｒ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ａｒｅ ｄｉｒｅｃｔ ｐｕｌｖｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，
ｕｈｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｍｉｃｒｏｗａｖｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｌｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｄ ｅｎｚｙｍｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｗａｓ ａ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｌｙｃｏｐｅｎｅ Ｓ ｎａｔｕｒａｌ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ，ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｅａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，
ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ａｎｄｔｈｅｐｏｐｕｌａｒｗａｙｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｏｒｌｙｃｏｐｅｎｅｗａｓｒｅｖｉｅｗｅｄ．
阻断剂对三孢布拉霉菌产番茄红素的影响
阻断剂对三孢布拉霉菌产番茄红素的影响
蔡文杰;汤华成;温丹旭
【摘 要】为选取高效安全的阻断剂,本实验采用对比试验方法,首次选择茉莉茶茶渣、茶碱和烟酰胺三种阻断剂,研究其对三孢布拉霉(Blakeslea trispora)代谢合成番茄红素、β-胡萝卜素合成量和菌体生物量的影响,并进一步优化茶叶阻断剂促产番茄红素条件.研究结果表明:茶渣、茶碱、烟酰胺均可促进三孢布拉霉累积番茄红素.研究结果表明发酵40 h加入9 g·L-1茶碱、8 g·L-1茶叶、6 g·L-1烟酰胺时,番茄红素的合成量分别是36.32、158.38、34.69 mg·L-1,β-胡萝卜素的含量分别是33.25、42.07、31.79 mg·L-1,菌体生物量分别是24.69、38.53、27.40 mg·L-1.其中以茶渣阻断番茄红素环化成β-胡萝卜素效果最佳,对其进一步实验的茶渣最佳加入时间为48 h,最佳加入量为9 g·L-1时,番茄红素生物合成量可达到205.49
mg·L-1.研究结果为探索通过阻断番茄红素转化为胡萝卜素代谢路径提供了理论参考.
【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》
【年(卷),期】2017(029)003
【总页数】5页(P45-48,69)
【关键词】三孢布拉霉菌;阻断剂;番茄红素;茶渣
【作 者】蔡文杰;汤华成;温丹旭
【作者单位】黑龙江八一农垦大学食品学院,大庆 163319;黑龙江八一农垦大学食品学院,大庆 163319;黑龙江八一农垦大学食品学院,大庆 163319 【正文语种】中 文
【中图分类】Q78
番茄红素具有清除自由基、预防多种癌症、保护心血管、抗老化、保护皮肤、增强免疫力等多种生理功能，已成为一种非常重要的类胡萝卜素并广泛应用[1]。已报道的番茄红素生产主要有微生物发酵法、化学合成法、天然植物提取法和基因工程法等，微生物发酵法由于其发酵周期短、可操作性强、成本低、副产物少等优点而被广泛认可，成为研究热点[2]。三孢布拉霉是目前可以实现工业化生产的唯一一种产番茄红素菌株，通过番茄红素环化酶抑制剂阻断番茄红素转化为β-胡萝卜素路径实现番茄红素的大量累积[3]。三孢布拉霉产番茄红素的途径是由八氢番茄红素经过脱氢反应生成的，有两种酶系参与完成脱氢反应。番茄红素经脱氢反应后，会在番茄红素环化酶的作用下发生环化反应，生成β-胡萝卜素。要想获得更高的番茄红素的生物合成量，就必须使番茄红素环化酶失去活行，阻断番茄红素环化成β-胡萝卜素，所以研究高效、低毒的阻断剂是至关重要的[4]。