胃癌患者全胃联合脾切除术对血小板活化的影响

论著胃癌患者全胃联合脾切除术对血小板活化的影响刘斌,唐建荣,黄世锋,宋学民 作者单位555广西柳州市,广西医科大学第四附属医院柳州市工人医院普外一病区 【摘要】　目的　观察胃癌患者全胃联合脾切除术对血小板活化的影响。

方法　选取13例因胃癌行全胃联合脾切除术的患者为研究对象,利用流式细胞技术,检测血小板α-颗粒膜糖蛋白(CD62P )作为血小板活化的标志物,分别于术前1d 、术后1周、术后2周及术后1个月测定患者的外周血血小板CD62P 阳性表达率和血小板计数并进行比较。

结果　所有患者术后恢复良好,未出现与手术相关的并发症。

术后1周的血小板计数与术前比较,差异有统计学意义(P <0101);术后2周的血小板计数与术前、术后1周和术后1个月比较,差异均有统计学意义(P <0101);术后1个月的血小板计数与术前比较,差异无统计学意义(P >0105)。

术后1周的CD62P 阳性表达率与术前、术后2周、术后1个月比较,差异均有统计学意义(P <0105);术后2周、术后1个月的C D62P 阳性表达率与术前比较,差异均有统计学意义(P <0101)。

结论　因胃癌行全胃联合脾切除术的患者术后血小板活化状态没有进展,不会增加血栓发生的风险性。

【关键词】　胃肿瘤;血小板活化;脾切除术;胃切除术 【中图分类号】R 656161　【文献标识码】A 【文章编号】1007-9572(2008)12-2217-02Inf luence of Ga str i c Can cer Tota l Ga str ecto m y with Sp lenec to m y o n P l a telet Act i va t i on L IU B in,TANG J ian -rong,HUANG Shi -feng,et a l .The F irst D epa rt m en t of Genera l Surgery ,L iuzhou Worker H ospita l ,L iuzhou 545005,Ch ina 【Abstra c t 】　O bjec ti ve T o observe by fl o w cyt ome try the plate let ac tivati on change s in ga stric carcino ma (G C )pa 2tients before and foll o wing t ota l ga strect omy (TG )with s p lenecto my .M ethods T hirteen pa tients who under went T G wit h sple 2nec t o m y for G C were chosen a s subjects in this study .U sing CD62P a s a ma rke r of pla t e let activ a tion,the positive ex pressi on of pe ri phe ra l pla t e let CD62P and pla tele t countwe re dete r m i ned and comp ared by fl ow cyto me try before o pe ra ti on,and 1,2weeks,1month aft e r .R esults P latele t coun t increased significantly 1,2weeks afte r operati on when co mpared with pre -ope rati on (P <0101),reaching maxi mum in week 2(P <0101).B ut t he increase i n P latele t count was not signi f i cant 1month afte r o pe ra ti on (P >0105).Expressi on of CD62P wa s significantly reduced afte r ope rati on (P <0101),reaching m ini m u m in week 1.No post ope rativ e co mpli ca ti ons occurred in any of the pa tients .Con clusi on The re is n o p rogress in p latele t activati on in G C pati ents afte r TG with s p l enect omy,not resulting i n the inc rease of thro m bus risk . 【Key wor d 】　St omach neopla s m s ;P l a tele t ac tiva ti on;S p lenecto my;Gastrecto my 脾切除术后深静脉血栓的发生率为2%～11%[1-2],其发生机制较复杂,与血小板活化状态密切相关。

C D62P 为血小板α-颗粒中的一种糖蛋白,血小板活化时,血小板α-颗粒膜与质膜融合,CD62P 暴露于血小板质膜表面,成为血小板活化的一个特征性指标[3-4]。

本研究利用流式细胞技术,以C D62P 作为血小板活化的标志物,观察胃癌患者全胃联合脾切除术对血小板活化的影响。

1　资料与方法111　一般资料　选择2006年7月—2008年3月我院收治的13例因胃中上部癌行全胃联合脾切除术的患者为研究对象,其中男8例,女5例,年龄(59±12)岁,其中胃底贲门癌患者10例,胃体癌患者3例。

所有病例行D2淋巴结清扫及食管空肠“P ”袢Roux -en -Y 吻合重建,手术由同一组熟练掌握全胃切除术的医师完成。

排除血液系统疾病及心脑血管疾病者。

112　主要试剂及设备　F ACScan 流式细胞仪、荧光标记的抗血小板糖蛋白抗体均购自美国B ect on Dicki on 公司,Sys mex XE -2100型全自动血细胞分析仪购自日本希森美康公司。

荧光标记的抗血小板糖蛋白抗体包括Peridinin chl orophyll protein 标记的血小板糖蛋白的M c Ab (C D61Pe rCP )、藻红素标记的抗血小板CMP140抗体(CD62P PE )和藻红素标记的鼠I gG (M IgG PE )。

113　样本采集检测方法　所有患者于术前1d 、术后1周、2周及1个月时清晨空腹抽取肘静脉血6m l,其中4m l 使用2%E DT A -K 2抗凝,使用Sys mex XE -2100型全自动血细胞分析仪检测血小板计数;另外2m l 用于活化血小板检测。

将2m l 静脉血放入含有1∶9EDT A 抗凝管内,轻轻混匀,取10μl 全血样本备用。

对照管内加入50μl 磷酸盐缓冲溶液(PB S)+M IgG PE 20μl +C D61PerCP 20μl,试验管内加入50μl P B S +C D62P PE 20μl,然后分别将5μl 样本加入对照管和试验管内,轻轻混匀,避光孵育20m in,再加入预冷的1%多聚甲醛混匀,放置冰箱内30m in,标本制备后在24h 内检测完毕。

校准流式细胞仪后,在Cell Q uest 软件条件下,将流式细胞仪的前向角散射(FSC )、侧向角散射(SSC )三色荧光(FL1-FL3)的检测信号均设置为对数放大,以C D61PerCP 阳性为获取条件,在CD61vs SS C 点图中设门找出血小板群,在单个血小板和血小板微颗粒所在位置圈门,计数门内个血小板,测定对照管内活化血小板D6表达率。

1　统计学方法　应用S SS 31统计软件进行统计学处理。

计量资料以(x ±)表示,不同时点的比较采用重复测量资7122:40010000C 2P 14P 10s料的方差分析,以P<0105为差异有统计学意义。

2　结果211　所有患者术后恢复良好,未出现与手术相关的并发症。

212　不同时点间的血小板计数和CD62P阳性表达率差异均有统计学意义(F值分别为70123、45115,P<0101)。

术后1周的血小板计数与术前比较,差异有统计学意义(q=5178, P<0101);术后2周的血小板计数与术前、术后1周和术后1个月比较,差异均有统计学意义(q值分别为18155、12178、16181,P<0101);术后1个月的血小板计数与术前比较,差异无统计学意义(q=1174,P>0105)。

术后1周的C D62P 阳性表达率与术前、术后2周、术后1个月比较,差异均有统计学意义(q值分别为15111、3139、5132,P<0105);术后2周、术后1个月的C D62P阳性表达率与术前比较,差异均有统计学意义(q值分别为13118、9180,P<0101,见表1)。

表1　术前与术后各时点血小板计数和CD62P阳性表达率比较(x±s)Ta b l e1　C omp aris on of platel et c ount and expressi on of C D62P before and after op erati on时间点血小板计数(×109/L)C D62P(%)术前29±6516±118术后1周42±8115±013术后2周69±11210±015术后1个月33±5219±0163　讨论目前认为,血小板计数的增加本身并不增加血栓形成的危险[5],血小板活化在血栓形成中起重要作用。

血小板活化包括3个方面:黏附、聚集和释放,三者相互促进,形成的血小板血栓是血栓形成的始动环节。

血小板功能研究是血栓性疾病防治的重点,使用流式细胞仪测定活化血小板是目前公认的最快捷、灵敏的方法[6]。

CD62P即P-选择素,又称血小板活化依赖性颗粒外膜蛋白(p latele t ac tivati on dependent granul e external membrane p r o2 t e in,PADG E M),是一种相对分子量约为140K D的跨膜糖蛋白,通常储存在血小板α-颗粒、致密颗粒、巨核细胞和血管内皮细胞的分泌颗粒(W eibel-Palade小体)中,其基因全长50kb,由18个外显子和17个内含子组成。