[医学]甘薯病毒病及其检测技术
甘薯羽状斑驳病毒RT-PCR检测(英文)
每北难业学报２００７，１６（６）：１９９～２０２ Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｂｏｒｅａｌｉ—ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ Ｓｉｎｉｃａ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ Ｆｅａｔｈｅｒｙ Ｍｏｔｔｌｅ Ｖｉｒｕｓ Ｕｓｉｎｇ ＲＴ－ＰＣＲ
ＺＨＡＯ Ｄｏｎｇ—ｌａｎ，ＴＡＮＧ Ｊｕｎ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕｎ—ｇａｎｇ，ＳＨＩ Ｘｉｎ—ｍｉｎ ａｎｄ ＺＨＯＵ Ｚｈｉ—ｌｉｎ
（Ｘｕｚｈｏｕ Ｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２ｌ１２ｌ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ ｏｆ ｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ ｆｅａｔｈｅｒｙ ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕｓ（ＳＰＦＭＶ），ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆ ｒｅ—
ｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ＰＣＲ）ｆｏｒ ＳＰＦＭＶ ｗａｓ ｂｕｉｌｔ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ ｗｅｒｅ ｖａｌｉｄａｔｅｄ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅｏ—
ｔｉｄｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ８８．３ ａｎｄ ９８．６ ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ＣＰ ｇｅｎｅ ｏｆ ＳＰＦＭＶ
ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ ｆｅａｔｈｅｒｙ ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕｓ；ＲＴ—ＰＣＲ；Ｖｉｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ＣＬ．Ｃ ｎｌｌｌｌｎｂｅｔ：Ｓ４３２．４１ Ｄｏｃｕｍｅｎｔ ｃｏｄｅ：Ａ Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ：１００４—１３８９（２００７）０６—０１９９一Ｏ４
GB／T7713-1987表
１１４ 安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２０１４，２０（０８） 发生较轻，只在牟平发现疑似病株，经检测病株带有 ＳＰＶＤ病毒。该病的发生和流行程度取决于种薯、种苗是 否带毒以及传毒介体的数量、传毒效能及甘薯品种的 抗性。 １．７甘薯虫害烟台地区较为严重的甘薯虫害主要有地 下害虫及烟粉虱、甘薯天蛾、甘薯麦蛾等 。地下害虫主 要有蛴螬、金针虫和地老虎，蛴螬咬食薯块，造成大而浅 的空洞，金针虫会造成薯块细而深的空洞，地老虎在薯块 顶部造成凹凸不平的虫伤疤痕，严重影响了甘薯的商品 率和品质；烟粉虱及蛾类害虫主要危害甘薯的叶片和嫩 茎，影响叶片正常的光合作用，而且烟粉虱是甘薯病毒病 的传播者，在同时发生烟粉虱和病毒病的甘薯田，病毒病 会较为严重 ］。 ２甘薯病虫害发生原因 ２．１多年重茬种植烟台甘薯种植多在土壤贫瘠的丘陵 山区，随着甘薯产业的发展，甘薯需求增多，有限的耕地 无法实行轮作倒茬，一个地块多年重茬种植，甘薯病虫害 种类增加且病情逐年加重，甘薯生长不良、植株矮小，导 致甘薯减产。 ２．２乱引种薯种苗甘薯加工需求的甘薯品种逐渐增 多，为了满足需求，有些甘薯种植户盲目从病区引进种 薯、种苗，带病的种薯、种苗造成了甘薯病害的蔓延。 ２．３农民对甘薯病虫害防治意识不高薯块、薯苗、土 壤、粪肥都是甘薯病虫害传播的媒介。农民缺少对病害 发病规律的认识，采收甘薯时没有对病薯进行集中处理， 而是扔到田间、地头或者用作饲料，造成土壤中、粪肥中 病原不断增多，人为加剧了翌年病害的发生。 ３防治对策 ３．１轮作换茬实行３ａ以上轮作制度，与花生、玉米等 作物轮作；重病地区改种棉花、玉米、芝麻、高粱等非寄生 作物。 ３．２培育无病薯苗保证苗床土壤不带病，每年育苗苗 床更换新土或新沙；种薯上床前进行精选，剔除病薯，将 精选的种薯用５００～６００倍多菌灵溶液浸泡，杀死表层病 原，然后上床；育秧期要加强管理，培育无病壮苗。 ３．３加大高剪苗的推广力度据徐卅Ｉ市农科院试验，高 剪苗比平剪苗发病率低１１．４０％，比连根拔秧的低１８％～ ３０％。因为传统观念，烟台地区农民要求薯苗为拔苗，不 能接受高剪苗。应消除农民对甘薯高剪苗的误解，打破 陈旧观念，普及推广高剪苗。 ３．４加强种薯检疫对调运的种薯、种苗实施严格的产 地或调运检疫，防止带病种薯、种苗调出调人，保护无 病区。 ３．５选用较抗病品种选用抗病品种是防治甘薯病虫害 最为有效最经济安全的方法，目前抗茎线虫的甘薯品种 有徐薯２５号、郑红２２、商薯ｌ９、烟薯２１等；抗黑斑病的品 种有冀薯９８、徐薯２３、烟紫薯１号等；抗根腐病的品种有 徐薯２５号、郑红２２、商薯１９、烟紫薯１号、烟薯２２、徐薯 ２６等。 ３．６药剂防治采用甘薯栽植时穴施药剂的方法：５％克 线丹颗粒剂、５％毒死蜱颗粒剂、３％辛硫磷颗粒剂、５％二 嗪啉颗粒剂，６６７ｍ 施用有效成分１００—１５０ｇ ・ 。防治 地下害虫地老虎可以在低龄幼虫期，傍晚时用４０％毒死 蜱乳油１ ０００倍液、５０％辛硫磷乳油１ ０００倍液喷浇苗间 及根际土壤 ］。 参考文献 ［１］付波，吴祖善，王传士．５％神农丹颗粒剂防治甘薯茎线虫病药效 试验［Ｊ］．杂粮作物，２００２，２２（６）：３６０． ［２］迟新之，刘汉舒，冯玲，等．甘薯天蛾危害损失及防治指标研究 ［Ｊ］．山东农业科学，１９９８（３）：３３－３５． ［３］孙厚俊，谢逸萍．甘薯粉虱研究进展［Ｊ］．江西农业学报，２００８，２０ （１０）：７９—８３． ［４］史明武，华小平，钱省，等．甘薯茎线虫病药剂防治筛选试验［Ｊ］． 现代农业科技，２００７（１３）：６８—７０． ［５］谢逸萍，马代夫，李秀英，等．５种药剂对甘薯茎线虫病的防治效 果试［Ｊ］．江西农业学报，２００８，２０（２）：６６—６７． ［６］何霭如，余小丽，李观康．４种药剂对甘薯地下害虫的田间防治试 验［Ｊ］．广东农业科学，２０１１（１８）：６２—６３． （责编：施婷婷） ＧＢ／Ｔ ７７１３—１９８７表表的编排，一般是内容和测试项目由左至右横读，数据依序竖排。表应有自明性。表应编排 序号每一表应有简短确切的题名，连同表号置于表上。必要时，应将表中的符号、标记、代码，以及需要说明事项，以最 简练的文字，横排于表题下，作为表注，也可以附注于表下。附注序号的编排。表内附注的序号宜用小号阿拉伯数字 并加圆括号置于被标注对象的右上角，如：／ＸＸ’），不宜用星号“，”，以免与数学上共辘和物质转移的符号相混。表的 各栏均应标明“量或测试项目、标准规定符号、单位”。只有在无必要标注的情况下方可省。表中的缩略词和符号，必 须与正文中一致。表内同一栏的数字必须上下对齐。表内不宜用“同上”、“同左”、“”和类似词，一律填人具休数字或 文字。表内“空白”代表未测或无此项，“一”或“？”（因“一”可能与代表阴性反应相混）代表未发现，ａｓｄ”代表实测结果 确为零。如数据已绘成曲线图，可不再列表。
甘薯脱毒种薯(苗 )生产技术规程
一、概述
甘薯是我国一种重要的粮食作物，广泛种植于南方地区。甘薯脱毒种薯（苗）生产技术对于甘薯的良种繁育和生产实践具有重要意义。本文旨在介绍甘薯脱毒种薯（苗）生产技术规程，旨在提高种薯（苗）的品质和产量。
二、选种
选用抗病、高产、优质、早熟的良种甘薯品种作为种源，具备以下特点：
1. 抗病性强，抗病力强的品种对病毒的抗性较高，能降低病毒传播率。
2. 产量高，优质的种薯要求产量高，既能保证繁殖材料的充足，又能保证后期产薯的丰收。
3. 早熟性强，早熟的品种生长周期短，适应性强，能适应不同的生长环境。
三、病毒的识别和监测
1. 通过观察甘薯的叶片和茎部，识别病毒感染的甘薯植株。通常病毒感染的甘薯叶片会呈现黄化、斑点或变形等现象。
2. 利用酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术，对甘薯进行病毒检测。
四、病毒的消毒
1. 使用50过氧化氢浸泡法对甘薯进行消毒处理，浸泡时间约为15-20分钟。
2. 选取正常外观、无病斑的甘薯进行消毒处理，确保病毒不会通过种薯传播到下一代。
五、甘薯的扦插和繁殖
1. 在甘薯生长盛期，选取生长良好、无病害的茎部或叶片，进行扦插繁殖。扦插时要确保植株的生长环境湿润、光线充足。
2. 通过扦插繁殖，能够保证种薯的生长环境和品质，有利于良种的延续和繁殖。
六、甘薯的定植和管理
1. 选择肥沃土壤，进行定植，保证植株生长的养分供应。加强对甘薯的病虫害防治，保证植株的健康生长。
2. 定期浇水、施肥，保证甘薯植株的正常生长和产量。
七、甘薯的采收和储藏
1. 在甘薯成熟后，进行采收。采收时要注意不损伤植株，选择正常外观、无病斑的甘薯进行储藏或下一轮的种植。
2. 进行甘薯的储藏管理，确保甘薯的质量和产量。
八、结语
甘薯脱毒种薯（苗）生产技术规程是甘薯生产的重要环节，对于良种的繁育和甘薯的高产高效具有重要意义。通过规范的操作，可以保证甘薯的生产质量和产量，为甘薯产业的健康发展提供有力保障。希望本文能够对甘薯脱毒种薯（苗）的生产技术有所启发和帮助。九、甘薯病毒监测与防控
甘薯体细胞胚状体及其在脱毒、扩繁中的应用
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%00(作物学报
12311456’6-72187’721第
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甘薯体细胞胚状体及其在脱毒、扩繁中的应用
王关林方宏筠李洪艳"
（辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连
99:0%&）
摘要通过甘薯徐薯
9,茎尖体细胞培养诱导胚性愈伤组织和胚状体，建立了体细胞无性系。胚性愈伤和胚状体诱导
培养基为
-8附加
0;+<%;0=>?@%，
*AB、
0;+=>?@’11、
0;9=>?@C1及
900=>?@D@。研究结果表明：采用茎尖体细胞胚胎
发生途径能够同时实现试管苗的深度脱毒及大幅度提高扩繁量，脱病毒率达
&+E，扩繁量达
(,%;&倍。田间种植该脱病
毒种苗能使甘薯产量比茎尖培养试管苗提高
+0E<900E。
关键词甘薯；体细胞胚胎发生；脱病毒；快繁
中图分类号：
8+(9文献标识码：
1
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!IOGRAVOPP；
[O").>.TI"H
甘薯（
78"/"$,9,3,3,2@$@.=）的主要病害是病
毒病。由于甘薯无性繁殖，带病毒的种苗传播快、发
病严重，使产量、质量急剧下降［
9］
。茎尖培养是目前
防治甘薯病毒病的有效方法。
’IP#RPH［
%］
最早采用茎
尖培养方法脱除了甘薯木栓病毒。我国对甘薯茎尖
培养的研究工作开展较晚，但进展较快，在
9&&(年
张慧娟［
(］
、杨永嘉［
*］
等分别报道了甘薯茎尖培养和
脱毒快繁法及其大幅度增产效应，并已进入推广应
用阶段。但是至今仍然存在着两个尚需深入解决的
问题：一是脱病毒程度差。这主要是茎尖培养中，要
把茎尖剥离成为
0;9==以下大小十分困难，而且成
活率低。也有研究表明茎尖培养不能彻底除去病
毒，为此把最初叫无毒苗改为脱毒苗［
+］
。二是甘薯
茎尖培养扩繁量小，成本高。为此，国内外学者对甘薯的细胞培养及体细胞胚胎发生进行了研究。迄今
已从茎尖、叶片、茎段及块根等外植体培养诱导出体
细胞胚［
:］
。刘庆昌等（
9&&(）［
\］
在对甘薯茎尖的组织
培养中实现了高频率的体细胞胚胎发生和植株再
生。
9&&:年他们又建立甘薯胚性细胞悬浮培养系，
并植株再生率达到
900E［
,］
。但是上述研究尚未进
行脱毒效果的系统分析及向生产实践转化。本研究
着重于以细胞培养及体细胞胚胎发生途径，同时实
现深度脱病毒和大幅度提高扩繁量，并应用于生产
实践。
<材料与方法<=<实验材料
"基金项目：辽宁省科技厅攻关项目（
&&0,0+）。
以国内广泛种植的高产品种徐薯
!"为试材，由
辽宁师范大学生物工程研究所实验基地提供。
!"#方法
!#$#!甘薯茎尖体细胞培养甘薯茎尖经常规
消毒后在显微镜下剥离到
%#$&%#’((大小时，迅
速用解剖刀切取小于
%#!((的茎尖分化组织细胞，
接种在胚性细胞诱导培养基中。在暗培养条件下，
待胚性愈伤组织形成后转入胚状体诱导培养基中。
形成的胚状体再转入光培养条件下的绿苗再生培养
基获得丛生试管苗。胚性愈伤组织诱导培养基为
)*附加
$#%(+,-$，
./0、
!#%&$#’(+,-122、
%#!(+,
-32及
!%%(+,-4-；胚状体诱导培养基为
)*附加
%#’(+,-$，
./0、
%#’(+,-122、
%#!(+,-32及
!%%(+,-4-；绿苗再生培养基为
)*附加
%#!(+,-
32、
%#!(+,-522。培养温度
$’6，光照
7%%%89。
!#$#$病毒检测脱毒试管苗筛选：从试管苗上
剪取适量叶片，加提取液研磨，离心后取上清液，采
用硝酸纤维素膜斑点酶联免疫检测法（
0:;<8:;/
=-5*2），按文献［
’］进行筛选检测。
指示植物鉴定法：通过
0:;<8:;/=-5*2筛选出的
脱毒试管苗，通过嫁接到巴西牵牛（
!"#$%&’%($’&），
观察病症鉴定脱毒试管苗。
!#$#7茎尖培养茎尖脱毒快繁培养方法按文
献［
!］进行。以通过
0:;<8:;/=-5*2及指示植物检测
的脱病毒试管苗为试材，并以未脱病毒种苗为对照。
茎尖培养基为
)*附加
%#!(+,-32、
%#!(+,-522及
%#!(+,->2，生根培养基为
)*附加
%#!(+,-532。
#实验结果
#"!甘薯茎尖体细胞培养诱导胚性愈伤组织、胚状
体及其无性系建立
小于
%#!((的茎尖分生细胞组织，接种在胚性
愈伤组织诱导培养基上，暗培养
7&’周后，可见到
!&’((左右大小不等的乳白色致密胚性愈伤组织
（图
!）。将其转到胚状体诱导培养基上培养
.&?
周后，在胚性细胞团的边缘诱导出许多颗粒状结构，
用立体显微镜观察时可辨认出球形胚、鱼雷胚和子
叶胚（图
$）。当胚状体细胞团转入相同的培养基中
继代培养时可不断扩繁，从而产生大量的胚状体。
这些胚状体细胞团转入绿苗生长培养基中培养
7&
.周可生长发育出许多丛生试管苗（图
7）。再将这
些试管苗分离单独进行茎尖扩繁培养，又可产生许体，从而建立体细胞胚状体无性系。
图
!从茎尖分生组织诱导的胚性愈伤组织
@A+#!=( 图 $不同发育时期的体细胞胚 @A+#$*:(G;AFD( 图 7从体细胞胚分化丛生试管苗 @A+#7N8GE;8D;IJB:(I:(G;AFD( #"#三种扩繁途径的扩繁量比较 为了观察体细胞胚状体途径的扩繁能力，以茎 尖培养和微型扦插繁殖为对照进行比较实验。分别 各接种 $%个茎尖外植体，微型扦插成活率最高达 O%P，后两者的成活率很低，茎尖培养成活 ?个，而 胚状体途径成活 ’个。但当扩繁培养 7代后（ * 7）， 三者已发生极大的差异，统计结果列表 !。?.7 表 !胚状体途径、茎尖培养途径及微型扦插途径扩繁量比较 "#$%&!’()*#+,-(.(/*+(*#0#1,(.23#.1,14#)(.05*+(*#01,(.)&16(7-： -()#1,8&)$+4(0&.&-,-， -6((11,*83%13+&#.7),8+(8311,.0 扩繁途径 !"#$%& %’ ()%(*+*#,%-茎尖外植体 .%/%’"0(1*-#2%’2$%%#试管绿苗扩繁量（株）及倍数 .%/%’(1*-#1"#2*-&()%(*+*#,%-#,3"2 接种数（个） .%/(1*-#"&成活数（个） .%/%’ 24)5,5*1诱导率（ 6） 7-&48"& )*#"9 :9 ;9 <9 = 数量 .%/倍数 >,3"2总扩繁量（ !） >%#*1.%/%’ ()%(*+*#,%- !,8)%84##*+"841#4)"<:;?@:=AB<<;AAC?;? "（ <# D=# ） 9$%%##,(841#4)"<:A=:;EEC;?@@CEA= "（ =# DE# ） 9%3*#,8"3F)G%+"-"2,2<:E "（ ;:# D<:# ） !：总扩繁量（ >%#*1.%/%’()%(*+*#,%-） "： 9 :的试管苗数量（ .%/%’9 :） #：继代培养次数（ >,3"2%’24F841#4)"）扩繁倍数 I9 =J9 :（ K)%(*+*#,%-#,3"2I9 =J9 :） 表 ;说明三代扩繁后，微型扦插只扩繁了 9 :的 ;?倍，茎尖培养扩繁了 A=倍，而胚状体途径扩繁了 约 =? 为 =DE，而胚状体为 ;:D<:，当扩繁培养 ;年后按 !I"$# 计算（ #为 ;<代， $为扩繁系数），三者的差 异十分巨大。由此可见，产生胚状体是一条理想的 扩繁途径。 9:5三种扩繁途径的脱病毒作用比较 图 CL%#F1%#MNO79P病毒检测结果 Q,+HC>$")"241#2%’5,)42&"#"8#,%-FG&#F1%#MNO79P ;H带病毒甘薯苗 =H茎尖培养的试管苗;HK1*-#R,#$5,)42 =HK1*-#"#2’)%32$%%##,(841#4)"为分析胚状体途径扩繁试管苗的脱病毒作用， 实验中与茎尖脱毒培养进行比较，并且以微型扦插 培养为阳性对照（微型扦插不能脱病毒）。对徐薯 ;?的种苗进行了检测， L%#F1%#MNO79P方法和指示植 物检测都确认为带病毒植株，主要病毒为甘薯羽状 斑驳病毒（ 9KQ!S）和甘薯潜隐病毒（ 9KOS）。带病毒 苗分别进行了茎尖体细胞诱导胚状体培养、茎尖培 养及直接进行试管内微型扦插培养，获得的 9 ;代的 试管苗分别进行 L%#F1%#MNO79P检测及巴西牵牛指 示植物鉴定。从图 C结果明显可见未脱毒徐薯 ;? 种苗呈阳性反应，胚状体诱导的试管苗及茎尖培养 的试管苗都呈阴性反应，而微型扦插繁殖的试管苗 仍然呈阳性反应。该实验结果进一步证实不能把微 型扦插苗作为脱毒苗使用。将阴性反应和阳性反应 的植株分别嫁接到指示植物巴西牵牛上，培养 ;个 月后可观察到带病毒试管苗致使牵牛发病而死亡， 而脱毒试管苗未使牵牛发病，生长健壮（图 E）。这 一结果也进一步表明 L%#F1%#MNO79P方法是可靠的。为了定量比较体细胞胚发生途径与茎尖培养途 径脱病毒的效果，分别取 ;::株第三代的试管苗（ 9 =） 进行了 L%#F1%#MNO79P病毒检测，统计结果列表 <。 表 9茎尖培养和胚状体培养的脱病毒率比较 "#$%&9’()*#+,-(.(/;,+3- -6((11,*#.7&)$+4(0&.&-,-83%13+&- 扩繁途径 K)%(*+*#,%- 3"#$%&2检测苗数 .%/%’ (1*-#2 #"2#"&阴性苗数 .%/%’ -"+*#,5" (1*-#2阳性苗数 .%/%’ (%2,#,5" (1*-#2中性苗数 .%/%’ -"4#)*1 (1*-#2脱病毒率（ 6）! S,)42M ’)"")*#" （ !"*-2T9L） 9$%%##,( 841#4)";::A<<;;BA N3F)G%M+"-"2,2;::@E:E@ET:HE !=次重复检测结果 !"*-2’)%3=)"(1,8*#"2/ 从表 <可见胚状体途径的脱病毒率可达 @E6。 茎尖培养脱病毒率为 A<6。茎尖培养的脱病毒效 果与茎尖剥离大小有关，剥离越小，脱毒效果越好。 9:>三种扩繁途径生产的试管苗的增产效应比较 本研究自 ;@@?年以来在相同的栽培和管理条 件下，连续 =年对胚状体途径生产的脱病毒试管苗 进行了田间栽培实验，并以茎尖培养途径、微型扦插 繁殖的试管苗及非脱毒试管苗（常规种苗）进行对比 实验。每年实验材料均为原种苗，种植面积不断扩 大， ;@@@年 =H==$3< ， <:::年 <:HB$3< ， <::;年 =AHB$3< 。非脱毒试管苗对照组每年 :HAB$3< 。其产 量统计结果如图 A所示。 在 =年实验中 <:::年大连地区干旱， =种扩繁 途径的试管苗的产量都明显下降，但 =年平均，徐薯 ;?的茎尖培养脱毒苗平均 AAB3< 产 =E::U+，比未脱 毒苗增产 =A6，此结果与邢继英等（ ;@@=）［ @］ 报道相 似。胚状体途径扩繁的试管苗 AAB3< 产达到约 E:::U+，增产 ??HCA6。最高产量达约 A:::U+，增产 ; AAB3< 产 :H:B6。由此可见胚状体快繁途径具BC=
甘薯病毒病的发生与防治
甘薯病毒病这些年在南北方各大薯区都呈现蔓延趋势，在个别地区甚至成为区域性病害，出现无论从哪个区域调入的薯苗，在本地区种植均出现病毒病症状的现象，极大地影响甘薯的产量与品质，成为制约甘薯产品健康发展的巨大障碍。针对甘薯病毒病的防控方法，我们就几年来的经验分享如下。1症状表现甘薯病毒病是由甘薯羽状斑驳病毒(简称SPFMV)侵染引起的一种病害，其表现症状与甘薯品种、侵染病毒的种类、甘薯生育期及外界环境条件等因素相关，在甘薯叶片症状主要表现如下：1.1褪绿型。发病初期或甘薯苗期，叶片产生轻度半透明的褪绿斑，有的形成明脉，发病后期叶片上形成紫环斑，病斑四周出现紫褐色。1.2花叶型。苗期染病，刚开始时叶脉成网状透明，后期沿叶脉形成黄绿相间的不规则花叶斑块。1.3卷叶型。叶片边缘上卷，发生严重时叶片卷成杯状。1.4皱缩型。叶片皱缩扭曲，红薯植株叶片少，叶片小，叶缘不整齐。1.5黄化型。甘薯叶片上变黄及形成网状黄脉。甘薯病毒病在叶片上症状比较容易发现，但在薯块上的表现则相对隐蔽，一般情况下不容易被发现，等到表现出症状时，已经到了发病后期难以预防。在薯块上主要表现为产生黑褐色或黄褐色龟裂纹，裂纹一般排列成横带状，或者在贮藏后薯肉发生木栓化，切开病薯后可见薯肉内产生黄褐色斑块。2甘薯病毒病的传播途径甘薯病毒病主要通过带病薯苗或薯块的远距离运输进行传播，也可通过机械收获或烟粉虱、蚜虫等害虫造成的伤口进行传播。病毒病的发生和流行程度取决于种薯、种苗的带毒率和各种传毒昆虫的种群数量、活力、其传毒效能及甘薯品种的抗性，此外还与土壤、耕作制度、栽植期等有关。3防治方法甘薯病毒病的防控应采用“预防为主，综合防治”的植保方针，全方面控制甘薯病毒病的发生与扩散。3.1选无病种薯育苗。选用正规育种育苗企业生产的脱毒种薯进行种薯繁育或引进种苗，如自己留种育苗应注意留种田的提纯复壮和育苗期种薯的选择，避免用小薯、病种薯育苗，以有利于培育壮苗，提高薯苗的免疫力。3.2加强苗床管理。如果发现有病毒病为害，应及时拔出感病苗，远离苗棚深埋处理，同时用病毒抑制剂加杀虫剂兑水均匀喷雾，每5~7d喷1次，共喷2~3次，起到钝化病毒，切断蚜虫、飞虱等传毒媒介的作用；同时加强苗床管理，提高薯苗免疫力，避免病毒病在苗床上蔓延。3.3移栽期管理。注意从标准育苗基地引苗，尽量避免引入病毒苗。如果在大田期感病，应做到早发现、早控制，极大地降低甚至避免病毒病对甘薯产量的影响。发现感病薯苗后，及时拔出并务必带离薯田，然后用病毒抑制剂均匀喷雾2~3次。注意大田期只要发生过病毒病，尽管通过有效措施控制住了病害的蔓延，也不能从大田薯苗上剪苗使用；感病薯苗所结的薯块也不可作为种薯使用。甘薯病毒病的发生与防治杨会利渊平山县农业农村局河北平山050400冤植物保护现代农村科技2020年第6期
甘薯羽状斑驳病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立
沈阳农业大学学报，２０１３—０４，４４（２）：１２９—１３５
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０ １ ３—０４，４４（２１：１ ２９—１ ３５
甘薯羽状斑驳病毒实时荧光定量ＰＣＲ检测方法的建立
王 丽ｈ，匡 ，乔 奇 ，秦艳红２，张德胜２，田雨婷２，王 爽２张立军ｌｂ，张振臣ｚ
（１．沈阳农业大学ａ．农学院，ｂ．生物科学技术学院，沈阳１１０１６１；２．河南省农业科学院植物保护研究所／河南省农作物病虫害防治 重点实验室／农业部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室，郑州４５０００２）
摘要：依据甘薯羽状斑驳病毒（Ｓｗｅｅｔ ｐｏｔａｔｏｆｅａｔｈｅｒｙ ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕｓ，ＳＰＦＭＶ）外壳蛋白（ＣＰ）基因的保守区设计引物和ＴａｑＭａｎ探针， 经过对反应体系和反应条件的优化，建立了特异、灵敏、高效的ＳＰＦＭＶ实时荧光定量ＰＣＲ检测方法。试验结果表明：该方法能检 测到目的病毒，标准曲线的斜率和相关系数分别为一３．３０７和０．９９８，扩增效率为１００．６％。最低可检测到约５＿４６个拷贝的阳性质 粒，灵敏度比常规ＰＣＲ高２个数量级。建立的实时荧光定量ＰＣＲ方法可用于田间样品的检测，为ＳＰＦＭＶ的早期预警和流行学研 究提供了技术手段。 关键词：甘薯羽状斑驳病毒；实时定量ＰＣＲ；荧光探针 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－１７００．２０１３．０２．００１ 中图分类号：￥４３２．４１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—１７００（２０１３）０２—０１２９—０７
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ Ａｓｓａｙ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ Ｓｗｅｅｔ ｐｏｔａｔｏ ｆｅａｔｈｅｒｙ ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕｓ
ＷＡＮＧ ＬｉＴＭ， 亟 ，ＱＩＡＯ Ｑｉ２，ＱＩＮ Ｙａｎ－ｈｏｎｇ２，ＺＨＡＮＧ Ｄｅ—ｓｈｅｎｇ２，ＴＩＡＮ Ｙｕ－ｔｉｎｇ ，
甘薯病毒病防控措施研究进展与展望优先出版
6作物杂志 Crops2016年第3期
甘薯病毒病防控措施研究进展与展望
董 芳1 张超凡1,2
（1中南大学研究生院隆平分院，410125，湖南长沙；2湖南省作物研究所，410125，湖南长沙）
摘 要 甘薯病毒病是甘薯生产中面临的严重威胁，对我国甘薯产业的发展具有极大的危害。目前，生产上常
用的防控甘薯病毒病的措施有切断病毒传染源、杀灭病毒传播的生物介质、脱毒甘薯的培养及应用、抗病毒制
剂的使用、抗病毒育种、弱毒株系交叉保护等。综述了甘薯病毒病的防控措施、抗病虫农药的发展、抗病毒新
品种的培育，及其应用前景。
关键词 甘薯病毒病防控；生物源农药；抗病毒育种；甘薯脱毒
作者简介：董芳，硕士研究生，主要从事甘薯育种与栽培研究张超凡为通信作者，研究员，主要从事甘薯育种与栽培研究基金项目：中南大学中央高校基本科研业务费专项资金（2015zzts326）；国家甘薯产业体系项目（CARS-11-C-16）收稿日期：2016-03-02；修回日期：2016-04-16甘薯（IPomona batatas Lam.）是重要的粮食作
物之一，在我国的种植面积居世界第一[1]。甘薯病
毒病的流行对我国甘薯的产量及品质产生了巨大
影响。甘薯病毒病在我国主要薯区均有发生，病
毒薯产量约减产20%~50%，甚至引起“种性退化”
现象，严重的导致绝收，对甘薯的产量及品质影响
极大，是甘薯生产面临的严重威胁[2]。目前尚未发
现对甘薯病毒病高耐或是免疫的基因，也没有有效
的防治方法。因此，培育和推广脱毒甘薯成为目前
防治甘薯病毒病的一种有效方法。建立甘薯脱毒苗
的繁育体系，对提高我国优质甘薯的产量和质量、
预防病毒的扩大传播具有巨大作用，同时能为进一
步培育抗病毒甘薯新品种打下坚实的基础，对保证
我国甘薯产业的安全发展也具有重要战略意义。
国外早在20世纪50年代末就已经展开了对甘
薯病毒的鉴定工作，截至1985年已报道的病害或
近似病害就达10余种[3]。发展到2012年，Clark等[4]
甘薯种质资源抗(耐)病毒病评价研究
４６ 江苏农业科学２００２年第２期 文章编号：ｌ。０２【３０２（２００２）０２ ００４６∞
甘薯种质资源抗（耐）病毒病评价研究
邢继英，杨永嘉，孙爱裉，胡兰英，钮福祥，李秀英，唐君 （江苏棣州甘薯研究中 ．江苏棣州２２１１２１）
擒要：对【２００多份甘薯种质资源材料的研究结果表明．田问品种病毒病发病率１００ ，发病程度较轻的品种 占２．４１ ，未发现免疫品种，品种间抗性差异较大；品种的发病程度与平均显症叶位呈极显著负相关，发病程度 与脱毒后的增产幅度呈极显著正相关｝进行品种抗性评价，采用先进行平均显症叶位调查．再结合脱毒后鲜薯增 产情况综合评定品种抗性的方法是可行的；调查时间在９月中Ｆ旬为宜。 关键词：时薯；病毒病；抗性鉴定 中图分类号：￥５３１．０３４ 文献标识码：Ａ 病毒病是甘薯上的重要病害．田间品种发病率 ｌＯ０ ］，是造成甘薯退化减产的重要原因。脱除病 毒后的甘薯能够大幅度提高产量和质量，一般品种 脱毒后增产２０ 以上，高者达２００ 之多“。。．品种 间差异较大。开展甘薯品种抗（耐）病毒病鉴定研究 是选择脱毒品种、进行抗病毒资源筛选和利用．开展 抗病毒病育种工作的基础，目前国内还未有这方面 的报道。ｌ９９５年以来．我们拟从甘薯病毒病症状、发 生程度 及对产量的影响等几方面着手进行探索． 评价不同品种的抗（耐）病特性。 ｌ研究方法 １．１ 甘薯病毒病症状和发生程度调查 ｌ ９９５～ｌ９９７年在甘薯苗床期（６月中旬）和大田 生长期（９月中下旬），对徐州甘薯研究中心所保存的 ｌ ２００多份国内外种质资源材料．进行了５次病毒病 发生情况调查 调查以品种小区为单位，目测叶片病 毒病症状和严重度，对部分材料进行血清学检测。 将病毒病症状严重程度分为五级 。零级：仔细 目测整个小区无典型症状叶片；一级：ｌ０ 左右或以 下叶片有少量的系统症状；二级：２Ｏ 左右叶片有典 型症状；三级：４０ ～６０ 叶片有典型症状；四级： ８Ｏ 以上叶片有典型症状，
温郁金甘薯病毒感染与病原血清学鉴定
Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 巾药科技 温郁金甘薯病毒感染与病原血清学鉴定水 钱华 ，王衍彬 （浙江省林业科学研究院，浙江 杭州 ３１００２３） ［摘要］目的：阐明导致温郁金种质退化的原因。方法：以温郁金块茎、根茎和叶片作样本，采用ＮＣＭ— ＥＬＩＳＡ方法进行检测。结果：在普通栽培的样品中发现甘薯病毒侵染，ＧＡＰ栽培样品中未发现。块茎中检测到 ５种病毒复合侵染，根茎中检测到３种病毒复合侵染。叶片部分目前尚未测出甘薯病毒。结论：初步认定温 郁金病毒病病原至少有５种，即ＳＰＦＭＶ、ＳＰＦＭＭＶ、ＳＰＬＶ、ＳＰＭＳＶ、Ｃ一６。其中ＳＰＭＳＶ属首次在国内植物中 测出。 ［关键词］温郁金；甘薯病毒；病原；ＮＣＭ—ＥＬＩＳＡ 温郁金（Ｃｕｒｃｕｍａ ｗｅｎｙｕｊｉｎ Ｙ．Ｈ．Ｃｈｅｎ ｅｔ Ｃ． Ｌｉｎｇ）是姜科（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）姜黄属（Ｃｕｒｃｕｍａ） 植物，其干燥块根是著名中药材“浙八味”之一， 其干燥根茎则称为温莪术，是常用中药。温郁金具 有行气化瘀，清心解郁，利胆退黄的功能，主治经 闭痛经，胸腹胀痛、刺痛，热病神昏，癫痫发狂， 黄疸尿赤。长期以来，温郁金都是以根茎作种种 植，长时间的无性繁殖，使种质退化，表现出块根 变小、数量减少、单株产量降低和品质下降，已成 为温郁金生产上亟待解决的问题之一＿ｌ Ｊ。以往的许 多研究表明，许多园艺作物和农作物的品种退化多 由病毒传染而引起 。然而，国内对引起各种中 药材种质退化病毒病原的相关研究很少 Ｊ。近年 来，我们在对中药材浙八味的生产质量调查中，对 导致温郁金种质退化的原因进行了研究，首次从温 郁金的块茎（郁金）和根茎（莪术）中发现有甘 薯羽状斑驳病毒（ＳＰＦＭＶ）、甘薯轻斑驳病毒 （ＳＰＦＭＭＶ）、甘薯潜隐病毒（ＳＰＬＶ）、甘薯轻斑点 病毒（ＳＰＭＳＶ）、Ｃ一６病毒（Ｃ一６）等５种甘薯病 毒感染，现将结果报道如下。 １材料 １．１样品采集 ２００５年２～３月对浙八味之一的温郁金药材进 行质量调查，从其主产地浙江瑞安市陶山镇沙洲村 和岱西村采集温郁金田间样品，沙洲村选择ＧＡＰ 试验田，岱西村选择普通栽培田。每块地分为块 茎、根茎和叶片３部分，计６份样本，放人塑料袋 （约２０ｃｍ Ｘ ３０ｃｍ）中带回实验室进行血清学鉴定。 １．２供试抗体 ＳＰＦＭＶ、ＳＰＦＭＭＶ、ＳＰＬＶ、ＳＰＭＳＶ、Ｃ一６的 抗体及碱性磷酸酯酶标记物由国际马铃薯中心植物 病毒学实验室制备，山东省农科院生物技术研究中 心提供。其余生化试剂均为Ｓｉｇｍａ公司产品。 用含０．１％牛血清蛋白（ＢＳＡ）和ＰＢＳ—Ｔｗｅｅｎ 缓冲液稀释，ＳＰＦＭＶ、ＳＰＭＭＶ、ＳＰＬＶ、ＳＰＣＦＶ、 Ｃ一６病毒抗体浓度：１：１ ０００，碱性磷酸酯酶标记 抗体结合物浓度：１：５００。 ２方法 ２．１样品处理 分别取块茎、根茎和叶片组织放人研钵中，加 入定量ＴＢＳ—ＤＩＥＣＡ（ｐＨ值７．５、０．０２ｍｏｌ・Ｌ～、 ０．０１ｍｏｌ・Ｌ ）仔细研磨，４￣Ｃ下澄清约１ｈ，取上清 液点到硝酸纤维素膜上，上样量为２０１．ｚＬ，然后将 膜转到一张干燥的滤纸上，室温干燥３０ｍｉｎ，保存， 待测。 ２．２检测程序 ２．２．１封闭在直径１５ｃｍ的培养皿中倒人３０ｍＬ封 闭溶液（２％脱脂奶粉，０．０２ｍｏｌ・Ｌ～ｔｒｉｓ—ＨＣ１， ０．０５ｍｏｌ・Ｌ～ＮａＣ１，ｐＨ ７．５），将膜缓慢浸入其中， 避免形成气泡。缓慢摇动，室温孵育１ｈ。 ［基金项目］ 浙江省自然科学基金项目——“浙八味”中药重金属含量生物控制技术研究（３００４１８） ［通讯作者］ 钱华，Ｔｅｌ：（０５７１）８７７９８２２９，Ｅ—ｍａｉｌ：ｑｉａｎｈｕａｌ８＠１２６．ｔｏｍ。 ８／￥１ＮＯ—ＴＣ＇
甘薯病毒病检测技术研究
试验研究 嘲北极保 ２ｏ１３￣３期总第１３７期
甘薯病毒病检测技术研究
陈玉霞 谷 峰 张朝臣 周天虹 邵湘愉
（Ｉ湖北省农科院农产品加工与核农技术研究所武汉４３００６４； ２湖北省农科院农业质量标准与检测技术研究所武汉４３００６４）
中图分类号：￥４３５ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００５—６１１４（２０１３）０３—０３１—００４
摘 要：湖北省甘薯病毒病主要有皱缩花叶型、卷叶型、叶片斑点型（含黄斑型和紫环斑型）等
三种症状类型。对三种类型的病株样本进行了电镜观察，结果表明，卷叶型、黄斑型和紫环斑型的 病株叶片中均有长线形病毒粒子，长度为１ ０５０ｍｌａ～１ ６５０ｍ￣，形态和大小无明显差异，皱缩花叶型 病株叶片中有时也可观察到长线形病毒。用三种症状类型病株与巴西牵牛靠接，巴西牵牛和甘薯 植株成活率达９０％以上，巴西牵牛染病率可达８０％以上。嫁接后的巴西牵牛叶片表现皱缩而且褪
绿症状者，电镜检测均有病毒，因此，巴西牵牛可以用作甘薯病毒病诊断的指示植物。 关键词：甘薯；病毒病；电镜；巴西牵牛
甘薯是利用块根和茎蔓繁殖的作物，因而易
受病毒病的感染。目前已报道的甘薯病毒有１Ｏ
余种，主要有甘薯羽状斑驳病毒、甘薯潜隐病毒、
甘薯黄矮病毒等ｎ 。甘薯感染病毒后，一般会在
薯叶和薯块上产生明显病症。病毒病是甘薯的
重要病害，是导致甘薯产量降低和种性退化的主
要原因之一，它广泛存在于世界各甘薯产区。我
国山东、江苏、北京等地的调查显示，由病毒病造
成的甘薯产量损失一般达２０％～３０％，严重的可
达５０％以上。作者曾在湖北省农科院甘薯资源
圃调查１０５个品种（品系），在湖北甘薯主产区咸 宁、郧阳、襄阳等地调查３０多个品种（品系），结
果表明，我省甘薯病毒病发病率高达６ｌ％，有的
品种病株率甚至高达１００％。甘薯病毒病已成为
湖北省甘薯生产的限制因子之一。因此，对湖北
省甘薯病毒病的检测技术进行研究十分必要。