嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后损伤区髓鞘相关轴突生长抑制因子受体表达的影响
中国骨伤２０１１年１月第２４卷第１期 Ｃｈｉｎａ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ Ｔｒａｕｍａ，Ｊａｎ．２０１１．Ｖｏ１．２４．Ｎｏ．１ ・５１・
・基础Ｘ０ｔ＂究・
嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后损伤区髓鞘相关轴突
生长抑制因子受体表达的影响
袁普卫 ，贺西京 ，王国毓 （１．陕西中医学院骨伤研究所骨病关节研究室，陕西咸阳７１２０００；２．西安交通大学第二医院骨二科）
【摘要】 目的：观察嗅鞘细胞移植前后脊髓损伤区髓鞘相关轴突生长抑制因子受体（ＮｇＲ）的变化，探讨嗅鞘细胞 移植治疗脊髓损伤的有关机制。方法：实验于２００６年９月至２００７年５月在西安交通大学医学院环境与基因重点实验 室完成。 实验动物：成年健康ＳＤ雄性大鼠４０只，用随机数字表法分为正常组、模型组、嗅鞘细胞组和ＤＦ１２对照组，每 组１０只。另取３０只健康成年雄性ＳＤ大鼠作为嗅鞘细胞的来源。 实验方法：除正常组外，其余各组均建立全横切脊 髓损伤模型。嗅鞘细胞组将原代培养１２ ｄ的嗅鞘细胞悬液调整为（１ｘ１Ｏ“）个／Ｌ，在距损伤缘上下各１ ｍｍ处分４点应 用微量注射器注射，深度１．０ ｍｍ，每处各注射１ Ｉｘｌ；ＤＦ１２对照组同法每点注射等量ＤＦ１２培养液；模型组、正常组不进 行任何处理。⑧观察项目与方法：各组分别于移植后１、４、８周采用免疫组化技术动态检测脊髓损伤区ＮｇＲ表达的变 化。同时在移植后８周后行嗜银染色检测组织形态学变化。结果： ＮｇＲ表达的变化：正常组ＮｇＲ表达的吸光度值明 显低于其余３组（尸＜０．０５）。嗅鞘细胞组于移植后１，４，８周脊髓损伤区ＮｇＲ的表达均明显低于模型组和ＤＦ１２对照组 （Ｐ＜Ｏ．０５或Ｐ＜０．０１），而模型纽和ＤＦ１２对照纽差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。 组织形态学变化：嗅鞘细胞移植８周后 除正常组外，其余各组均可见明显的神经纤维再生，但模型组与ＤＦ１２对照组大部分纤维排列紊乱，再生纤维方向性 较差；嗅鞘细胞组可见明显的新生轴突，且神经纤维跨越损伤部位修复脊髓损伤，无论在数量还是质量上均优于模型 组及ＤＦ１２对照组。结论：嗅鞘细胞移植可能通过降低脊髓损伤区ＮｇＲ蛋白的表达，从而促进损伤脊髓的修复。 【关键词】 脊髓损伤； 髓鞘相关轴突生长抑制因子受体； 免疫组织化学； 细胞移植 ＤｏＩ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１００３—００３４．２０１ １．０１．０１５
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉ０ｎ ｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＮｇＲ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｊｕｒｉｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ ＹＵＡＮＰｕ—ｗｅｉ ，ＨＥ Ｘｉ－ｆｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｇｕｏ—ｙｕ． Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆＢｏｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｊｏｉｎｔ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉ— ｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏ！ ｏｆＳｈａｎ￣ｉ，Ｘｉａｎｙａｎｇ ７１２０００，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＮｇＲ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ（ＳＣＩ）ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｃｅｌｌｓ（ＯＥＣｓ）ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｌｅｖａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＯＥＣｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｒｅａｔｉｎｇ ＳＣＩ．Ｍｅｔｈ－ ｏｄｓ：Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｅｎｆｏｒｃｅｄ ｆｒｏｍ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００６ ｔｏ Ｍａｙ ２００７ ｉｎ ｔｈｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｇｅｎｅｓ Ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｘｉ＂ａｎ Ｊｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．①Ｆｏｒｔｙ ａｄｕｌｔ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ＯＥＣｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＤＦ１２ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｒａｎｄｏｍ ｄｉｇｉｔｓ ｔａｂｌｅ．Ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ １０ ｒａｔｓ．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，３０ ｈｅａｌｔｈｙ ｍａｌｅ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ａｃｃｅｐｔｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ．＠Ｔｈｅ ｒａｔｓ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ＯＥＣｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＤＦ１２ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｃｕｔ ｏｆｆ Ｔ】ｏ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ＳＣＩ ｍｏｄｅ１．Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ ＯＥＣｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ［（１ｘｌＯ“）ｐｉｅｃｅ／Ｌ］ｗａｓ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｒｅ— ｇｉｏｎ ａｂｏｕｔ １ ｍｍ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍａｒｇｉｎ ｏｆ ｉｎｊｕｒｙ（ａｂｏｕｔ １．０ ｍｍ ｄｅｐｔｈ ａｎｄ ｅｖｅｒｙ ｐｌａｃｅ ｗｉｔｈ １ Ｉｘ１）ｏｆ ＯＥＣｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＤＦ１ ２ ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｌｕｉｄ ｗａｓ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ＤＦ１２ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｉｎ ａ ｓａｍｅ ｄｏｓｅ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｄｉｄ ｎｏｔ ａｎｙ ｄｉｓｐｏｓａ１． ⑧Ｉｎ ｔｈｅ １ ｓｔ，４ｔｈ ａｎｄ ８ｔｈ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｊｅｅｔｉｏｎ，ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＯＥＣｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａ— ｔｉｏｎ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＯＥＣｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ８ｔｈ ｗｅｅｋ ａｆｔｅｒ ｉｎｊｅｃ— ｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｌｌ ４０ ｒａｔｓ ｓｕｒｖｉｖｅｄ ａｎｄ ｗｅｒｅ ａｃｃｅｐｔｅｄ ｆｏｒ ａｎａｌｙｓｉｓ．①Ａｔ ｔｈｅ １ｓｔ，４ｔｈ ａｎｄ ８ｔｈ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｉｍｍｕｎｏｈｉｓ— ｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＮｇＲ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜Ｏ．０５）， ａｎｄ ｉｎ ＯＥＣｓ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ＤＦＩ２ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５ ｏｒ Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉ— ｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＤＦ１２ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．②Ａｔ ｔｈｅ ８ｔｈ ｗｅｅｋ ａｆｔｅｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ ｎｅｒｖｅｆｉｂｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｉｎｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ＯＥＣｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄＤＦ１２ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｆｉｂｅｒｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＤＦ１２ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｒｒａｎｇｅｄ ｉｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ＯＥＣｓ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＯＥＣｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａ— ｔｉｏｎ ｍａｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｒｅｐａｉｒ ｏｆ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ ｂｙ ｄｅｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＮｇＲ． ＫＥＹＷＯＲＤＳ Ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ； ＮｇＲ； Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ； Ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ＺｈｏｎｇｇｕｏＧｕ Ｓｈａｎｇ／Ｃｈｉｎａ ＪＯｒｔｈｏｐＴｒａｕｍａ，２０１１，２４（１）：５１－５４ ＷＷＷ．ｚｇｇｓｚｚ．ｃｏｒｎ
通讯作者：袁普卫Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｐｉｎｅ—ｓｕｒｇｅｏｎ＠１６３．ｃｏｎｌ
・５２・ 中圈骨伤２０１１年１月筇２４卷第ｌ期 Ｃｈｉｎａ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ Ｔｒａｕｎｍ，Ｊａｎ．２０１１，Ｖｏ１．２４，Ｎｏ．１
轴突生长抑制因子（ＮｏｇｏＡ、ＭＡＧ及ＯＭｇＰ）及
其相关信号轴突抑制因子受体ＮｇＲ（Ｎｏｇｏ一６６ ｒｅｃｅｐ—
ｔｏｒ）、ＲｈｏＡ在脊髓损伤中的作用成为近年来脊髓损
伤的研究热点。嗅鞘细胞（ＯＥＣｓ）凶自身特点曾被誉 为２１世纪治疗脊髓损伤最有前景的移植材料…。基
础及临床研究均表明ＯＥＣｓ移植能够促进脊髓功能 的恢复，但其是否能通过影响ＮｇＲ的表达来促进损
伤脊髓的再牛目前尚 十分明确，本实验通过观察
ＯＥＣｓ移植前后ＮｇＲ的动态变化，从而进一步探讨
ＯＥＣｓ移植治疗脊髓损伤的可能机制。
１材料与方法
１．１ 实验动物与分组 实验于２００６年９月至
２００７年５月在西安交通大学医学院教育部环境与 基凶重点实验室完成。成年ＳＤ大鼠４０只（由两安
交通大学实验动物中心提供），８周龄，体质量２５０～
３００ ｇ，雄性大鼠，随机数字表法分为正常组、模型
组、嗅鞘细胞组（ＯＥＣｓ组）、ＤＦ１２对照组，每组１０只。
另取３０只健康成年雄性ＳＤ大鼠用于嗅鞘细胞的
取材，体质量２００～２５０ ｇ。
１．２实验仪器与试剂 胎牛血清、ＤＦ１２、胰蛋白酶 （均为ＧＩＢＣＯ产品）；兔抗鼠Ｐ７５ ＮＴＲ单克隆抗体，
羊抗兔二抗、ＤＡＢ显色试剂盒（均为武汉博士德公
司产品）；小鼠抗大鼠ＮｇＲ、羊抗小鼠二抗（均为
ＣＨＥＭＩＣＯＮ公司产品）；２５ ｅｍ 斜口细胞培养瓶
（Ｈｙｃｌｏｎｅ产品），超净工作台（ＢＣＭ一１Ｏ００Ａ，苏州苏
净集团安泰公司）；荧光 微镜（ＡＦＸ—ＩＩＡ，日本
Ｎｉｋｏｎ）；体式显微镜（Ｓ６Ｄ，德国Ｌｅｉｃａ）；荧光倒置显
微镜（ＤＭＩＬ，德国Ｌｅｉｃａ）；手术显微镜（德国Ｌｅｉｃａ）；
ＣＯ２培养箱（ＢＢ１６，美国Ｈｅｒａｅｕｓ）；ＬｅｉｃａＱ５００ＩＷ图 像处理分析系统； 体定向仪（Ｎａｒｉｓｈｉｇｅ ＳＲ一６）。
１．３实验方法
１．３．１ 嗅鞘细胞的取材、培养、鉴定及纯化 按参
考文献［２］进行。大鼠断颈处死，头部浸入７５％的乙
醇３ ｒａｉｎ。在超净台内迅速取出两侧嗅球，置于Ｄ—
Ｈａｎｋｓ平衡盐溶液中除去软膜，然后用Ｄ—Ｈａｎｋｓ液 冲洗２遍。在手术显微镜下用眼科剪剪取嗅球最外
２层（嗅神经层和小球层），并将其剪碎，将剪碎组织 按８００ ｒ／ｍｉｎ离心３ ｒａｉｎ，取出弁上清液，滴加质量浓
脊髓损伤的治疗现状及进展
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脊髓损伤的治疗现状及进展
作者：夏计划 邹国耀
来源：《中国医药科学》2013年第09期
[摘要]脊髓损伤（SCI）由于损伤机制的不同，分为原发性、继发性损伤。原发性损伤是直接损伤，多为创伤性的，具有不可逆性。继发性损伤为创伤后的病理生理过程，包括神经细胞的坏死和凋亡等，具有可逆性。既往有不少学者在阻止或减少继发性损伤的治疗方面做了很多研究，取得了一定的成果；近年来有不少新的行之有效的方法涌现，现就脊髓损伤的治疗现状及进展作一综述，以期为研究人员或医务工作者提供有价值的参考。
[关键词]脊髓损伤；治疗；进展；综述
[中图分类号] R651.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）09-46-03
脊髓受到外力造成的直接损伤为原发性损伤，直接损伤后会有一系列的病理生理过程，即脊髓继发性损伤，一旦造成损伤，后果较为严重。近年来对脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）的研究较多，治疗方法也有很多，传统的方法通过手术解除压迫，内固定使脊柱恢复原有的序列及稳定性，以及药物，高压氧等非手术治疗手段来减轻脊髓继发性损伤，但在神经细胞的恢复方面效果不佳，因此涌现出新的治疗方式，如细胞移植，基因治疗等。引起国内外众多学者关注。
1 手术治疗
SCI后早期行内、外减压术，结合牵引、过伸等整复骨折脱位、椎间植骨融合椎弓根内固定稳定脊柱等方法可达到较为理想的治疗效果。颈髓损伤：根据脊髓腹侧或背侧受损的情况及适应征，选择适宜的手术方式。陈雄生等[1]报告3163例颈前路手术，发生颈脊髓和神经根损伤占总例数的0.41%。胸腰段脊髓损伤：可根据具体损伤类型采用前路、后路手术，近年来，国内外学者在探索前后联合入路手术来处理严重而复杂的脊柱结核、胸腰椎骨折和脱位等。金大地等[2]报告2560例腰椎间盘突出症及腰椎管狭窄症术后发生神经损伤22例，其中有16例完全恢复，马尾神经损伤未完全恢复4例。实时三维导航辅助椎弓根螺钉植入技术应用于脊柱畸形的矫正中，增加了弓根螺钉植入的精确性，降低螺钉重植率，大大降低了医源性损伤[3]。但国外有研究者实验表明[4]：手术内固定器械造成脊柱的过牵，可造成的脊髓牵拉损伤。以上手术方法均有其优点及不足，进行选择时应严格把握适应证，既要达到治疗目的，也要避免医源性损伤的发生。
细胞移植在脊髓损伤治疗的研究进展
脑与神经疾病杂志２００８年第１６卷第１期
细胞移植在脊髓损伤治疗的研究进展
雷德强（综述） 张方成赵洪洋（审校）
中图分类号：Ｒ７４４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—３５１ｘ（２００８）０１—００７１—０３
脊髓损伤（ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ，ＳＣＩ）的治疗一直是医学界的
难题。随着脊髓损伤病理生理过程认识的不断深入，各种治疗 方法不断取得进展。近年来，细胞移植在实验性脊髓损伤治疗
的研究中日益深入，显示出良好的应用前景。本文对细胞移植
治疗脊髓损伤的研究进展及应用前景进行综述。
细胞移植治疗脊髓损伤是近来脊髓损伤治疗的研究热点。
目前在实验研究中被认为治疗脊髓损伤有效的载体包括：神经
干细胞（ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＮＳＣｓ）、胚胎干细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ
ｃｅｌｌｓ，ＥＳＣｓ）、骨髓间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｅｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，
ＭＳＣｓ）、嗅鞘细胞（０１ｆａｃｔｏｒｙ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｃｅｌｌｓ，ＯＥＣｓ）、雪旺细胞
（Ｓｃｈｗａｎｎ ｃｅｌｌｓ，ＳＣｓ）、少突胶质细胞和成纤维细胞等。
细胞移植可在脊髓损伤的多个方面起作用，其治疗脊髓损
伤的机制可能为：①桥接脊髓损伤断端，形成功能性突触，重新
建立神经传导通路；②分泌多种神经营养因子改善脊髓局部微
环境并启动再生相关基因的顺序表达，从而促进轴突的再生；
③使损伤的脱髓鞘轴索再髓鞘化，恢复有髓神经电传导功能。
１、神经干细胞（ＮＳＣｓ）
神经干细胞是一种未分化、多潜能、具有自我更新能力的
前体细胞，它的子细胞能够分化产生神经系统的各类细胞，且
经过多次分裂后仍能稳定地保持自身的特性。其良好的生物
学特性表现在：（１）具有自我增殖分裂、自我更新能力和多向分
化潜能；（２）对损伤和疾病具有反应能力，可远距离迁移至病
损部位；（３）作为基因转导或表达的载体，其表达稳定，维持时
间长，而且可避免机体产生的排异反应…。
神经组织工程修复脊髓损伤中的种子细胞
神经组织工程修复脊髓损伤中的种子细胞
作者：曾晗冰，李士， 李万里，徐华梓
【摘要】 脊髓损伤后局部产生的各类抑制因子和神经断端之间的瘢痕都是脊髓损伤难以修复的重要原因。通过细胞移植不仅可以补充局部损失的细胞，而且可以增进损伤脊髓功能的恢复。本文对脊髓损伤修复中的各类常见种子细胞进行了综述，并对各类细胞的优缺点进行了讨论。最后按照目前的研究现状，对细胞移植医治脊髓损伤的研究趋势进行了展望。
【关键词】 脊髓损伤； 组织工程； 神经组织； 种子细胞； 修复
Abstract：The inhibitory environment and loss of axonal connections
after spinal cord injury pose many obstacles to regenerating the lost
tissue．Cellular therapy provides a means of restoring the cells lost to the
injury and could potentially promote functional recovery after such
injuries．This review presents a summary of the various types of cellular
therapy used to treat spinal cord wide range of cell types have been
investigated for such uses and the advantages and disadvantages of each cell
type are discussed along with the research studying each cell type．Based on
the current research，suggestions are given for future investigation of cellular therapies for spinal cord regeneration．
嗅鞘细胞联合血管内皮生长因子促进周围神经再生的实验研究
山东医药２０１２年第 鲞箜三
嗅鞘细胞联合血管内皮生长因子促进
周围神经再生的实验研究
王磊，吕刚，李永明，庄培元。李帅，贾志强
（辽宁医学院，辽宁锦州１２１００１）
摘要：目的探讨嗅鞘细胞（ＯＥＣｓ）与血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）联合移植促进坐骨神经再生的协同作用。方
法取ｓＤ大鼠６０只，随机分成４组，即生理盐水（ＣＯＮ）组、ＶＥＧＦ组、ＯＥＣｓ组和ＶＥＧＦ＋ＯＥＣｓ组。制作大鼠坐骨
神经缺损模型，在再生室内分别注入ＣＯＮ、ＶＥＧＦ、ＯＥＣｓ、ＶＥＧＦ＋ＯＥＣｓ。术后观察各组大鼠一般状态，并于术后４
周和１２周在光镜、电镜下观察再生室神经再生情况，检测大鼠坐骨神经电生理情况等。结果ＶＥＧＦ组、ＯＥＣｓ组
和ＶＥＧＦ＋ＯＥＣｓ组坐骨神经单位横断面有髓神经纤维计数及其直径，电生理检测结果及腓肠肌湿质量均高于ＣＯＮ
组（Ｐ均＜０．０５）。ＶＥＧＦ＋ＯＥＳ组神经纤维的组织形态学优于ＶＥＧＦ、ＯＥＣｓ组。结论ＯＥＣｓ移植联合ＶＥＧＦ对大
鼠神经再生均有明显的促进作用，二者有协同作用。
关键词：神经再生；嗅鞘细胞；血管内皮生长因子；移植
中图分类号：Ｒ６５１．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２—２６６Ｘ（２０１２）３３－００２５－０３
Ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｓｃｉａｔｉｃ
ｎｅｒｖｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ＷＡＮＧ Ｌｅｉ。ＬＶ Ｇａｎｇ，ＬＩ Ｙｏｎｇ—ｍｉｎｇ，ｚＨＵＡＮＧ Ｐｅ —ｙｕａｎ，ＬＩ Ｓｈｕａｉ，ＪＩＡ Ｚ —ｑｉａｎｇ
（Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｊｉｎｚｈｏｕ １２１００１，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｅｎｓｈｅａｔｈｉｎｇ ｃｅｌｌ（ＯＥＣｓ）ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ
神经胶质细胞移植与脊髓再生
江苏临床医学杂志２００２年第６卷第２期
●综述
神经胶质细胞移植与脊髓再生
章庆峻 罗卓荆 李明全
（第四军医大学西京医院垒 骨科研究所，西安，７１００３２）
关键词脊髓损伤；细胞移植；轴完再生
中图井类号：Ｒ０５１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７ ６５ｔ４（２００２）０２ ０［６５ ０４
脊髓损伤（ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｉＩｕｗ，ＳＣＩ）后，由于在
中枢神经系统（ｃｅｎｔｒａｌ ＩｌｅＰ，ｒＯＵＳ ｓｙｓｔｅｍ，ＣＮＳ）没有
能提供断裂轴突有效再生的微环境而使ＳＣＩ不能
痊愈，给伤者留下严重的躯体功能障碍。大多数
神经胶质细胞在ＣＮＳ移植后均能诱导ＣＮＳ轴突
的再生。在早期，人们从外周神经移植、轴突完全
再生的成功经验中发现：外周神经系统（ｐｅｒｉｐｌｅｒａｌ
Ｆｌｅｌ３，＇ＯＵ８ ｓｙｓｔｅｍ，ＰＮＳ）之所以能完全再生，主要是
由于神经轴突的髓鞘细胞一雪旺细胞（Ｓｃｈｗａｎｎ
ｃｅｌｌ，ＳＣ，神经膜细胞）能有效地增殖形成引导通
道，并分泌大量神经营养因子和细胞分子，促使轴
突有效再生，功能恢复。而在ＣＮＳ与ＳＣ相一致
少突胶质细胞却元此类功能，其增生迁移晚于再
生轴突，不能形成轴突迁移的 ｆ导通道，导致再生
轴突“迷路”，并分泌抑制性因子抑制轴突生长；
ＣＮＳ中另一主要胶原细胞一星彤胶质细胞在损
伤后能较快反应性增生，过度增生形成胶原瘢痕，
使已迷路的中枢再生轴突失去有效再生。因此，
在ＳＣＩ区域，能植入一种有能力改变Ｃ ｓ损伤后
微环境、促进和诱导ＳＣＩ轴突有效修复再生的基
质，是人们一直努力的目标。应用ＳＣ（包括周围
神经）、胚胎脑和脊髓组织、少突胶质细胞以及胶
质细胞类的空管膜细胞（ｅｐｅｎｄｙｍａｌ ｃｅｌ１）ｌ１ Ｊ和伸展
细胞（ｔａｎｙｃ￣＃ｔｅ） Ｊ等移植于ＳＣＩ内，通过大量实验
证实是有效的，但终未能达到类似于ＳＣ在ＰＮＳ
中有作用 近几年来，嗅鞘细胞（ｏｌ｛ａｃｔｏｒｙ ｃ＝ｎ—
骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤
骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤
【摘 要】脊髓损伤（spinal cord injury， sci）是一种临床上常见的以损伤平面以下感觉、运动功能完全丧失和大小便失禁为主要表现的中枢神经系统的严重创伤。由于神经元本身再生能力不足及损伤局部缺乏适宜的再生微环境，脊髓损伤的治疗成为医学界研究的难题。近年来，随着神经生物学和干细胞技术的发展，干细胞移植成为治疗脊髓损伤的新希望和新方法。目前可供选择的移植细胞类型有胚胎干细胞、神经干细胞、嗅鞘细胞、雪旺细胞、骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，bmscs）和成纤维细胞等，而骨髓间充质干细胞以其强大的增殖和分化能力，取材方便，易于分离培养和低免疫源性等特征而被广泛用于疾病研究及治疗，因此探索bmscs移植治疗sci具有重要的临床意义。本实验旨在研究bmscs的不同移植方式对于sci治疗效果的比较，为临床bmscs移植治疗sci寻找一种更有效的移植方式。
【关键词】骨髓间充质干细胞；细胞移植；脊髓损伤
【中图分类号】r459 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）03-0039-04
材料和方法
1.大鼠bmscs的培养
健康雄性wistar大鼠，spf级，年龄30天左右，由湖北省实验动物研究中心提供，合格证号：scxk（鄂）2008-0005。
全骨髓贴壁法：取一月龄wistar大鼠，断颈处死；严格无菌条
件下取大鼠的
双侧后肢的股骨和胫骨，去除骨表面的肌肉组织，hanks液清洗，剪去骨骺端，暴露骨髓腔；用5ml的无菌注射器吸取hanks液冲洗骨髓腔，收集冲出的骨髓细胞，反复吹打制成单细胞悬液；而后接种在t25的培养瓶内，置于37℃ 、5%co2培养箱内孵育。首次换液时间为第3天，以后每3天更换培养液一次。待细胞融合达到70%开始传代。
许旺细胞修复脊髓损伤相关研究
・ １１６ ・ 国际骨科学杂志２０１０年３月 第３１卷第２期Ｉｎｔ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ，Ｍａｒｃｈ ２５，２０１０，Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．２
许旺细胞修复脊髓损伤相关研究
杨豪程云为 郭晓东 杨述华
摘要脊髓损伤修复至今仍是医学界难题之一，以许旺细胞（ｓＣ）为基础的细胞移植在近年脊髓损 伤修复研究方面取得很大进展。ＳＣ单独移植对脊髓损伤后运动功能恢复仍然有限，很多研究更多地关 注ＳＣ与其他种子细胞联合移植，以提高ｃＡＭＰ水平，中和神经抑制性因子等。目前对损伤轴突修复研 究主要采用以ＳＣ为基础的联合移植方式，但仍有很多问题如ＳＣ移植存活率、内源性ＳＣ移行等有待进
一步研究。 关键词许旺细胞；脊髓损伤；轴突再生；细胞移植；再髓鞘化 Ｄ０Ｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—７０８３．２０１０．０２．０１９
脊髓损伤时机械暴力及随后产生一系列生物化学反 应导致了局部神经元和胶质细胞的死亡、轴突断裂、神经
通路完整性丧失 ］。然而脊髓损伤断端处形成的神经胶
质瘢痕对于轴突再生产生了机械屏障作用，此外瘢痕会
产生大量轴突生长抑制因子表达在细胞表面。可见，脊 髓损伤后组织环境对轴突再生是不利的，损伤轴突不能
参与形成运动功能恢复的新神经通路 ］。为了促进损伤
轴突再生，需要在脊髓断端处移植入含有种子细胞的生 长基质。种子细胞可分泌神经营养因子，改善脊髓损伤
后抑制性组织环境，提高损伤轴突再生能力，并穿越损伤 节段，建立有功能的神经突触连接 。］。目前用于移植治
疗脊髓损伤的种子细胞有许旺细胞（Ｓｃｈｗａｎｎ’Ｓ ｃｅｌｌ，ＳＣ）、
嗅鞘细胞（ＯＥＣ）、多能干细胞、基因修饰的成纤维细胞、巨
噬细胞等。 近年来，ＳＣ用于修复脊髓损伤受到广泛关注。脊髓
组织损伤后局部环境释放多种炎性介质，诱导ＳＣ发生一 系列改变，如去分化、移行、分裂增殖、分泌表达神经营养
因子、再髓鞘化再生轴突等 ］。脊髓损伤后ＳＣ从外周移
纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞髓鞘形成相关蛋白表达的影响
第ｌ９卷第２期 ２００９年３月 江苏大学学报（医学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｖｏ１．１９ Ｎｏ．２ Ｍａｒ．２００９
纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞髓鞘形成相关蛋白表达的影响
陈 静 ，黄秋生。，窦 毅 ，宗海洋 ，崔颜宏 ，
庄 琴 ，孙湘兰 ，龚爱华 ，张志坚
（１．江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江２１２０１３；２．江苏大学附属医院耳鼻喉科，江苏镇江２１２００１）
［摘要］ 目的：探讨纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞髓鞘相关蛋白表达的影响。方法：将体外培养的成人鼻粘膜嗅鞘 细胞种植于纤维蛋白支架，用多聚赖氨酸修饰的玻片作为对照底物，培养ｌ４天后用扫描电镜观察细胞的形态学变化 并对细胞内髓鞘形成相关蛋白２，３－环核苷３一磷酸二酯酶（２ ，３ ｃｙｃｌｉｃ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ３ ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ，ＣＮＰａｓｅ）和髓鞘 碱性蛋白（ｍｙｅｌｉｎ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＢＰ）进行免疫荧光染色定位和免疫印迹半定量测定，分析纤维蛋白支架对人嗅鞘细 胞ＣＮＰａｓｅ和ＭＢＰ表达的影响。结果：人嗅鞘细胞种植于纤维蛋白支架后，其形态为长条带状，细胞成束排列，方向
一致。细胞内ＣＮＰａｓｅ和ＭＢＰ表达水平明显高于对照组。结论：纤维蛋白支架与人嗅鞘细胞具有很好的生物相容性 并可促进细胞表达髓鞘相关蛋白ＣＮＰａｓｅ和ＭＢＰ；将该组织工程支架用于移植治疗脊髓损伤，有利于再生神经纤维的 髓鞘形成。 ［关键词］人嗅鞘细胞；组织工程支架；纤维蛋白（原）；２，３－环核苷３一磷酸二酯酶；髓鞘碱性蛋白 ［中图分类号］ Ｒ３１８．０８ ［文献标志码］ Ａ 【文章编号］ １６７１—７７８３（２（】０９）０２—００９８—０４
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｉｂｒｉｎ ｓｃａ ｌｄ ｏｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｔｈｅ ｍｙｅｌｉｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
嗅鞘细胞移植治疗国外脊髓损伤患者的围手术期护理
・ １Ｏ１Ｏ ・ 护士进修杂志２００７年６月第２２卷第ｌ１期
嗅鞘细胞移植治疗国外脊髓损伤患者的围手术期护理
赵艳萍 王苏珍 李兵
（北京市虹天济神经科学研究院，北京市西山医院，北京１０００４１）
摘 要 目的探讨嗅鞘细胞移植治疗国外脊髓损伤患者的护理措施及效果。方法对８３例国外脊髓损伤患
者术前做好心理护理、基础护理及术前准备；术后严密观察生命体征，预防并发症及康复指导。结果８３例患者脊
髓功能部分恢复，生存质量均有改善，未发生并发症。结论科学有效的护理策略是保障手术成功、预防并发症、促
进功能康复的重要保证。
关键词 嗅鞘细胞移植 国外患者 脊髓损伤 围手术期护理
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｏｌｆａｃｔｏｒｙ ｓｈｅａｔｈ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｆｏｒｅｉｇｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉ￣ｕｒｙ Ｐｅｒｉｏｐｅｒａｔｉｖｅ
ｎｕｒｓｉｎｇ ｃａｒｅ
中图分类号：Ｒ４７３．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２—６９７５（２００７）１１—１０１０—０２
脊髓损伤是人类一种灾难性的创伤，往往造成
患者不同程度的截瘫，严重影响患者生活自理能力
和参与社会活动的能力 ］。嗅鞘细胞移植是神经功
能重建的方法之一，目前被认为是治疗脊髓损伤较
有前景的方法。现将２００４年１１月～２００５年１１月
８３例国外脊髓损伤患者在我科进行嗅鞘细胞移植
术的护理体会报告如下。
１资料与方法
１．１一般资料 ８３例中男６６例，女１７例，年龄９
～７５岁，平均年龄３５．７岁。本组患者均符合手术
适应证 ］：脊髓损伤后时间超过６个月，脊髓损伤部
位没有压迫病变，脊髓没有横断性解剖断裂。
１．２手术方法 全麻下行病变节段后方人路，切开
硬膜，显露出脊髓。在脊髓损伤部位与正常脊髓上
下交界处分两点各注入０．０２５ ｍｌ嗅鞘细胞悬液，约
５×１０ 个。术后给予止血、抗感染等处理嘲。
１．３结果 按美国脊髓损伤学会指定的评分标
细胞移植：脊髓损伤临床研究中应关注的问题——细胞移植：脊髓损伤临床研究中应关注的问题
中国脊柱脊髓杂志２００７年第１７卷第９期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＳｐｉｎｅ ａｎｄ Ｃｏｒｄ，２００７，Ｖｏｆ．１７，Ｎｏ．９ ６４７
细胞移植治疗脊髓损伤的相关问题探讨
【编者按】自本－？ｌｊ就嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤发表了几篇观点不同的文章以来．有关细胞移
植在脊髓损伤治疗中的作用问题又一次引起了大家的关注。本期编辑部邀请了在该领域做了
较多工作和进行过较多研究的几位专家．就该热点问题进行讨论 他们从不同角度阐述了这一
治疗方法，介绍了细胞移植的种类及各自的优势和存在的问题．并就临床研究方案的设计、适
应证选择、疗效评估标准等提出了自己的观点。他们对这一方法的认可程度不同．对有些问题
的看法也不尽相同，但他们都提出了证明各自观点的令人信服的依据 希望各位同道阅读他们
的文章后，能结合自己的经验对该治疗方法做出自己的判断或提出自己的见解．以推动脊髓损
伤研究的发展
中图分类号：Ｒ６８３．２，Ｑ８１３ 文献标识码：Ｃ 文章编号：ｌＯＯ４—４ｏ６ｘ（２ｏｏ７）一０９—０６４７一ｌＯ
细胞移植：脊髓损伤临床研究中应关注的问题
关骅（中国康复研究中心脊柱脊髓外科１０００６８北京市）
脊髓损伤是可造成患者终生残疾的严重损伤。根据ＷＨＯ“健康功能国际分类（ＩＣＦ）”标准．脊髓损伤可造
成患者器官水平的神经功能障碍（ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ），患者整体水平的各种功能障碍（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）Ｎｔ．社会水平的参与
障碍（１ｉｍｉｔｅｄ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｏｎ）。这些不同层次的障碍给患者、家庭及社会带来沉重负担。２０世纪中期以后，临床
医学及康复医学的进展使脊髓损伤的严重并发症得到有效控制，脊髓损伤患者的平均寿命接近正常平均寿
命，患者的生活自理能力得到显著提高。但是．脊髓损伤特别是完全性脊髓损伤仍无有效治疗方法，如何修复
或重建脊髓神经结构的连续性及恢复脊髓神经功能仍是医学界正在努力解决的难题。