槐米中芦丁及槲皮素的提取实验策划

槐米中芦丁及槲皮素的提取、分离、鉴定及含量测定

实验策划

[实验背景]

槐米为豆科植物槐树(Sophora japonicaL)的花蕾，具有清热、凉血、止血的功效。现代药学研究表明，槐米中主要含有芦丁，槲皮素和粘液质等，其中芦丁是有效成分。芦丁(Rutin)，又名芸香甙 (Rutio side)，属黄酮类化合物[1]，其化学名称为∶5，7，3，4'-四羟基一3一芸香糖黄酮，性状为黄色结晶粉末或无晶形粉末，有苦味，略溶于水，能溶于热水及乙醇。芦丁具有维生素P样作用，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，临床上用于治疗毛细管脆性引起的出血症，有助于恢复毛细血管弹性，如治疗脑血管出血、高血压、视网膜出血、急性出血性肾炎等;芦丁还具有抗心肌缺氧、缺血、抗心律失常、降低血清胆固醇、抑制血小板集聚、抗溃疡、抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗衰老、抗辐射、抗病毒和增强免疫力等功能，是预防和治疗糖尿病、心绞痛、慢性心功能不全、高血脂和预防动脉硬化[2]、心机梗死、脑血栓等疾病的天然绿色药物。因此，目前芦丁已被广泛用于医药、保健食品和化妆品中，具有很高的开发价值。我国芦丁生产主要以槐米(槐花的花蕾)为原料进行提取。

[目的要求]

1．通过芦丁的提取与精制掌握黄酮类化合物的不同提取方法及操作。2．掌握槲皮素的制备原理及操作。

3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用

4．通过芦丁的结构检识，熟悉它的主要性质、检识方法和含量测定。[实验内容]

1、芦丁的提取方法：碱提取酸沉淀法

1.1、原料与试剂

槐米（100g），石灰水（硼砂缓冲液饱和），亚硫酸钠，盐酸，op-10，水。

1.2、仪器

电子天平，量筒（1000mL），pH试纸，抽滤装置，真空干燥器，大烧杯等。

1.3、实验步骤

a.称取槐米100g，加水800mL煮沸，用硼砂缓冲液饱和的石灰水调pH至8～9，加入1%亚硫酸钠作为抗氧剂，在90°C提取30min，过滤。

b.反复提取3次，滤液合并放冷，用盐酸调pH至2～3，60～70°C保持10min，加入0.25％的OP一10，沉淀60min，过滤，结晶用盐酸洗涤1次，用冷水洗涤2～3次得芦丁，70°C真空干燥至恒重。

1.4、结果与分析讨论

结果表明，碱溶pH对芦丁提取率的影响显著，在pH=7时，随着pH的增大，产率升高，至pH=9时，产量最高，但随着pH的继续增加，产率下降。故采用pH=9为最佳值。在此条件的基础上，对酸沉的pH加以改进，结果表明酸沉pH=4时，提取率最高。抗氧剂亚硫酸钠的加入能阻止芦丁在提取过程中被氧化，增大了芦丁的稳定性，使芦丁的提取效率和产品纯度都有显著提高，可在大规模工业化生产中推广。

2、芦丁和槲皮素的精制及鉴定

2.1、原料与试剂

槐米，硼砂，氧化钙，盐酸，3%的硼砂，2%的H2SO4，水。

2.2、仪器

721 型分光光度计，真空泵，JJ500电子天平，葡聚糖凝胶柱，烧瓶，烧杯，温度计，电炉等。

2.3、实验步骤

a.取槐米若干，加约6倍量水，煮沸提取，在搅拌下缓慢加入石灰水至pH 为8~ 9，然后加适量3%的硼砂，在此pH 条件下煮20 ~ 30分钟。

b.趁热过滤，残渣反复减压过滤3次，合并滤液，在60~ 70摄氏度条件下，用浓盐酸将合并液调至pH 为5，酸水液放置24小时，抽滤。

c.用水将沉淀物洗至中性，60度干燥得芦丁粗品，用沸水重结晶，70~ 80摄氏度干燥后的芦丁纯品。

d.精制芦丁以1:80加2%H2 SO4，再火加热2h，冷却抽滤。残杂水洗至中性，然后95% 乙醇重结晶、葡聚糖凝胶柱色谱分离( SphadexLH20)，用甲醇

做洗脱剂。因芦丁不能被洗脱，从而得到槲皮素黄绿色纯品。

2.4、结果与分析讨论

采用碱溶解酸沉淀法，工艺流程简便，槲皮素提取率高，质量稳定，符合槲皮素对照品要求，且本工艺容易实现工业化生产。但在实际操作过程中应当注意的有：

a.提取温度的影响：用水和石灰水调pH 值至8~ 9，加入3%硼砂后，在60℃以下时，随着提取温度的升高，产率不断增加。但提取温度在60℃以上时，产率已无明显的改变，所以提取温度以60~ 70℃为宜。

b.提取时间对产率、含量的影响：提取时间会影响提出率，提取时间小于20min 时，随着时间的增加，产率不断增加。但提取时间大于30min时，随着提取时间的延长，芦丁的产率反而有下降的趋势，这可能是由于芦丁被氧化造成的，时间越长芦丁被氧化的量就越大。实验中加入硼砂的目的就是用作稳定剂。以每次提取时间20~ 30min为宜。

c.提取液pH 值对产率、含量的影响：应当注意所用碱液不易度过高，以免在强碱性下，尤其加热时破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性不易过强，以免生成洋盐，致使析出的黄酮化合物又重新溶解，降低产品收率。

3、芦丁的含量测定方法

3.1、原料与试剂

芦丁标准液，30%乙醇

3.2、仪器

紫外分光光度计，10 mL容量瓶（若干），吸量管等。

3.3、实验步骤

a.精密吸取某浓度的芦丁标准液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，在250 nm波长处作紫外检测。

b.制作标准曲线得到回归方程和相关系数。

c.待测样品同样用30%乙醇稀释，测其吸收强度。

3.4、结果与分析讨论

根据所得的标准曲线求得样品平均含量及回收率，该方法仪器操作简便，快速，价格较低，易于推广，缺点为精密度较低。

[参考文献]

[1]童婧,郭晓蓉,房文亮,夏云.槐米中芦丁提取工艺研究.安徽医科大学临床医

学院,合肥

[2]刘冲,李丽丽. 芦丁的含量测定方法研究进展.郑州大学药学院,河南郑州

[3]骆阳葆.从槐米中提取槲皮素的研究.绍兴文理学院化学化工学院药学系,绍

兴市

第二组：陈峰20090401310004，

符灵珊20090401310008，

苏俊20090401310029