克伦特罗检测试剂盒使用说明书
克伦特罗检测试剂盒使用说明书KitCatalogNo.BC-3003
Page1of4一、概要:克伦特罗(Clenbuterol)，俗称瘦肉精，是一种β2兴奋剂。能提高动物体内的瘦肉的比例，并加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，然而其会残留在动物体内，人类食用后会产生严重的副作用，轻则导致心跳及心率不正常，重则可引发心脏病。目前，许多国家政府已明令禁止其使用于动物饲料中。
本公司研发生产的克伦特罗检测试剂盒的检测结果准确、稳定，可检测存在于动物的尿液、血清、血浆、组织(肌肉、心脏、肝脏等)、及动物饲料樣本中的克伦特罗。样品前处理方式简单、方便，适用于各级政府食品安全检测机构、各类屠宰企业、肉类食品加工及饲料生产企业等。
二、检测原理:本试剂盒利用竞争酶联免疫方法，预先在微孔中包被羊抗兔抗体，实验时先后加入克伦特罗标准品，或待测样本，克伦特罗酶标抗原和兔抗克伦特罗抗体。经过室温温育，反应液中的兔抗克伦特罗抗体与微孔板上的羊抗兔抗体结合，待测样品中的克伦特罗与克伦特罗酶标抗原竞争微孔板上的兔抗克伦特罗抗体。洗涤后，没有与抗体结合的待测样品中的克伦特罗或酶标抗原被洗去，再加入反应底物，结合的酶标抗原的酶将底物转化为蓝色产物，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色。反应完成后，样品中克伦特罗含量越多，反应呈色就越浅；反之，样品中克伦
特罗含量越少，则呈色越深。利用标准曲线可计算出样品中克伦特罗含量。
三、试剂盒提供试剂:1.羊抗兔抗体包被的微孔板:96孔。2.克伦特罗参考标准品:0，0.05，0.25，1.00，2.50，5.00ppb(ng/ml);1.5ml/瓶，一套共6瓶。3.克伦特罗酶标抗原试剂(1X):7ml/瓶。4.兔抗克伦特罗抗体:7ml/瓶。5.样品稀释液：100ml/瓶。6.显色剂/底物：11ml/瓶。7.反应终止液：11ml/瓶。8.洗涤液(20X)：50ml/瓶，使用前稀释20倍。
四、其它试剂和仪器:1.试剂盐酸(5mM,10mM)氢氧化钠溶液(2.0M)2.仪器均质机(Ultra-turrax)微孔板酶标仪振荡器离心机氮气吹干仪或旋转蒸发器超声波破碎仪20µl,50µl,100µl,200µl,及1ml移液器
五、待测样品处理方法:1.尿液将样品在室温(18-25ºC)以4,000转离心10分钟后取上清液或者过滤后取滤液100克伦特罗检测试剂盒使用说明书KitCatalogNo.BC-3003
Page2of4μl,加入样品稀释液400μl（5倍稀释），用于下一步检测。如预计样品中克伦特罗含量较低，也可加入样品稀释液100μl（2倍稀释）。
2.血清/血浆a)血清:抽取动物血液，置于玻璃试管中待其凝固，在室温(18-25ºC)以4,000转离心10分钟后取上层清亮液体(血清)，如血块无明显收缩，导致血清量不足，可用竹签轻轻拨动血块后再离心，取上清液100μl,加入样品稀释液400μl（5倍稀释）均匀混合，取100μl溶液，用于下一步检测。b)血浆:取100μl血浆,加入样品稀释液400μl（5倍稀释）均匀混合，用于下一步检测。注：取血过程中尽量避免溶血，如血清混浊，可离心取上清液检测。
3.肉样及内脏组织用均质机(Ultra-turrax)对组织样品进行均质。称取1克均质后的组织样品到离心管中，加入1ml10mM的盐酸，涡旋振荡2分钟。将混匀后的样品以在室温(18-25ºC)以10,000转离心5分钟或以4,000转离心10分钟，吸取250μl上清液到1.5ml试管中。加入5μl的2M氢氧化钠溶液,均匀混合。将以上样品再次在室温(18-25ºC)以
10,000转离心5分钟或者以4,000转离心10分钟，直接吸取上清液100μl，加入样品稀释液400μl（5倍稀释），均匀混合，用于下一步检测。
4.肉动物饲料称取5.0克的饲料样品,加入10ml5mM的盐酸,置于离心管中涡旋振荡混匀30分钟或超声混匀20分钟。在室温(18-25ºC)以4,000转离心10分钟,转移出上清液,吸取上清液100μl,加入样品稀释液100μl，均匀混合，(相当于0.25g样品/ml检测液)用于下一步检测。
六、检测之前的注意事项及准备工作：1.注意事项：使用前将所有试剂回升至室温(18-25℃)。严格按说明书操作﹐不得改变加样顺序及温育时间。尽量缩短加样时间﹐加入相同试剂或样品时应使用多道微量加样器。洗板过程要小心操作，每个孔要均匀充满冲洗液。操作時应保持一致性和一定的强度，不可更改冲洗次数。在读数之前用软纸轻轻擦试微孔板底部，防止因污染而影响读数结果。洗涤后,避免微孔干燥。在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，可盖住微孔板。克伦特罗检测试剂盒使用说明书KitCatalogNo.BC-3003
Page3of4没有用完的微孔板应存放在有干燥剂的密封袋內,2-8ºC保存。2.试剂准备：实验前准备将试剂盒取出放置于室温中，使试剂盒回温至室温(18-25℃)。20倍稀释洗涤液准备50ml浓缩洗涤液(20X)，用蒸馏水或去离子水稀释至1,000ml。在2~8ºC可保存三个月。用前混匀。七、操作步骤：1.从密封袋中取出所需数目微孔板条放置在支架内，并编号。2.加入克伦特罗标准液(浓度由低到高)和待测样品，每孔100µl。3.加入克伦特罗酶标抗原，每孔50µl，轻轻摇匀10秒。4.加入兔抗克伦特罗抗体，每孔50µl，轻轻摇匀30秒。5.置于室温反应30分钟(18-25ºC)。6.弃去微孔中的反应液，用300μl/well稀释好的洗涤液冲洗微孔，再重复洗4次，总共洗5次。7.将微孔中剩余液体在吸水纸上拍干。8.加入反应底物，每孔100µl，轻轻摇匀10秒。9.置于室温反应20分钟(18-25ºC),避免光线照射。10.加入反应终止液，每孔100µl，轻轻摇匀20秒。11.在15分钟内，使用酶标仪在450nm波长处读取各孔吸光度值，并绘制标准曲线。八、结果分析:
1.计算各标准品(或样品)的吸光度值百分比，按下式计算：
各标准品(或样品)平均吸光度值%B/B0=X100零标准品(0ng/ml)平均吸光度值
2.绘制标准曲线图，纵坐标表示标准品百分比吸光值(%B/B0)，横坐标表示各标准品克伦特罗浓度ppb(ng/ml)。各样品浓度可根据其百分吸光度值，从标准曲线上读出，再乘以或除以样品的稀释倍数(请参照第九项检测结果计算)。
克伦特罗ppb(ng/ml)吸光度值%B/B0
0.002.584100.00.052.35191.00.251.93474.81.001.13644.02.500.64124.85.000.41516.1
0102030405060708090100
0.001.002.003.004.005.00%B/B0
克伦特罗浓度ppb(ng/ml)克伦特罗检测试剂盒使用说明书KitCatalogNo.BC-3003
Page4of4九、检测结果计算:按以上所述进行样品处理，并从标准曲线上读出的浓度值，须按下表计算克伦特罗的实际浓度。No.样品稀释系数氯霉素的实际浓度ppb,ng/ml,或ng/g1尿液2或5校正曲线上读出的浓度值x2或52血清/血浆5校正曲线上读出的浓度值x53肉类/内脏5校正曲线上读出的浓度值x54饲料4校正曲线上读出的浓度值x4十、最低检测灵敏度:本克伦特罗检测试剂盒的最低检测灵敏度为：0.05ppb(0.05ng/ml,0.05ng/g).十一、样品检测下限:本试剂盒的最低检测灵敏度是0.05ppb(0.05ng/ml或0.05ng/g)。由于样品需要预先处理，有其稀释度或浓缩度，所以各样品必须依据其稀释度或浓缩度计算出其检测下限。No.样品检测下限1尿液(2倍稀释)0.10ppb(0.10ng/ml)2尿液(5倍稀释)0.25ppb(0.25ng/ml)3血清/血浆0.25ppb(0.25ng/ml)4肉类及内脏0.25ppb(0.25ng/g)5饲料0.20ppb(0.20ng/g)十二、交叉反应(特异性):克伦特罗…………………100%沙丁胺醇…………………143%
十三、精密度:CV%<10%
十四、添加回收实验的回收率:No.样品回收率(大约)1尿样70%~110%之间
2血清/血浆85%~105%之间
3肉类85%~105%之间
4肝/心脏80%~110%之间
5饲料75%~115%之间
十五、文献:1.Haasnoot,W.,Cazemier,G.,Stouten,P.andKemmers-Voncken,A.ImmunochemicalApproachestotheAnalysisofβ-AgonisticDrugs.ACS-Books,ResidueAnalysisinFoodSafety:ApplicationsofImmunoassayMethods.Eds.Ross.C.BeierandLarryH.Stanker(1996).2.Haasnoot,W.,Stouten,P.,Schilt,R.,Hooijerink,D.Afastimmunoassayforthescreeningofβ-agonistsinhair.Analyst123,(1998),2707.
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农产品快速检测技术W1204-4 样品处理——检测猪肉中克伦特罗-微教材
《农产品/食品快速检测技术》课程-微教材知识讲解1、样本处理前须知：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（2）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。
（3）未处理的样本需冷冻保存。
（4）处理后的样本可在2℃～8℃避光保存24h。
边学边练/案例分析任务：样品处理——ELISA法检测猪肉中克伦特罗样品：猪肉参考标准：克伦特罗ELISA检测试剂盒说明书操作技术要点：方法一：（1）将待检样品去除油脂后用均值器进行均质；（2）精确称取1±0.01g均质后的样品于5ml-15ml离心管中；（3）加入2ml组织提取液，充分震荡2min；（4）4000r/min以上速度离心10min；（5）取1ml液体另一离心管中，加入40μL 1mol/L氢氧化钠震荡混匀，pH调至7-8 （6）取20μL上清进行检测。
方法二：（1）将样品去除油脂后用均质器进行均质；（2）精确称取2±0.01g均质后的样品于50ml离心管中；（3）加入8ml乙腈，充分震荡2min；（4）4000r/min以上速度离心10min；（5）取2ml上层清亮有机相至洁净的试管中，于50-60℃氮气流下吹干/旋转蒸发至干；（6）加入1ml复溶工作液，用漩涡仪漩涡30s；（7）再加入1ml正己烷，用漩涡仪漩涡1min；（8）4000 r/min以上速度离心5min，去除上层正己烷相；（9）取20μL下层溶液进行检测。
拓展阅读1、饲料样品的处理方法一：（1）称取1.0±0.05g饲料样品于50ml离心管中；（2）加入5ml饲料提取液，充分震荡混匀；（3）4000 r/min以上速度离心10min；（4）取1ml液体另一离心管中，加入40μL 1mol/L氢氧化钠震荡混匀，pH调至7-8；（5）取20μL上清液进行检测。
方法二：（1）用均质器均质饲料样本；（2）精确称取2±0.01g均质后的样品于50ml离心管中；（3）加入8ml乙腈，充分震荡2min；（4）4000r/min以上速度离心10min；（5）取1ml上层清亮有机相至洁净的试管中，于50-60℃氮气流下吹干/旋转蒸发至干；（6）加入1ml复溶工作液，用漩涡仪漩涡30s；（7）再加入1ml正己烷，用漩涡仪漩涡1min；（8）4000 r/min以上速度离心5min，去除上层正己烷相；（9）取20μL下层溶液进行检测。
德国拜发克伦特罗试剂盒
德国拜发克伦特罗试剂盒
检测原理
检测的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对克伦特罗抗体的捕获抗体。
加入克伦特罗抗体后，会与捕获抗体连接。
经过孵育及洗板步骤后，加入标准、样品溶液及克伦特罗酶标记物（酶连接物），游离的克伦特罗与克伦特罗酶连接物竞争克伦特罗抗体结合位点（竞争美联免疫），没有连接的克伦特罗酶连接物在洗涤步骤中被除去。
将底物/发色剂加入到孔中并且孵育。
结合的酶连接物将发色剂转化为蓝色的产物。
加入反应终止液后使颜色由蓝转变为黄色。
在450 nm 处测量，吸光度值与样品中的克伦特罗浓度成反比。
猪尿中克伦特罗检测方法—酶联免疫吸附测定法
原理
测定的基础是抗原抗体反应。
酶联板包被有克伦特罗特异性抗体的抗体，加入抗克伦特罗的特异性抗体，两者结合被固定。
标样或试样中克伦特罗与酶（辣根过氧化酶）标记抗原竞争抗克伦特罗的特异性抗体。
通过洗涤以除去没有与抗克伦特罗的特异性抗体结合的酶标记抗原。
加入酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）结合到酶联板上的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。
加入反应停止液后使颜色由蓝色转变为黄色。
在450nm处测定吸光度值。
吸光度值与样品中的克伦特罗浓度成反比。
英国朗道克伦特罗检测盒
检测原理：
1.在可拆解成条状的酶标板上，已包被了克伦特罗特异性抗
体。
2..标准液或样品中的克伦特罗会酶标记物争夺酶标板上抗
体的结合位点形成抗体/抗原或抗体/酶标抗原复合物
3.洗涤酶标板，除去游离的酶标记物，加上底物/发色剂.在
一定温度范围内，抗体/酶标抗原复合物催化底物/发色剂。
克伦特罗ELISA快速检测方法
克伦特罗ELISA快速检测方法克伦特罗属于-兴奋剂类药物，可以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长。
8.3 当板间差异性大时，可能原因是板与板之间孵育时间相差太大，板与板之间洗涤不一致，移液枪使用不当，温度不同等。
克伦特罗属于-兴奋剂类药物，可以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长。
目前由于多起克伦特罗中毒事件且出现了死亡案例，因此被禁止使用。
克伦特罗ELISA快速检测试剂盒与经典色谱法相比，具有操作过程简单、样品处理快捷，可同时分析多个样品，分析时间短、成本低、灵敏度高且对环境污染小等优点。
1 原理ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。
此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
2 试样的准备2.1 对于尿样可直接用于检测，或者样品比较浑浊时，可适当离心。
当尿样冷冻时，应将尿样回温再测。
2.2 饲料样品要按照说明书的处理步骤进行。
当然，为保证样品充分被提取，可适当延长涡旋时间、离心时间及离心转数。
3 试剂的准备3.1 不同批次的试剂盒不能混用，因为抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。
3.2 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。
ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的应为新鲜的和高质量的。
自配的缓冲液应用pH计测量较正。
3.3 从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后使用。
试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
3.4 检测过程中应尽量保持室温20~25℃，避免在通风口操作，温度过低、过热或蒸发都会影响检测数据的准确性。
同样不应再阳光直射下实验，防止过热或蒸发带来影响。
4 加样4.1 在ELISA中一般有4次加样步聚，即加标本或样品、酶结合物、底物、终止液。
加样时应将所加物加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡，当有气泡时可用干净的枪头小心刺破。
4.2 加标准及样品时一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中，每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染。
盐酸克伦特罗试剂盒操作流程图
盐酸克伦特罗试剂盒操作流程图
取出所需的微孔板条并插入框架内
样品前处理
准备工作液 酶联免疫实验设计 加样（各50ul ） 加酶联结合物(除空白孔,各50ul)
倾空微孔板, 用250ul 冲洗液重复洗板5次
0标样 加克伦特罗抗体溶液(各100ul) 该反应速度快，建议使用多道移液器
轻轻敲击微孔板四周，室温20-25℃避光孵育30分钟 平行试验
试剂升温 尿样离心 洗液，样品稀释液，底物溶液 标样 空白
添加 样品
加显色液(各200ul)
加中止液(各50ul)
室温20-25℃避光孵育30分钟
充分混合
450nm 下读取OD 值
ELISA测定CLB项目调查题
1．您对盐酸克伦特罗（CLB）的了解程度是
①不了解②一般了解③非常了解
2．您对ELISA方法的了解程度是
①不了解②一般了解③非常了解
3．您对ELISA测定CLB残留方法的了解程度是
①不了解②一般了解③非常了解
4．您承担或参加过CLB残留检测的实验吗？
①是②否
如果选择①，请您选择所采用的实验方法
①HPLC ②GC-MS ③ELISA ④其他：
5．通过本次培训，您最想了解的是
①国内外现状②方法原理③实验操作程序④其他：6．本次培训结束后，您是否从事该方面的工作
①是②否
黄啟良
中国农业科学院植物保护研究所副研究员
中国农业大学农业应用化学系
农药专业博士
主要从事农药剂型加工原理和农药产品质量检测方法研究。
联系电话：0（办）
E-mail:。
实验一 克伦特罗直接竞争ELISA检测实验指导
实验一克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测克伦特罗（clenbuterol），化学名为4-氨基-α-[ (叔丁胺基)甲基]-3,5-二氯苯甲醇盐酸盐，属于β-兴奋剂（β-Agonist）的一种。
由于克伦特罗能显著降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉产量（由此得名“瘦肉精”），曾在畜牧业上作为生长促进剂被广泛使用。
克伦特罗有较大的毒性，当人们食用高残留克伦特罗的动物性食品时，会出现心悸、头疼、目眩、恶心、呕吐、发烧、颤栗、神经过敏、血管扩张、心率加快、肌肉震颤等中毒症状。
因此，欧美等国早已禁止克伦特罗在畜牧生产上的应用，我国农业部于1997年3月发布[农牧发(1997)]3号文件，禁止克伦特罗在动物生产中的应用。
1999年再次发布文件，禁止其使用，并规定了在动物组织中的最高限量。
然而，由于经济利益的驱使，克伦特罗违法滥用的现象仍然较为普遍，中毒现象屡屡发生。
图1 克伦特罗分子结构式检测克伦特罗的方法主要有高效液相色谱法（HPLC），气相色谱－质谱法（GC-MS），毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）等等。
HPLC法与GC-MS 法是克伦特罗残留检测的确证方法，其优点是检测精确度高，但因其仪器化程度高、检测时间长、过程繁琐、检测费用昂贵等而阻碍其推广应用，而酶联免疫分析（ELISA）快速检测技术因成本低、操作简单、速度快、一次检测样本量大、仪器化程度低，现已成为常用的筛选方法。
1 实验原理在微孔条上预包被偶联抗原；加入样品或标准品，样品或标准品中的克伦特罗与微孔条上预包被的偶联抗原竞争结合酶标记的克伦特罗单克隆抗体，游离的酶标记抗体通过洗涤被除去；再加入显色液，结合的酶标记抗体使无色的显色液转化为蓝色，加入反应终止液后再转变为黄色，在450nm处测量，样品吸光值与样品中克伦特罗含量成负相关，通过标准曲线即可计算出样品中克伦特罗含量。
检测原理示意图如下所示：①未包被酶标板②将包被抗原包被在酶标板上③首先将标准品或待检样品加入到包被好的酶标板微空内④然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，孵育期间包被抗原与样品中的被检药物将同时竞争酶标抗体，如果样品中的被检药物含量多则与包被抗原结合的酶标抗体就少，反之就多⑤通过洗涤将反应液中未与包被抗原结合的酶标抗体去除⑥加入底物缓冲液与底物液的混合液，酶标抗体上辣根过氧化物酶将催化底物进行显色反应（由无色变为蓝色）⑦达到显色时间后，加入硫酸溶液终止酶促反应，同时反应溶液由蓝色变为金黄色，此反应液可通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度值，从而通过软件计算得到待检药物的浓度2 实验材料（1）克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。
食品冷链品控专业《实验三十四、食品中克伦特罗含量检测》
实验三十四、食品中克伦特罗含量检测〔高效液相色谱法〕克伦特罗为强效选择性β-受体冲动剂，可明显促进动物生长，并增加瘦肉率，因而俗称“瘦肉精〞。
202190年代，受当时科研水平所限，我国局部地区曾错误地将其作为先进科研成果引入，并作为饲料添加剂进行推广。
之后一系列由含克伦特罗引发的食物中毒事件发生后，我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局在2021年9月10日发布的?禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录?中，将盐酸克伦特罗等列为禁用药品。
然而仍有极个别养殖户因重视程度不够或受经济利益驱使，在饲料里私自添加“瘦肉精〞，使“健美猪〞等引发的中毒事件频繁发生。
一、原理固体试样剪碎，用高氯酸溶液匀浆，液体试样参加高氯酸溶液，进行超声加热提取后，用异丙醇乙酸乙酯〔4060〕萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行别离，用乙醇浓氨水〔982〕溶液洗脱，洗脱液浓缩，流动相定容后在高效液相色谱仪上进行测定，外标法定量。
二、试剂及配制克伦特罗clenbuterol hydrochloride，纯度≥%；超纯水；磷酸二氢钠〔NaH2ol/L〕：准确称取40g氢氧化钠，用超纯水溶解并定容至1L，摇匀。
磷酸二氢钠缓冲液〔L，g/L的标准储藏溶液，贮存于冰箱内〔0~40℃〕；使用时用甲醇稀释成L的克伦特罗标准使用液，进步用甲醇水〔4555〕适当稀释。
三、仪器设备高效液相色谱仪；水浴超声清洗器；磨口玻璃离心管：〔长〕×〔内径〕，具塞，或相当者；5mL玻璃离心管或相当者；酸度计；离心机；振荡器；旋转蒸发器；旋涡式混合器；微孔过滤膜〔μm，水相〕；弱阳离子交换柱〔LC-WCX〕3mL或相当者；N2-蒸发器；匀浆器。
四、平安提醒1 多数化学试剂、药品对人体都具有危害性，在实验操作前，实验者应戴一次性手套，防止用手直接接触。
2 所有的药品、试剂都应贴有明显的标签，标明药品名称、质量规格及来货日期，必要时用明显标志标明药品、试剂危险性质。
鼠抗克伦特罗单克隆抗体说明书
R-protagen
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鼠抗克伦特罗单克隆抗体说明书
产品名称：鼠抗克伦特罗单克隆抗体
英文名称：Mouse anti- Clenbuterol Monoclonal Antibody
产品编号：MC0026
免疫原：盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白偶联物（CL-BSA）
克隆号：4H8、5A3、1C6、3G2
抗体类型：未鉴定
亲和常数：
特异性：IC50分别为2.28ng/ml，5.02ng/ml，6.82ng/ml，27.75ng/ml，与β-激动剂沙丁胺醇（Salbuterol）、肾上腺素（Epinephine）、去甲肾上腺素
（Norepinephrine）、异丙肾上腺素（Isoprenaline）和莱克多巴胺
（Ractopamine）的交叉反应率均低于0.5％。
纯化方法：Protein A亲和层析
抗体浓度：
产品规格：1ml
储存体系：0.01M PBS pH7.4
储存条件：-20℃
2 2 应用情况：ELISA、快速诊断。
注意：如使用频繁，请分装冻存。
不可反复冻融。
瘦肉精双拼检测卡说明书(完整版)
盐酸克伦特罗-莱克多巴胺金标检测双拼卡使用说明书【产品简介】本产品运用抗原抗体的特异反应以及侧向层析和胶体金技术进行动物尿样、组织和饲料中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺残留的快速定性检测，不需要任何仪器，整个检测过程只需要3-5分钟左右，灵敏度为盐酸克伦特罗：5 ng/mL（5 ppb），莱克多巴胺：5ng/mL（5ppb）。
【适用范围】适用于动物尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的测定。
检出限为盐酸克伦特罗：5 ng/mL（5 ppb），莱克多巴胺：5ng/mL（5ppb）。
【一、尿样收集】尿液标本必须收集在洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
若不能及时送检，尿样标本在2ºC-8ºC冷藏可保存48小时。
长期保存需冷冻于-20ºC，忌反复冻融。
【二、组织样本收集】组织样本（包括精肉、肝脏、肺脏和肾脏）立即检测或收集在塑料袋中送检。
若不能及时检测，样本在2-8℃冷藏可保存24小时，-20℃冷冻保存1周，冷冻时忌反复冻融。
将组织样本剪碎，称取0.5g 组织样本装入我公司提供的配套组织提取液中。
充分混匀，然后将离心管放入90℃以上沸水浴加热10min 便有液汁浸出，取出此离心管放至室温，（如条件具备，将离心管放入小离心机中，4000转离心5分钟后，取上清为待检液），如果没有离心机，需将离心管静置15分钟，此离心管中的样本渗出液为待检样品，检测时应尽量取上清液。
【试剂盒组成】1、瘦肉精双拼卡快速检测卡40根2、说明书1份3、一次滴管40根4、一次性手套5双【操作步骤】1．在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和尿样标本恢复至室温。
2．从原包装铝箔袋中取出检测卡，在1小时内应尽快地使用。
3．将试剂盒置于干净平坦的台面上，用塑料吸管垂直滴加2-3滴无空气泡的尿样（约60ul-80ul）于加样孔(S孔)内。
4．结果应在3~5分钟读取，且30分钟内结果不会有任何改变，根据示意图判定结果。
饲料中盐酸克仑特罗含量的检测方法
1范围本标准规定了饲料中盐酸克仑特罗的测定方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料中盐酸克仑特罗的检测。
第一篇高效液相色谱法2原理样品经有机溶剂（甲苯+氯甲烷混合液）抽提，提取液经酸性氧化铝小柱纯化，洗脱液浓缩后用0.1mol/L盐酸溶解后供高效液相色谱仪进行检测。
3试剂除方法另有规定外，试剂均为分析纯，水为二次重蒸水或超纯水。
3.1酸性氧化铝（100-200目），层析用。
3.2甲苯。
3.3二氯甲烷。
3.4乙腈，色谱纯。
3.5 0.1mol/L盐酸。
3.6氢氧化钠。
3.7 20mol/L磷酸二氢钾溶液。
3.8 30μmol/L乙二胺四乙酸二钠溶酸。
3.9盐酸克仑特罗贮备液：精密称取盐酸克仑特罗标准品，用0.1mol/L盐酸溶液配成约100μg/ml标准贮备。
3.10盐酸克仑特罗标准工作液：将贮备液用0.1mol/L盐酸溶液稀释为（0.1-2.0）μg/ml，放在水箱中备用。
4仪器4.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。
4.2旋转蒸发器。
4.3离心机。
4.4超声波发生器。
5操作方法5.1提取称取饲料样品约5g（精确至0.001g），加入0.1mol/L盐酸溶液25ml，超声波处理15分钟，离心5分钟（400转/分），取上清液用40％NaOH溶液调节至pH12。
加甲苯一二氧甲烷（3：1V/V）三次提取（每次20ml），合并提取液。
5.2净化将提取液蒸发至约5ml，过酸性氧化铝小柱（直径1cm，长12cm），用0.1mol/L盐酸溶液洗脱待测成分，洗脱液水浴蒸干后用0.1mol/L盐酸溶液0.50ml溶解，0.45μm滤膜过滤后供高压液相色谱仪检测。
5.3色谱条件。
5.3.1色谱柱，G18柱。
5.3.2流动相：乙腈：缓冲液[20mmol/L磷酸二氢钾+30μmol/LEDTA，ph3.9]（20：80V/V）5.3.3流速：1ml/分钟。
5.3.4检测波长：243nm。
5.3.5进样量：20μl。
一、产品概要
一、产品概要克伦特罗(瘦肉精)是一种肾上腺受体激动剂即神经兴奋剂。
80年代末期发现其对家畜具有促进生长，降低脂肪，提高瘦肉率的功效，曾被作为饲料添加剂使用。
然而，90 年代初期以来，出现多起克伦特罗(瘦肉精)中毒事件，并出现了死亡案例，因此被禁止使用。
克伦特罗快速检测试剂盒采用直接竞争酶联免疫一步法，可对尿液、饲料、肉类组织中的克伦特罗进行快速定量检测。
二、试剂原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测尿样、组织、饲料等样本中的盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride，Cle），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。
检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的盐酸克伦特罗和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗盐酸克伦特罗抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含盐酸克伦特罗含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中盐酸克伦特罗的残留量。
三、使用范围克伦特罗检测试剂盒可定性、定量检测动物组织（肌肉、肝脏等）、尿液、饲料、牛奶等样品中克仑特罗的残留量。
四、技术指标1 试剂盒灵敏度：(ng/ml)2 反应模式：25℃，30min～15min。
3 检测下限：尿液样本: 组织样本: 饲料样本:1ppb4 交叉反应率：克伦特罗（Clenbuterol）:100% 马布特罗（Mabuterol）:<1% 特普他林（Terbutalin）:<1% 溴布特罗（Brombuterol）:<1%沙丁胺醇（Salbutamol）:<1% 莱克多巴胺（Ractopamine）:<1%5 样本回收率：尿样:95%±10% 组织:85%±15% 饲料:85%±15%五、试剂盒组成酶标板、标准液、高标准液、酶标记物、抗体工作液、底物液A、底物液B、终止液、20X浓缩洗涤液、10X复溶液六、贮藏及保存期储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。