克伦特罗Elisa试剂盒说明
克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书
一、概要
克伦特罗（Clenbuterol）属于β-兴奋剂，因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。HPLC或GC-MS一直用作检测β兴奋剂的方法，但是其前处理步骤费用昂贵；而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测尿，肌肉，肝脏及饲料中的CLE。
本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被克伦特罗抗原，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体,加入TMB底物显色，样本吸光值与其残留物克伦特罗负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。
三、适用范围
可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液等样本中克伦特罗的残留量。
四、交叉反应率
克伦特罗 ………………………………………………100%
特普他林 ……………………………………………小于1%
非诺特罗 ……………………………………………小于1%
马布特罗 ……………………………………………小于1% 西马特罗 …………………………………………小于1%
溴布特罗 ……………………………………………小于1%
塞曼特罗 ……………………………………………小于1%
五、使用单位需自备的设备及试剂
设备：
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅振荡器
┅┅涡旋仪
┅┅离心机
┅┅水浴锅
┅┅天平：感量0.01g
┅┅刻度移液管：10ml
┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml
┅┅玻璃离心管：10ml
┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、200ml～1000ml
多道 250ml
试剂：
┅┅甲醇(分析纯)
┅┅乙腈(分析纯)
┅┅氢氧化钠(分析纯)
┅┅正己烷(分析纯)
┅┅浓盐酸
┅┅磷酸二氢钾(分析纯)
----氯化钠(分析纯)
----去离子水 六、提供的材料与试剂
1、96孔酶标板×1块
2、标准液×6瓶： (1ml/瓶）
0ppb, 0.05ppb, 0.15ppb,0.45ppb, 1.35ppb,4.05ppb
3、高浓度标准品：（1ml/瓶） 100ppb
4、克伦特罗酶标物…………………………………………7ml
5、克伦特罗抗试剂………………………………………… 9ml
6、底物液 A液 ……………………………………… 7ml
7、底物液 B液 ………………………………………7ml
8、终 止 液 …………………………………………7ml
9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml
10、克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)…………………………40ml
七、溶液的配制
配液1: 样品稀释液
用去离子水将克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)按1:1体积比进行稀释，即：1份克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)+1份去离子水；用于提取样本的稀释，样品稀释液在4℃环境可保存一个月。
配液2: 洗涤工作液
用去离子水将浓缩洗涤液(10×)按1:9体积比进行稀释，即：1份浓缩洗涤液(10×)+9份去离子水；用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。
配液3: 1M 氢氧化钠溶液
称取4.0g 氢氧化钠加去离子水混匀溶解定容至100ml。
配液4: 0.1M 盐酸溶液
量取0.83ml浓盐酸加去离子水混匀定容至100ml
配液5：组织样本提取液 80ml 25%甲醇溶液加20ml 0.1M 盐酸
八、样本前处理步骤
样本处理前须知：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（b）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。
（c）未处理的样本冷冻保存。
（d）处理后的样本可在2-8℃避光保存24h。
（一）组织带有低脂肪的肉、肝等组织
----称取2.0±0.05g匀浆样本至50ml离心管中；
----加入6ml组织样本提取液，用振荡器振荡摇至均匀；
---- 3000g以上离心5分钟；
----取1ml上清液加入20μl 1M 氢氧化钠溶液混匀（混匀以后测定pH值，大约为8）；
---- 3000g以上离心5分钟；
l用于分析。----取上清液20
（二）尿液
l清亮尿样直接测定（如尿样浑浊必须通过过滤或3000g以上，15℃离心10min直至清亮），暂不使用的样本应冷冻保存。----取20
（三） 饲料前处理方法
----用均质器均质饲料样本；
----称取1±0.05g均质样本于50ml离心管中， 加入10ml0.1MHCL，用振荡器剧烈振荡5min，3000g以上离心5min；
----取1ml上清液加入20μl 1M 氢氧化钠溶液混匀（混匀以后测定pH值，大约为8）；
---- 3000g以上离心5分钟；
---将上清液用样品稀释液稀释五倍 l用于分析。----取20
九、检测步骤
测定前应须知：
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。
2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
操作步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本：加标准品/样本20ml/孔到对应的微孔中，再加入酶标物50ml/孔，再加入抗试剂80ul/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应20～30min。
8、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完资料），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
十、 结果判定 结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含克伦特罗成负相关。
1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.569，样本2的吸光度值为1.725，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.523；0.05ppb为2.217；0.15ppb为1.566；0.45ppb为0.842；1.35ppb为0.387；4.05ppb为0.145。则样本1的浓度范围是0.45ppb～1.35ppb；样本2的浓度范围是0.05ppb～0.15ppb，再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中克伦特罗的浓度范围。
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝ B ×100%
B0
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0(ppb)标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以克伦特罗标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中克伦特罗实际残留量。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。
样本的稀释倍数：
组织样品稀释倍数：3倍
尿液稀释倍数：1倍
饲料样品稀释倍数：50倍
十一、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：0.05ppb 样本最低检测限：
组织样品………………………………………0.15ppb
尿液样品………………………………………0.1ppb
饲料样品……………………………………2.5ppb
回收率：
组织样品………………………………………80±10%
尿液样品…………………………………80±10%
饲料样品…………………………………80±10%
精密度：试剂盒的变异系数均小于10%
十二、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm〈0.5）时，表示试剂可能变质。
AccuDip TM 克伦特罗快速检测试纸卡使用说明书 (尿样检测)
美国信合免疫诊断公司AccuAffinity, Inc. 公司地址：4320 Verdigris Circle, San Jose, CA 95134, U.S.A. 电话：001-408-368-1364 传真：001-408-944-9665 公司网址： 公司邮箱：contact@
AccuDipTM克伦特罗快速检测试纸卡使用说明书
(尿样检测)
产品编号：AAF-11111
1. 产品概述:
克伦特罗，又名瘦肉精，属于β-兴奋剂类药物，是一种肾上腺类神经兴奋剂。当添加到动
物饲料中后，可以增加动物的瘦肉量，同时减少饲料使用。然而瘦肉精为增加瘦肉率所需
用量大，在动物体内代谢缓慢，在肉类尤其是内脏中会有大量残留，如果食用进入人体会
直接危害人体健康，出现晕厥、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐、肌肉振颤等中毒症状，
特别是对高血压、心脏病等疾病患者危害更大，严重的可导致死亡。瘦肉精是国家明令禁
止使用的饲料添加剂。
本产品将胶体金免疫层析原理应用于克伦特罗含量的快速测定。可以直接检测动物尿样，
样品不需要稀释和前处理，使用简便。反应灵敏，检测灵敏度为3纳克/毫升（3ppb)。检
测迅速，结果在5-10分钟内显示。
2. 用途及灵敏度：
本产品适用于尿样中克伦特罗（Clenbuterol)含量的快速检测。
检测灵敏度：3纳克/毫升(3ppb)
3. 检测原理：
本产品将胶体金免疫层析原理应用于克伦特罗含量的快速测定。在试纸卡中，抗克伦特
罗抗体偶联到胶体金颗粒上，克伦特罗测试抗原固定在纤维素滤膜上。如果样品不含有
克伦特罗，胶体金抗体偶联物与固定抗原结合，在膜上显示检测线，检测结果为阴性。
如果样品中含有克伦特罗，克伦特罗结合在胶体金抗体偶联物上，抑制了胶体金抗体偶
联物与固定抗原的结合，不显示检测线，检测结果为阳性。
4. 试纸卡产品组成：
试纸卡（1块）；一次性吸管（1支）；干燥剂（1块）
克伦特罗诊断试剂盒的有关技术参数
克伦特罗诊断试剂盒的有关技术参数
陈明亮;傅福康;李国芳;张兰英
【期刊名称】《肉类工业》
【年(卷),期】2004(000)002
【摘 要】目前国内市场克伦特罗的诊断试剂盒进口国有:英国、德国、意大利等,国产有上海等.现就进口和国产的克伦特罗试剂盒的有关技术参数及其它相关内容进行叙述.
【总页数】2页(P37-38)
【作 者】陈明亮;傅福康;李国芳;张兰英
【作者单位】上海上食肉类有限公司,200436;上海上食肉类有限公司,200436;上海上食肉类有限公司,200436;上海上食肉类有限公司,200436
【正文语种】中 文
【中图分类】TS251
【相关文献】
1.探析酶联免疫试剂盒对牛尿液与牛血清中盐酸克伦特罗含量的检测 [J], 蔡展生;曾国耀
2.盐酸克伦特罗胶体金快速检测试剂盒质量研究 [J], 赵才敏;李涛;蒋丽;杨昌彪;李莎;汪勋;曹虎灵;
3.ELISA试剂盒与LC-MSMS法检测动物排泄物及饲料中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的比较研究 [J], 贺健强; 刘刚; 梁德勇; 尹青青; 栾小康; 杨珍; 崔晓辰
4.盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制—Ⅰ克伦特罗人工抗原及抗体的制备 [J], 李利东;宓晓黎;袁建兴;潘荣生
5.盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制——Ⅱ克伦特罗酶联免疫检测方法的研究 [J], 宓晓黎;李利东;丁贵平;成恒嵩;潘荣生;李平
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酶联免疫吸附法(ELISA)检测猪肉中盐酸克伦特罗
龙源期刊网
酶联免疫吸附法（ELISA）检测猪肉中盐酸克伦特罗
作者：薛金英
来源：《中国动物保健》2014年第10期
盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精）为一种人工合成的β-肾上腺素兴奋剂，具有扩张支气管的作用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。当其应用量达到治疗量的5～10倍时，其有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此俗称为“瘦肉精”。在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种和生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质，同时也造成食品中盐酸克伦特罗（瘦肉精）的残留。当人们食用盐酸克伦特罗残留的产品后会出现一系列的中毒症状。动物源性食品药物残留问题逐渐引起人们的重视。本法用于定量、定性检测猪肉中盐酸克伦特罗的残留。
1试验原理
采用间接竞争ELISA法，在微孔板上包被抗盐酸克伦特罗检测抗原，样品中的盐酸克伦特罗将和酶标板上的盐酸克伦特罗检测抗原竞争结合盐酸克伦特罗抗体，盐酸克伦特罗检测抗原结合的盐酸克伦特罗抗体再与同时加入的酶标二抗结合，洗涤后，用TMB底物系统显色，微孔板吸光值与样品中盐酸克伦特罗含量成负相关，与标准曲线比较再乘以浓度比值即可得出盐酸克伦特罗在样品的实际含量。
2试验方法（稀释倍数为4倍）
称取1.0 g（±0.05 g）均质样品于50 mL聚苯乙烯离心管中，加入1 mL 0.1 M盐酸，再加入2 mL提取工作液，充分振荡混匀5 min，4 000 rpm（20～25℃）离心10 min。取1 mL上清液加入约25 μL 1 M 氢氧化钠调节pH至6.5～7.5之间，充分振荡混匀，取50 μL用于分析。如果上层中存在白色脂肪层，取样时应避开。
试剂准备：将10×浓缩洗涤液和蒸馏水（或去离子水）按1∶9充分混匀，即为1×洗涤液。
编号：将盐酸克伦特罗标准溶液和待测样品对应微孔按序编号，建议每个标准溶液和待测样品均做重复孔。
酶联免疫法定量检测克伦特罗
RIDASCREEN® Clenbuterol Fast
酶联免疫法定量检测克伦特罗
摘要
RIDASCREEN® Clenbuterol Fast（编号：R1701）
竞争酶标免疫分析法定量检测尿液，血清/血浆，肝脏，肾脏，肉类和组织中的克伦特罗及其他β-兴奋剂。
试剂盒中包含有酶联免疫试验所需的所有试剂，包括标准溶液。
试剂盒足够进行96次检测（包括标准）。
定量检测需要微孔板酶标仪。
样品处理：
尿液和血清/血浆：不需要样品处理
肝脏，肾脏，肉类，组织：用RIDA® C18 columns (Art. No. R2002)纯化
试验时间： 样品制备（以10个样品为例）
尿液（离心或过滤）………….…………………….….…...约10min
肝脏，肾脏，肉类，组织……………..………….…...……至少6h
检测时间（孵育时间）……………………………….……………1h
检测限：
尿液，血清/血浆中的克伦特罗………………..……………100ppt
肝脏，肾脏，肉类，组织的克伦特罗………..……………100ppt
回收率： 尿样…………………………...………. 90 % ± 12 %
交叉反应：
RIDASCREEN® Clenbuterol试剂盒的特异性是通过测定相应物质的交叉反应而得到的。
Clenbuterol .............................…………….…..............约100 %
Brombuterol .............................………………..............约130 %
Bromchlorbuterol ......................…….…………............ 约95 %
Mabuterol ........................…………...….........................约86 %
瘦肉精
竞争酶联免疫吸附法测定猪肉中的瘦肉精
（试剂盒）
盐酸克伦特罗俗名“瘦肉精”欧美等发达国家纷纷严禁此类药物在畜牧生产中的应用，FDA和WTO还制定了畜产品中瘦肉精的最高残留限量。检测瘦肉精常用的方法有高效液相色谱法(GC-MS)、气质联机法(HLPC)和酶联免疫吸附法(ELISA)，其中酶联免疫吸附法是目前最佳的检测方法。ELISA检测方法有双抗体夹心法测抗原、间接法测抗体、竞争法测抗体等。该次试验利用的是酶联免疫吸附法中的竞争法测抗体。
一、目的：限制瘦肉精在畜牧生产中的使用，对肉品卫生安全进行较好的监督。
二、原理：利用多克隆抗体既能与盐酸克伦特罗结合，也能与包被抗原结合。这些包被抗原 被固定在酶标板孔壁上，当样品中含有瘦肉精时，它与包被抗原竞争结合抗体中有限量的结合位点。由于每一个孔中抗体的结合位点位点数相同，当样品中瘦肉精浓度低时，就有更多抗体的位点与包被抗原结合，更多的抗体被固定在酶标板壁上，就会与更多的酶标二结合，所以结果就呈现深蓝色。相反，样品的瘦肉精浓度高，结果就呈现浅蓝色。加入终止液后，蓝色相应变成黄色，然后用酶标仪进行测定。
三、实验材料与方法
原料：无皮猪肉（易剔除杂质、脂肪）
试剂：盐酸克伦特罗—酶联免疫试剂盒
仪器：电热恒温水浴锅、DSY-1-2孔、酶标仪、离心机、匀浆机、微量加样器
方法：1原料的处理：将精肉用高速捣碎机捣碎混合均匀，放置冰箱冷冻备用。取捣碎的样品5g，加入25ml，50mmlHCL震动1.5h，以达到均质。称取5g均质物(相当于1g肝脏或肌肉），加入离心管中，1000r/min离心15min.取上清液至令一个离心管中，加1mol NaOH 300ul,混合15min.加入4ml,500mmolKH2PO4(pH3.0),迅速混匀置于4摄氏度的冰箱内保存至少1.5h.1000r/min，离心15min，分离上清液。
克伦特罗ELISA快速检测的几点操作体会
翻蝌广￣２ｏｉｏ年第１５期 ３５ 检测分析 Ｄ ｍｉ， ａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａ，ｊ（ｄｙｓ ｉ
克伦特罗ＥＬｌ 快速检测的几点操作体会
马 丽
克伦特罗属于 一兴奋剂类药物，可以提高脂 肪型动物的瘦肉率和加速动物生长。目前由于多
起克伦特罗中毒事件且出现了死亡案例．因此被
禁止使用 克伦特罗ＥＬＩＳＡ快速检测试剂盒与经 典色谱法相比．具有操作过程简单、样品处理快
捷。可同时分析多个样品，分析时间短、成本低、 灵敏度高且对环境污染小等优点。
１原理 ＥＬＩＳＡ方法的基本原理是酶分子与抗体或抗
体分子共价结合．此种结合不会改变抗体的免疫 学特性．也不影响酶的生物学活性。此种酶标记
抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生 特异性结合
２试样的准备 ２．１对于尿样可直接用于检测．或者样品比较浑
浊时，可适当离心。当尿样冷冻时。应将尿样回温 再测。 ２．２饲料样品要按照说明书的处理步骤进行 当 然，为保证样品充分被提取．可适当延长涡旋时 间、离心时间及离心转数。
３试剂的准备
３．１不同批次的试剂盒不能混用．因为抗体和微 孔板具有盒与批次的特异性
３．２按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试 剂。ＥＨＳＡ中用的蒸馏水或去离子水．包括用于
洗涤的应为新鲜的和高质量的 自配的缓冲液应 用ｐＨ计测量较正。
３．３从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温
马丽：沧州市饲料质量监督检验站。 平衡后使用 试剂盒中本次实验不需用的部分应
及时放回冰箱保存
３．４检测过程中应尽量保持室温２０～２５℃．避免 在通风口操作，温度过低、过热或蒸发都会影响 检测数据的准确性 同样不应再阳光直射下实
验，防止过热或蒸发带来影响。
４加样 ４．１在ＥＬＩＳＡ中一般有４次加样步聚．即加标本
或样品、酶结合物、底物、终止液。加样时应将所
加物加在板孔的底部．避免加在孔壁上部。并注 意不可溅出。不可产生气泡．当有气泡时可用干
净的枪头小心刺破 ４．２加标准及样品时一般用微量加样器．按规定
四种克伦特罗ELISA试剂盒比对试验
《上海畜牧兽医通讯》２００９年第２期 ・ ３７ ・
四种克伦特罗ＥＬＩ ＳＡ试剂盒比对试验
章志霞 程劲松 （浙江省衢州市畜牧兽医局３２４０００）
近年来，非法使用克伦特罗的现象已大为改观，但仍有
极少数故意或在不知情的情况下使用克伦特罗的情况。为
严厉打击非法使用克伦特罗的行为，我们已将尿样的克伦特
罗阳性水平调整至１ ０ ｎｇ／ｍｌ。如此低的检出限，对所用的
ＥＬ１ＳＡ试剂盒提出了较高的要求。为评价克伦特罗ＥＬＩＳＡ
试剂盒检测质量，特开展本次比对试验。本次试验选用了四
种不同品牌的试剂盒进行试验，分别是某进口品牌Ａ、国产
品牌Ｂ、ｃ、Ｄ。试验方案在参考国内一些专家学者的文献后
进行了适当修改。
ｌ材料与方法
１，１ 材料
ｌ １．１ 克伦特罗ＥＬＩＳＡ试剂盒：进口品牌Ａ：批号为
０４１３７，有效期至２００８年１１月；国产品牌Ｂ：批号为
０８０３１１１２，有效期至２００９年４月３１日；国产品牌Ｃ：批号为
０８０５３０２０１，有效期至２００９年５月３０日；国产品牌Ｄ：批号为
２００８０５１０，有效期至２００９年５月ｌ０日。
１．１．２水：取超纯水机生产的新鲜水。
ｌ １．３离心管：１．５ ｍｌ离心管。
１．２ 方法
１．２．１基准尿样：选择经克伦特罗试纸条测试为阴性的数
份尿样进行混合后，以４ ５００ ｒ／ｒａｉｎ离心１０ ｍｉｎ后取上清，以
ｌ ｍｌ／管进行分装。
１．２．２测试尿样：取１００ ｎｇ／ｍｌ的克伦特罗标准样品，向不
同离心管的基准尿样中分别添加５、１０、２Ｏ、３０、４０、５０、６Ｏ ｌ，
使尿样中的克伦特罗添加量达到０ ５、１．０、２ ０、３．０、４．０、
５ ０、６．０ ｎｇ／ｍｌ。涡旋３０ ｓ后静置５ ｒａｉｎ．用于检测
１．２．３因为所有受测的试剂盒标准品均为６个，所以样品
排列采用同一方法，具体如表１： 表１样品排列方法
注：原尿指基准屎样。原屎＋０ ５ ｎｇ指原屎中添加的克伦特罗量达到０ ５
盐酸克伦特罗
摘要
盐酸克伦特罗酶联免疫反应适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的量检测，是一项筛查盐酸克伦特罗残留的新技术。克伦特罗作为一种主要的
β- 兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中, 用以提高肌肉和脂肪的比例并加快生长速度。由于克伦特罗可作为肌肉舒缓剂用于人类疾病治疗, 在畜禽中过量残留可能会对消费者造成危害, 为此, 被禁止在食品生产中应用。由于该检测方法技术性强，对试验环境要求特殊，因此影响ELISA检测质量的因素有很多，如试剂因素、标本因素和操作因素等。试剂的质量固然是影响检测结果准确性的关键因素,然而检测人员的操作是否规范合理对ELISA检测结果的影响也不可忽视。本论文就ELISA法检测猪的肝脏中盐酸克伦特罗含量以及试剂的选择、温育条件、洗涤次数、准确加样、显色时间等多个操作因素对检测结果产生的影响进行了分析并针对性的提出了相应的控制对策，从而为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速的检测盐酸克伦特罗残留的方法。
关键词：酶联免疫；检测；盐酸克伦特罗；关键控制因素
摘要应该改为：
本论文就ELISA法检测猪的肝脏中盐酸克伦特罗含量以及试剂的选择、温育条件、洗涤次数、准确加样、显色时间等多个操作因素对检测结果产生的影响进行分析，针对性的提出了相应的控制对策，从而为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速的检测盐酸克伦特罗残留的方法。试验结果表明，、、、、、、
Abstract
Clenbuterol hydrochloride enzyme-linked immune response is applicable to
urine, fodder and other groups and the amount of clenbuterol residues in the sample
testing, clenbuterol hydrochloride residue is a screening of the new technology.
酶联免疫法定量检测克伦特罗 2
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酶联免疫法定量检测克伦特罗摘要
® （编号：）
竞争酶标免疫分析法定量检测尿液，血清血浆，肝脏，肾脏，肉类和组织中地克伦特罗及其他β兴奋剂.
试剂盒中包含有酶联免疫试验所需地所有试剂，包括标准溶液.
试剂盒足够进行次检测（包括标准）.
定量检测需要微孔板酶标仪.
样品处理：
尿液和血清血浆：不需要样品处理
肝脏，肾脏，肉类，组织：用® (. . )纯化
试验时间： 样品制备（以个样品为例）
尿液（离心或过滤）………….…………………….….…...约
肝脏，肾脏，肉类，组织……………..………….…...……至少
检测时间（孵育时间）……………………………….……………
检测限：
尿液，血清血浆中地克伦特罗………………..……………
肝脏，肾脏，肉类，组织地克伦特罗………..……………
回收率： 尿样…………………………...………. ±
交叉反应：
® 试剂盒地特异性是通过测定相应物质地交叉反应而得到地.
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克伦特罗说明书一步法
2010-01版
1 盐酸克伦特罗酶联免疫检测试剂盒使用说明书
一、概要
克伦特罗（clenbμterol，CLE）是一种－肾上腺受体激动剂，此类药品在临床上用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。我国农业部第235号文件规定不得检出。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。
二、测定原理
本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗体。检测时，加入标准品或样品溶液及克伦特罗酶结合物，他们竞争性地与克伦特罗抗体结合，形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。
三、试剂盒组成
酶标板1块(包被抗克伦特罗抗体)
标准液6瓶（1ml/瓶）：0、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb。
酶结合物 …………………………7ml
显色剂A …………………………7ml
显色剂B …………………………7ml
终止液 …………………………7ml
10×浓缩洗涤液…………………50ml
说明书 ……………………………1份
四、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
（1）设备
……微孔板酶标仪(450nm)
……振荡器
……离心机
……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl
……容量瓶：100ml，500ml，1000ml
（2）试剂
……三氯乙酸
……氢氧化钠
……叔丁基甲醚 色谱级
……浓 HCl