如何进行石蜡切片制作

一、固定液（xx 氏液）

饱和苦味酸75mL+40%甲醛25mL+冰醋酸5mL

二、苏木精染液（实验前至少 3 个月要配好）[Harris 'solution]

1. A液：

KAl（SO

4）

2 （硫酸铝钾）40g+蒸馏水900ml，加热溶解

2. B液xx精5g+无水乙醇100ml

3•将B液倒入A,继续加热至沸腾

4.C 液，

1.5g 氧化汞溶于10ml 蒸馏水

5•将C倒入AB混合液，边加边搅拌，缓慢，加完后加热至再度沸腾

6. 将上混合液放入冷水中迅速冷却

7. 装瓶，临用前加入10ml 冰乙酸

使用之前要过滤！

三、熬蜡

3-4天，每天6-7 h，至xx为止。

四、脱水

如果用的是波恩氏液，则可以从50%或者70%乙醇开始脱水。如果当天不能完成透明过程，到70%处可以停止，否则得一直做到透明过程。如果用的是甲醛-PBS缓冲液固定，则必须从30%处脱水。

30% (乙醇)1h ---------- 50%1h ------ 70%1h(可以过夜) --------- 85%1h --------- 95%l30min——95%ll30min ----- 100%I,II100(%b时间须自己摸索，不同组织脱水时间不一样。如果脱水时间过长，则会导致切片的时候有刀痕并且组织不容易切完整。如果脱水时间过短，细胞间隙水分不能完全脱去，透明的时候会变得浑浊，导致透明液不能完全代替乙醇。

一般说来，像肾脏、胰腺等管状、泡状结构比较多的组织脱水时间可稍微减短，像心脏、肝脏等结构比较致密的组织，脱水时间可稍微长点，一般两次100%乙醇处，每次都不超过30min。

五、透明

( 1)二甲苯乙醇30min

( 2)二甲苯l 30 min

(3) 二甲苯II30min。如果用二甲苯透明，则须完成后续的包埋工作。女口

果二甲苯里是浑浊状态的，表明组织间隙水没脱干净。

也可以用水杨酸甲酯透明，一般要18-24 h。

六、包埋

( 1 )二甲苯石蜡20~30 min

( 2)石蜡I 20~30 min

( 3)石蜡II 30 min

七、切片

一般4-7°角，4-5微米厚度

八、染色(最后再做)