生物化学--实验九血浆胆固醇总量的测定
血清胆固醇的定量测定
血清胆固醇的定量测定摘要：目的：定量测定人血清胆固醇。
方法：采用磷硫铁法测定胆固醇含量。
结果：该人血清胆固醇为132mg/ml。
结论：该人的胆固醇含量正常。
关键词：胆固醇；磷硫铁法胆固醇参与血浆蛋白的组成，是细胞膜的结构成分，胆汁酸盐，肾上腺皮质激素，维生素D等的前体。
胆固醇的测定方法包括化学显色法（磷硫铁法和邻苯二甲醛法）和酶学法（试剂盒），本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇。
血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇则溶在无水乙醇中。
在乙醇提取液中加入磷硫铁试剂，胆固醇和试剂会产生紫红色化合物，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定。
1 仪器与试药1.1 仪器 721型分光光度计；离心机；试管；EP管；1.2 药品与试剂人血清；10%三氯化铁溶液；磷硫铁试剂；胆固醇标准溶液；无水乙醇2 方法2.1 胆固醇的提取取人血清约100μL，分装到两个EP管中，每个管中分别加入200μL无水乙醇，摇匀，每个管中加入无水乙醇1000μL，摇匀，静置10min，离心（3000rpm，5min），得到上清液备用。
2.2 比色测定取三支试管，分别按照表1加入如下试剂。
摇匀，室温静置10min。
将混合溶液加入比色皿中，若比色皿过大，可加入无水乙醇稀释，放入分光光度计中进行测定吸光度。
表1试管编号1（测定管）2（标准管）3（空白管）胆固醇提取液 1.0ml ————胆固醇标准液—— 1.0ml ——无水乙醇———— 1.0ml磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml2.3 计算人血清胆固醇=(OD2/OD1)×0.08×(100/0.04)= (OD2/OD1)×200，其中，OD2表示测定管的吸光度，OD1表示标准管的吸光度。
3 结果与讨论3.1 计算结果 OD2为0.096，OD1为0.145，计算可得，人血清胆固醇为132mg/ml.3.2 讨论正常人胆固醇含量约为110-220 mg/ml，从结果来看，我们可以看处这个人的胆固醇含量是正常的。
血清总胆固醇的测定和血清蛋白分离实验
血清总胆固醇的测定实验目的：测量血清中总胆固醇的含量实验原理：胆固醇酯加水在胆固醇酯酶的催化下生成游离胆固醇和脂肪酸。
游离胆固醇加氧在胆固醇氧化酶作用下生成胆烷4-烯-3-酮和过氧化氢，过氧化氢再加4-氨基安替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成醌亚胺，醌亚胺在500nm 有特异吸收峰，吸收的强度与胆固醇含量成正比。
反应如下：胆固醇酯+H 2O 胆固醇酯酶→ 游离胆固醇+脂肪酸游离胆固醇+O 2 胆固醇氧化酶→ 胆烷-4-烯-3-酮+H 2O 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚过氧化物酶→ 醌亚胺染料+H 2O 实验操作：取干净干燥的小试管3支，标号，按下表操作混匀，置37℃水浴5-6分钟，以空白管校零，在500nm 波长下比色读取各管吸光度。
实验结果：As= 0.214 A T =0.143标准管胆固醇含量mmol/L=5.00mmol/L测定管胆固醇含量mmol/L=3.34mmol/L分析讨论：为保证实验结果准确，滴加液体时可以先滴加量少的液体，再滴加含量较大的血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验目的：醋酸纤维薄膜电泳把血清蛋白分离，并测定血清蛋白种类实验原理：带电颗粒在电场作用下，向着与其所带电性相反的电极移动，称电泳。
醋酸纤维薄膜电泳可把血清蛋白分离为：清蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白5条区带实验操作：1.点样：取在缓冲液中浸泡的醋酸纤维薄膜一条（2.5×8cm），轻轻夹于滤纸中，吸去多余的缓冲液，在薄膜的毛面上距一端约1.0cm～1.5cm处，用点样气沾上血清后迅速压一下，然后将毛面向下使两端紧贴在四层滤纸上，加盖，平衡2～3分钟，通电电泳。
2.电泳：恒压120V，0.6mA/cm，时间50～60分钟。
3.染色：电泳完毕后，关闭电源，将薄膜取出，直接浸入氨基黑染色液中染色，取出用漂洗液浸洗3～4次，至背景完全无色为止。
实验结果:电泳后出现5条区带，从正极到负极，分别为清蛋白、α1、α2、β、γ，点样线。
胆固醇测定分析课件
监测治疗效果和调整治疗方案。
胆固醇测定的分类
总胆固醇测定
高密度脂蛋白胆固醇测定
检测血液中所有胆固醇的总量，包括 低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白 胆固醇和极低密度脂蛋白胆 的脂蛋白，其水平降低与心血管疾病 风险相关。
低密度脂蛋白胆固醇测定
低密度脂蛋白是一种富含胆固醇的脂 蛋白，其水平升高与动脉粥样硬化风 险相关。
VS
详细描述
冠心病患者通常需要降低低密度脂蛋白胆 固醇（LDL-C）水平，而高密度脂蛋白胆 固醇（HDL-C）水平较高则有利于降低 疾病风险。脑血管疾病患者同样需要关注 血脂水平，尤其是胆固醇和甘油三酯等指 标。糖尿病患者的胆固醇水平管理也是预 防并发症的重要手段之一。
05 胆固醇测定后的建议
对于高胆固醇的建议
02 胆固醇测定方法
实验室测定法
01 02
酶法
利用胆固醇氧化酶将胆固醇转化为胆烷酰过氧化物，再通过过氧化物酶 将胆烷酰过氧化物转化为胆烷酸，最后通过酸碱滴定法测定胆烷酸的含 量，从而计算出胆固醇的浓度。
化学法
利用化学反应将胆固醇转化为可测定的物质，如胆烷酸、丙二醇等，再 通过滴定法或分光光度法测定其含量，从而计算出胆固醇的浓度。
03
免疫法
利用抗体与抗原的特异性结合反应，将胆固醇与抗体结合，再通过酶标
法或荧光法测定酶或荧光的强度，从而计算出胆固醇的浓度。
快速测定法
试纸法
利用试纸上的酶和显色剂与胆固 醇发生反应，根据试纸的颜色变 化计算胆固醇的浓度。
便携式仪器法
利用便携式仪器检测全血或血清 中的胆固醇，一般采用酶法或化 学法，仪器具有操作简便、快速、 准确等特点。
增加营养补充
适量补充富含维生素和矿物质的食品，如坚果、 鱼和绿叶蔬菜等。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告实验报告
实验目的：
测定血清总胆固醇的浓度。
实验原理：
血清总胆固醇（total cholesterol, TC）可被酶促反应分析法（enzymatic reaction method）测定。
在反应液中加入胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，使血清中的TC被水解成自由胆固醇和酯化胆固醇，同时释放出的氢过氧化物（H2O2）与4-氨基安替比林（4-AAP）和3,5-二溴-4-硝基苯磺酸（DHNS）在高温下作用形成紫色化合物，其吸光度与TC的浓度成正比。
实验原料：
1. TC标准品（10.0 mmol/L）
2. 4-AAP（0.5 mmol/L）
3. DHNS（0.65 mmol/L）
4. 胆固醇酯酶
5. 胆固醇氧化酶
6. 磷酸盐缓冲液（pH
7.4）
实验步骤：
1. 取血清标本1.0 mL，并用离心机离心10分钟，除去沉淀后得到澄清的血清。
2. 取1.0 mL澄清的血清加入10 μL胆固醇酯酶，放置于37℃恒温槽中加水浴反应30分钟。
3. 倒入10 μL胆固醇氧化酶，再加入2.0 mL磷酸盐缓冲液（pH 7.4），混匀。
4. 加入15 μL4-AAP和15 μLDHNS，混匀后在37℃恒温槽中加水浴反应10分钟。
5. 记录吸光度（A）值，以TC标准品作为对照，计算出血清中TC的浓度。
实验结果：
本实验测定血清总胆固醇的浓度为X mmol/L。
实验结论：
采用酶促反应分析法测定血清总胆固醇的浓度，结果可靠，该方法操作简便，对临床诊断有参考意义。
胆固醇测定
（二）实验试剂
1、血清（样本） 2、蒸馏水 3、工作液 4、胆固醇标准液（标本）：5.17 mmol/L
四、实验内容和操作过程
1.取3支干净试管，分别标明测定管（T）、标准管（S） 和空白管（O），然后按下表加入试剂： 加入物 血清（ml） 测定管T 15 标准管S 空白管O
6、生化项目检测 （2）测定
7、样本结果登记
8、样本查询
9、系统注销 10、工作结束 清洗仪器，退出系 统、关闭仪器，关闭计算机，切 断电源，处理试剂。
七、临床意义
血清胆固醇浓度增高见于动脉粥样硬化， 肾病综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿 病。其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障及 牛皮癣等血清胆固醇有增高。 血清胆固醇浓度降低常见于恶性贫血、溶 血性贫血及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇降 低，其他如感染和营养不良等情况。
URIT-800半自动生化分析仪使用 介绍
1、开机 打开计算机显示器、主机、 分析仪主机；运行系统管理程序并进 入操作主界面。 2、工作前准备 检查废液瓶；清洗 管路；设置吸收池温度；待机30min； 清洗管路；调整A/D初始值”对仪器 进行自动调整；确认仪器是否需要校 准。
3、登录
4、清洗
10次左右。
5、参数设置
6、生化项目检测 （1）编号
4.生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正 比，用半自动生化分析仪测定胆固醇的含量。
三、实验器材与试剂（一）实验材（1）试管 3支（2）水浴箱
（3）试管架 （4）洗耳球
1台
1个 1个
（5）微量五档可调移液器 2支 （6）刻度吸量管（5ml） 1支 （7）半自动生化分析仪 1台
GPO-PAP法测定总胆固醇
测定（U） 10 --1000
混匀，37℃水浴 10min，505nm 波长，以空白管调 0，测定各管吸光度。 程 （三）结果计算： CT （四）注意事项 样品中胆固醇浓度大于 13mmol/L 时，可用生理盐水稀释后再重新测定， 结 果乘以稀释倍数。 课堂 本法容易受到哪些物质的干扰？ 提问 课堂 GPO-PAP 法测定总胆固醇的原理和操作方法。 小节 布置 简述 GPO-PAP 法测定总胆固醇的注意事项。 作业 参考 《生物化学》潘文干主编（第６版）．人民卫生出版社 书目 《基础医学实验指导》自编
胆ห้องสมุดไป่ตู้醇酯酶
教 学 要 求
胆固醇+ 脂肪酸 胆甾烯酮 + H2O 醌亚胺 + H2O
胆 固 醇 + O2 胆固醇氧化酶 H2O2 + 4-AAP + 酚 （二）操作步骤 空白（B） 教 学 过 讲 授 新 课 样 品（μ L） --10 1000 校准液（μ L） D.W. （μ L） 工作液（μ L） 校准（C） -10 -1000
山东医学高等专科学校《生物化学》实验教案
教研室 生物化学 课程 内容 生物化学实验 专业 09 级所有专业 指导教师 徐燕 学时 2 实验四 血浆脂类测定 ——GPO-PAP 法测定总胆固醇
教材 生物化学实验 教学 目的 和要 求 教学 内容 教学 重点 难点 教学 媒体 复习 旧课
1、掌握 GOD-PAP 法的检测原理。 2、掌握用 GOD-PAP 法检测总胆固醇的操作步骤。 GPO-PAP 法测定总胆固醇 重点：掌握 GPO-PAP 法测定总胆固醇的原理和操作方法。 难点：测定原理。 学生动手操作为主，课堂演示为辅 总胆固醇测定方法及临床意义 （一）原理 胆固醇酯 + H2O
胆固醇测定——精选推荐
总胆固醇含量与年龄、性别、饮食有关。一般来说年龄越大含量越高；女性 稍低于男性，但绝经后超过男性；长期的高蛋白，高脂饮食也会使血清胆固醇含 量上升；脑力劳动者比体力劳动者高。病理性增加见于胆道梗阻、肾病综合征、 慢性肾小球肾炎、动脉粥样硬化、高血压、糖尿病、甲状腺功能减退、传染性肝 炎、门脉性肝硬化、某些慢性胰腺炎、自发性高胆固醇血症、家族性高脂蛋白血 症、老年性白内障及牛皮癣等。胆固醇的监测用于评估罹患动脉硬化的风险以及 对脂类/脂蛋白的代谢紊乱进行诊断和监测治疗。减少见于严重贫血、急性感染、 甲状腺机能亢进、脂肪痢、肺结核、先天性血清脂蛋白缺乏及营养不良。
200mg/dl=5.2mmol/ l/l
l
300mg/dl=7.8mmol/
l
换算关系式：mg/dl × 0.026 = mmol/L
mmol/l × 38.66 = mg/dl
8 性能指标
本法线性范围为 3-800mg/dl，不准确度允许范围 X ±10%，不精密度 CV=1.7%，
灵敏度为 3mg/dl。 9 注意事项 9.1 血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。 9.2 仅应用于体外诊断。 9.3 扔弃废物应符合当地的法规。
东莞常平医院 生化实验室
胆固醇测定
文件编号： DGCPH- BC-SOP-04-31
版序：2005-1 页码：第 1 页，共 4 页
1 测定方法
酶法（ CHOD-PAP 法）。
2 测定原理
胆固醇酯 + H2O 胆固醇酯酶
胆固醇 + 脂肪酸
血清总胆固醇测定
如癌症晚期等。
【注意事项】
胆固醇:
▪ 标本采集：空腹12h采血，避免溶血。可用下列抗凝 剂，直至所列浓度对结果没有明显影响，EDTA 25mg/ml； 枸橼酸钠50mg/ml；草酸盐50mg/ml；肝素2mg/ml；氟化 物10mg/ml。
▪ 标本保存：血清胆固醇在室温（25℃）或2-8℃冷藏
可稳定7天，在-20℃密集冷冻可稳定数月，血浆中胆固醇 稳定性同血清。
实验五 血清总胆固醇测定
【实验目的】 ▪ 学习血清总胆固醇测定的实验原理。 ▪ 掌握总胆固醇的测定方法和操作技术。
【实验原理】
血清脂类包括甘油三酯、胆固醇、胆固醇 酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸。它们在血液中 以脂蛋白（脂和载脂蛋白的复合体）的形式存 在。用超速离心技术可把血浆脂蛋白分成四大 族：CM、VLDL、LDL、HDL，用电泳技术可 把血浆脂蛋白分成α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β脂蛋白、CM。
【思考题】
▪ 一、简述双缩脲法测定蛋白质含量的原理 ▪ 二、简述血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理 ▪ 三、简述酶法测定血糖的原理 ▪ 四、Km的意义？
五、简述酶法测定血清总胆固醇的基本原理。
【试剂与器材】
▪ 1.总胆固醇测定试剂盒 ▪ 2.酶标板、板条、微量进样器、微量移液器 ▪ 3.生化培养箱、酶标仪 ▪ 4. 血清
【操作步骤】
1. 配制工作试剂： R1取4.5ml，R2取0.5ml，置于10ml玻璃试管中
2. 取酶标板1块，板条1条，按下表操作：
3.置于37℃生化培养箱10mi源自，492nm波长处在酶标仪上读 取各管的吸光度A。
血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇 FC和胆固醇酯（CE）两部分。胆固醇酯可 被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪 酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化 作用下生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2 在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物 酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌 类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正 比。
总胆固醇测定概述
总胆固醇测定概述
总胆固醇测定：血浆胆固醇包括胆固醇酯(70%)和游离胆固醇(30%)两种。
血浆和组织中所含胆固醇经常处于交换状态。
由于胆固醇不断进、出血液，所以血浆胆固醇不仅反映胆固醇摄取与合成情况，还反映携
带胆固醇的各种脂蛋白的合成速度，以及影响脂蛋白代谢的受体情况。
血浆胆固醇主要存在于LDL中，其次为HDL和VLDL，CM中含量最少。
胆固醇在维持机体正常功能上是非常重要的。
其主要功能有：①
胆固醇是所有细胞膜和亚细胞器膜上的重要组成成分;②是胆汁酸的唯
一前体;③是所有类胆固醇激素，包括性腺和肾上腺激素的前体等。
参考值：TC水平因生活条件(饮食、运动等)而异，随年龄上升。
中青年男性略高于女性，老年女性高于男性。
我国血脂异常防治建议
中以≤5.17mmol/L(200mg/dl)为合适水平，5.20-5.66 mmol/L(201-21
9mg/dl)为临界范围(或边缘升高)，≥5.69 mmol/L(220mg/dl)为升高。
美国以≥6.21 mmol/L(240mg/dl)为高胆固醇血症。
血清胆固醇实验报告
一、实验目的1. 熟悉血清胆固醇测定的原理和方法。
2. 掌握血清胆固醇测定的操作步骤。
3. 了解血清胆固醇与人体健康的关系。
二、实验原理血清胆固醇是血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
血清胆固醇的测定对于预防、诊断和治疗心血管疾病具有重要意义。
本实验采用氧化酶法测定血清胆固醇含量。
氧化酶法测定血清胆固醇的原理是：胆固醇在氧化酶的作用下，与氧化剂反应生成过氧化氢，过氧化氢再与邻苯二胺反应，生成有色产物。
有色产物的颜色深浅与血清中胆固醇含量成正比，通过比色法测定吸光度，即可计算出血清胆固醇含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清标本- 胆固醇氧化酶试剂- 邻苯二胺试剂- 空白试剂- 标准胆固醇溶液- 比色皿- 比色计2. 实验仪器：- 移液器- 离心机- 恒温水浴锅四、实验步骤1. 标准曲线绘制：- 将标准胆固醇溶液用蒸馏水稀释成不同浓度（如：0、1、2、3、4、5mg/dL）。
- 每个浓度分别加入胆固醇氧化酶试剂、邻苯二胺试剂和空白试剂，充分混匀。
- 将混合液放入恒温水浴锅中，反应一定时间（如：30分钟）。
- 用比色计测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 将血清标本用蒸馏水稀释成一定浓度。
- 按照标准曲线绘制步骤，进行操作。
- 测定吸光度，根据标准曲线计算血清胆固醇含量。
3. 结果分析：- 对实验数据进行统计分析，得出血清胆固醇含量的平均值、标准差和变异系数。
- 分析实验误差来源，提出改进措施。
五、实验结果1. 标准曲线绘制结果：- 绘制标准曲线，线性相关系数R²为0.998，表明实验结果可靠。
2. 样品测定结果：- 血清胆固醇含量测定结果为（X±SD）mmol/L，其中X为血清胆固醇含量，SD 为标准差。
3. 结果分析：- 通过统计分析，得出本次实验的血清胆固醇含量与参考值（正常范围为2.86-5.17mmol/L）进行比较，判断是否处于正常范围。