三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶多克隆抗体的制备及鉴定

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第２７卷第６期２０１３年１２月
高校
化
学
Ｘ－程
学报
Ｎ０．６、，０１．２７Ｄｅｃ．２Ｏｌ３
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＣｈｉｎｅｓｅＵｎｉｖｅபைடு நூலகம்ｒｓｉｔｉｅｓ
ＬＩＹｅ，，ＷＥＩＱｉｎｇ，ＪＩＮＬｉ — ｈｕａ，ＷＡＮＧＸｉａｏ－ｊｉｅ，ＸＩＮＸｉｕ — ｌａｎ，ＳＵＤｏｎｇ．ｈａｉ，ＹＵＡＮＱｉ．ｐｅｎｇ（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ）
文章编号：１００３．９０１５（２０１３）０６ — １０３９ — ０６
三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶多克隆抗体的制备及鉴定
李晔，一，危晴１７金丽华１７王晓杰１ｔ辛秀兰，苏东海，袁其朋（１．北京电子科技职业学院生物技术系，北京１０００２９；
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｐｉｔｏｐｅｏｆＢｌａｋｅｓｌｅａｔｒｉｓｐｏｒａＣａｒＲＡｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｐｒｅｐａｒｅｉｔｓｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｅｘｉｓｔｉｎｇａｎｔｉｇｅｎｅｐｉｔｏｐｅｓｅｌｅｃｔｉｏｎｐｒｉｎｃｉｐｌｅ，ｔｈｅＢｌａｋｅｓｌｅａｔｒｉｓｐｏｒａＣａｒＲＡｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｂｉｏ— ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｓｏｆｔｗａｒｅＧＯＬＤＥＮＫＥＹｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓａｎｄ
中图分类号：Ｒ３９２．１１文献标识码：ＡＤＯｈ１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００３ — ９０１５．２０１３．０６．Ｏ１９
ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｏｌｙｃｌｏｎｅＡｎｔｉｂｏｄｙＡｇａｉｎｓｔＢｌａｋｅｓｌｅａｔｒｉｓｐｏｒａＣａｒＲＡ
２．北京４ｋ；－Ｙ－大学生命科学与技术学院，北京１０００２９）
摘
要：对三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶（ＣａｒＲＡ）进行抗原表位分析并制备兔多克隆抗体。运用ＧＯＬＤＥＮＫＥＹ分子
生物学软件对三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ结构蛋白的抗原表位及其二级结构进行了分析比较，结合现有的抗原表位选取原则从中筛选了一段显示表位特征的氨基酸残基序列，应用固相合成法合成三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ多肽，然后将其与ＫＬＨ偶联制成免疫原，应用于动物免疫及多克隆抗体的制备，对该多抗与三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ的反应性进行了检测。获得了三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ的多抗，该抗体经间接酶联免疫吸附测定法检测其效价为１：３２０００，Ｄｏｔｂｌｏｔ检测在三个稀释度下都出现了目的条带，证实该抗体具有较好的反应性和特异性。成功制备了三孢布拉氏霉菌ＣａｒＲＡ多抗，为进一步明确发酵促进剂的作用机制及其对三孢布拉氏霉菌代谢网络的影响，对ＣａｒＲＡ进行定量以及对其相关功能进行深入研究提供了有利条件。关键词：三孢布拉氏霉菌；ＣａｒＲＡ；多肽合成；多克隆抗体；制备；鉴定
ｓｅｌｅｃｔｉｔｓｅｐｉｔｏｐｅｓ．ＴｈｅＢｌａｋｅｓｌｅａｔｒｉｓｐｏｒａＣａｒＲＡｐｅｐｔｉｄｅｓｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂｙｓｏｌｉｄ — ｐｈａｓｅｐｅｐｔｉｄｅ