作物抗病性鉴定
实验六 作物抗病性鉴定
作物抗病性鉴定(evaluation of disease resistance )是作物抗病育种的重要基础，从抗原筛选、后代选择、直到品种推广的全过程都离不开抗病性鉴定。狭义的抗病性鉴定是评价寄主品种、品系或种质对特定病害抵抗或感染程度，广义的抗病性鉴定还应包括病原物的致病性评价。鉴定方法包括自然鉴定、接种鉴定、田间成株鉴定、室内苗期鉴定、离体鉴定及间接鉴定等，在实际工作中则需根据作物、病害种类，目的要求和设备条件而定。常用方法如下：
1、田间自然鉴定 自然发病条件下的田间鉴定是鉴定抗病性的最基本方法，尤其是在各种病害的常发区，进行多年、多点的联合鉴定是一种有效方法。它能对育种材料或品种的抗性进行最全面、严格的考验。田间鉴定的方法因作物种类而异，大田作物的田间鉴定一般要进行人工接种，接种方法又因病菌而异。对于稻瘟病等气传病害，可分别用涂抹、喷雾及注射等方法进行接种，以使具有抗接触、抗侵入等抗病机制的品种也得以发病。
2、温室或田间接种鉴定 这种方法是将病原菌孢子或病毒直接接种到温室或田间植株的叶片、果实或根上，它适合对所有作物进行抗病性鉴定。由于抗病现象是寄主、病原物及环境条件三者共同作用的结果，因此，这种鉴定结果也能真实地反映被鉴定材料的抗病性，可靠性强。接种鉴定的技术规程包括育苗、接种体的制备(病菌的分离、保存与抱子诱发)及接种3个环节，接种的方法有点滴法、喷雾法、摩擦法及注射法等。
3、离体接种鉴定 为鉴定以组织、细胞或分子水平的抗病机制为主的病害，可选用离体接种鉴定。具有操作简便，鉴定结果可靠等优点。可同时分别鉴定同一材料对不同病原菌的抗性。因直接从植株上取下子叶、叶片或果实进行鉴定，不影响幼苗正常生长发育和开花结实。鉴定方法不仅因作物、病菌种类而异，而且抗病性分级标准也因作物、病原菌的种类不同而存在很大的差别。
以下则针对水稻稻瘟病、小麦条锈病、玉米大斑病等部分主要作物的最重要病害分别学习各种鉴定方法和技术。
I 水稻苗瘟抗性的鉴定
一、实验目的．
1、熟悉水稻苗期稻瘟病的症状特征。
2、学习和初步掌握水稻苗瘟抗性鉴定技术。二、内容说明
水稻稻瘟病是一种世界性的真菌病害，被列为水稻三大病害之首。水稻稻瘟病具有传播快、发生范围广、流行频率高、灾变严
重等特点。在我国水稻各稻区常年均有不同程度的发病，给水稻生产带来极大 的损失。）为稻梨孢菌6-1稻瘟病原菌（图：世代，oryzae）无性（Pyricularic
，半知菌亚门梨孢Pyrcularia grisea Sacc.Barr
Magnaporthe grisea 属。有性世代： ，子囊菌亚门。分生孢子梗不分 Yaegash
2~8个枝，从寄主表皮或气孔伸出，具 隔膜，基部稍膨大，淡褐色，向上色淡， 稻瘟病原菌 图6-1
基部有脚胞。个隔膜，常有1~3顶端曲状，上生分生孢子。分生孢子无色，洋梨形或棍棒形，
群和群、ZF群、ZD群、ZEZA我国稻瘟病菌有7群43个生理小种，为群、ZB群、ZC ZG群，其中ZG小种为优势小种，分布最广。
侵染部位多和症状多样性等特稻瘟病在水稻整个生育阶段皆可发生，具有为害时间长、点。按其为害时期和部位的不同，可分为苗瘟、叶瘟、节瘟、穗颈瘟和谷粒瘟，其中以穗颈分蘖期和抽穗期。叶期、瘟对产量的影响最大。稻株容易感病的生育期是4
品种是稻瘟病发生和流行的基础。稻瘟病菌群体大、繁殖快，其高度的变异性使新的生理小种不断更替出现，导致选育的高抗品种很容易丧失抗性。因此，必须坚持长期研究病原 菌的变化，并不断地选育新的抗病品种。℃对菌丝发育、分温度和湿度是影响稻瘟病发生流行的主要环境条件，以气温为25~28最适合病菌孢子的形成和侵入。阴雨连绵，日照不足或96%生孢子形成最为适宜，相对湿度时晴时雨，或早晚有云雾或结露条件，病情扩展迅速。光照对孢子形成、萌发及侵入都有抑的潜育期制作用，缺氧时孢子不能萌发。在饱和湿度和适温条件下，病菌侵入稻叶后经4d就可出现病斑。偏施过施氮肥有利发病。放水早或长期深灌根系发育差，抗病力弱发病重。
其中人工接种鉴定根据稻瘟病的抗性鉴定方法可分自然诱发鉴定和人工接种鉴定两种。．
菌株的接种方式不同，又可分为：
① 抗谱测定，即多个菌株单个接种；② 多个菌株混合接种。
自然诱发鉴定适于苗瘟、叶瘟穗、颈瘟和枝梗瘟鉴定，人工接种鉴一般适于对苗瘟和叶瘟的鉴定。一般来说，苗瘟与穗瘟有极显著正相关，因而抗瘟性鉴定常采用苗期人工接种鉴定。但人工接种鉴定时，一般应用多个种群代表小种的混合菌种，以增加鉴定准确性和普遍性。
三、材料仪器药品
．供试材料1⑴ 供试水稻育种材料若干以及抗病对照品种和感病对照品种各一个。
⑵ 供试稻瘟病菌菌种 从当地搜集分布广、致病力强的主要稻瘟病菌的代表性生理小种若干个。分别进行小种培养繁殖。
．仪器用品2⑴ 病菌培养器具 高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、恒温培养箱、三角瓶（或茄子瓶)、培养皿、接种环、搪瓷盆、纱布等。
⑵ 菌液接种和制备器具 显微镜、载玻片、盖玻片、搪瓷盘、普通专用喷雾器或医用喉头喷雾器、医用皮下注射器、橡胶管和保温、保湿的遮荫设备。
3．病菌培养基⑴ 酵母淀粉琼脂培养基（酵母2g、可溶性淀粉10g、琼脂15~20g，加水1000ml）。
⑵ 大麦或高粱种子。
四、方法步骤
（一）人工接种鉴定1．菌种制备 将供试稻瘟病菌菌种各生理小种分别培养，混合接种。
2．病原菌培养繁殖 培养方法包括一级培养繁殖和二级培养繁殖两个步骤：
⑴ 一级培养繁殖 采用酵母淀粉琼脂培养基培养。方法为：将琼脂10~15g放入1000ml，装入试管，经消毒灭菌后，取出2g，酵母10g水中加热溶化，再加可溶性淀粉（或煎糖）．
制成斜面，接种病原菌，放在26~28℃恒温箱中培养10d左右即可取用。
⑵ 二级培养繁殖 将病原菌转移到大麦（或高粱）粒培养基上进行培养扩大繁殖，用于接种鉴定。其方法是将大麦粒加水后煮到半熟状态或用水浸泡24h，然后倒去多余的水分，装入三角瓶内（或茄子瓶），高压灭菌，灭菌后立即将麦粒摇散防止结块。然后在无菌操作条件下接种病菌，放在26~28℃恒温箱内培养。培养4~5d时应摇动三角瓶内的大麦粒，使菌丝生长均匀。待灰色
菌丝长满大麦粒并开始变黑时，用自来水冲洗大麦粒上的菌丝，随后摊放薄层于搪瓷盘中，盘上覆盖1~2层纱布以保湿，置于25~28℃变温条件下培养2d左右，即可见到麦粒上产生大量灰色的分生孢子，就可供接种使用。扩大繁殖时，应注意搪瓷盘内的湿度不宜过高，否则只长菌丝，较少产生分生孢子。
3．育秧⑴ 前期准备 每个盘中同时安排感病和抗病品种作对照。将各供试水稻材料的种子进行粒选，各取30~40粒种子，经消毒、冲洗、催芽后准备播种。
⑵ 培育方法 在盛有肥沃泥土的搪瓷盘中育秧。幼苗2叶期定株，每个材料选留10株生长一致的秧苗。定株后酌施2~3次氮肥，最后一次施氮肥应在接种前3~4d施用，使幼苗生长嫩绿。
如采用注射接种鉴定法，可在秧田中育秧，移植于大田后进行接种鉴定。
4．接种
⑴ 喷雾接种 一般在3~4叶期。日平均气温25~28℃和阴雨高湿，叶面长时间（12h以上）常有水珠的时期接种，最有利于发病。
具体步骤是：将产生不同病菌小种孢子的大麦粒放入盛有自来水的烧杯中搅拌，分别配制成孢子悬浮液，用100倍显微镜检孢子密度，平均每个视野应有孢子20~25个（孢密度则为20~25万个/ml）。然后将不同生理小种的孢子悬浮液混合，用于接种。采用专用喷雾器喷雾接种。喷雾时要将叶片充分均匀湿润。接种后，在26~28℃下，用薄膜覆盖保湿24小时。然后移至室外，在20~30℃下保持高湿，培养7天，进行病情鉴定。
⑵ 注射接种：一般在水稻6~7叶期分蘖进行，接种的分蘖必须有一张未展开的嫩心叶。将按上述方法配制好孢子悬浮液，使用医用皮下注射器从叶鞘外侧注入孢子悬浮液，直到多余菌液从心叶中冒出为止。接种后7d调查植株的发病情况。
（二）自然诱发鉴定该方法适于多雾天气和阴雨的条件下的稻瘟病重病区，可种植鉴定材料，采用自然诱发抗病鉴定。
具体操作：将鉴定材料种植在重病区肥沃土壤上，施氮水平略高于当地丰产田。如有必丛，可移栽或直播，重10~20要可进行人工田间接种，以诱导发病。每个鉴定材料一般栽植
复三次。以当地抗、感品种作对照。在鉴定区周围应种植若干行咸感病的品种作诱发行，以增加感染强度。保持高湿条件。
（三）病情鉴定一般是接种后7d即进行病情鉴定，或当感病对照品种达到高度发病时调查。并按全国水稻稻瘟病抗病性鉴定分级标准（见表6-1）逐株鉴定和记载，
苗瘟和叶瘟抗性分级标准6-1 表
症 状 抗性类型级 别
R 叶片上未见病斑或产生针头状或稍大褐点抗病
M 叶片上产生圆形或椭圆形病斑，中间灰白色，边缘黄褐色，病斑大中抗
小在两叶脉之间，病斑直径在3mm以内
S
叶片上产生典型梭型病斑，中心灰白色，边缘黄褐色，病斑超过两感病
条叶脉间的宽度
然后用加权法求其平均病级。
各相应病级数各级病株数病情指数 最高病级数鉴定总株数 。级制稻瘟病抗性分级标准（见表6-2）国际水稻研究所采用10 苗叶瘟抗性分级标准（IRRI）表6-2
级 抗性水平受害情况病
0 ）HR高抗（叶上无病斑
1 ）抗（R病斑为针头大小的褐点
2 褐点稍大3 1~2mm
）中抗（MR圆形至椭圆形的灰色病斑，边缘褐色，病斑直径 4 ，通常局限于两条叶脉间，受害面积不超过叶面积的1~2cm梭形病斑，长2%
5 10% 梭形病斑，受害面积不超过叶面积的）感（MS 6 11~25% 梭形病斑，受害面积为叶面积的7 梭形病斑，受害面积为叶面积的S感（） 26~50%
8 梭形病斑，受害面积为叶面积的51~75%
9
全叶枯死）HS高感（五、实验作业
倍显微100．分组进行稻瘟病的苗期人工喷雾接种鉴定。先配制病菌孢子悬浮液，在1．
镜下检查孢子液浓度，即检查3个视野内的孢子数，明确是否符合所要求的孢子悬浮液。
2．进行喷雾接种和喷雾接种后的保温、保湿和遮光等管理工作。
后，进行发病情况检查，确定供试水稻品种的抗性。．接种7d3 ．水稻抗瘟性鉴定应注意哪些问题?4
II 小麦条锈病抗性鉴定
一、实验目的
、熟悉小麦条锈病的症状特征。1 2、学习和初步掌握小麦条锈病抗性鉴定技术。二、内容说明
小麦锈病俗称黄疸、麦疸等，分条锈病、叶锈病和秆锈病三种，其中条锈病是我国发生范围最广、
抗病虫育种
抗病虫育种
一 抗病虫育种的意义与作用
1 抗病性、抗虫性的概念
（1）抗病性：农作物某品种对某种病害不感染或感染程度较轻，生长发育和农艺性状受害较小，可称具有抗病性。
（2）抗虫性：指寄主植物所具有的能抵御或减轻某些害虫的侵袭或危害的能力。
2 抗病虫育种的意义与作用
（1）抗病虫育种是防治作物病虫害的主要方法。
（2）比其他防治病害的方法经济有效、简单易行、效果稳定，而且也没有药剂引起的公害。
3 抗病虫育种的特点
抗病虫育种不仅与作物本身的遗传特性有关，而且与寄生物或有害生物的遗传，作物与寄生物之间的相互作用以及两者对环境的敏感性等有关。
寄主植物和寄生物之间具有协同进化的关系。
4 基因对基因学说
针对寄主方面每一个垂直抗病基因，在病原菌方面或迟或早也会出现一个相对应的毒性基因； 毒性基因只能克服其相应的抗性基因，而产生毒性（致病）效应；在寄主—寄生物体系中，任何一方的每个基因都只有在另一方相应基因的作用下，才能被鉴定出来。
二 作物抗病虫性的类别与机制
1 病原菌致病性及其变异
(1)致病性：
a 毒性（virulence）：指的是病原菌能克服某一专化抗性基因而侵染该品种的特殊能力，是一种质量性状，又称为专化性致病性。
b 侵袭力(aggressivenese)：指在能够侵染寄主的前提下，病原菌在寄生生活中的生长繁殖速率和强度，是一种数量性状，又称非专化性致病性。
(2)生理小种(physiological race)：同一病原菌可以分化成许多类型，不同类型之间对某一品种的专化致病性有明显差异，这种根据病原菌致病性差别划分出的类型，就是生理小种。
（3）致病性的遗传
毒性：单基因隐性遗传
侵袭力：可能是多基因遗传
（4）致病性的变异
a 突变：真菌和病毒中已发现不少新的毒性基因来自突变。
b 有性杂交：病原真菌小种间、变种间和种间杂交后基因发生重组。
小麦种质资源根腐病抗性鉴定
技术与方法 有，有待进一步的研究，尤其是研究分析方 法亟待规范；转基因作物对生态系统多样性 的影响仍在研究争论之中，尚无定论。 （分子植物育种） 萝卜Ｄ染色体在７号 连锁群的定位研究 有关萝卜基因组的分子研究不多，已发表 的文章几乎都是报道萝卜雄性不育及其恢复 基因的分子标记或转移利用，而萝卜分子连锁 群同染色体之问的对应关系研究至今是一个 空白，所以７号连锁群是不是萝卜Ｄ染色体 在分子水平的反映也无从可知。笔者在已知 萝卜Ｄ染色体附加系对线虫具有抗性和萝卜 分子图谱的７号连锁群定位有抗线虫基因 胁１ 的基础上，利用（ａｐ）ＲＡＰＤ分子标记技 术，以甘蓝型油菜异源萝卜附加系为材料，筛 选到９ｏ个萝卜Ｄ染色体的特异标记。选择４ 个在萝卜构图亲本问表现多态性的Ｄ染色体 标记进行Ｆ２群体（包括２４５个单株）分离检 测，并与构图用的５Ｏ５个ＡＦＬＰ和ＲＡＰＤ标记 一起用Ｊｏｉｎ一瑚ｐ ３．０进行连锁定位分析。结 果萝卜Ｄ染色体标记全部定位于７号连锁群， 并且７号连锁群上只有Ｄ染色体的特异标记， 说明萝卜７号连锁群就是Ｄ染色体在分子水 平的反映。证实了定位有抗线虫基因胁１脚 的７号连锁群对应于具有线虫抗性效应的萝 卜Ｄ染色体。本实验结果对研究萝卜Ｄ染色 体控制的农艺性状或抗逆性以及萝卜抗线虫 育种和萝卜抗线虫基因向其它芸薹属作物的 转移都将会起到重要的指导作用。 （中国农学通报） ４ 持久抗稻瘟病杂交水稻 新三系的选育 湖北省恩施自治州是全国的稻瘟病常发 重发病区之一，新品种在生产上使用年限短。 针对这一特点，自２０世纪８Ｏ年代以来，恩施 州育种工作者确立了“优质高产多抗广适”为 总体育种目标，重点开展持久抗稻瘟病育种。 通过建立高效稳定的稻瘟病抗性鉴定圃和抗 病育种基地，广泛征集和积极创制优异种质 资源；对这些资源进行长期鉴定筛选，并利用 筛选出的具有持久抗瘟能力的种质资源作供 体亲本，采用相宜的杂交配组方式，创制人工 制恢（保）组合；对其后代株系进行定向选择， 培育具有持久抗瘟能力的不育（保持）系和恢 复系，再通过合理配组利用，育成具有持久抗 瘟能力的杂交水稻新组合。经２Ｏ余年的努 力，成功育成了一批基本符合上述目标的杂 交水稻新三系和组合，并陆续投放于大面积 生产，产生了较大经济、社会和生态效益。 （云南大学学报） 小麦种质资源根腐病抗性鉴定 笔者应用一套比较完善的田问抗病性鉴 定方法，对７１９份小麦种质进行了根腐病抗 性鉴定；其中黑龙江省内种质１８４份，国外种 质５３５份。对照品种为新曙光１号，该对照 品种发病快，且严重感病；中抗对照品种为克 丰２号。 经过三年田间鉴定，依据叶部病指、病级 及黑胚率等，参试种质发病有显著差异，由于 鉴定条件比较一致，感病对照品种发病充分， 鉴定结果可靠。通过鉴定的７１９份种质对根 腐病均无免疫的。叶部和穗部均表现抗根腐 病的种质有２５份，占鉴定材料总数的３．４ ～法一一方一 ～与一一术一～技一鬻蛊 维普资讯 技术与方法 ％；叶片抗病、穗部中抗的材料有２１份，占２． ９％；叶片中抗、穗部抗病的材料有２４份，占 ３．３％；叶片、穗部均表现中抗的材料有２３ 份，占鉴定总数的３．２％；叶片、穗部表现中 感，或者是叶片中感，穗部感病，或穗部中感， 叶片感病的材料有２６６份，占鉴定材料的３７． ０％；叶片和穗部均表现感病的材料４９份，占 ６．８％。其余３１１份均为叶片抗病而穗部感 病，或者穗部感病而叶片抗病的材料，占鉴定 材料总数的４３．３％。抗病材料一般比感病 材料发病和枯死晚５～７ｄ。从材料来源来 看，本省小麦利 质表现抗病的较多，叶、穗双 抗的利 质中，省内利－质与国外利 质的比例为５ ：１，可见这与我省种质的适应性和抗病性强 有关。尽管如此，还没有发现对小麦根腐病 表现免疫的种质。以上研究结果表明，对现 有小麦种质资源进行抗根腐鉴定和筛选是有 效的，也是为抗病育种提供种质资源的快速 途径。 （黑龙江农业科学） 小麦品种里勃留拉的 持久抗条锈性遗传机制 抗锈性“丧失”问题严重影响小麦抗锈 品种的有效利用。寻求相对持久的抗性品种 一直是抗锈育种工作努力的方向。国内外对 小麦品种持久抗病性的特点和遗传机制有许 多研究，但尚未找到选育和鉴定持久抗病品 种的有效方法。里勃留拉在甘肃陇南大面积 种植３１年，最大种植面积曾达到３４００Ｏ ｈｍ ， 经受了十多个不同流行小种的考验，至今仍 保持着稳定的抗性。陇南是我国小麦条锈病 的常发易变区，是鉴定抗条锈性的理想之地。 因此，在陇南用里勃留拉研究小麦品种的持 久抗病性，既具有代表性，对条锈病持续控 制也具有重要意义。 为了探索小麦品利 持久抗条锈病性的遗 传机制，对持久抗条锈小麦品种里勃留拉进 行了成株期抗病特点和抗性遗传分析，并对 主效基因与微效温敏基因共同控制的持久抗 病性的鉴定选择方法进行了探讨。结果表 明，里勃留拉前期反应型为２～３型，后期转 为１～２型，其典型特征表现为发病率低、严 重度低、病情指数低、病斑小、病斑扩展速度 慢。遗传分析表明，里勃留拉抗性由１对显 性和１对隐性共２对互补的主效基因和若干 成株期微效温敏基因共同控制。在杂交转育 时要扩大选择群体，在早代进行混合选择， 晚代进行单株选择。在成株发病前期，以低 发病率和中抗为标准选择主效基因组合；在 发病后期，应以反应型和严重度的降低为标 准选择微效基因组合。研究还表明，里勃留 拉的干尖性状是由具重复作用的２对隐性基 囚控制，与抗锈性之间存在相关，但作为抗 条锈性辅助选择的形态标记其可靠性较低。 （麦类作物学报） 小麦抗纹枯病利－质创新及 ＱＴＬ定位的初步研究 创造抗纹枯病小麦种质，并探讨其抗性遗 传特点，是启动小麦抗纹枯病遗传育乖ｆｔ研究的 基础。以中国育种中很少利用的ＡＲｚ和Ｎｉａ— ｖｔｌ４为纹枯病抗源，以大面积推广品种扬麦 １５８等为受体亲本，通过复交组合，聚合抗病基 因；用单粒传法构建含１３７个重组自交系ＡＲｚ／／ 扬麦１５８的遗传群体为材料，以致病力较强的 Ｒ一４６菌株为纹枯病病原，分别用沟带接菌法 和牙签接菌法进行抗纹枯病的接菌鉴定。结 果，创造出了０２Ｐ１２、０２Ｐ３１５等兼抗纹枯病、赤 霉病或白粉病的新种质；ＡＲ 扬麦１５８群体在 牙签接菌法中，病情指数介于２９．８％～６４．４％ 之问，
不同花生品种对花生褐斑病和网斑病抗病性鉴定
不同花生品种对花生褐斑病和网斑病抗病性鉴定
路兴涛;张成玲;张田田;孔繁华;张勇
【摘 要】本研究旨在明确不同花生品种对花生褐斑病和网斑病的抗性,为品种选育及田间病害防治提供依据.采用田间病圃鉴定法鉴定了花生不同品种对褐斑病和网斑病的抗性,结果表明,参试的9个花生品种中有6个品种对花生褐斑病的相对抗病指数在0.6以上,花育23、日花1号和四粒红属于高抗病类型,其中花育23相对抗病指数最高为0.87;鲁花8号、青花7号和冀花4号属于抗病类型.13个花生品种中只有2个花生品种对花生网斑病的相对抗病指数在0.6以上,其中花育36属于高抗类型,相对抗病指数为0.81;农大056属于抗病类型,其余花生为敏感性,但是每个花生品种对花生叶斑病的综合抗性较差.
【期刊名称】《花生学报》
【年(卷),期】2013(042)003
【总页数】4页(P52-55)
【关键词】花生;褐斑病;网斑病;抗性
【作 者】路兴涛;张成玲;张田田;孔繁华;张勇
【作者单位】泰安市农业科学研究院植物保护研究所,山东泰安271000;泰安市农业科学研究院植物保护研究所,山东泰安271000;江苏徐州甘薯研究中心,江苏徐州221131;泰安市农业科学研究院植物保护研究所,山东泰安271000;泰安市农业科学研究院植物保护研究所,山东泰安271000;泰安市农业科学研究院植物保护研究所,山东泰安271000 【正文语种】中 文
【中图分类】S565.2;S432.4+4
花生是世界上重要的油料作物和经济作物之一，也是我国出口创汇的重要作物之一，在国民经济中占有重要地位。近年来，随着花生重茬的种植，花生褐斑病和网斑病呈现逐年加重趋势，成为影响花生产量的重要因素。
在田间，花生褐斑病和网斑病主要发生在花生生长中后期，往往与花生黑斑病混合发生，未引起足够重视。花生褐斑病菌(Cercospora arachidicola Hori)属半知菌亚门尾孢菌属，侵染花生后在叶片上形成圆形、椭圆形或不规则棕褐色至褐色病斑，有黄色晕圈。在田间，病原菌以分生孢子、子座及菌丝团等在病残体上越冬，翌年条件适宜时产生分生孢子进行侵染[1-2]。
西瓜甜瓜品种（系）苗期枯萎病、蔓枯病抗性快速联合鉴定技术
西瓜甜瓜品种（系）苗期枯萎病、蔓枯病抗性快速联合鉴定技术姚协丰徐建朱凌丽娄丽娜刘广张曼侯茜徐锦华*羊杏平（江苏省高效园艺作物遗传改良重点试验室·江苏省农业科学院蔬菜研究所南京210014）摘要：西甜瓜枯萎病、蔓枯病是设施生产中的防治难点，培育及推广优质复合抗病新品种是生产上控制病害最为经济、环保、有效的手段。开展复合抗性育种研究，品种资源的复合抗病性鉴定是首要工作。但是目前尚无两种病害抗性鉴定技术标准发布，为了提高品种资源复合抗性鉴定的效率、准确性、规范性，对枯萎病、蔓枯病病原菌的来源与扩繁，苗期活体接种和离体叶片接种结合方法，联合抗病鉴定评价指标等进行技术总结，以规范西甜瓜品种（系）苗期抗枯萎病、蔓枯病的快速联合鉴定技术方案。本研究方案克服了“以往单一接种效率低、周期长、耗费多，避免了传统活体先后接种方法病害发病交互影响，病情指数偏高，易产生误导性结果”等缺点，为大批量初步筛选西瓜甜瓜枯萎病、蔓枯病复合抗性品种资源提供可参考的技术方法。为推动西甜瓜抗枯萎病、蔓枯病育种和种业提升提供技术保障。关键词：西瓜；甜瓜；枯萎病；蔓枯病；联合抗性鉴定
基金项目：江苏省重点研发计划项目[BE2021364]；江苏省种业振兴揭榜挂帅项目[JBGS(2021)075，JBGS(2021)069]；国家西甜瓜产业技术体系项目（CARS-26-08）。作者简介：姚协丰（1982-），男，江苏苏州人，博士，副研究员，主要从事西瓜甜瓜抗病育种与技术推广。E-mail：******************.cn*通信作者：徐锦华，男，研究员，主要从事西瓜甜瓜育种。E-mail：****************.cn。西瓜、甜瓜是重要的园艺经济作物，在我国蔬果生产、消费中占据了十分重要地位，在调整农业产业结构和促进农民增收致富等方面发挥显著作用[1-2]。随着西甜瓜设施栽培面积的不断扩大及种植年限不断增长，西甜瓜病害发生情况日益严重[2]。尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)侵染引起的枯萎病和亚隔孢壳属（Stagonosporopsis）危害引起的蔓枯病是西甜瓜生产上两种主要病害[3-7]。目前设施栽培常年连作伴随病菌量加大、高温高湿等农业生态条件恶化，导致病害高发、重发，生产上植株死亡率可达30%~40%，严重可达80%以上[4,8-9]，已成为制约西甜瓜产业发展的重要因素。生产上发生西甜瓜枯萎病、蔓枯病后，仍以化学药剂防治为主，长期使用化学农药易产生抗药性、农药残留和环境污染，使得西甜瓜枯萎病、蔓枯病等防治越发成为生产上的难点[4,10]。培育及推广优质复合抗病西甜瓜新品种是控制枯萎病、蔓枯病最为环保、经济、有效的办法[5,11,12]。然而开展复合抗性育种研究，品种资源对枯萎病和蔓枯病的复合抗病性鉴定是首要工作。抗病性鉴定是抗病育种的基础，而符合生产实际的抗病性鉴定技术方法又是抗病性鉴定的关键，制定出准确、快捷的复合鉴定技术，可提高抗病育种的准确性，加速抗病育种进程[13]。抗性品种与抗性鉴定方法结合，促进西甜瓜抗性品种的推广与应用。目前国内生产上尚无发布实施的关于西瓜甜瓜枯萎病、蔓枯病单独或者两种病害联合抗性鉴定技术标准可参考，只有一些国内外抗性鉴定方法的文献报道，但是目前国内外对西甜瓜枯萎病、蔓枯病的抗性鉴定方法多采用分株单一接种法，比如枯萎病苗期浸根接种、灌根接种、叶子刺伤接种[12,14-17]，以及通过苗期蔓枯病孢子悬浮液的喷雾接种、离体接种等[13,18]。分株单一接种法效率低、耗费种子等试验材料多，且不同批次试验不稳定。也有少量报道枯萎病、蔓枯病复合接种，即都以活体先后接种枯萎病和蔓枯病菌[12,19]，然而目前的复合接种方法同时活体接种两种病原菌，往往会造成病害发病交互影响，病情指数偏高，容易产生误导性结果，而且由于枯萎病菌对感病植株是致命的，接种后基本全部死亡，无法同时进行其它多抗性苗期鉴定试验，对感枯萎病材料如需鉴定蔓枯病等其它抗病性，后期仍需要进行不同批次的单独接种试验，导致传统枯萎病和蔓枯病的双重抗性鉴定不在同株同时鉴定的，影响结果一致性，拉长鉴定周期。因此为更加简便、高效鉴定西瓜甜瓜品种（系）对枯萎病、蔓枯病抗性，针对当前单一接种为主的技术不足，亟需制定适合大量快速抗源筛选，能够避免不同病害发病交互影响病情观察和统计结果，且鉴定结果更快速准确的抗病性联合鉴定技术规程。本文建立了西甜瓜品种（系）枯萎病苗期活体和蔓枯病离体叶片联合抗性接种鉴定技术方法，实现了同一植株同时鉴定枯萎病和蔓枯病两种病害的抗性，缩短鉴定周期，避免病害交叉影响、提高鉴定稳定性、节约试验材料等，适合大量快速抗源筛选。以期为广大西甜瓜科研育种及品种试验推广等单位和个人，提供可参考的快速联合抗性鉴定技术规范。以推动西甜瓜抗枯萎病、蔓枯病育种，保障西瓜甜瓜种业提升。1试验材料1.1鉴定品种（系）、对照品种选择及育苗管理1.1.1鉴定品种（系）和对照品种：联合抗性鉴定中除了所参鉴的西瓜、甜瓜品种（系），还可选一个感病对照和一个抗病对照。西瓜枯萎病抗病对照可采用高抗品种‘卡红’，感病对照可选用感病品种‘苏蜜1号’；甜瓜枯萎病抗病对照可选用‘长香玉’，感病对照可选‘苏甜二号’。西瓜蔓枯病抗病对照可采用材料‘PI189225’，感病对照可选用感病品种‘苏蜜1号’；甜瓜蔓枯病抗病对照可选用抗病材料‘PI200819’，感病对照可选‘苏甜4号’。1.1.2育苗管理：鉴定品种（系）和对照品种在播种前将供试种子用10%次氯酸钠溶液浸泡5min，流动清水冲洗去除表面残留消毒液，种子放在铺有吸水纸培养皿中，置30℃~32℃恒温培养箱内催芽。待种子露白后，播于50孔穴盘（泥炭∶蛭石∶珍珠岩=3∶1∶1混合基质填装）内，每份材料种植25株，3次重复。育苗温度保持在白天26±2℃，夜间16±2℃，待出苗长至3~5片真叶时的植株作为备用。活体接种枯萎病菌后的西瓜甜瓜植株，定植于装有灭菌育苗基质的直径为10cm的营养钵中，置于26±2℃的温室培养管理，待后续病情观察。1.2病原菌来源及扩繁1.2.1病原菌来源：尖孢镰刀菌西瓜专化型（Fusariumoxyspo⁃rum(Schl.)f.sp.niveum(E.F.Smith)Snyder&Hansen）为害的西瓜枯萎病以生理小种1为优势小种，为此宜选用1号生理小种Race1。甜瓜枯萎病菌株用尖孢镰刀菌甜瓜专化型（Fusariumoxysporum(Schl.)f.sp.melonis(Leachetcurrence)SnyderetHansen）
植物抗病表型评价标准
植物抗病表型评价标准
植物抗病表型评价标准通常包括以下几个方面：
1. 病害程度：根据病害在植物各个部位的表现，如叶片、果实、茎秆等，可分为无病、轻病、中病和重病等不同级别。病害程度可以通过观察病斑数量、病斑大小、植株生长状况等指标来评估。
2. 病害发展速度：评估病害在植物上的发展速度，可以通过观察病斑扩展速度、植株病害传播速度等指标来衡量。
3. 植物生理指标：通过对植物的生理指标进行测定，如叶绿素含量、净光合速率、水分含量等，来评估植物的抗病能力。抗病性较强的植物在这些生理指标上通常表现出较好的状态。
4. 抗病反应类型：根据植物对病害的反应，可以将其分为免疫型、抗病型和耐病型等不同类型。免疫型植物在病害侵染初期即可表现出抗病反应；抗病型植物在病害发展过程中逐渐产生抗病反应；耐病型植物在病害严重时仍能保持一定的生长状态。
5. 抗病基因表达：通过检测植物抗病相关基因的表达水平，如PR基因、几丁质酶基因等，来评估植物的抗病性。抗病基因表达水平较高的植物通常具有较好的抗病能力。
6. 病情指数：病情指数是通过对植物病害程度、病害发展速度等多个方面进行综合评价得出的一个指标，可以用来衡量植物的抗病性。病情指数越低，植物抗病性越强。
综上所述，植物抗病表型评价标准涉及病害程度、病害发展速度、植物生理指标、抗病反应类型、抗病基因表达和病情指数等多个方面。根据不同病害种类和植物种类，具体评价标准可能会有所差异。在实际应用中，通常需要根据具体情况制定相应的评价标准和方法。
大豆对疫霉根腐病抗病性鉴定方法
1999年
6月
June1999中国油料作物学报
Chinesejournalofoilcropsciences第
21卷第
2期
Vol.21No.2
大豆对疫霉根腐病抗病性鉴定方法
朱振东 王晓鸣
(中国农业科学院作物品种资源所 北京
100081)
摘要 应用下胚轴伤口接种方法鉴定85份大豆种质对大豆疫霉菌1号生理小种的抗病性
,在两次鉴定
中有
95.29%的大豆品种(系)表现一致的抗病或感病反应。本方法所获鉴定结果稳定可靠,利用注射器接种可以极大地提高工作效率
,建议作为我国鉴定大豆种质资源对大豆疫霉根腐病抗病性的基本方法。关键词 大豆 大豆疫霉菌 胚轴伤口接种 抗病性鉴定
由大豆疫霉菌(
Phytophthorasojae)引起的大豆疫霉根腐病是严重影响大豆生产的破坏性病害之一
,
该病于
1948年首先发生于美国的印第安纳州
,目前已分布于世界各主要大豆生产区[1]
。
1989年沈崇尧
和苏彦纯在我国黑龙江、吉林和北京从大豆罹病植株上首次分离到大豆疫霉菌[2]
。随后
,其他一些研究
者也相继在黑龙江的许多地区分离到该菌并发现病原菌存在致病力分化[3～5]
。朱振东和王晓鸣将其分
离的大豆疫霉菌分离物鉴定为
1号生理小种[6]
。大豆疫霉菌已成为影响黑龙江大豆生产的重要病原菌
之一[4]
。大豆对大豆疫霉菌的抗性由显性单基因控制
,种植抗病品种是防治大豆疫霉根腐病的主要方
法[1]
。因此
,鉴定大豆疫霉根腐病发生区主要栽培大豆品种的抗病性
,筛选直接用于生产的抗病品种是
控制病害发生和蔓延的有效途径
;同时迅速开展我国大豆种质资源的抗病性鉴定
,为抗病育种提供丰富
抗原
,加速抗病育种的进展。本文对下胚轴伤口接种鉴定大豆对大豆疫霉根腐病抗病性的方法进行评
价
,为建立我国统一的对该病抗病性鉴定方法提供参考。
1 供试材料
供试大豆疫霉菌为
41-1菌株
,从黑龙江农科院合江地区农科所试验田罹病大豆植株上分离获得
,
已鉴定为
1号生理小种[6]
。菌株用稀释
V8培养基保存和培养。
2020年湖南省玉米引种品种抗病性鉴定报告
2020年湖南省玉米引种品种抗病性鉴定报告
根据2017年湖南省农业委员会《湖南省主要农作物品种引种备案实施办法》（湘农发〔2017〕48号）有关规定，湖南省作物学会组织湖南省玉米工程技术研究中心、湖南省植物病理学会联合进行玉米引种品种抗病性鉴定。2020年试验结果总结如下：
一、品种名称及来源
序号 品种名称 送种单位 序号 品种名称 送种单位
1 高玉132 小春农业科技有限公司 30 河玉397 湖南省区试品种
2 陵玉13 小春农业科技有限公司 31 福单7号 湖南省区试品种
3 新中玉161 湖南神农大丰种业科技公司 32 鸿玉3226 湖南省区试品种
4 正大561 云南正大种子有限公司 33 金玉6546 湖南省区试品种
5 盛谷1号 云南正大种子有限公司 34 亚华玉1号 湖南省区试品种
6 盛谷2号 云南正大种子有限公司 35 BN21 湖南省区试品种
7 白甜糯B9 仲衍种业股份有限公司 36 先玉1995 湖南省区试品种
8 川玉糯7号 仲衍种业股份有限公司 37 湘农玉36号 湖南省区试品种
9 仲彩糯401 仲衍种业股份有限公司 38 福玉19 湖南省区试品种
10 金仲甜001 仲衍种业股份有限公司 39 创世519 湖南省区试品种
11 创世90 四川创世嘉农业科技有限公司 40 沣玉5号 湖南省区试品种
12 劲单3号 重庆中一种业有限公司 41 先玉1891 湖南省区试品种
13 劲单9号 重庆中一种业有限公司 42 州玉9号 湖南省区试品种
14 杰甜糯2号 四川云海农业科技有限公司 43 黔9018 湖南省区试品种
15 农科大8号 四川云海农业科技有限公司 44 亚华玉2号 湖南省区试品种
16 明科玉8号 重庆大爱种业有限公司 45 沣玉4号 湖南省区试品种
17 晶玉111 重庆大爱种业有限公司 46 先玉1990 湖南省区试品种
18 恒禾2号 山西潞玉种业玉米科学研究院 47 荟玉2186 湖南省区试品种
河北省小麦主栽品种对茎基腐病抗性鉴定及评价指标相关性分析
河北省小麦主栽品种对茎基腐病抗性鉴定及评价指标相关性分析
作者：吴玉星 韩森 王亚娇 张巧丽 高建海 栗秋生 孔令晓
来源：《植物保护》2023年第06期
关键词：小麦品种；茎基腐病；假禾谷镰刀菌；抗性评价
由假禾谷镰刀菌引起的小麦茎基腐病也称小麦冠腐病（Fusariumcrown rot，FCR），是小麦生产中重要的土传病害，可导致小麦根茎基部变褐腐烂，是小麦生产重要的限制因素之一。该病在澳大利亚、美国、加拿大等国家均有发生，正常年份造成产量损失约10%，大流行年份可达35%。并且由于全球气候变暖、耕作制度的变革、缺乏高效持久药剂等因素，病害发生呈逐渐加重趋势。该病自2012年在我国首次报道以来，发病面积和严重度急剧增加，河北省发病严重地块白穗率达到20%～50%。 抗性品种应用是病害管理的重要环节，但对于小麦茎基腐病，生产上鲜有免疫或高抗的小麦品种，感病或高感品种占80%以上。稳定、高效的抗性鉴定方法是抗性育种和基因挖掘的基本前提，而抗性评价指标的选择可影响评价的准确性，田间抗性评价易受环境因子和作物生长发育状态影响，而温室评价方法存在与田间抗性水平相关性并不显著的现象，因此，用多种抗性评价方法和指标进行综合评价，有利于筛选优质抗性资源。通过苗期及成株期抗性评价，先后筛选出了‘Surico’‘CSCR6’‘EGAWylie'翻山小麦“宁麦9号’等表现中抗的种质材料。研究者在对黄淮麦区236份小麦品种（系）的抗性评价中，发现多数材料在苗期感病或高度感病；筛选出‘矮抗58’和‘郑麦7698’可分别作为感病和中抗对照品种，苗期和成株期抗性水平无显著相关性。金京京等对我国670份小麦品种（系）进行温室苗期抗性鉴定，发现感病材料（病情指数>30）所占百分比达到84%，且包含多个近年来小麦生产中的主推品种；发掘获得15份抗病表现稳定、抗性水平与抗病对照‘Sunco’相仿的材料，病情指数在10.9～19.4之间，其株高、抽穗期等农艺性状表现出较为丰富的变异，可为小麦抗茎基腐病品种选育提供种质资源。
抗病育种的步骤和方法如下
抗病育种的步骤和方法如下
一、抗源的选择
广泛授集育种原始材料，从中筛选具有能抗某种或者某几种，或者抗某一病害的不一致生理小种的亲本作为抗源，这是选育抗病品种的最为重要的物质基础。抗病基因的要紧供体之一是作物的近缘野生植物，目前育成的各类作物的抗病品种，大都是将野生近缘植物的抗病基因（或者其衍生种）导入新品种而育成的。通常说来，作物初生基因中心或者多样性中心，即寄主、寄生物的共同发源地，寄主的抗病类型与病菌的毒性类型，往往最为复杂多样。比如美国在土耳其南部授集到一个小麦标本（编号PI178383），能抗条锈病4个生理小种，腥黑穗病的35个与矮腥黑穗病的10个生理小种。菲律宾国际水稻研究所在6723个原始材料中筛选抗草丛矮缩病的抗源，结果从印度的一个野生稻（O. nivara）中找到了抗源。苏联在墨西哥野生棉种中找到了抗棉花黄萎病的抗源，并育成了抗病品种塔什干1号、3号。
其次，选用抗源时，务必熟悉本地区本作物要紧病害病菌类型及要紧生理小种的构成、抗源的抗谱大小。如1963年因出现条中13、16号小种，使南大2419小麦失去抗性；1972年出现新小种条中18、19号，使阿勃、丰产3号小麦失去抗性。据研究，抗源的抗谱与抗性持久性有关系。比如抗条锈品种尤皮Ⅱ，抗10个小种，对1个小种感病，维持抗性18年；丰产3号对7个小种免疫，5个小种抗，2个小种感，维持抗性9年；北京8号对1个小种免疫，2个小种抗，6个小种感病，维持抗性4年。
选育抗病品种，利用野生近缘植物或者古老的地方品种，往往会带来若干不易克服的缺点，因此通常以利用其衍生种作抗源比较好。比如，用“高加索”作为抗白粉病亲本，高加索的抗源来自德国品种牛朱特（牛朱特与无芒4号杂交，再与无芒1号回交育成高加索），而牛朱特的抗源来自黑麦，抗源也可用人工诱变方法自行制造。
务必指出，抗源单一化，实质上就是品种单一化，容易使新品种失去抗性。因此务必广泛授集抗源。
广西玉米自交系纹枯病抗病性鉴定
作物杂志Ｃｒｏｐｓ
李石初 唐照磊 张培坤
摘要２００３年秋至２００５年夏连续２年对广
西２２３份玉米自交系进行多年多重复的田间纹枯病
抗病性鉴定。接种鉴定方法：将玉米纹枯病分离菌
在大麦粒上扩繁，于玉米拔节期进行田间接种，采用
国际玉米小麦改良中心（ＣＩＭＭＹＴ）的病害分级评定
方法进行鉴定。结果表明：玉米自交系间的抗感性
存在差异，同一自交系在同年度内春播与秋播鉴定
中抗病性表现存在明显差异。在２２３份材料中未发
现免疫类型，高抗自交系占所鉴定总数的１．３％、抗
病的占１４．４％、中抗水平占６．３％、感病占２．２％、高
感占７５．８％
关键词 玉米自交系；纹枯病；抗病性鉴定
玉米纹枯病是一种由立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ
ｓｏｌａｎｉ ｋｕｈｎ）侵染所致的土传病害，它不仅危害玉
米，也危害水稻、小麦¨Ｊ。１９６６年我国吉林省有发
生玉米纹枯病的记载，之后，全国许多省份陆续有发
生的报道。近年来，玉米纹枯病的发生日趋严重，尤
其是在雨水较多、气温较高的南方地区，已上升成为
玉米生产的一种重要病害 ，引起国际玉米小麦改
良中心科学家的重视。在广西一般田块病株率在
２０％一３０％，严重的可达１００％，甚至全株枯死，果
穗腐烂 ｊ，给玉米生产造成很大损失，严重影响广
李石初，副研究员，广西玉米研究所，５３０２２７，广西南宁明阳 唐照磊，张培坤，通讯地址同第１作者 基金项目：广西科学基金项目（桂科青０３３９０２８） 收稿日期：２００５—０９—０２；修回日期：２００５—１１—２５
３ 结论
田间试验结果表明：金斧种衣剂对绿豆苗期根
腐病有良好的防治效果，增产作用明显。金斧种衣
剂药种重量比１：８０和１：１００包衣处理防病效果最
好，分别为８７．６％和８３．２％。金斧种衣剂药种重量
比１：８０和１：１００包衣处理增产效果分别达１５．５％
和１２．６％。从降低应用成本和效果两因素考虑，生 西玉米生产的发展。玉米抗病育种的经验和实践均