鸡蛋中卵类粘蛋白的研究进展

作者：史晓霞，金永国，黄茜，蔡朝霞，马美湖

作者单位：华中农业大学国家蛋品加工技术研发分中心,武汉 430070本文链接：https://www.360docs.net/doc/d06096358.html,/Conference_7351888.aspx

鸡卵粘蛋白的提取及猪胰蛋白酶的分离纯化

鸡卵粘蛋白的提取及猪胰蛋白酶的分离纯化摘要：鸡卵类粘蛋白是由鸡卵清中制得的一种糖蛋白，具有强烈的抑制胰蛋白酶的作用，常用于胰蛋白酶的酶学性质的研究和胰蛋白酶的亲和层析纯化制备。胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种，EC3.4.21.4。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。本实验以鸡蛋清为原料，提取猪胰蛋白酶的天然抑制剂鸡卵粘蛋白，并以此为配基，偶联到琼脂糖凝胶上，制成鸡卵粘蛋白的亲和吸附剂，然后通过亲和层析直接从猪胰脏的粗提液中纯化猪胰蛋白酶。并设计了酶活性测定以对纯化过程进行监测和对纯化效果进行评价；设计了电泳实验对制备的猪胰蛋白酶进行纯度和分子量的测定。关键词：鸡卵粘蛋白；胰蛋白酶；亲和层析；分离纯化；酶活性。鸡卵粘蛋白（chicken ovomucoid简称CHOM）是鸡蛋清中的一种糖蛋白，至今还未能获得单一组分，在电泳行为上常呈现不均一性。不同来源的卵类蛋白末端基有很大差别，鸡卵类蛋白N-末端基为丙氨酸。卵类粘蛋白在中性活酸性溶液中对热和高浓度的脲是相当稳定的，而在碱性溶液中比较不稳定，尤其温度较高是易迅速失活，在50%丙酮或10%三氯乙酸溶液中仍有较好的溶解度。它们的等电点有一定的范围，大致在3.9—4.5之间。鸡卵粘蛋白除对牛和猪的胰蛋白酶有强烈的抑制作用外，对枯草杆菌蛋白酶也有一定的抑制作用，但对胰凝乳蛋白酶无抑制作用，对人的胰蛋白酶也无明显抑制作用，因此常用于胰蛋白酶酶学性质的研究。在pH7.8～8.0碱性条件下，CHOM可可逆性的结合胰蛋白酶，以CHOM为配基制成亲和吸附剂，通过亲和层析技术对胰蛋白酶进行分离纯化。 1材料与方法 1.1材料与试剂市售鲜鸡蛋，10%TCA，1mol/L NaOH ，5mol/L NaOH ，1mol/L HCl，5mol/L HCl，丙酮（A.R），葡聚糖凝胶G-25（ SephadexG-25)，0.02mol/L, pH6.5磷酸缓冲液，DEAE-52离子交换纤维素，离子交换剂（0.5mol/L HCl ，0.5mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl ），洗脱液（0.3mol/L NaCl—0.02mol/L, pH6.5磷酸缓冲液）,透析袋（φ2.7cm）,标准胰蛋白酶溶液（1mg/ml），0.05mol/L PH7. 8 Tris- HCl缓冲液，BAEE底物缓冲溶液（0.05mol/L CaCl2- 0.05mol/L PH8.0 Tris- HCl缓冲液），1mmol/L BAEE底物溶液，Sepharose 4B，0.5mol/L NaCl，2mol/L NaOH，0.2mol/L PH9.5碳酸钠缓冲液，56%1，4-二氧六环（V/V），环氧氯丙烷（A.R），亲和柱平衡液（0.5mol/L KCl，0.05mol/L CaCl2—0.1mol/L, Tris—HCl PH7.8缓冲液），亲和柱洗脱液（0.5mol/L KCl—0.1mol/L PH2.5甲酸溶液），，无水氯化钙，亲和柱平衡液新鲜猪胰脏，PH2.5-3.0乙酸酸化水，2.5mol/L H2S0 4 （ 0.5mol/L KCl，0.05mol/L CaCl2—0.1mol/L, Tris—HCl PH7.8缓冲液），亲和柱洗脱液：（0.5mol/L KCl— 0.1mol/L PH2.5甲酸溶液）等。 1.2主要仪器与设备 DELTA320型酸度计，离心机，磁力加热搅拌器，恒流泵，紫外检测仪，N2000生化工作站软件，?16×400mm 层析柱，电脑，布氏漏斗、抽滤瓶，循环水真空泵，?10×200mm 层析柱，紫外可见扫描分光光度计，微量可调取液器，石英比色皿（d=1cm），恒温摇床，紫外分光光度计，循环水真空泵，DS型高速组织捣碎机，电子天平，精密试纸

2018西综考研名词解释：粘液样变性

2018西综考研名词解释：粘液样变性 16. 粘液样变性(mucoid degeneration)：是指间质内有粘多糖(透明脂酸等)和蛋白质的蓄积。常见于间叶组织肿瘤、风湿病、动脉粥样硬化和营养不良时的骨髓和脂肪组织等。镜下：间质疏松，有多突起的星芒状纤维细胞散在于灰蓝色粘液样的基质中。 17.病理性色素沉着(pathologic pigmentation)：有色物质(色素)在细胞内外的异常蓄积称为病理性色素沉着。 18.脂褐素(lipofuscin)：是蓄积于胞浆内的黄褐色的微细颗粒，电镜下显示为自噬溶酶体内未被消化的细胞器碎片残体，其中50%为脂质。附睾管上皮细胞、睾丸间质细胞和神经节细胞的胞浆内正常时便含有脂褐素。 19.病理性钙化(pathologic calcification)：在骨和牙齿以外的软组织内有固体钙盐(主要是磷酸钙和碳酸钙)的沉积称为病理性钙化。 20.营养不良性钙化(dystrophic calcification)：继发于局部变性、坏死组织或其他异物(如血栓、死亡的寄生虫卵)内的钙化，称为营养不良性钙化。营养不良性钙化体内钙磷代谢正常。 21.转移性钙化(metastatic calcification)：由于钙磷代谢障碍(高血钙)所致正常肾小管、肺泡壁、胃粘膜等处的多发性钙化，称为转移性钙化，可影响细胞、组织的功能。甲状旁腺功能亢进、骨肿瘤破坏骨组织、维生素D过量摄入等可引发高钙，导致转移性钙化。 22.坏死(necrosis)：是活体内范围不等的局部细胞死亡，死亡细胞的质膜(细胞膜、细胞器膜等)崩解、结构自溶(坏死细胞被自身的溶酶体酶消化)并引发急性炎症反应。 23.核固缩(pyknosis)：表现为核缩小、凝聚，呈深蓝染，提示DNA停止转录。 24.核碎裂(karyorrhexis)：表现为染色质崩解成致密蓝染的碎屑，散在于胞浆中，核膜溶解。 25. 核溶解(karyolysis)：染色质中的DNA和核蛋白被DNA酶和蛋白酶分解，核淡染，只见或不见核的轮廓。 26. 凝固性坏死(coagulative necrosis)：坏死的细胞的蛋白质凝固，还常保持其轮廓残影。这可能是由于死死局部的酸中毒使坏死细胞的结构蛋白和酶蛋白变性，封闭了蛋白质的溶解过程。凝固性坏死好发于心肌、肝、脾、肾等。 27. 干酪性坏死(casepis necrosis)：是彻底的凝固性坏死，是结核病的特征性病变。镜下：不见坏死部位原有组织结构的残影，甚至不见核碎屑，肉眼观：坏死呈白色或微黄，细腻，形似奶酪，因而得名。 28. 坏疽(gangrene)：是身体内直接或间接地与外界大气相通部位的较大范围坏死，并因有腐败菌生长而继发腐败。坏疽分为干性、湿性和气性三种。 29. 液化性坏死(liquefactive necrosis)：是坏死组织因酶性分解而变为液态。最常发生于含可凝固的蛋白少和脂质多的脑和脊髓，又称为软化(malacia)。化脓、脂肪坏死和由细胞水肿发展而来的溶解性坏死(lytic necrosis)都属于液化性坏死。 30. 纤维素性样坏死(fibrinoid necrosis)：曾称为纤维素样变性。发生于结缔组织和血管壁，是变态反应性结缔组织病(风湿病、类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮、结节性多动脉火等)和急进性高血压的特征性病变。镜下，坏死组织成细丝、颗粒状的红染的纤维素(纤维蛋白)样，聚集成片块。纤维素样坏死物质可能是肿胀、崩解的胶原纤维(由于抗原-抗体复合物引发)，或是沉积于结缔组织中的免疫球蛋白，也可能是由血液中渗出的纤维蛋白原转变成的纤维素。

大米蛋白研究与利用概述

大米蛋白研究与利用概述摘要：本文从大米蛋白组成成分、结构和性质出发，以研究开发和利用大米促进精深加工为支撑，阐述大米蛋白分离提取方法，概述国内外大米蛋白产品研究及开发利用现状，并对其前景进行展望。关键词：大米；大米蛋白；提取工艺；制备；利用农业是国民经济的基础，粮食是基础的基础，是人类赖以生存、繁衍和发展的必要条件，也是食品工业的基础，是所有食品工业的基本原料的来源。稻谷（Oyaza sativa）是人类重要的粮食种类之一，尤其是在亚洲地区。2007年国际水稻研究所统计数据显示，近年来世界年生产稻谷总产量约为5.33亿t，中国的稻谷总产量达到1.865亿t，占35％，居世界首位。稻谷生产和消费集中在亚洲地区，尤其以中国、印度尼西亚、孟加拉、越南和泰国为主［1］。长期以来，稻谷生产和稻谷加工产品及副产品的深加工一直倍受食品科学家高度关注。大米蛋白的开发和利用研究正是基于丰富稻米加工产品和合理利用稻米加工副产品的研究和综合利用。因此，提取和合理利用大米中蛋白质具有重要社会和经济意义。 1 大米蛋白的组成和理化特性 1.1 大米蛋白的组成大米蛋白具有优良营养品质，是公认的谷类蛋白中的优质植物蛋白。按Osborne分类方法［2］，大米蛋白可粗分为4类：清蛋白（albumins），可溶解于水的蛋白质，占总量2%～5％；球蛋白（globulins），溶于0.5mol／L的NaCl溶液，占总量2%～10％；谷蛋白（glutelin），溶于稀酸或稀碱，占总量80％以上；醇溶蛋白（prolamins），溶于70%～80％乙醇溶液，占总量1%～5％。其中谷蛋白和醇溶蛋白成为贮藏性蛋白，它们是大米蛋白的主要成分。而清蛋白和球蛋白含量较低，是大米中的生理活性蛋白。大米蛋白因赖氨酸含量较高、必需氨基酸含量与其他谷类蛋白中必须氨基酸含量比较具有一定优势和生物价（BV）及蛋白质效用比率（PER）较高而具有良好得营养价值。

盐析法快速分离鸡蛋清卵白蛋白的初步研究

盐析法快速分离鸡蛋清卵白蛋白 2 摘要：鸡蛋清原液用pH 9.0的Tris-HCl缓冲液稀释5倍，4℃下静置至少6 h，采用30%～80%不同饱和度的硫酸铵分离卵白蛋白，采用Bradford法测定盐析后蛋白含量，SDS-PAGE检测其纯度，结果表明，60%饱和度的硫酸铵分离鸡蛋清卵白蛋白效果较好。关键词：盐析法；鸡蛋清；卵白蛋白鸡蛋中含有丰富的生命必需元素，营养价值较高。随着对鸡蛋生理生化活性研究的不断深入，对鸡蛋的利用逐渐超越简单的初加工阶段，趋向于开发具有较高附加值的生理活性物质[1-2]。蛋清是一种以水为分散介质，以蛋白质为分散相的典型胶体物质，鸡蛋清中的蛋白质含量约为总量的11%，除不溶性的卵黏蛋白外，均为可溶性蛋白质。卵白蛋白、卵铁传递蛋白和溶菌酶是其中3种主要的生物活性蛋白质。卵白蛋白是蛋清中主要的活性蛋白，约占蛋清蛋白质含量的54%。卵白蛋白具有许多功能特性[3]，例如，卵白蛋白对胰蛋白酶有强烈抑制作用，能部分抑制枯草杆菌蛋白酶活性[4]；Fujita用胃蛋白酶水解卵白蛋白，并用RP-HPLC分离出具有血管舒张活性的物质OA358-365[5]；Davalos和Xu等研究发现，卵白蛋白酶降解物具有强抗氧化活性的多肽[6-7]。卵白蛋白是生物化学中一种重要的参考蛋白质，包含所有的必需氨基酸，而且比例合理。高度纯化和结晶的卵白蛋白可以作为载体、稳定剂、封阻剂或标准物等，也可作为营养添加剂应用于食品工业。虽然许多学者对卵白蛋白进行了大量研究，但对其生物学特性和功能的了解仍不够全面，本文采用硫酸铵盐析的方法，对鸡蛋清中的卵白蛋白进行了快速初步分离，为其进一步开发利用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料新鲜鸡蛋，购自超市；卵白蛋白标准品，Sigma公司；硫酸铵分析纯，购自天津市风船化学试剂科技有限公司；透析袋，Amersham Bioscicnccs(SF)Corp。 1.2 试验方法 1.2.1 鸡蛋清原液的制备取新鲜鸡蛋，用双层灭菌纱布过滤得到水样成分，充分搅拌30 min（搅拌剧烈程度以不起泡沫为准）。为了降低鸡蛋清粘度以利于后续试验，取5 mL鸡蛋清用pH 9.0的Tris-HCl缓冲液（50 mL 0.1M Tris-base 溶液与5.7 mL 0.1M HCl溶液混匀后，冷却到室温，加水定容到100 mL）进行5倍稀释，4℃下静置至少6 h。 1.2.2 鸡蛋清卵白蛋白盐析法分离将静置蛋清4℃、10000 rpm离心10 min，取上清液，缓慢多次加入烘干研磨成粉末的硫酸铵，磁力搅拌，使加入粉末溶解，并参考硫酸铵溶液饱和度计算表，使其饱和度分别达到30%、40%、50%、60%、70%和80%。4℃静置过夜，于4℃、12000rpm离心10 min，不同饱和度离心所得沉淀均用pH 9.0的Tris-HCl 缓冲液溶解，并在4℃、0.05 M的Tris-HCl缓冲液中进行透析。期间更换透析液2~4次，透析过夜。 1.2.3 蛋白质检测蛋清盐析蛋白质含量采用Bradford法测定[8-9]：考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合则呈现蓝色，蛋白与考马斯亮蓝反应后，溶液在分光光度计波长595 nm处吸光度与蛋白质含量成正比。用BSA蛋白标准液在波长595 nm处测得的吸光值绘制标准曲线（见表1），不同饱和度盐析得到的蛋白样品在595 nm波长测得的吸光值，通过标准曲线得到蛋白含量。采用SDS-PAGE检测盐析后卵白蛋白的纯度。表1 标准曲线配比表处理序号0.01%BSA标准液（μL）蒸馏水（μL）考马斯亮蓝（μL）蛋白质含量（μg/mL） 1 0 200 1000 0 2 40 160 1000 20 3 80 120 1000 40 4 120 80 1000 60 5 160 40 1000 80

米糠蛋白的研究现状

米糠蛋白的研究综述摘要：廉价的米糠是稻谷加工的副产物是丰富的蛋白质来源，并且米糠蛋白的氨基酸组成丰富，具有低过敏性。所以米糠蛋白的提取越来越受到关注，米糠蛋白的提取方法主要有碱法提取、酶法提取和物理法，复合法提取，本文主要就米糠蛋白的提取方法进行综述，针对米糠蛋白的改性后的功能进行阐述。关键词：米糠蛋白碱法酶法 Abstract:Cheap rice bran is a by-product of rice processing，which is a rich source of protein, and its amino acid composition is rich, hypoallergenic. So the extraction of rice bran protein is more and more attention, the extracting method of rice bran protein mainly alkali distillation, enzymatic method and physical method, the complex legal extraction, this paper mainly summarized the extracting method of rice bran protein, elaborates the functions of rice bran protein modification . Key words:rice bran protein alkaline enzyme hydrolysis 前言米糠是一种廉价易得、营养丰富的稻米加工副产品。米糠中含有丰富的营养物质，全脂米糠一般含有12%~18%的蛋白质、16%~20%脂肪、12%左右灰分、14%膳食纤维，碳水化合物总量约为50%左右，包括淀粉、半纤维素等，具有较高利用价值[1]。米糠主要运用于饲料中，利用率较低，目前人们对于植物蛋白的需求不断增加，因此从米糠中寻求新的植物蛋白资源具有重要的现实意义。 1 米糠蛋白米糠蛋白中有清蛋白、球蛋白、醇蛋白以及谷蛋白。这四种蛋白质质量比例为37:36:22:5，其中可溶性蛋白质约占70%，与大豆蛋白接近[1]。米糠蛋白质中必需氨基酸齐全，生物效价较高。将米糠与大米中的蛋白质相比较，前者的氨基酸组成更接近FAO / WHO的推荐模式，营养价值可以和鸡蛋相媲美[2-3]。尤其是赖氨酸含量高于大米蛋白的含量，这补偿了谷物蛋白中氨基酸不足的缺陷，大大提高了米糠蛋白的营养价值，使其成为可与动物蛋白相比拟的优质蛋白质。从营养的角度看，清蛋白和球蛋白有很好的氨基酸平衡，赖氨酸、色氨酸的含量较高，高于大米以及其他谷物中的含量。而大米中蛋白质的主要成分是谷蛋白和醇溶蛋白，清蛋白和球蛋白的含量较低，致使赖氨酸、蛋氨酸、色氨酸含量极低，由于限制氨基酸的存在，使大米中蛋白质的营养价值偏低。米糠蛋白的生物效价(PER)为2.0~2.5，与牛奶中酪蛋白相近(PER为2.5)[4]，而且，米糠蛋白是低过敏性蛋白，不含致敏因子。因此米糠蛋白非常适合作为婴幼儿和特殊人群的营养食品，国内外高度重视米糠蛋白的研究和产品开发。 2 米糠蛋白的提取

生物技术制药

1. 生物技术制药：采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。 2. 抗体：能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 3.疫苗：是指将病原微生物(细菌、病毒、真菌、立克次氏体、支原体、衣原体等)及其代谢产物，经过人工减毒、灭火或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的免疫制剂。 4.反义核酸：包括反义DNA分子，或由部分RNA和部分DNA形成的RNA-DNA 嵌合分子，以及经高度化学修饰的寡聚核酸类似物。 5.载体分为：质粒载体和λ噬菌体载体。①质粒载体涉及三个要素：复制子、选择标记、多克隆位点、几种质粒载体（克隆载体、表达载体、突变载体、报告载体）②λ噬菌体载体：常用于构建基因组文库和cDNA 文库。λ噬菌体载体通常分为插入型载体和置换型载体，插入型载体是指载体中一个酶切位点用于外源DNA的插入，置换型载体是指外源DNA通过置换载体上非必需序列插入载体。 6.目的基因常用的制备方法：化学合成法、PCR法、基因文库法、cDNA 文库法。 7.基因工程药物制造程序：获得目的基因→构建基因工程菌→工程菌大规模培养→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检测→成品加工→成品检测。 8.基因工程菌的培养过程:（1）摇瓶操作：了解工程菌生长的基础条件（温度、pH、培养基组分及C/N），分析表达产物的合成、积累对受体细胞的影响。（2）培养罐操作：确定培养参数、控制方案及顺序。基因工程菌的培养方式:（1）补料分批培养：将种子接入发酵反应器中进行培养，经过一段时间后，间歇或连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的培养方式。（2)连续培养：将种子接入发酵反应器中，搅拌培养至一定浓度后,开动进料和出料的蠕动泵，以控制一定稀释率进行不间断的培养。两阶段连续培养，控制和优化诱导水平、稀释率、细胞比生长速率。（3）透析培养：利用膜的半透性原理使代谢产物和培养基分离，通过去除培养液中的代谢产物来解除其生产菌的不利影响。（4）固定化培养：维持质粒稳定性(5）分批培养:DO-Stat 法：调节搅拌转速和通气速率控制溶氧在 20%，补料的流加速率是关键。Balanced DO-Stat 法：控制溶氧、搅拌转速、糖的流加速率，使乙酸维持在低浓度。控制菌体比生长速率的方法：在最优表达水平获得高密度、高表达。9.基因工程菌发酵工艺的影响因素:（1）培养基的影响（2）接种量的影响（3）温度的影响（4）溶解氧的影响（5）诱导时机的影响（温度、氧、营养）（6）pH的影响（细胞生长期、外蛋白表达期）（7）诱

卵菌的研究进展

卵菌的研究进展草业科学---林艳艳---20104033107 【摘要】卵菌是一类重要的病原生物，可以侵染人类、动物和植物，尽管形态上与真菌类似，但是卵菌在进化上与硅藻和蓝藻亲缘关系更近；多种植物病原菌属于卵菌。卵菌是多分枝的群体,包括60 多种疫霉菌多个活体营养的霜霉菌和100 多种腐霉菌,其中许多是植物病原菌。卵菌在系统进化上有别于其它植物病原真菌,形成一个独立的群体,所致病害给许多农作物和花卉植物造成毁灭性危害。近年来，随着基因组学理论和技术的发展，大量的卵菌基因组相关的数据库被建立。【关键词】卵菌，独立群体，基因，致病一、卵菌的独立性： 1.过去很长时间以来，人们都认为卵菌是真菌，因为卵菌也是丝状体，获得营养的方式也是吸收。但卵菌有很多其独特的特征（表1），其单倍体的卵子接合产生二倍体的卵孢子，而真真菌不产生卵孢子；细胞壁成分是b-葡聚糖和纤维素，而真真菌则是几丁质。卵孢子产生游动孢子，游动孢子的鞭毛有二种类型，一种是以鞭动形式，后导向；而另一种则是茸鞭毛，前导向。所以，又称该群生物为异鞭毛生物。尽管真真菌中的壶菌也产生游动孢子，但其游动孢子的鞭毛只有一种鞭动后导向鞭毛。第四个显著的不同是卵菌的营养细胞一般是多核菌丝，无隔膜，核是二倍体，其生活史中主要是二倍体。而真真菌绝大多数的菌丝有隔膜，一个细胞中含有一个、二个或多个单倍体核。但一些卵菌也能够产生单细胞的菌丝。电镜观察卵菌和真真菌的超显微结构也有明显不同。卵菌的线粒体是管状脊，与异鞭毛藻类相似，而真真菌的线粒体是板片状脊。因此，卵菌应属于无色的藻类而不是真真菌。推测卵菌可能是管藻失去叶绿体后改变为腐生型，但有待进一步的证据。————————文献: ●林奈《自然系统》，贝塞（1950）的分类系统， ●安斯沃思（Ainsworth，1971、1973）的分类系统， ●阿尔克斯（1981）的近代分类系统 ●余永年;卵菌的系统学和分类学[J];武汉植物学研究;1986年04期 2. rDNA序列分析表明，卵菌和异鞭毛藻类或藻类具有共同的祖先，尤其是卵菌中的丝壶菌门（Hyphochytridiomycota）和网黏菌门（Labyrinthulomycota）与藻类的关系更为紧密。藻类中的异鞭毛藻与其他藻类明显不同，其具有和卵菌相同的线粒体管状脊和其他超显微结构。能够进行光合作用的藻类含有叶绿素c和其他色素，这些色素在其他生物中没有。二、卵菌的近代研究进展： 1.卵菌的基因组学研究进展 1.1由于卵菌与真菌以及其他物种不同，尽管其引起的病害十分严重，但其治理，不同行为的生物学机制以及不同发育阶段的分化机制在分子水平上却远未得到研究。近年来，随着生命科学其他领域的理论和科技的发展与渗透，很多研究方法与技术引入到卵菌研究中，如线性DNA转化技术、报告基因的使用、基因沉默及RNAi【3】，随着大豆疫霉（Phytophthorasojae）、橡树疫霉（P.ramorun）全部

人卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)酶联免疫分析试剂盒使用说明

人卵清蛋白特异性IgE（OVA sIgE）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用特异性：本试剂盒可同时检测人OVA sIgE，且与其他抗体无交叉反应。有效期：6个月预期应用：ELISA法半定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中OVA sIgE含量。说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。实验原理用OVA包被酶标板，制成固相载体。向微孔中先加入待测样品进行反应，然后再加入辣根过氧化物酶标记抗人IgE抗体进行反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的OVA sIgE呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品中OVA sIgE的效价（抗血清最终能显色的最高稀释倍数记为效价）。试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。 2.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 3.辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgE抗体稀释液（HRP-anti-guinea IgE Diluent）：1×10ml/瓶。 4.辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgE抗体（HRP-anti-guinea IgE）：1×120μl/瓶（1：100）。 5.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 6.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 7.终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

生化分离《生物分离与纯化技术》实验题目

2009生化分离工程实验（闭卷考试） 2012生化工艺实验简答题（23选6题，每个实验选一题） 1.在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO？ 2.索氏提取装置由哪几部分组成（画图）？工作原理？ 3.咖啡因升华过程中用到了什么装置？咖啡因的升华结晶应注意哪些操作？ 4.茶叶咖啡因的提取实验中，浓缩去除乙醇的过程中用到了哪些设备？ 5.动物脏器DNA提取实验中，蛋白质是如何去除的？ 6.动物脏器DNA提取实验中，如何鉴定DNA的纯度？ 7.动物脏器DNA提取实验中，RNA是怎样去除的？ 8.动物脏器DNA提取实验中，氯仿-异戊醇的作用是什么？离心后分哪几层？ 9.动物脏器DNA提取实验中，为什么用0.1M NaCl-SSC间歇式的搅拌猪肝？ 10.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上半部），粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？ 11.鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中，所用树脂是哪种？树脂为什么预处理，如何预处理？ 12.DEAE-纤维素是哪种类型离子交换剂，如何预处理DEAE-纤维素？ 13.在鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中固定相、流动相分别是什么？ 14.简要画出离子交换层析系统中所用设备组成图。 15.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上），为什么提取液的pH在3.5左右？ 16.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（下），pH6.5的用意何在？ 17.简述反胶团萃取甘薯中淀粉酶的实验原理 18.栀子黄提取实验中，栀子苷是如何去除的？为什么用此方法去除？ 19.栀子黄提取实验中，如何鉴定藏花红素中栀子苷的去除情况？ 20.栀子黄提取实验中，吸附前为什么将滤液稀释至240mL乙醇？ 21.栀子黄提取实验中，吸附前为什么将滤液pH调至3 22.大蒜SOD提取实验中，是如何去除杂蛋白的？PBS与丙酮的作用分别是什么？ 23.大蒜SOD提取实验中，用哪种方法测定SOD活性？其原理是什么？ 1. 在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO? 答:吸取水分，防止咖啡因蒸汽溶于水；中和鞣酸； 2. 索氏提取装置有哪几部分组成？（画图）

生化技能大赛

鸡卵类粘蛋白的分离与纯化一．前言鸡卵类粘蛋白（chicken ovomucoid 简称CHOM）是鸡卵清中含有的一种糖蛋白，在电泳行为上常出现不均一性，这主要与糖蛋白的分子量不均一性有关。鸡卵类粘蛋白具有强烈抑制胰蛋白酶的作用，是胰蛋白酶的天然抑制剂，胰蛋白酶抑制剂是一类具有胰蛋白酶抑制作用的物质，该类物质的来源不同 ,其活性和作用的酶也不同，常用于胰蛋白酶的酶学性质的研究[1]。另外对牛和猪的胰蛋白酶有强烈的抑制作用，对枯草杆菌蛋白酶也有一定的抑制作用，但对胰凝乳蛋白酶无抑制作用，对人的胰蛋白酶也无明显的抑制作用。另外,蛋白酶抑制剂可以抑制昆虫的生长和发育，近年来在抗虫基因工程得到了广泛的应用[2]。CHOM在中性和偏酸性溶液中对热和高浓度的脲都是相当稳定的，在50%丙酮或10%三氯乙酸溶液中仍有较好的溶解度，但在碱性溶液中比较不稳定，尤其当温度较高时易迅速失活。由于CHOM在PH7.8～8.0的碱性条件下具有很强的结合胰蛋白酶的活性而且这种结合是可逆的，可以CHOM为配基制成亲和吸附剂，通过亲和层析技术有效的分离和纯化胰蛋白酶。二．实验目的：了解并熟悉鸡卵类黏蛋白的提取、分离、纯化的方法,掌握凝胶过滤柱层析、离子交换柱层析、透析纯化等方法分离纯化鸡卵类黏蛋白的原理及操作方法。三．实验原理鸡卵类黏蛋白的提取【基本原理】鸡卵黏蛋白是一种糖蛋白，存在于鸡蛋清中，在10％三氯乙酸或50％丙酮溶液中有较好的溶解度。选择合适的pH值，三氯乙酸浓度和丙酮浓度，可以从蛋清中获得鸡卵黏蛋白的粗提液。凝胶层析对鸡卵类黏蛋白提取液的纯化【基本原理】蛋白质混合溶液在经过凝胶层析柱时，大分子蛋白质沿颗粒间的空隙以较快的速度流过凝胶柱，最先流出柱外。而盐或其他小分子物质因进入凝胶颗粒的微孔中向下移动的速度较慢，所以最后流出柱外。因此通过凝胶层析可以达到除去小分子物质的目的。鸡卵类黏蛋白纯品的制备【基本原理】初步提取得到的鸡卵类粘蛋白，经DEAE-纤维素离子交换柱进一步纯化，可除去少量的杂蛋白。得到鸡卵类粘蛋白的纯溶液。然后经透析、丙酮沉淀、抽真空干燥即可获得鸡卵类粘蛋白纯品。四．材料与试剂仪器：紫外分光光度计电泳仪摇床离心机核酸蛋白检测仪透析袋铁架台层析柱恒温水浴锅电磁炉 4℃冰箱微量取液器材料与试剂：鸡蛋尺子三氯乙酸丙酮磷酸盐缓冲液 DEAE-纤维素 0.3M氯化钠-0.02M PH6.5磷酸盐缓冲液 1M 氯化钠-0.02M PH6.5磷酸盐缓冲液 0.05M PH8.0 Tris-Hcl BAEE 胰蛋白酶 BSA Marker 0.05%考马斯亮蓝R250染色液7%乙酸

米糠中功能性成分的研究现状与发展趋势修订稿

米糠中功能性成分的研究现状与发展趋势 Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】

米糠中功能性成分的研究现状与发展趋势 ?2006-12-21国家食物与营养咨询委员会王永斌（蚌埠学院食品科学与工程系，蚌埠 233000）摘要：米糠是具有很高营养价值和开发前景的稻谷加工副产品。本文重点介绍了米糠功能成分的研究现状与发展趋势，为米糠的综合利用提供参考。关键词：米糠；功能成分；研究现状：发展趋势；综合利用米糠是禾本科植物稻谷的外壳，是碾米过程中被碾下的皮层及米胚和少量碎米的混合物，约占稻谷的5%～6%，它不仅来源丰富，而且营养全面。米糠中富含不饱和脂肪酸、生育酚、生育三烯酚、脂多糖、可食纤维、角鲨烯、γ-谷维醇等生理活性物质。这些物质对于预防人体心、脑血管疾病，抗癌，增强免疫力，降低血脂，预防便秘和肥胖症具有显着的功能作用，是保健食品、医药、化工制造业的重要原料，在世界各国受到广泛重视。同时，米糠含有活性很强的脂肪酶，这种脂肪酶能很快分解米糠中所含的油脂，使酸价迅速上升，并有可能经受脂肪氧合酶的进一步氧化作用（俗称“哈变”），在较短的时间内产生一种令人难以接受的霉味。新鲜米糠，在常温下的几小时内，其酸价可由4mg KOH/g上升到10 mg KOH/g以上，25℃气温下，米糠的游离脂肪酸（FFA）含量以约为1%/h升速增大。米糠中夹杂的害虫和微生物的生命活动也会加速米糠酸败劣变。因此，必须钝化这种酶，使米糠稳定，米糠才可进行深度开发。米糠资源的深度开发利用，必须集约经营，否则难以取得规模效益，工艺、技术及装备等条件也难以实现。国内米糠的总产量虽然很大，但由于稻谷加工企业比较分散，生产规模也不大，再加上新鲜米糠稳定性较差，不易贮存和运输，因此难以集中生产。目前，米糠有效利用率尚不足20%，大部分作为饲料，甚至作为废料，资源浪费严重。 1 米糠的营养成分及生理功能

兔(Rabbit)卵清蛋白特异性IgG(OVA-sIgG)-NEWA

上海笃玛生物科技有限公司本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断兔（Rabbit）卵清蛋白特异性IgG（OVA-sIgG） ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗卵清蛋白特异性IgG（OVA-sIgG）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的卵清蛋白特异性IgG （OVA-sIgG）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

湖南省株洲市2018届高三年级教学质量统一检测理综生物部分(word)

株洲市2018届高三年级教学质量统一检测(二) 理科综合能力测试一、选择题：本题共13小题，每小题6分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1.下列关于细胞的叙述正确的是 A.小分子物质和离子可通过被动运输或主动运输进入细胞 B.细胞分裂的方式有三种：有丝分裂、无丝分裂、减数分裂 C.所有细胞正常代谢都离不开其生活的稳定的内环境 D.癌细胞是动物细胞内具有自养能力并能快速增殖的细胞 2.精卵识别后，精子头部的顶体释放顶体酶使卵子外部结构溶出一条孔道，以利于精卵融合成受精卵。下列叙述正确的是 A.顶体内储存的顶体酶是在精子的溶酶体中合成的 B.精卵细胞的识别、结合与膜表面蛋白质的结构特异性有关精子游冋卵子所需的能量来自线粒体内葡萄糖的氧化分解 D.卵子既供质基因又供核基因，所以受精卵中遗传物质的嘧啶和嘌呤数目不相等 3.下列关于实验的叙述正确的是 A.观察人体口腔上皮细胞的线粒体时，用健那绿染色前需要先用盐酸处理 B.在“生物体维持PH稳定的机制”的实验中，清水组和缓冲液组都可作为对照组 C.不可用绿色植物成熟叶肉细胞进行细胞失水和吸水的观察实验 D.可用澄清的石灰水检验CO2的生成，来探究酵母菌的呼吸方式 4.下列关于植物生长素及其类似物的叙述，不正确的是 A.豌豆幼苗切段中乙烯的合成受生长素浓度的影响 B.生长素是色氨酸在植物体内经过一系列反应转变而来的 C.去掉顶芽，侧芽附近的生长素来源暂时受阻，浓度降低 D.生长素浓度超过最适浓度，随其浓度升高对植物生长抑制作用增强 5.乳头瘤病毒(HPⅤ)是一种球形DNA病毒，人感染可诱发宫颈癌等恶性肿瘤。研究机构为评估某种HPV疫苗的效果，在志愿者中进行接种。一段时间后，统计宫颈癌出现癌前病变(癌变前病理变化，可发展为恶性肿瘤)的人数，结果见表。下列分析错误的是 A.Bl组人群中出现癌前病变比例显著高于A1组，可推测HPV是诱发癌前病变因素

米渣和米糠蛋白的开发利用

米渣和米糠蛋白的开发利用李绮丽．吴卫国（湖南农业大学食品科技学院。长沙４１０１２８）摘要：大米深加工副产物中，米渣和米糠的量最大，可利用价值最高。因其含有丰富的蛋白质而具有很大潜在的经济价值。利用现代科技手段对其进行开发和合理利用既可减少浪费叉可创造更多价值．为农业经济发展带来新的增长点。对米渣和米糠蛋白营养成分、提取方法、蛋白改性、开发利用进行综述，对从事此项工作人员具有很好的参考意义。关键词：营养价值；提取；改性；开发利用中图分类号：偈２１０．９文献标志码：Ａ文章编号：１００１７—６３９５（２００９）０６—００３９—０４世界稻谷生产和消费的主要地区在亚洲．而中国是稻谷生产大国。２００９年稻谷的产量预计超过上年的１．９亿ｔ。在大力发展稻谷种植业的同时，稻谷深加工与综合利用也越来越受到国内外生产厂家的重视。大米加工过程中整米约５５％。碎米１５％，米糠１０％、谷壳２０％，而大米深加工又会产生大量的副产物如碎米、米胚、稻壳、米糠、米渣等。在味精及葡萄糖生产过程中．每吨大米通过糖化后约有０．５ｔ湿米渣，这些副产物不是以低廉的价格出售．就是用于动物饲料，而对其做进一步开发利用的很少。事实上，大米深加工的副产物中含有丰富的蛋白质资源，营养价值不可小视，若利用现代科技手段对大米深加工副产物进行开发和合理利用．既可以减少资源浪费，又可以创造更多价值．为农业经济的发展带来新的增长点。在大米深加工副产物中。以米渣和米糠可利用价值最高。１米渣和米糠蛋白的成分及营养价值米渣是以大米为原料的味精厂、葡萄糖厂、酒厂、麦芽糊精厂等在利用完大米淀粉之后的副产物。经分析，米渣中主要含有的成分是蛋白质和碳水化合物，其中蛋白质含量很高．远大于大米甚至大豆中的蛋白质含量，是良好的蛋白质资源。米渣中的蛋白质主要是胚乳蛋白，由清蛋白（４％一９％）、盐溶性球蛋白（１０％一１１％）、醇溶性谷蛋白（３％）和碱溶性谷蛋白（６６％～７８％）组成ｌ”。米糠是大米加工的副产品。是糙米碾白过程中被碾下的皮层及少量米胚和碎米的混合物。通常米糠的主要成分为油脂１４％。２４％、蛋白质１２％，１８％、收稿日期：２００９一０９—２１作者简介：李绮丽（１９８６一）．女，在读研览生．专业方向为食品科学。通讯作者：昊卫固，男，教授，从事食品科学研究工作。无氮浸出物３３％一５３％、水分７％～１４％、灰分８％一１２％。米糠不仅蛋白质含量丰富，而且其蛋白质的质量和营养价值可与大豆蛋白相媲美。米糠中的必需氨基酸构成与ＦＡ０厢ＨＯ的蛋白质氨基酸构成的理想模式基本一致，更重要的是米糠中还含有一般食物罕见的长寿因子谷胱甘肽。在人体内，谷胱甘肽通过谷胱甘肽过氧化酶的催化．可与过氧化物发生反应，还原过氧化物，避免它对人体造成危害，具有保护大脑功能及有助于体质健康作用。谷胱甘肽在体内还有传递氨基酸的作用田。２米渣和米糠蛋白的提取米渣中主要的蛋白质成分是水不溶性谷蛋白，传统的提取方法是采用碱溶酸沉提取法。称取一定量的大米渣，加人一定比例的水。搅拌均匀；加入一定的碱溶液调节溶液的ｐＨ值，控制一定的温度缓慢搅拌，使蛋白质在碱性状态下溶解；离心分离，去渣，取蛋白液．加入一定浓度的盐酸调节蛋白液至等电点，静置沉淀；蛋白质沉淀完全后离心分离，干燥，即得产品。桂向东等唧对大米的副产品糟渣中的食用蛋白进行了碱法提取，通过正交实验，得出碱提的最佳条件为碱浓度为０．５ｍ肌，温度为５０℃，时间为４ｈ。固液比为ｌ：１２。在此条件下蛋白质的得率为６９．２７％，产品的蛋白质含量为６７．９％。碱溶酸沉法在植物蛋白的提取中已有较长的历史，如在大豆蛋白等的提取中有良好的效果。但是大米在深加工过程中，蛋白质在高温下产生了一定程度的变性．导致米渣中蛋白质在碱性条件下溶解性较差，影响了蛋白质的提取。由于碱法提取米渣蛋白有诸多弊端，故此法的应用越来越少ｆ４一。有研究人员采用碱酶两步法提取蛋白质，即先万方数据

实验五鸡蛋清中卵类粘蛋白分离纯化及活性测定

实验五鸡蛋清中卵类粘蛋白分离纯化及活性测定一、实验目的和要求 1）设计从鸡蛋清中分离纯化卵类粘蛋白的试验方案。 2）设计从鸡蛋清中分离纯化卵类粘蛋白的试验操作条件。 3）了解离子交换层析系统中四大组成部分和实验主要影响因素。 4）掌握熟离子交换层析层析仪的使用方法和注意事项。 5）学会凝胶预处理和装柱、平衡、洗脱的方法。二、器材和试剂 1．实验器材：层析系统LH-2，（包括自动部分收集器，紫外检测仪，记录仪，蠕动泵，梯度混合器）6套；高速离心机；布氏漏斗；烧杯500ml,100ml，各16个；移液管1、2、5ml, 各16个；量筒50ml,100ml，各16个；真空干燥器 4个；滴管， 16个；滤纸φ120， 1盒； 2．实验试剂： (1)丙酮；(2)1％，pHl.15的三氯乙酸：将称取的三氯乙酸置烧杯内，加入2／3总体积的蒸馏水溶解，用6mol／L氯氧化钠调至约pHl.15，静置约1h，然后在pH计上校正至pH 1.15，最后补充水到所配体积；(3)0.02 mol／L,pH6.5，磷酸盐缓冲液；(4)0.5mol／L 氯化钠—0.5mol／L氢氧化钠溶液；(5)0．5mol／L盐酸溶液；(6)0.3mol/L氯化钠—0.02mol ／L磷酸盐缓冲液，pH6.5；(7)底物缓冲液：0.05mol／L，Tris-HCl缓冲液，pH8.0，内含2.22mol／L的氯化钙；(8)2mmol／1,BAEE底物：用底物缓冲液配制；(9)lmg／mL胰蛋白酶溶液：用0.001 mol／L盐酸配制；(10)DEAE-纤维素粉(DE-32)；(11)SphadexG-25；（12）鸡蛋 30个；（13）1％硝酸银三、实验原理 1．蛋清中蛋白质结构组成为：卵清蛋白、卵转铁蛋白、卵类粘蛋白、卵粘蛋白、溶菌酶、G2、G3球蛋白、卵抑制素、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、蛋白抑制剂、抗生物素蛋白。2．鸡卵类粘蛋白(chickenovomucoid，CHOM)的性质: 鸡卵类黏蛋白(chickenovomucoid，CHOM)是由鸡卵清中制得的一种糖蛋白，可强烈地抑制胰蛋白酶，对枯草芽孢杆菌蛋白酶也有一定程度的抑制作用，但对胰凝乳蛋白酶无抑制作用，对人的胰蛋白酶也无明显的抑制作用。常用于胰蛋白酶酶学性质的研究。也可将其制成亲和吸附剂，通过亲和层析技术有效地分离与纯化胰蛋白酶。