溶菌酶的研究及应用简介
溶菌酶在治疗细菌、真菌等感染性疾病的应用

溶菌酶在治疗细菌、真菌等感染性疾病的应
用
溶菌酶具有广泛的抑菌谱,对革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌等致病微生物均有不同程度的抑制作用,已应用于口腔、五官、上呼吸道、皮肤、泌尿生殖系统感染性疾病的治疗。
据文献报道,溶菌酶可有效地治疗龋齿、口腔溃疡、牙周炎、复发性口疮、白念珠菌感染口炎等疾病。
陈楷正和韩剑星等分别研究了生物溶菌酶辅助治疗婴幼儿和小儿鹅口疮的疗效,两项研究结果显示,制霉菌素、特比萘芬分别与生物溶菌酶合用比单独使用治疗效果好,且起效快,病程缩短。
张昱观察了含服溶菌酶含片对小儿急性扁桃体炎治疗的临床效果,研究结果显示常规青霉素治疗加含服溶菌酶含片比常规青霉素治疗疗效显著提高,溶菌酶的辅助治疗可以降低因长期服用青霉素而产生的耐药性。
张琇等报道,溶菌酶对革兰阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形链球菌等)、革兰阴性菌(大肠埃希菌、铜绿假单胞菌)及真菌(白念珠菌)均有抑制作用,其广谱的抗菌作用解决了现有抗菌药物抗菌谱窄的问题。
同传统抗菌药物比较,溶菌酶具有更广的抗菌谱和更高的敏感性,尤其是对多重耐药菌株和真菌具有优势。
此
外,溶菌酶还能降低头孢菌素对某些致病菌致炎活性物质的释放,减轻内毒素血症。
溶菌酶的作用

溶菌酶的作用溶菌酶是一种常见的酶类,具有溶解细菌细胞壁的作用。
它在保护机体免受细菌感染以及在食品加工和医疗领域中都具有重要的应用价值。
首先,溶菌酶具有抗菌作用。
细菌细胞壁是由肽聚糖和多肽交联而成的网络结构,具有保护细菌免受外界应激和环境的功能。
然而,溶菌酶可以使细菌细胞壁结构破坏,从而导致细菌死亡。
溶菌酶通过水解细菌细胞壁的淀粉样物质,使其结构松弛并最终溶解。
这种作用可以有效地杀灭许多病原菌,并在身体免疫系统中起到重要的作用。
其次,溶菌酶在食品加工中起着重要的作用。
许多食品中存在着细菌污染的风险,如奶制品、肉类等。
在食品加工过程中,添加适量的溶菌酶可以有效地降解细菌细胞壁,从而去除其中的有害细菌,并增加食品的安全性和质量。
例如,加入溶菌酶的乳制品可以有效地去除细菌污染,提高产品的卫生水平。
这些溶菌酶的应用还可以提高食品的保存期限,减少细菌感染导致的食品腐败。
此外,溶菌酶在医疗领域具有广泛的应用前景。
由于其强大的抗菌能力,溶菌酶可以用于治疗各种感染性疾病。
临床上,溶菌酶可以应用于治疗呼吸道感染、皮肤感染、泌尿系统感染等疾病。
溶菌酶可以破坏感染细菌的细胞壁,导致其死亡,并消除炎症反应。
此外,溶菌酶还可以加速伤口的愈合,促进组织再生,对于创伤性损伤的治疗具有积极的作用。
总结起来,溶菌酶作为一种重要的酶类,在抗菌、食品加工和医疗领域都具有重要的应用价值。
它可以通过水解细菌细胞壁的结构,解除菌体的保护层,从而破坏细菌的免疫机制并最终导致其死亡。
在食品加工中,溶菌酶可以去除食品中的细菌污染,并增加产品的安全性和保存期限。
在医疗领域,溶菌酶可以应用于治疗感染性疾病,并加速伤口的愈合。
因此,溶菌酶的应用前景非常广阔,将在未来得到更加广泛的开发和利用。
溶菌酶

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溶菌酶在水果、蔬菜保鲜上的应用
经过溶菌酶浸泡过的水 果,可以有效抑制水果表面 细菌的生长繁殖防止烂果, 延长了水果的保鲜期。溶菌 酶和甘氨酸按照一定比例涂 抹到水果上保鲜效果更加明 显。
在冷却肉保鲜中的应用 溶菌酶保鲜剂对冷却 肉保鲜具有良好的效果。 采用浸渍法或喷雾法,使 用浓度为1%~3%。使用方 法为分割的肉块经喷雾或 浸渍,在无菌条件下沥水 20~30分钟,进行真空或 托盘包装即可。
食品保鲜技术 ——溶菌酶
小组成员 认识溶菌酶
获取溶菌酶
溶菌酶的具体应用
小组成员
认识溶菌酶
含义
溶菌酶又称胞壁质酶, 由129个氨基酸组成的一 种无毒、无副作用,又具 有一定的溶菌作用碱性球 蛋白,可溶于水和酸性溶 液,而且耐热,耐干燥, 在室温下可长期存放,性 质稳定。
优点
溶菌酶作为防腐剂 安全性高。传统的防 腐剂具有一定的毒害 性和局限性。溶菌酶 作为天然活性物质满 足食品添加剂的要求。
获取溶菌酶
广泛存在于鸟 类、家禽的蛋 清和哺乳动物 的眼泪等分泌 物及组织细胞 中(如淋巴组 织、肠道等)
Hale Waihona Puke 从木瓜、大麦、 无花果、卷心 菜和萝卜等植 物中也可分离 出溶菌酶,也 可以通过微生 物发酵制得
以蛋清为原料, 在pH6.5条件 下用阳离子交 换树脂吸附后 用硫酸铵洗脱, 经透析后冷冻 干燥得产品。
溶菌酶的具体应用
在食品软包装中的应用
在乳制品中的应用
溶菌酶在水果、蔬菜保鲜 上的应用 在冷却肉保鲜中的应用
在食品软包装中的应用
将溶菌酶固定化在食品包 装材料上,生产出有抗菌功效 的食品包装材料,以达到抗菌 保鲜功能。
在乳制品中的应用
高考溶菌酶常考知识点

高考溶菌酶常考知识点溶菌酶是一种可以破坏细菌细胞壁的酶类物质。
在高考生物考试中,溶菌酶是一个常见的知识点。
本文将介绍溶菌酶的基本概念、作用机理、应用领域以及相关实验方法。
一、溶菌酶的基本概念溶菌酶也被称为葡萄球菌溶菌酶,是一种能够裂解葡萄球菌细胞壁的酶类物质。
它主要存在于人类和动物体内的各种组织和分泌物中,是一种天然的防御机制。
溶菌酶是由细菌、真菌、植物和动物等生物体产生的一类酶,具有广泛的生物学活性。
二、溶菌酶的作用机理溶菌酶的作用机理主要是通过破坏细菌细胞壁而导致细菌死亡。
它能够降低细菌细胞壁的完整性,导致内部渗漏和细胞内容物外泄,最终导致细胞溶解。
在免疫防御中,溶菌酶可以识别病原菌细胞壁上的特定抗原,从而发挥抗菌作用。
三、溶菌酶的应用领域溶菌酶在医药领域具有广泛的应用价值。
首先,它可以作为一种抗菌剂用于治疗细菌感染性疾病。
其次,溶菌酶还可以作为一种重要的实验工具,用于细菌分子生物学研究中,如基因工程、DNA重组等领域。
此外,溶菌酶还广泛应用于食品工业、饲料工业、环境保护等领域。
四、溶菌酶相关的实验方法在研究溶菌酶时,有几种常用的实验方法可以用来检测其活性和测定其浓度。
首先是溶菌酶活性的检测,常用的方法有酶活性测定法和酒石酸盐凝胶电泳法。
其次是溶菌酶浓度的测定,常用的方法有比色法、生物学活性测定法和免疫学测定法。
五、总结通过对溶菌酶的基本概念、作用机理、应用领域和相关实验方法的介绍,可以看出溶菌酶在生物学领域中具有重要的研究和应用价值。
对于高考生物考试来说,了解溶菌酶的相关知识点,有助于理解细菌的抵抗机制以及抗菌药物的开发和应用。
同时,掌握溶菌酶相关实验方法,可以对细菌研究提供有力的实验手段。
本文对高考溶菌酶的常考知识点进行了概括性的介绍,希望对广大考生有所帮助。
在备考过程中,建议考生加强对溶菌酶相关知识的学习和理解,注重实验方法的掌握,提高解题能力和实验操作水平。
祝愿各位考生取得优异的成绩!。
溶菌酶

海洋低温溶菌酶
学生:石淑钰 指导老师:张庆芳 微生物发酵实验室
主要内容
溶菌酶的介绍
溶菌酶的应用
溶菌酶活力测定及其体外抑菌试验
溶菌酶介绍
溶菌酶(Lysozyme),又称胞壁质酶、球蛋白G、 N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。此后人们发现溶菌酶 广泛地存在于高等动物组织及分泌物、植物及各 种微生物中,其中在新鲜的鸡蛋清中含量最高。 溶菌酶可选择性地分解微生物细胞壁的同时不破 坏其它组织,且本身无毒无害,因而它是一种天 然的安全性能很好的杀菌剂、防腐剂,将可广泛 应用于食品防腐、医药制剂、日用化工等行业。 在我国,溶菌酶的应用范围和应用量还比较有限, 但可以预计溶菌酶将会是应用于我国食品工业中 一种重要的功能性食品添加剂。
• 溶菌酶作为天然防腐剂,在食品防腐保鲜方面有 可能代替传统防腐剂,同时也提高了食品的安全 性,随着人们食品安全性的要求不断提高和科学 技术的不断进步,一种崭新的食品保鲜技术—酶 法保鲜技术正在崛起,但是溶菌酶在应用过程中 可能存在一些问题,由于溶菌酶具有特异性,只 能抑制某些细菌,而降解真菌细胞壁的酶还没有 作为食品防腐剂。溶菌酶还存在消化过程中的过 敏反应和抗原性问题,不同的溶菌酶混合使用, 或者与其他防腐剂共同使用,则会提高扩展溶菌 酶的使用范围,提高溶菌酶防腐效果,针对溶菌 酶还存在的一些问题,溶菌酶在食品工业中的应 用有待于进一步研究和探讨。
2.溶菌酶在生物医药上的应用
• 2.1 溶菌酶在基因工程和酶工程上的应用 • 2.2具有抗菌消炎、增强免疫力的功效 • 2.3.具有改善肠道生态环境提高免疫力的功 效 • 2.4.人体血液或尿液中溶菌酶的浓度还可作 为多种疾病的诊断指标 • 2.5 溶菌酶可以预防龋齿、清除细菌 • 2.6 溶菌酶在降解壳聚糖上的应用
溶菌酶

1922年,英国细菌学家Fleming发现人的唾液、眼泪中存在有溶解细菌细胞壁的酶,因其具有溶菌用,故命名为溶菌酶。
溶菌酶广泛地分布于自然界中,在人的组织及分泌物中可以找到,动物组织中也有,以鸡蛋清中含量最多。
其他植物组织及微生物细胞中也存在[1]。
它是由动物特定细胞内的核糖体上合成的一种蛋白酶,分泌到细胞外杀死细菌的。
它存在于卵清、唾液等生物分泌液中,催化细菌细胞壁肽聚糖N-乙酰氨基葡糖与N-乙酰胞壁酸之间的1,4-β-糖苷键水解的酶。
它可以溶解掉细菌的细胞壁,杀死细菌。
由于溶菌酶能够选择性地分解微生物的细胞壁,并且自身没有毒害,因此作为一种天然、安全的杀菌剂和防腐剂,在食品工业、医药制剂、日用化工等行业被普遍重视。
随着开发和应用研究的进一步深入,溶菌酶的发展前景将会十分广阔。
下面主要陈述溶菌酶的一些基本情况及其在食品工业中的应用。
在食品工业中,溶菌酶是无毒的蛋白质,能选择性地使目标微生物细胞壁溶解而使其失去生理活性,而食品中的其他营养成分几乎不会造成任何损失。
因此,它可以安全地替代有害人体健康的化学防腐剂(如苯甲酸及其钠盐等),以达到延长食品货架期的目的,是一种很好的天然防腐剂。
现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐。
1 溶菌酶的分类溶菌酶按其所作用的微生物不同分两大类,即细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。
真菌细胞壁溶菌酶包括酵母菌细胞壁溶解酶和霉菌细胞壁溶解酶。
1.1 细菌溶菌酶细菌溶菌酶通常可分为三大类:N-乙酰氨基己糖苷酶,它催化水解肽聚糖中糖骨架中的β(1→4)糖苷键;N-乙酰胞壁酰-丙氨酸酰胺酶,它催化裂解肽聚糖中糖基与肽基;内肽酶,它催化裂解肽聚糖肽桥中的肽键。
1.2 真菌溶菌酶真菌溶菌酶主要包括几丁质酶和β-葡聚糖酶。
1.2.1 几丁质酶虽然一些外几丁质酶(exochitinases;EC3.2.1.30)也表现出抗真菌的特性,但抗真菌的几丁质酶主要是内几丁质酶(endochitinases;EC3.2.1.14)。
溶菌酶及其在畜牧生产上的应用
溶菌酶及其在畜牧生产上的应用
溶菌酶是一类能够溶解菌壁的酶类物质,它具有广泛的应用价值。
在畜牧生产中,溶菌酶可以用作饲料添加剂,以提高动物的饲料利用率和增强其消化功能。
溶菌酶的作用机制是通过分解细菌细胞壁中的多糖和蛋白质,从而使细菌壁受到破坏,达到杀菌的效果。
同时,溶菌酶还可以促进动物肠道中有益菌的生长,提高肠道健康状况,增强机体免疫力。
在畜牧生产中,溶菌酶被广泛应用于饲料添加剂中,以提高饲料利用效率和增强动物的消化功能。
这是因为溶菌酶可以加速饲料中的大分子多糖的降解,从而提高饲料的可消化性。
同时,溶菌酶还可以减少因为饲料不良造成的消化不良和腹泻等问题,从而提高动物的生产性能。
另外,在动物饲养过程中,肠道微生态平衡的破坏往往导致消化不良和免疫力下降等问题。
溶菌酶可以通过抑制有害细菌的生长,促进有益菌的繁殖,从而有助于维持肠道微生态平衡,提高动物的健康水平。
总之,溶菌酶在畜牧生产中发挥着重要的作用,可以提高动物的饲料利用率,增强消化功能,维护肠道健康和提高免疫力。
溶菌酶的功能主治
溶菌酶的功能主治1. 概述溶菌酶是一种可以溶解细菌细胞壁的酶,它在生物体内起着重要的保护作用。
本文将介绍溶菌酶的功能主治,包括溶菌酶的作用机制、主要途径、应用领域以及注意事项。
2. 溶菌酶的作用机制溶菌酶主要通过以下两种机制发挥作用: - 溶解细菌细胞壁:溶菌酶通过酶解作用,将细菌细胞壁中的多肽聚糖连接断裂,导致菌体的溶解和破坏。
- 促进溶菌酶释放:溶菌酶可以刺激宿主细胞产生和释放更多的溶菌酶,从而增强免疫系统对细菌的防御能力。
3. 溶菌酶的主要途径溶菌酶的主要途径包括以下几种: - 自然分泌:某些细菌可通过主动分泌将溶菌酶释放到周围环境中,以攻击潜在竞争者。
- 细菌感染:当细菌感染宿主时,机体会产生溶菌酶来对抗细菌入侵。
- 化学合成:人工合成的溶菌酶也可以应用于治疗感染性疾病。
4. 溶菌酶的主要功能溶菌酶具有以下主要功能: - 抗菌作用:溶菌酶可溶解细菌细胞壁,破坏细菌结构,从而抑制细菌生长和繁殖。
- 免疫调节:溶菌酶可以增强机体的免疫力,促进免疫细胞活性,提高抗菌能力。
- 抗炎作用:溶菌酶具有一定的抗炎效果,可减轻炎症反应,促进伤口愈合。
5. 溶菌酶的应用领域溶菌酶在医学领域有广泛的应用,包括以下几个方面: - 感染性疾病治疗:溶菌酶可以用于治疗细菌引起的感染性疾病,如肺炎、乳腺炎等。
- 食品工业:溶菌酶可用于食品工业中的细菌检测和控制,确保食品质量和安全。
- 生物工程:溶菌酶可以应用于生物工程领域,用于基因组研究、DNA提取等。
- 医药研发:溶菌酶在药物研发过程中可以用于筛选和测试抗菌药物。
6. 注意事项在使用溶菌酶时需要注意以下事项:- 剂量控制:使用溶菌酶时需要控制剂量,避免过量使用产生不良反应。
- 药物相互作用:溶菌酶可能与其他药物发生相互作用,导致药物疗效降低或产生不良反应,应避免与其他药物同时使用。
- 过敏反应:部分患者可能对溶菌酶过敏,使用时需密切观察患者的体征和症状,如有不适应立即停用并咨询医生。
溶菌酶的研究进展
溶菌酶的研究进展溶菌酶概述溶菌酶,也称为裂解素,是一种在细菌、真菌、动物和植物中都存在的水解酶。
它们可以降解细胞墙材料,使细胞变为裸露状态。
溶菌酶广泛应用于医学、食品和制药等领域。
溶菌酶的来源溶菌酶存在于多种微生物和真菌中,如链球菌、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、支原体和放线菌等。
通过培养和发酵技术,可以大规模制备纯净的溶菌酶。
此外,许多动植物也拥有溶菌酶,如人类唾液中的溶菌酶可以消化细菌、口腔扁桃体中的溶菌酶可以抵御病毒和细菌。
植物中的溶菌酶则是一种抗病毒和抗真菌的重要保护因子。
溶菌酶的作用溶菌酶的主要作用是降解细胞壁,使细胞膜完整性受到破坏,导致细胞死亡。
此外,溶菌酶也能辅助免疫反应,促进抗菌作用,调节免疫细胞的活动,增强自身的抵抗力。
在食品和制药领域,溶菌酶可以作为肉制品厌氧菌的灭菌方法,促进乳制品中的凝乳和定型,同时也可用于生产肝素和生物制剂等。
溶菌酶的研究进展溶菌酶研究的重点在于其抗菌作用和免疫调节作用。
近年来,溶菌酶的研究进展主要集中在以下两个方面。
溶菌酶与细菌感染溶菌酶可以降解细菌细胞壁,对于抗菌作用具有重要的意义。
近年来,科学家发现溶菌酶与多种细菌感染相关联,如肺炎球菌感染、链球菌感染等。
溶菌酶的研究有助于了解病原菌与免疫细胞之间的互动机制,为治疗细菌感染提供新的思路。
溶菌酶的免疫调节作用溶菌酶不仅有着明显的抗菌作用,还可以调节免疫细胞的活动,增强自身的抵抗力。
最新研究发现,溶菌酶还具有降低过敏反应和抗肿瘤等作用,将为临床治疗提供新的方向。
,溶菌酶具有广泛的应用价值和研究前景。
通过深入研究溶菌酶的结构、功能和作用机制,可为疾病的治疗和疫苗的研发提供新的思路,并推动溶菌酶在医药和食品等领域的应用。
鸡蛋溶菌酶研究报告
鸡蛋溶菌酶研究报告摘要本报告旨在研究鸡蛋溶菌酶的特性、功能以及其在生物医学领域的潜在应用。
通过对鸡蛋溶菌酶的实验分析和相关文献的综述,我们发现鸡蛋溶菌酶具有广泛的抗菌活性以及调节免疫系统功能的特点,同时在癌症治疗和药物传递等方面也显示出巨大的应用潜力。
1. 引言溶菌酶是一类能够溶解细菌细胞壁的酶,其主要作用是破坏细菌细胞的完整性,从而导致细菌的死亡。
鸡蛋溶菌酶是一种溶菌酶家族成员,其在鸡蛋的卵清中广泛存在。
近年来,研究人员对鸡蛋溶菌酶进行了广泛的研究,并发现它具有多种生物学活性和应用潜力。
2. 鸡蛋溶菌酶的特性鸡蛋溶菌酶具有以下主要特性:•分子量较小:鸡蛋溶菌酶的分子量通常在10-30 kDa之间,体积较小,便于纯化和应用。
•蛋白稳定性:鸡蛋溶菌酶在一定的条件下能够保持较高的稳定性,不易失活。
•pH和温度适应性:鸡蛋溶菌酶在酸性和碱性环境下均能保持一定的酶活性,并且能在较高温度下保持稳定。
•抗菌活性:鸡蛋溶菌酶能够与细菌的细胞壁结合,并破坏其完整性,从而导致细菌的死亡。
3. 鸡蛋溶菌酶的功能鸡蛋溶菌酶具有多种功能,主要包括:•抗菌作用:鸡蛋溶菌酶能够破坏细菌细胞壁,从而起到抗菌作用。
鸡蛋溶菌酶对多种致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等都具有较强的抑制作用。
•调节免疫系统:鸡蛋溶菌酶能够增强机体的免疫功能,调节免疫系统的活性。
研究表明,鸡蛋溶菌酶可以促进巨噬细胞和T细胞的活化,并增强它们对病原体的攻击能力。
•抑制肿瘤生长:鸡蛋溶菌酶具有一定的抗肿瘤活性。
实验证明,鸡蛋溶菌酶通过诱导肿瘤细胞凋亡、阻断和抑制肿瘤细胞的增生和侵袭等多种机制来抑制肿瘤的生长。
•药物传递载体:鸡蛋溶菌酶可以作为药物传递的载体,将药物通过酶活性和胶束形态的特性载运到靶细胞,提高药物的效果和选择性。
4. 鸡蛋溶菌酶在生物医学应用的潜力由于其特殊的抗菌活性和多种功能,鸡蛋溶菌酶在生物医学领域具有广泛的应用潜力,主要包括以下方面:•抗菌剂:鸡蛋溶菌酶可以作为一种新型的抗菌剂应用于感染性疾病的治疗。
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溶菌酶的研究及应用简介摘要溶菌酶(lysozyme)是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶,又称胞壁质酶(muramidase)。
人们对溶菌酶的研究始于20 世纪初,英国细菌学家Fleming在发现青霉素的前6年(1922年)发现人的唾液、眼泪中存在能溶解细菌细胞壁的酶,因其具有溶菌作用,故命名为溶菌酶,其中鸡蛋溶菌酶的研究和应用已相当深入和广泛[1]。
通过对它的结构、性质、来源的研究;溶菌酶已广泛的应用于医药、生物工程和食品工业等多个方面。
关键词溶菌酶;结构;应用;研究进展溶菌酶(Lysozymc EC3.2.1.17)又名胞壁质酶(muramidase)、乙酞胞壁酸聚糖水解酶(N-acctylmuramide glyca-nohydrolase),广泛地分布于自然界[2]。
在病毒(如噬菌体T4)、细菌(如枯草杆菌)、植物(如番木瓜)、动物(如鼠、狗)及人体内都含有。
人体内多数组织器官含有一定浓度的溶菌酶。
但以脾、肾含量较高。
在鼻及支气管分泌液、泪液、脑脊液、唾液、乳汁及血液中均含有一定量的溶菌酶。
此酶自被发现以来,经科学家们不断地研究,使得它在酶学及临床医学中均占有一定的重要位置,也将其应用于医疗、食品、畜牧及生物工程中。
1 溶菌酶的发现1907年Nicollc[2]猜测芽胞杆菌(Bacillus)及枯草杆菌中含有溶解细菌的酶。
1909年schtchenko[3]第一个报道了鸡蛋清内含有溶解细菌的酶。
1922年Alexander Fleming[2]发现鼻粘液里有一种能溶解微球菌(micrococcus lysodeikticus)及其他细菌的酶,他把这种酶命名为溶菌酶(lysozyme)。
经过仔细的观察和研究,他发现此酶广泛地存在于生物组织及机体的某些分泌物中。
之后Robert及Wolff 也从鸡蛋清里提取出溶菌酶。
1937~1946年间Abraham[3],Robinson, Alderson及Fevold等人通过实验从而分别获得了溶菌酶的结晶。
2 溶菌酶的理化性质、空间结构2.1溶菌酶的理化性质溶菌酶由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白,在酸性环境下,溶菌酶对热的稳定性很强。
当pH值为1.2~11.3范围内剧烈变化时,但其结构几乎维持不变。
当pH值为4~7,96℃热处理15 min仍能保持87%的酶活性;当pH值为3 时能耐100℃加热处理45min;但碱很容易破坏酶活性,当处于碱性pH 值范围时,溶菌酶的热稳定性就很差[4]。
在干燥条件下,溶菌酶可以长期在室温存放,其纯品为白色或微黄色。
黄色的结晶体或无定形粉末,无臭,味甜。
易溶于水,易遭碱破坏,不溶于丙酮和乙醚。
其分子结构如下:2.2 空间结构溶菌酶是第一个结构弄清楚的酶,在很长一段时间中,其中有许多蛋白晶体研究及蛋白质结构与功能关系研究。
这些进展都是利用溶菌酶获得的溶菌酶一直被当作一种研究蛋白质空间构象、酶动力学及分子进化的理想模型[5]。
溶菌酶的分子最较小,不同来源的溶菌酶组成一级结构的氨基酸数量是相同的,但多肽链上某些个别氨基酸有差异,因此来源于不同种属如噬菌体、番木瓜、鸟类、鸡、鼠、狗、人类的溶菌酶或同一种属不同脏器如兔的肝、脾、鼠的脾、肾的溶菌酶分子量各不相同[1][3],鸡蛋清溶菌酶的分子量为14000[8]。
目前,鸡蛋清溶菌酶HEWL 的酶学性质、分子结构、催化机理乃至酶蛋白基因结构已研究清楚,并成为研究蛋白质结构与功能的一个重要模式蛋白。
1963年J.Jollcs和Canfields 测定了鸡蛋清溶菌酶HEWL的一级结构。
Phillips 等人1965年用x 射线晶体结构分析法阐明了溶菌酶的三维结构,HEWL由129个氨基酸残基组成的单一多肤链,含有4对二硫,三维结构为一较紧密的椭球,大小为4.5 nm×3.0 nm×3.0 nm,其构象复杂,α螺旋仅占25 %,在分子的一些区域有伸展着的β片层结构,研究表明溶菌酶的内部几乎都为非极性的, 疏水的相互作用在溶菌酶的折叠构象中起到重要作用, 其分子表面有一个容纳多糖底物6个单糖的裂隙, 这是溶菌酶的活性部位。
溶菌酶的底物为细胞壁的长链肽聚糖,当酶发挥催化效力时,肽聚糖的六个氨基糖单位正好嵌入酶的裂隙,裂隙两侧为Glu35、Asp52 及Trp62 残基是酶活性必需基团;同时Asp101、A rg114、Trp108等残基对“底物—酶复合物”的形成也起着重要作用,该酶活性受组氨酸和N-乙酰葡糖胺的抑制。
后期的研究表明,不同来源的溶菌酶虽在空间结构相似但在活性中心与功能上是有所不同。
植物溶菌酶活性中心的研究比较少,木瓜溶菌酶中Trp残基不参与底物的结合,活性中心除包括—COOH (Asp / Glu)外,还必需一个Cys。
而且,该酶受组胺抑制基本上不受N-乙酰葡糖胺抑制,这些与HEWL 有所不同。
赖晓芳[6]等采用化学修饰等方法,对萝卜溶菌酶活性中心进行了初步研究,他们采用脱氨再生几丁质凝胶亲和层析从萝卜叶中获得了PAGE均一的溶菌酶,并通过微量蒸发扩散法获得其结晶。
用pH 动力学研究方法和化学修饰法对酶的活性中心进行了初步研究。
实验结果表明: —COOH ( Glu/A sp)基团、Trp 及His残基可能为酶活性所必需。
对Tyr、Cys、Ser/ Thr残基修饰后,酶活性基本上不受影响。
同时,酶活性受到组胺和N-乙酰葡糖胺抑制。
并且对萝卜溶菌酶与鸡蛋清溶菌酶和木瓜溶菌酶的活性中心的相互差异进行了讨论。
现有情况表明萝卜溶菌酶活性中心与HEWL 可能不同,HEWL 的活性中心只包括—COOH (Asp/Glu)和Trp残基;亦与木瓜溶菌酶的不同,其活性中心除含—COOH (Glu/Asp)基团外,还含有—SH基团。
用IAA 和DTNB 对萝卜溶菌酶进行化学修饰,酶活性基本不变,用EIIman试剂法也测不出酶分子含有游离—SH基团,只测得酶分子中含有2.11mol—SH蛋白质的二硫键存在,所以萝卜溶菌酶活性中心可能不含游离巯基。
另外,HEWL,受组胺和N-乙酰葡糖胺显著抑制;而萝卜溶菌酶也受组胺显著抑制,但基本上不受N-乙酰葡糖胺抑制;木瓜溶菌酶不仅受组胺显著抑制,而且受N-乙酰葡糖胺抑制也较强。
这些差异可能反应了萝卜溶菌酶与鸡蛋清溶菌酶和木瓜溶菌酶在功能上的分化。
3 溶菌酶的种类及作用机理溶菌酶根据其作用的微生物不同可以分为两大类:细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。
胞壁溶菌酶又细分为两种:一种是作用于β-1, 4糖苷键的细胞壁溶解酶。
另一种是作用于肽链“尾”端和酰胺部分的细胞壁溶解酶。
真菌细胞壁溶菌酶包括酵母菌细胞壁溶解酶和霉菌细胞壁溶解酶[7]。
溶菌酶来源广泛,可以从动物、植物及微生物生物体中提取,其作用机制也有所不同。
3.1 动物源溶菌酶动物源溶菌酶包括鸡蛋清溶菌酶及人和哺乳动物溶菌酶。
鸡蛋清溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖, 作用位点是N-乙酰胞壁酸(NAM) 的1位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG) 的4位碳原子间的β- 1, 4糖苷键。
细胞壁肽聚糖主要由NAM、NAG 和肽“尾”(一般是4个氨基酸)组成, NAM与NAG 通过β-1, 4糖苷键相连,肽尾则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上,肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸)连接,NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构, 作为细胞壁的骨架。
人溶菌酶分子量为14600 单位, 对人的溶菌酶研究发现它是由130个氨基酸残基组成,也有4个S-S键,其一级结构氨基酸顺序及组成与鸡蛋清溶菌酶相比有极大的差异, 但三级结构有相似性, 其溶菌活性比鸡蛋清溶菌酶高2倍。
对于哺乳动物溶菌酶, 目前仅从牛、马、羊等动物的乳汁中分离出溶菌酶, 其化学性质与人溶菌酶相似, 但结构尚不清楚, 其溶菌活性远低于人溶菌酶。
3.2 植物源溶菌酶目前发现含溶菌酶的植物有近170种,在木瓜、无花果,大麦等植物中均已分离出溶菌酶。
植物源溶菌酶分子量较大,约为24000~29000单位,其对溶壁小球菌的溶菌活性不超过鸡蛋清溶菌酶的1/3,但其对胶体状甲壳质的分解活性则是鸡蛋清溶菌酶的10 倍。
3.3 微生物源溶菌酶微生物产生的溶菌酶可分为7 类:(1)蛋白酶与内肽酶;(2)酰胺酶(主要作用于细菌细胞壁肽聚糖中N-乙酰胞壁酸(NAM)与肽“尾”之间的N-乙酰胞壁酸-L- 丙氨酸键) ;(3)N-乙酰已糖胺酶(类似于鸡蛋清溶菌酶,主要破坏细菌细胞壁肽聚糖中的β-1, 4 糖苷键) ;(4)β-1, 3、β-1, 6-葡聚糖酶、甘露糖酶(主要用于分解酵母细胞的细胞壁) ;(5)壳聚糖酶(分解霉菌细胞壁的一种溶菌酶);(6)磷酸甘露糖酶;(7)脱乙酰壳多糖酶[9]。
3.4 噬菌体产生的溶菌酶该酶是一种特异性的酶,由噬菌体感染、诱导产生,但未被感染的宿主细胞上不存在该酶。
4溶菌酶的应用4.1在生物工程研究中的应用随着生物科学的发展,溶菌酶已成为基因工程及酶工程中必不可少的工具酶,用以制造和提取菌体内的活性物质如核酸、酶及活性多肽等,利用其专一性水解细胞壁的特点,有助于人们对细胞壁细微结构的认识,为我们深入研究细胞壁的构造打下了坚实的基础,同时作为是一种重要的破壁酶,在原生质体的制备方面提供了新的方法,因此溶菌酶被广泛应用于生物技术、生物工程中。
4.2在食品工业中的应用溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质,又具有溶菌作用,因此可用作食品防腐剂。
目前已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐,溶菌酶属于冷杀菌,在杀菌防腐过程中不需加热,因而避免了高温杀菌对食品风味的破坏作用,尤其对热敏感的物质更具有重要意义[8] 。
还可以添加到乳粉中,使牛乳人乳化,以抑制肠道中腐败微生物的生存,同时直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖。
此外,还能利用溶菌酶生产酵母浸膏和核酸类调味品。
4.2.1溶菌酶在乳制品中的应用溶菌酶作为一种非特异性免疫因子,对肠道中腐败性微生物有特殊杀灭作用。
溶菌酶是双歧杆菌增长因子,有防止肠炎和变态反应的作用,对婴幼儿肠道菌群有平衡作用;溶菌酶还能够强化血清灭菌蛋白、γ-球蛋白等体内防御因子,加强机体对感染的抵抗力;在干酪生产中添加溶菌酶可代替硝酸盐等抑制丁酸菌的污染,防止干酪产气!并对干酪的感官质量有明显改善作用。
溶菌酶还可以用于巴氏杀菌奶防腐剂,现在商品中应用方法,一般是在装包前加入使浓度达到300~600ppm;另外,牛乳中溶菌酶含量远远低于人乳,现在实验表明,将溶菌酶添加到牛乳及其制品中,可使牛乳人乳化,满足婴幼儿对乳制品要求。
4.2.2溶菌酶在低度酒类和饮料中的应用试验表明,在低度酒中每公斤添加20%的溶菌酶替代水杨酸作防腐剂,对酒的风味无不良影响,且受酒类澄清剂的影响很小!并可以去除水杨酸的毒性,是低度酒类较好的防腐剂,日本成功把溶菌酶用于清酒的防腐剂;此外,溶菌酶还可用于pH6.0~7.5的饮料和果汁的防腐[12]。