野生酸枣仁中总黄酮的提取及其抗氧化活性

第２８卷第３期　２０１６年９月　塔里木大学学报　

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔａｒｉｍ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｖ０１．２８　Ｎｏ．３　

Ｓｅｐ．２０１６　

文章编号：１００９—０５６８（２０１６）０３—００４６—０６　

野生酸枣仁中总黄酮的提取及其抗氧化活性　蔡雨晴　，　贾棹东　吴茜茜　蒋卉　（１南疆化工重点实验室／生命科学学院，新疆阿拉尔８４３３００）　（２新疆生产建设兵团塔里木盆地生物质源保护利用重点实验室／生命科学学院，新疆阿拉尔８４３３００）　

摘要【目的】试验以酸枣仁为试验材料，采用超声波辅助提取酸枣仁中的总黄酮，研究其抗氧化活性。【方法】通过单因素试　验考察了乙醇浓度、浸泡时间、超声温度、超声时间、料液比对酸枣仁总黄酮提取率的影响以及提取物的活性。【结果】按照单　因素试验确定参数变化水平区间，得到酸枣仁总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇浓度６４．４６％，浸泡时间１２　ｈ，超声时间４＿４．ｏ２　ｍｉｎ，超声温度６２．８６℃，总黄酮提取含量为７．４１５　２　ｍｓ／ｇ。抗氧化试验结果表明，酸枣仁黄酮清除ＤＰＰＨ、羟自由基的Ｉｃ卯值　分别为０．４３６　ｍｇ／ｍＬ和２．５０５　１　ｍｇ／ｍＬ。【结论】优化了酸枣仁中总黄酮的提取方法，黄酮粗提物具有一定的清除自由基活　性。　关键词酸枣仁；总黄酮；超声波辅助提取；抗氧化活性　中图分类号：￥８１６．７　文献标识码：Ａ　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９—０５６８．２０１６．０３．００９　

Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｚｉｚｙｐｈｉ　ｓｐｉｎｏｓｉ　Ｓｅｍｅｎ　Ｃａｉ　Ｙｕｑｉｎｇ　’　Ｊｉａ　Ｚｈｕｏｄｏｎｇ‘　Ｗｕ　Ｘｉｘｉ　Ｊｉａｎｇ　Ｈｕｉ　’　（１　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｉｎ　Ｓｏｕｔｈ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ／Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，　Ｔａｒｉｍ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｌａｒ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　８４３３００）　ｆ　２　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ＆Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｉｎ　Ｔａｆｉｍ　Ｂａｓｉｎ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　Ｃｏｒｐｓ／Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔａｒｉｍ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｌａｒ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　８４３３００）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔａｋｉｎｇ　Ｚｉｚｙｐｈｉ　ｓｐｉｎｏｓｉ　Ｓｅｍｅｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｅｘｔｒａｃ－　ｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｚｉｚｙｐｈｉ　ｓｐｉｎｏｓｉ　Ｓｅｍｅｎ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｉｍｅ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｉｍｅ，ｓｏｌｉｄ—ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ，ｔｈｅ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｒａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ，ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：６４．　４６％ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，１２　ｈｏｕｒｓ　ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ，４４．０２　ｍｉｎ　ｆｏｒ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　６２．８６。Ｃ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉ—ｏｘｉｄａ—　ｔｉｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ，ｔｈｅ　ＩＣ∞ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　Ｚｉｚｙｐｈｉ　ｓｐｉｎｏｓｉ　Ｓｅｍｅｎ　ｆｏｒ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｏｆ　ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌｓ　ｗｅｒｅ　０．４３６０ｍｇ／　ｍＬ　ａｎｄ　２．５０５１ｍｇ／ｍＬ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　ｓｐｉｎｏｓａ　Ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．　Ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｃｏｎｄｉｔｏｎｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｙｐｈｉ　ｓｐｉｎｏｓｉ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ—ａｓｓｉｓｔｅｄ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　

收稿Ｅｔ期：２０１５－０８一ｏ４　基金项目：国家大学生创新创业训练计划项目（２０１４１０７５７０１１）。　作者简介：蔡雨晴（１９９２一），女，２０１５级在读硕士，研究方向为植物资源保护利用。　Ｅ—ｍａｉｌ：ｃａｉｃａｉｙｕｑｉｎｇ＠１２６．ｃｏｒｎ　｝为通讯作者　Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｈｌ１５６＠１６３．ｃｏｒｎ　第３期　蔡雨晴等：野生酸枣仁中总黄酮的提取及其抗氧化活性　４７　酸枣仁是鼠李科（Ｒｈａｍｎａｃｅａｅ）植物酸枣　（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ　ｊｕｊｕｂａ　Ｍｉｌ１．ｖａｒ．ｓｐｉｎｏｓａ（Ｂｕｎｇｅ）Ｈｕ　ｅｘ　Ｈ．Ｆ．Ｃｈｏｗ）的种子，具有养心补肝、宁心安神等功　效，是较为常用的镇定安眠的中药，是卫生部认定的　药食同源的物品之一Ｌ１Ｉ２］。酸枣仁中主要的化学成　分有黄酮　一引、生物碱　］、皂苷［９－１１］、三萜　等化　合物。牛春燕，李游　等认为黄酮类物质为酸枣　仁主要有效成分之一。本文对酸枣仁中黄酮的提取　工艺进行优化，并对提取的黄酮进行了抗氧化实验。　１材料与方法　１．１材料与仪器　野生酸枣仁：２０１４年１　１月采集于陕西省渭南市　澄城县交道镇阿兰寨村边山上，经塔里木大学植物科　学学院吴翠云教授鉴定为鼠李科（Ｒｈａｍｎａｃｅａｅ）植物　酸枣（Ｚｉｚｙｐｈｕｓｊｕｊｕｂａ　Ｍｉｌ１．Ｖｆｌｌ＂．ｓｐｉｎｏｓａ（Ｂｕｎｇｅ）Ｈｕ　ｅｘ　Ｈ．Ｆ．Ｃｈｏｗ）的种子。　芦丁标准品（纯度＞９８％）；石油醚、乙醇、氢氧　化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、铁　氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁、１，１一二苯基一２一苦肼　基（ＤＰＰＨ）、邻二氮菲、硫酸亚铁、过氧化氢均为分析　纯；　ＤＨＧ一９１４５Ａ电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪　器有限公司）；ＬＤ５００摇摆式中药粉碎机（长沙市岳　麓区常宏制药机械设备厂）；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ—ＳＱＰ电子天平　（北京赛多利斯科学仪器有限公司）；７２１—１００紫　外一可见分光光度计（上海菁华科技有限公司）；ＲＥ　一５０Ｂ旋转蒸发器（上海申生科技有限公司）；仪表　恒温水浴锅（上海申光仪器仪表有限公）；ＫＱ３２００ＤＢ　型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；　８００型离心沉淀器（上海手术器械厂）。　１．２试验方法　１．２．１原料预处理　酸枣仁脱脂粉的制备：将酸枣仁粉碎，过２０目　筛，称取一定量的酸枣仁粉置于索氏提取器中，用ｌ０　倍体积的石油醚（６０～９０℃）水浴回流脱脂２次，每　次回流３　ｈ，并回收石油醚。将脱脂后的酸枣仁粉混　匀后密封干燥保存。　１．２．２酸枣仁总黄酮含量的测定　１．２．２．１标准曲线的制作　芦丁标准品溶液的制备：精密称取芦丁标准品　１２．００　ｍｇ置于１０．０　ｍＬ容量瓶中，用乙醇超声溶　解，定容，即浓度为１．２００　ｍｇ／ｍＬ芦丁溶液作为标准　品母液。　采用亚硝酸钠一硝酸铝比色法绘制芦丁标准曲　线＿１　，溶液为空白对照，于波长５１０　ｎｍ测其吸光度。　以芦丁标准液浓度（ｍｇ／ｍＬ）为横坐标（ｘ），吸光度　（Ａ）为纵坐标（Ｙ），绘制标准曲线。　１．２．２．２样品中总黄酮提取率的测定　供试样品溶液的制备：精确称取２．０００　ｇ酸枣仁　粉，以乙醇浓度为２０％，料液比为１：１０，浸泡时间为　１２　ｈ，在超声功率为１５０　Ｗ，超声温度为４０　ｃＩ＝的条件　下超声提取３０　ｍｉｎ，提取液以３　０００　ｒ／ｍｉｎ转速离心　２０　ｍｉｎ，即得供试样品溶液。　取５．０　ｍＬ供试样品溶液于５Ｏ．００　ｍＬ容量瓶　中，按测定芦丁标准溶液吸光度的方法测定样品溶液　的吸光度，计算总黄酮的提取率。酸枣仁总黄酮提取　率的计算公式为：　总黄酮平均含量（Ｑ）＝Ｃ×Ｖ×Ｄ／Ｍ；　总黄酮提取率／％＝Ｃ×Ｖ×Ｄ×１００／（Ｍ×Ｑ）　式中：Ｃ为总黄酮提取液的质量浓度（ｍｇ／ｍＬ）；　Ｖ为溶液体积（ｍＬ）；Ｄ为溶液稀释倍数；Ｍ为酸枣　仁的质量（ｇ）。　１．２．３超声波辅助提取总黄酮单因素试验设计　精确称取酸枣仁粉２．０００　ｇ，选择乙醇浓度０、　２０、４０、６０、８０、１００％，超声时间ｌ０、２０、３０、４Ｏ、５０、６０　ｍｉｎ。超声温度３０、４０、５Ｏ、６０、７０、８０℃，浸泡时间４、　８、１２、１６、２Ｏ、２４　ｈ，料液比１：５、１：１０、１：１５、１：２０、　１：２５、１：３０，５个参试因子进行单因素试验，考察各个　因素对酸枣仁总黄酮提取率的影响。　１．２．４酸枣仁总黄酮的抗氧化性试验　样品溶液的制备：称取１２．０　ｇ脱脂酸枣仁粉末，　以最优条件提取，离心，将得到的上清液浓缩，干燥，　得到１．６４６　ｇ酸枣仁黄酮粗提物。　称取０．０５０　ｇ粗提物于１０．０　ｍＬ的容量瓶中，　加水溶解并定容，此样品粗提物溶液浓度为　５．Ｏ０　ｍｇ／ｍＬ，即１．０　ｍＬ相当于样品中含有５．Ｏ　ｍｇ