黄酮的提取 三种方法
辣木叶中黄酮的提取具体操作流程
1.1材料与试剂
辣木叶，老师提供；芦丁标准品、分析纯无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝，氢氧化钠等。
1.2仪器与设备
KQ-300DE型数控超声波清洗器；电子分析天平；AnkeTDL-5-A离心机；紫外/可见分光光度计。
1.3辣木叶总黄酮的提取方法
取干燥的辣木叶，粉碎过40目筛。
准确称取辣木叶粉1.0g，置于100mL烧杯中，加入体积分数为80%的乙醇溶液超声提取，提取液离心分离，测定总黄酮的含量。
具体操作流程：辣木叶→干燥→磨粉→过40目筛→超声提取→离心→上清液→测定总黄酮含量。
1.4总黄酮的测定方法
1.4.1芦丁标准曲线的绘制
准确称取干燥至恒重的芦丁标准品20mg，用体积分数为80%的乙醇溶液溶解，定容至25mL，配制得到质量浓度为0.80mg/mL的芦丁标准溶液。
准确吸取新配制的芦丁标准溶液0、125、250、500、625、750、1500μL于10mL的比色管中，加入体积分数80%的乙醇溶液至9mL，加入5%的Na-NO2溶液300μL，摇匀，放置6min。
加入10%的Al（NO3）3溶液300μL，摇匀，放置6min，再加入1mol/L的NaOH溶液500μL，摇匀，静置10～15min。
以80%的乙醇溶液为试剂空白作参比液，于510nm波长处测定吸光值。
以芦丁浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度值A为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程y=ax-b，R2=x，得线性关系。
1.4.2辣木叶总黄酮含量的测定
准确吸取适量辣木叶黄酮提取液，按照芦丁标准曲线制作方法测定吸光度。
由吸光度根据回归方程计算出原提取液中总黄酮的质量浓度（C），测量得到辣木提取液体积（V），然后计算出辣木叶中总黄酮的提取率。
辣木叶中总黄酮提取率（以芦丁计）%=C×VM×100其中：C为样液经吸光度算出的原提取液中总黄酮的质量浓度（g/mL）；V为提取液的总体积（mL）；M为称取的辣木叶粉质量（mg）。
方法一：乙醇超声提取
1.5单因素试验
1.5.1料液比对辣木叶总黄酮提取率的影响
准确称取1.0g辣木叶粉5份，分别置于100mL的烧杯中，加入体积分数80%的乙醇溶液混匀，选择提取温度20℃、提取时间20min、超声波处理功率150W，分别考察料液比为1∶20、1∶25、1∶30、1∶35和1∶40（g/mL）对辣木叶总黄酮提取率的影响。
提取液于4200r/min下离心20min，取上清液测定吸光度值，计算总黄酮提取率。
1.5.2提取时间对辣木叶总黄酮提取率的影响
准确称取1.0g辣木叶粉5份，分别置于100mL的烧杯中，加入体积分数80%的乙醇配成料液比1∶30（g/mL）的溶液，选择超声功率150W、提取温度20℃，分别考察超声处理时间为10、20、30、40和50min对辣木叶总黄酮提取率的影响。
提取液于4200r/min下离心20min，取上清液测定吸光度值，计算总黄酮提取率。
1.5.3超声功率对辣木叶总黄酮提取率的影响
准确称取1.0g辣木叶粉5份，分别置于100mL的烧杯中，加入体积分数80%的乙醇配成料液比1∶30（g/mL）的溶液，选择提取时间40min、提取温度20℃，分别考察超声功率为120、150、180、210和240W时对辣木叶总黄酮提取率的影响。
提取液于4200r/min下离心20min，取上清液测定吸光度值，计算总黄酮提取率。
1.5.4提取温度对辣木叶总黄酮提取率的影响
准确称取1.0g辣木粉5份，分别置于100mL的烧杯中，加入体积分数80%的乙醇配成料液比1∶30（g/mL）的溶液，选择提取时间40min、提取功率210W，分别考察处理温度为20、30、40、50和60℃时对辣木叶总黄酮提取率的影响。
提取液于4200r/min下离心20min，取上清液测定吸光度值，计算总黄酮提取率。
1.6辣木叶总黄酮提取响应面优化试验方案设计
试验采用Design-Expert8.0.6.1软件中的Box-Behnkendesign设计原理，以提取温度、时间、料液比和功率4个因素为自变量，以总黄酮提取率为响应值设计试验，并在最优提取条件下对优化结果进行验证试验。
Box-Behnken试验因素及水平编码值见表1，试验设计编排组合见表2，共29个实验点，其中24个析因点，5个中心点。
方法二：水浸提
1 材料与方法
1.1材料辣木叶，老师提供；DZKW-4型电热恒温水浴锅；万用电炉；722型
可见分光光度计；其他为实验室常用仪器设备
1.2方法
1.2.1 辣木叶中总黄酮提取工艺。
取约170g辣木叶粉，按料液比1：5g/L
加水，加热至沸腾并维持75min，使辣木叶中的总黄酮尽可能浸出。
煎煮结束后，先用6层纱布粗滤，滤去较大的残渣。
所得滤液再用高速离心机5000r/min离心10min，分离除去细微残渣，最后得澄清提取液。
测定所得总黄酮含量。
1.2.2 总黄酮含量测定
与方法一中1.4相同
1.3正交实验
1.3.1 为确定总黄酮的最佳提取工艺，以料液比、煎煮温度和煎煮时间为主
表1
方法三：丙酮水溶液提取总黄酮
1 材料与方法
1.1材料辣木叶，老师提供；可见分光光度计；旋转蒸发器；紫外分析仪；
循环水多用真空泵
1.2方法此方法除了提取剂换成了丙酮水溶液外，其余步骤均与乙醇提取
一样。
1.3正交实验。
为确定总黄酮的最佳提取工艺，以料液比、温度、提取时间
1.4总黄酮含量测定
测定方法与方法一1.4相同1
1.5此法与乙醇提取工艺比较
此法虽然提取效率略低，但提取物纯度更高，具有提取液颜色浅，杂质少，易于纯化，过滤性能好，浓缩能消耗大，溶剂易回收等优点。
1.7数据处理与分析
使用Excel2007、OriginPro8.0和DesignEx-pert8.0软件对试验数据进行统计分析和建立回归方程模型。
所有试验均重复3次取平均值
备注：由于采用通江产的辣木叶，其具体黄酮含量未知，先采用以上方法进行实验，实验进程中根据具体情况调整实验操作。
第三节 黄酮类化合物的提取与分离
2019-5-18
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槐米中芦丁的提取
槐米（槐树Sophora japonica L. 花蕾）加约6倍 量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至 pH8~9，在此pH条件下微沸20~30分钟，趁热 抽滤，残渣同上再加4倍水煎1次，趁热抽滤。 合并滤液，在60~70℃下，用浓盐酸调至pH为5， 搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性， 60℃ 干 燥 得 芦 丁 粗 品 ， 于 水 中 重 结 晶 ， 70~80℃干燥得芦丁纯品。
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分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小 大顺序洗脱。
分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分 子大小顺序洗脱。
总的洗脱顺序：糖多的苷糖少的苷 游离苷元（极性小大）
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葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：
碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH）， 含盐水溶液(0.5mol/L NaCl等)。
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有时溶剂萃取过程也可以用逆流分 配法连续进行。常用的溶剂系统有： 水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。
溶剂萃取过程在除去杂质的同时， 往往还可以收到分离苷和苷元或极 性苷元与非极性苷元的效果。
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（二）碱提取酸沉淀法
黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水， 但却难溶于酸性水，易溶于碱性水， 故可用碱性水提取，再于碱水提取液 中加入酸，黄酮苷类即可沉淀析出。 此法简便易行，如芦丁、橙皮苷、黄 芩苷的提取都应用了这个方法。
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在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意 所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性 下，尤其加热时会破坏黄酮母核。在加 酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成 （金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物 又重新溶解，降低产品收率。
黄酮类化合物的提取纯化方法
黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景任红丽2009090141摘要：对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。
在药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用，为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。
关键词：黄酮类化合物提取工艺药用价值黄酮类物质是一类低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质[14]，又称生物黄酮或植物黄酮，属植物次级代谢产物，广泛存在于各种植物的各个部位，尤其是花、叶，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。
迄今，已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现，人工合成的黄酮类化合物也不断问世。
最初这类物质仅用于染料方面，自20世纪20年代，槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后，才开始引起人们的关注，研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性，改善记忆，抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。
1.提取纯化方法1．1 传统提取方法1．1．1 热水提取法水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。
但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。
此外，水提取物容易发霉发酵[22]。
1．1．2 碱性水、碱性稀醇浸提法中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基[7]，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。
黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。
举例说明黄酮的提取分离方法
举例说明黄酮的提取分离方法组长：宁组员：翟雪王璐璐子涵子惠罗春雨红成1.提取方法1.1热水提取法热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间与煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。
以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。
实例桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。
甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。
此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。
1.2有机溶剂萃取法其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。
常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。
高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。
提取次数一般为2～4 次,提取方法有热回流提取和冷浸提取两种方式。
实例桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最正确工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。
使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最正确提取溶剂是60%丙酮。
西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。
银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 应选用70% 的乙醇作浸提剂最正确。
生：生黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。
黄酮素提取的开题报告
黄酮素提取的开题报告黄酮素提取的开题报告引言：黄酮素是一类天然化合物，广泛存在于植物中，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗癌等。
近年来，随着人们对健康的关注度不断提高，黄酮素的研究和应用也越来越受到关注。
本文旨在探讨黄酮素提取的方法和应用前景。
一、黄酮素的提取方法1. 传统提取方法传统的黄酮素提取方法主要包括浸提法、水蒸气蒸馏法和溶剂提取法。
浸提法是将植物材料浸泡在溶剂中，使黄酮素溶解于溶剂中，然后通过蒸发溶剂得到黄酮素。
水蒸气蒸馏法是将植物材料与水一起加热，黄酮素随水蒸气蒸发出来，再通过冷凝得到黄酮素。
溶剂提取法则是利用溶剂将黄酮素从植物材料中提取出来。
2. 新型提取方法随着科技的进步，人们提出了一些新型的黄酮素提取方法，如超声波提取法、微波辅助提取法和超临界流体提取法。
超声波提取法是利用超声波的机械作用和热效应，使黄酮素从植物材料中释放出来。
微波辅助提取法则是利用微波的加热效应，使黄酮素从植物材料中快速溶解出来。
超临界流体提取法是利用超临界流体的溶解性能，将黄酮素从植物材料中提取出来。
二、黄酮素的应用前景1. 医药领域黄酮素具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性，因此在医药领域有着广阔的应用前景。
黄酮素可以作为药物的原料，用于制备抗氧化剂、抗炎剂和抗癌药物等。
此外，黄酮素还可以用于治疗心血管疾病、神经系统疾病和免疫系统疾病等。
2. 食品领域黄酮素在食品领域也有着广泛的应用。
由于其抗氧化性能，黄酮素可以用作食品添加剂，延长食品的保鲜期。
此外，黄酮素还可以用于制备功能性食品，如抗衰老食品、美容食品和减肥食品等。
3. 化妆品领域黄酮素具有抗氧化和抗炎的特性，因此在化妆品领域也有着广泛的应用。
黄酮素可以用于制备抗衰老化妆品，减缓皮肤老化的过程。
此外，黄酮素还可以用于制备抗炎化妆品，缓解皮肤炎症和过敏反应。
结论：黄酮素作为一类天然化合物，具有多种生物活性，具有广阔的应用前景。
传统的黄酮素提取方法已经被新型的提取方法所取代，新型提取方法具有提取效率高、操作简便等优点。
竹叶黄酮的提取方法
竹叶黄酮的提取方法竹叶黄酮是一种有效的天然植物黄酮类化合物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
提取竹叶黄酮的方法可以分为传统方法和现代方法两类。
以下将详细介绍这两类方法的步骤和特点。
1. 传统方法：传统方法是指使用溶剂提取技术，其步骤如下：(1) 制备竹叶样品：首先收集所需的竹叶样品，并进行初步处理，如去除杂质、洗净等。
(2) 粉碎竹叶：将处理后的竹叶样品研磨成粉末状，增加其表面积，有利于后续的提取过程。
(3) 溶剂提取：将竹叶粉末与适量的有机溶剂（如乙醇、甲醇、乙醚等）充分混合，常温静置数小时或使用超声波提取仪进行提取。
(4) 过滤和蒸发：将提取液过滤，去除悬浮物和杂质，然后使用旋转蒸发仪蒸发溶剂，得到黄酮提取物。
(5) 结晶和纯化：根据黄酮的溶解度，选择适当的溶剂进行结晶和纯化，以获得纯度较高的竹叶黄酮。
传统方法的优点是简单易行且操作成本较低，但存在提取效果受到诸多因素影响、操作时间长、产物纯度较低等缺点。
2. 现代方法：现代方法是指使用高效分离、提纯和检测技术，如超临界流体萃取、疏水性液相色谱、超滤等，其步骤如下：(1) 制备竹叶样品：同传统方法。
(2) 超临界流体萃取：将竹叶样品与超临界流体（如二氧化碳）接触，对黄酮进行萃取。
超临界流体的选择和操作参数的调节对提取效果有重要影响。
(3) 疏水性液相色谱：使用疏水性材料作为填料，选择合适的流动相，对黄酮进行快速分离和纯化。
(4) 检测和分析：使用高效液相色谱、气相色谱、质谱等技术对黄酮进行定量和质量鉴定。
现代方法的优点是提取效率高、操作时间短、所得产物纯度较高，但设备成本较高且技术要求较高。
无论是传统方法还是现代方法，都可以根据实际需求进行改进和优化，以提高提取竹叶黄酮的效果。
例如，可以通过改变提取溶剂的种类和浓度、调节提取时间和温度、优化色谱条件等方式来改善提取效果。
此外，合理选择竹叶的收获季节和地域也会对黄酮的含量和品质产生影响。
黄酮提取方法
黄酮提取方法黄酮是一类天然植物化合物，具有多种生物活性和药理作用。
以下是黄酮的一种常用提取方法：材料和试剂：-植物材料（如花朵、果实、叶子等）-乙醇或丙酮（有机溶剂）-蒸馏水（无机溶剂）-丙酮-水混合溶液（可选，用于分离黄酮类化合物）步骤：1. 准备植物材料：选择新鲜的植物材料，并将其洗净、晾干，去除杂质和不需要的部分。
根据具体植物材料的性质，可以选择使用花朵、果实、叶子等部位。
2. 粉碎植物材料：将植物材料切碎或研磨成细粉，以增加提取效率。
可以使用搅拌器、研钵或研磨机等设备进行粉碎。
3. 提取溶剂选择：选择适当的有机溶剂，如乙醇或丙酮，作为黄酮的提取溶剂。
这些溶剂具有良好的溶解性，能够高效地提取黄酮类化合物。
4. 溶剂提取：将粉碎后的植物材料与适量的有机溶剂混合，放入容器中，并密封。
让溶剂与植物材料充分接触，并进行提取。
可以选择常温静置提取、加热提取或超声波提取等方法，以增加提取效果。
5. 过滤：将提取液过滤，去除植物材料残渣和固体颗粒，得到澄清的提取液。
6. 浓缩提取液：使用浓缩设备（如旋转蒸发仪）将提取液中的溶剂蒸发掉，使其浓缩。
得到浓缩后的提取物，其中包含了黄酮类化合物。
7. 可选步骤：如果需要分离和纯化特定的黄酮类化合物，可以使用进一步的分离技术，如液相色谱（HPLC）或柱层析等方法。
这可以根据目标黄酮类化合物的性质和目的来选择。
以上是一般黄酮提取的常用方法，但需要根据具体的植物材料和实验条件进行调整和优化。
提取黄酮的方法可以因不同的植物种类和黄酮化合物的特性而有所差异。
因此，在实际操作中，建议参考相关的科学文献、专利或咨询专业人士的建议，以获取更详细和准确的提取方法。
此外，为确保实验操作的安全性和可靠性，请在进行实验之前仔细阅读和遵守相关实验室安全操作规程，并使用适当的个人防护设备。
在进行黄酮提取实验时，应注意溶剂的挥发性和易燃性，确保实验室通风良好，并遵循实验室废弃物管理规定。
最后，对于黄酮的提取和应用，建议与专业领域的研究人员、科学家或专业医疗人员进行深入讨论和咨询，以获取更准确和专业的指导。
生物酶法提取陈皮的黄酮
生物酶法提取陈皮的黄酮陈皮，即晒干的橘子或柑橘果皮，是一种常用的中药材。
它味苦、性温，具有理气、燥湿、行滞的功效，常被用于治疗胃脘痞满、嗳气呕吐等病症。
陈皮中含有丰富的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，提取陈皮中的黄酮成分是一项具有潜力的工作。
传统的黄酮提取方法主要有水提法、醇提法、超声波提取法等，但这些方法存在提取效率低、操作复杂、耗时耗能等问题。
而生物酶法提取陈皮的黄酮，则是一种新兴的、高效的提取方法。
生物酶法提取陈皮的黄酮是利用酶的特殊性质，通过酶解作用将陈皮中的黄酮类化合物释放出来。
具体来说，首先需要从陈皮中提取酶，常用的酶源有木瓜酶、蛋白酶等。
提取到的酶可以通过酶的分离纯化和酶活力的检测来进行鉴定和优选。
在提取过程中，需要将陈皮粉末与适量的提取液（常用的提取液有甘氨酸-缓冲液、柠檬酸-缓冲液等）混合，并加入适量的酶。
然后，将混合物进行搅拌和加热，使酶能够与陈皮中的黄酮类化合物发生酶解反应。
反应时间和温度需要根据具体的酶和陈皮样品来确定，一般在40-60℃条件下进行，酶解时间为1-3小时。
酶解反应完成后，需要采取合适的方法将酶和悬浮物分离。
常用的方法有离心、滤过、沉淀等。
分离得到的液体中含有酶解得到的黄酮类化合物，但其中仍然存在其他杂质。
因此，还需要对液体进行进一步的处理和纯化。
纯化的方法有很多种，可以根据具体需求选择合适的方法。
常用的纯化方法有溶剂萃取、吸附树脂分离等。
通过这些方法，可以有效地去除杂质，提高黄酮类化合物的纯度。
最后，提取得到的黄酮类化合物可以通过多种分析方法进行鉴定和定量。
常用的分析方法有高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）等。
这些方法可以准确地确定黄酮类化合物的种类和含量，为后续的研究和应用提供了可靠的数据支持。
总的来说，生物酶法提取陈皮的黄酮是一种高效、简便的方法。
它利用酶的特殊性质，可以在较短的时间内提取到陈皮中的黄酮类化合物，并保持其较高的活性和纯度。
柚皮总黄酮不同提取方法的比较
第50卷第11期2022年6月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.50No.11Jurt2022柚皮总黄酮不同提取方法的比较叶桑茹，简梓晴，徐毅锋，叶伟璇，李海彬，罗兰(广州新华学院药学院，广东广州510520)摘要：比较超声法、纤维素酶辅助法、微波消解法下柚皮总黄酮的提取率，在单因素考察各提取方法的基础上，进行正交试验优化提取工艺，然后确定最佳提取方法。
结果表明，三种提取方法的总黄酮提取率分别为1.04%、1.10%、1.25%o经综合考虑，建议采用微波消解法提取，其最佳提取工艺为：料液比1：20(g：mL)、乙醇浓度85%,提取温度70t、提取时间10min,提取率为1.25%。
可为柚皮总黄酮类化合物的提取和应用提供参考依据。
关键词：柚皮；超声波法；纤维素酶辅助法；微波消解法；总黄酮中图分类号：R284.2文献标志码：A文章编号：1001-9677(2022)11-0079-06Comparison of Different Extraction Methods for TotalFlavonoids from Pomelo Peel*YE Shen-ru,JIAN Zi-qing,XU Yi-feng,YE Wei-xuan,LI Hai-bin,LUO Lan(School of Pharmacy,Xinhua College of Guangzhou,Guangdong Guangzhou510520,China)Abstract:Compared the extraction rate of total flavonoids in pomelo peel with ultrasonic method,cellulase assisted method and microwave digestion method,on the basis of single factor investigation of each extraction method,orthogonal experiment was conducted to optimize the extraction process,and determine the best extraction method.The results showed that the extraction rates of total flavonoids were1.04%, 1.10%and1.25%,respectively.After comprehensive consideration,microwave digestion was recommended for extraction.The optimal extraction conditions were as follows: solid-liquid ratio was1:20(g:mL),ethanol concentration was85%,extraction temperature was70°C,extraction time was10min,and the extraction rate was1.25%.It can provide reference for the extraction and application of total flavonoids in pomelo peel.Key words:pomelo peel；ultrasonic method；cellulase assisted method；microwave digestion method；general flavone柚(Citrus maxima(Bum.)Merr.),为芸香科(Rutaceae)柑橘属(Citrus)水果，在我国的栽培历史悠久，品种繁多，资源丰富。
三种不同方法对余甘子中总黄酮含量测定
三种不同方法对余甘子中总黄酮含量测定摘要：目的:分析冷浸提取法、超声波提取法、回流提取法对余甘子中的黄酮类活性成分含量的影响。
方法:选取余甘子干果进行粉碎和过筛，对其粉末采用冷浸提取法、超声波提取法、回流提取法三种方法进行提取，利用NaNO2-AI(NO3)3显色法测定总黄酮含量，分析3种提取方法对实验结果的影响。
结果:回流提取法为最佳提取条件，测得云南余甘子含量为404.4mg/g。
结论:三种方法中，回流提取法是提取余甘子中黄酮类化合物的中最佳提取方法。
关键词：余甘子总黄酮含量测定余甘子又名余甘果、油甘子，其主要药理活性成分为黄酮类、生物碱、有机酸等。
黄酮类化合物，指以2-苯基色原酮为骨架衍生的一类化合物的总称。
黄酮类化合物可在紫外光（359nm）及可见光（510nm)下呈不同颜色的荧光，可以用紫外可见分光光度计进行总黄酮含量检测。
本研究分析冷浸提取法、超声波提取法、回流提取法对余甘子中的黄酮类活性成分含量的影响。
1材料与仪器1.1材料与试剂试剂:无水乙醇、95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、芦丁标准品（纯度≥95%，CAS号153-18-4），化学试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
余甘子购自云南。
1.2仪器与设备F-040型超声波清洗机（深圳福洋科技集团有限公司），752N型紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司），HC-30118R型高速冷冻离心机（云南中科中佳科学仪器有限公司），RS-FS1406型多功能粉碎机（合肥荣事达小家电有限公司），JJ324BC型电子天平（精度0.001，上海精胜科学仪器有限公司）。
2方法2.1粉碎:取云南余甘子50g，置中草药粉碎机中粉碎，过80目筛得余甘子粉末，置干燥箱中保存备用。
2.2提取:2.2.1浸渍法称取余甘子粉末5g,加60%乙醇100mL，冷浸24h，使有效成分充分浸出。
2.2.2超声波提取法称取余甘子粉末各5g，各加60%乙醇100 mL，超声提取1次，在提取温度为60℃，功率为210W，提取时间为40min的条件下进行提取。
黄酮类化合物的提取分离
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
2. 苷类
水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度 较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。
3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。
4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮 类化合物则应避免。
二、粗提物的精制处理
1． 溶剂萃取法去杂
石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物 质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较 大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和 非极性苷元。
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰 化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减 活性。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿