可溶性糖测定
样品中可溶性糖的测定
样品中可溶性糖的测定一、目的通过对样品中可溶性糖的测定，初步掌握利用紫外-可见分光光度计进行定量的测定方法和仪器使用技术。
二、原理可溶性糖的测定方法有很多，本实验采用蒽酮比色法。
在强酸条件下，蒽酮与可溶性糖（包括还原性糖和非还原性糖）作用生成蓝绿色糖醛衍生物，该蓝绿色颜色深浅与含糖量成正比，可在625nm下进行比色测定。
三、仪器用具和试剂仪器用具：分光光度计、试管、移液管、离心机等。
试剂：蒽酮：100mg蒽酮溶于50ml浓H2S04（化学纯）中，当天配制当天使用。
蔗糖标准液（1mg/ml已配制好）：精确称取0.1000g蔗糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至100ml，加2-3滴浓H2S04，该溶液可长期保存。
四、测定方法1．样品处理方法：将水样放入离心管中，10，000rpm离心2min后，准确吸取1ml作为待测样品，每个样品重复一次。
若是植物样品，则取干粉末样品0.05~0.1g左右, 放入塑料小试管中，加6-8ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸20分钟，取出冷却，3500转/分离心10分钟，取上清，重复提取2次，收集上清，用蒸馏水定容至50 ml，作为待测样品，每个样品重复一次。
2．标准曲线的配制：准确吸取1mg/ml的蔗糖标准液5ml，加水定容量50ml，得到浓度为0.1mg/ml蔗糖同时取待测液1.0ml，加蒽酮4.0ml，在40℃水浴中显色10-15分钟。
（注：各管在加入蒽酮试剂时要迅速，加完后用力振荡1-2分钟。
）3.1 Cary分光光度计：打开分光光度计，机器预热5-10分钟：打开计算机，双击Carywin进入Cary软件包主菜单；双击Concentration图标，进入操作界面，单击Setup进行参数设置:仪器参数：分析波长：625nm; 狭缝：2.0nm; 丫轴读值：Abs标准曲线参数：浓度单位：mg/ml；个数：6; 浓度值：将计算所得值填入;待测样品参数：个数：20（多设，预防不够）设置完毕，单击OK，退出Setup，当右侧出现红色625nm，则表明仪器已准备好。
蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量
蒽酮比色定糖法测定可溶性糖含量实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.学习求标准曲线方程—最小二乘法3. 掌握分光光度计的使用实验原理蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
反应式：该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
实验步骤1．求标准曲线方程取6只试管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）标准溶液，沸腾7分钟取出，用自来水冷至室温，用721分光光度计比色，波长620nm，1＃管作为参比(保留)，求标准曲线方程。
（G浓度为200μg／mL，蒽酮试剂：2克蒽酮／每升85%H2SO4）2. 样品含糖量的测定（1）取菜叶（包菜和白菜两个样）准确称取1.00克剪碎研细后，放入大试管，加入25mL蒸馏水，煮沸10分钟，通过漏斗滤入250mL容量瓶中（可以抽滤），并用煮沸蒸馏水提取两次，滤液并入容量瓶中，滤纸上的残渣用水冲两次，冷却定容至刻度。
（2）吸取0.5mL 滤液于编号的三只试管中，以蒸馏水补足1.00mL；另吸取1.00mL滤液于另编号的三只试管中，加蒽酮试剂5.0mL（于冷水浴中操作），摇匀后于沸水浴中煮沸7分钟，取出冷却至室温，以求标准曲线的1＃管作为参比，用721分光光度计在620nm处测吸光度或透过率。
最小二乘法求标准曲线方程的公式：X：G 的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－�ST本实验要求相关系数r≥0.99。
可溶性糖的标准曲线
可溶性糖的标准曲线可溶性糖的标准曲线是在实验室中常用的一种分析方法，通过建立标准曲线，可以准确测定样品中可溶性糖的含量。
本文将介绍可溶性糖的标准曲线的建立方法及其在实验中的应用。
首先，建立可溶性糖的标准曲线需要准备一系列不同浓度的标准溶液。
这些标准溶液的浓度应该覆盖待测样品中可溶性糖的浓度范围。
通常可以选择葡萄糖或者蔗糖作为标准溶液的原料，按照一定比例配制成不同浓度的标准溶液。
接下来，使用适当的分析方法，比如酶法、光度法或者色谱法，对这些标准溶液进行测定，得到它们的吸光度或者色谱峰面积。
然后，将测得的吸光度或者色谱峰面积与标准溶液的浓度进行对应，绘制标准曲线。
标准曲线通常是一条直线或者曲线，其方程表示了吸光度或者色谱峰面积与溶液浓度之间的关系。
通过标准曲线，我们可以根据待测样品的吸光度或者色谱峰面积，反推出样品中可溶性糖的浓度。
在实际应用中，建立好标准曲线后，我们就可以用它来测定各种样品中可溶性糖的含量了。
首先，将待测样品进行预处理，得到适合分析的溶液。
然后，使用相同的分析方法，测定待测样品的吸光度或者色谱峰面积。
最后，根据标准曲线，计算出待测样品中可溶性糖的含量。
通过建立可溶性糖的标准曲线，我们可以快速、准确地测定样品中可溶性糖的含量，为食品加工、医药制备等领域提供了重要的数据支持。
同时，标准曲线的建立方法也可以应用到其他物质的分析中，具有很高的实用价值。
总之，可溶性糖的标准曲线是一种重要的分析工具，通过合理的实验设计和精确的数据处理，我们可以建立准确可靠的标准曲线，并将其应用到实际分析中，为科研工作和生产实践提供有力支持。
希望本文的介绍对大家在实验中的工作有所帮助，也希望大家能够在实践中不断总结经验，提高分析水平，为科学研究和生产技术的发展贡献自己的力量。
可溶性糖含量的测定
可溶性糖含量的测定
切取样品0.5g置入研钵内，加入蒸馏水和少量石英砂研磨至匀浆，将匀浆连同残渣一起定容至100mL的容量瓶中，室温下静置30～60min（每隔5min混匀一次），或离心或过滤，弃去残渣。
取干净试管若干支，分别加入样液1ml和蒽酮试剂5ml，摇匀后于沸水浴中，加热10min，冷却后于620nm下测定吸光值（以标准曲线的空白为零点），并记录数据。
根据标准曲线可计算出每个处理每1g样品所含有的可溶性糖含量。
结果与计算
C＝AN/W
C.样品可溶性糖量（ug/g）；A.标准曲线中得到的可溶性糖量（ug）；N.稀释倍数；W.样品重量（g）。
注意事项：
✧研磨要充分，否则提取样品的糖含量会偏低；
✧研磨后静置的过程要求每隔一段时间将容量瓶上下颠倒混匀这样
可以使糖充分地提取至溶液中；
✧要求严格掌握反应的时间和温度；
✧比色前，需冷却才能比色，否则温度会影响到比色的结果；
✧蒽酮试剂不稳定，易被氧化变成褐色，所以一般为当天配置；
蒽酮试剂的配制：称取0.2g蒽酮溶于100ml98%浓硫酸中。
可溶性糖含量测定实验的改进
可溶性糖含量测定实验的改进可溶性糖含量测定在许多领域都具有重要意义，如植物生理学、食品科学、医学等。
通过对可溶性糖含量的测定，可以了解植物的生理状态、食品的品质和加工工艺，以及人体血液中血糖的水平等。
因此，对可溶性糖含量测定实验的改进就显得尤为重要。
可溶性糖含量测定主要基于糖类的水解和还原性质。
在碱性环境中，糖类可以被碘化钾氧化，同时生成可滴定的碘。
通过测定消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积，可以计算出可溶性糖的含量。
实验所需材料和设备包括：新鲜植物叶片、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、丙酮、酚酞指示剂、1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液、容量瓶、滴定管等。
样品制备：将新鲜植物叶片剪成小段，称取一定质量，加入50 mL 80%乙醇，在80℃下加热10 min，然后过滤得到提取液。
蒸馏：将提取液倒入蒸馏瓶中，加入5 mL浓盐酸，蒸馏至100 mL。
萃取：向蒸馏液中加入10 mL丙酮，用力摇动后静置分层，弃去水层。
滴定：向丙酮层中加入3滴酚酞指示剂，用1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至粉红色。
计算：根据硫代硫酸钠标准溶液的用量和实验条件，计算可溶性糖的含量。
称取样品时要保证叶片的质量和大小基本一致，以保证实验结果的准确性。
在加入盐酸进行蒸馏时要注意安全，避免烫伤。
在萃取步骤中要保证丙酮完全覆盖水层，以确保糖类物质被完全萃取。
在滴定过程中要保证滴定管洁净，避免残留物对实验结果的影响。
每个样品需做至少3个平行实验，以保证实验结果的可靠性。
通过实验，我们得到了不同样品中可溶性糖的含量（表1）。
从表中可以看出，不同样品中可溶性糖的含量存在较大的差异。
通过对不同样品中可溶性糖含量的测定，我们可以发现不同样品之间的糖含量存在差异。
这种差异可能是由于植物生长环境、品种等因素造成的。
实验过程中也需要注意操作细节，如称样量的控制、萃取时丙酮的使用量等，这些因素都会对实验结果产生影响。
因此，需要对实验操作进行精确控制，以提高实验结果的准确性。
植物中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。
Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。
但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。
（二）试剂1. 80 ％乙醇。
2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（100 μg/mL ）。
蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]
蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。
（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。
2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。
3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。
100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。
（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。
将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。
取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。
植物组织中可溶性糖含量测定方案
植物组织中可溶性糖含量的测定—蒽酮比色法一、原理糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在630 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、淀粉、纤维素），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。
二、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，电热恒温水浴锅，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1) 蒽酮浓硫酸试剂：1.0 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中，贮藏于棕色瓶中（当日配置）(2) 浓硫酸3.材料：草莓新鲜果实三、实验步骤1、标准曲线的制作1、1 1 %蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘干至恒重，精确称取1.000g。
加蒸馏水溶解，转入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
1、2 100ug/mL蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，加水至刻度。
取10mL刻度试管11支，从0~10分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。
1、3 按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96℃沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后取出至室温下放置15min，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
2、可溶性糖提取称取具有代表性样品的可食部分100 g，放人组织捣碎机中，迅速捣成匀浆（或研磨），称取0.50 g浆状样品，共三份。
分别放入3支试管中，加入10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤到50 mL容量瓶中，用蒸馏水反复洗涤试管及残渣并定容至刻度。
吸取上述1.0mL提取液至10mL容量瓶中，用蒸馏水定容。
植物组织中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定原理：糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
实验材料任何植物鲜样或干样。
试剂80%乙醇葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:准确称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100mL,使用时在稀释10倍（100μg/mL）。
蒽酮试剂称取1.0g蒽酮，溶于80%浓硫酸（将98%浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中）1000mL中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用2~3周。
仪器设备分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管，剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉漏斗，滤纸。
实验步骤1.样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5~1.0g（或干样粉末5~100mg），放入大试管中，加入15mL蒸馏水，在沸水浴中煮沸20min，取出冷却，过滤入100mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。
2.标准曲线制作取6支大试管，从0~5分别编号，按表加入各试剂。
表蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量试剂管号0 1 2 3 4 5100μg/mL葡萄糖溶液（mL）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1蒸馏水（mL） 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0蒽酮试剂（mL） 5 5 5 5 5 5葡萄糖量（μg）0 20 40 60 80 100将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下，用空白调零，测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（μg）为横坐标绘制标准曲线。
3.样品测定取待测样品提取液1.0mL加蒽酮试剂5mL，同以上操作显色测定光密度。
重复3次4.结果计算溶性糖含量（%）=从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积（ml）×样品重量（g）×106]/100 式中：C——从标准曲线查得葡萄糖量，μg。
实验二十一 可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）一、目的掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1 .仪器（ 1) 分光光度计(2 ）电子顶载天平(3 ）三角瓶： 50m1 X 1（ 4 ）大试管： 9 支（ 5) 试管架，试管夹（ 6 ）漏斗，漏斗架（ 7 ）容量瓶： 50rnl X 2（ 8 ）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1（ 9 ）水浴锅2 .试剂（ 1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml(2 ）浓硫酸(3) 蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用。
3 .材料小麦分蘖节。
四、操作步骤1 .葡萄糖标准曲线的制作取 7 支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2葡萄糖含量（ ug ）0 10 20 30 40 60 80在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。
以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。
2 .植物样品中可溶性糖的提取将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中，加沸水 25m1 ，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在 50m1 容量瓶中，定容至刻度。
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可溶性糖测定
可溶性糖是指在水或其他溶液中能够被溶解的糖类物质，主要包括单糖、双糖和少量
的多糖。
可溶性糖在生物体中起到了重要的营养供应和能量代谢作用，因此对于可溶性糖
的测定具有重要意义。
本文将介绍常见的可溶性糖测定方法以及其原理。
1. 酚硫酸法
酚硫酸法是一种常见的可溶性糖测定方法，适用于各种单糖和双糖的测定。
其原理是
将样品加入到酚硫酸试液中，糖与试剂中的酚反应能够产生紫红色的复合物，根据复合物
的颜色深浅可以测定糖的含量。
该方法具有操作简便、测定灵敏度高、适用范围广等优点，但同时也存在样品干扰和部分糖类无法测定的缺点。
2. 酶法
3. 高效液相色谱法
高效液相色谱法是一种适用于各种单糖、双糖和多糖的测定方法，其原理是利用色谱
柱对样品进行分离和纯化，通过检测柱後样品分离出来的不同组分的质量和相对浓度来确
定糖的含量。
该方法具有测定精度高、可同时测定多种糖类等优点，但需要高精度设备和
技术人员，操作较为繁琐。
4. 紫外光度法
综上所述，各种可溶性糖测定方法具有优缺点，需要根据不同的实验需求选择最适合
的方法进行研究。