胶乳透射免疫比浊法
浅谈免疫比浊法技术优势
结果一致， 有很好的相关性和重复性， 胶乳增强免疫
的灵敏度高出两倍。但另一方面， 免疫透射比浊法 。
透射比浊法检测的灵敏度高、 线性范围广、 结果稳 定、 操作简单、 抗干扰能力强、 速度快、 适合各种有全 自动生化分析仪的医院， 完全符合实验室常规检测 的要求。因此， 免疫透射比浊法比免疫散射比浊法 在临床实验室的应用中， 更具有广泛的应用价值与 圆愿苑员
检验领域普遍使用。人们传统地认为散射比浊法要 比透射比浊法更灵敏， 准确度高， 包括许多教科书也 测定法， 即免疫透射比浊测定和免疫散射比浊
［ 员］
这样述说。圆园 世纪 苑园 年代起出现了微量免疫沉淀 此免疫比浊测定逐渐被广泛应用于临床体液中蛋白
， 自
质含量检测的领域。近几年来， 免疫透射比浊测定 技术被广泛使用在全自动生化分析仪上， 实现高速、 灵敏和自动化。 一束光线通过有悬浮质点的胶体溶液时， 会产 生丁铎尔现象， 这是胶体粒子散射光的结果。粒子 被光照射后而发光， 同时受到散射和吸收两个因素 万方数据 圆愿苑园
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摇 摇 比浊法也称浊度法， 属于散射光谱分析， 是在比 许多方面和比色法相似， 但本质上又有区别
糟造怎泽蚤燥灶泽：蚤皂皂怎灶燥贼怎则遭蚤凿蚤皂藻贼则蚤糟 皂藻贼澡燥凿 蚤皂皂怎灶藻 灶藻责澡藻造燥皂藻贼则赠 澡葬泽 皂葬灶赠 葬凿增葬灶贼葬早藻泽援 月怎贼 贼澡藻 贼怎则遭蚤凿蚤皂藻贼则蚤糟 蚤皂皂怎灶燥葬泽泽葬赠 皂藻贼澡燥凿 澡葬泽 葬 灶蚤择怎藻 遭藻糟燥皂藻泽 澡藻贼藻则燥早藻灶藻燥怎泽 则藻葬糟贼蚤燥灶 蚤泽 澡燥皂燥早藻灶藻燥怎泽 则藻葬糟贼蚤燥灶，早则藻葬贼造赠 蚤皂责则燥增藻泽 贼澡藻 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠，憎澡蚤糟澡 皂葬噪藻泽 贼澡藻 贼藻糟澡灶蚤择怎藻 澡葬泽 遭藻贼贼藻则 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 葬凿增葬灶贼葬早藻援 【 运藻赠 憎燥则凿泽】 栽澡藻 蚤皂皂怎灶蚤贼赠 贼则葬灶泽皂蚤泽泽蚤增蚤贼赠 贼怎则遭蚤凿蚤皂藻贼则蚤糟；栽澡藻 蚤皂皂怎灶蚤贼赠 泽糟葬贼贼藻则蚤灶早 贼怎则遭蚤凿蚤皂藻贼则蚤糟； 杂怎责藻则蚤燥则蚤贼赠 造燥憎藻则 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 蚤泽泽怎藻，贼燥 凿藻增藻造燥责 造葬贼藻曾 藻灶澡葬灶糟藻凿 贼藻糟澡灶燥造燥早赠，葬灶贼蚤早藻灶 葬灶贼蚤遭燥凿赠 遭蚤灶凿蚤灶早 糟燥葬糟藻则增葬贼蚤燥灶 则藻葬糟贼蚤燥灶（ 圆 ） ，贼澡蚤泽 贼藻糟澡鄄
一种胶乳增强免疫比浊试剂、稳定方法及应用与流程
一种胶乳增强免疫比浊试剂、稳定方法及应用与流程1胶乳增强免疫比浊试剂的介绍胶乳增强免疫比浊试剂是一种常用于免疫学实验中的试剂，它可以被用来检测特定抗原或抗体的存在，尤其是在生物医学和生命科学领域中应用广泛。
该试剂由胶体金、珠光体、荧光素、光散射物等成分组成，能够通过增强散射和吸收等光学效应，从而提高检测的灵敏度和可信度，并且还能够保证试剂稳定性和可重复性。
2胶乳增强免疫比浊试剂的稳定方法为了保证胶乳增强免疫比浊试剂的稳定性，通常采用以下方法：2.1抑制氧化反应某些成分在氧化反应的作用下会失去活性，因此可采用添加还原剂来抑制氧化反应。
通常使用亚硫酸钠、硫代硫酸钠等还原剂，可以有效地抑制氧化反应。
2.2控制温度和光照温度和光照会对试剂的稳定性产生影响，因此需要控制环境温度和光照强度。
通常把试剂置于暗处或遮光袋中，避免直接照射光线。
2.3添加保护剂添加保护剂能够保护试剂免受外界环境的影响，一些常用的保护剂有甘露醇、丙二醇、山梨醇等。
这些保护剂能够减轻试剂在储存和运输过程中受到的压力，从而延长试剂的使用寿命。
3胶乳增强免疫比浊试剂的应用流程胶乳增强免疫比浊试剂的应用流程包括以下几个步骤：3.1试剂前处理使用前，需要将胶乳增强免疫比浊试剂离心，将沉淀物均匀悬浮于试剂中。
3.2样品处理制备样品液，通常需要对样品进行稀释、加热、离心等操作，以获得更加准确的测量结果。
3.3加试剂将胶乳增强免疫比浊试剂加入样品中，混合均匀后进行孵育。
3.4测量结果测量反应产物的比浊度、荧光强度等参数，并进行数据分析和结果判定。
4胶乳增强免疫比浊试剂的应用胶乳增强免疫比浊试剂的应用范围非常广泛，通常用于以下方面：4.1检测抗体和抗原胶乳增强免疫比浊试剂可以用于检测特定抗体或抗原的存在，常常被应用于医学诊断、生物工程等领域。
4.2生化分析胶乳增强免疫比浊试剂能够用于测定肽、多肽、蛋白质、脂质等生化物质的存在和浓度。
4.3分子识别胶乳增强免疫比浊试剂可以用于基因测序和DNA分析等领域，为了识别特定的分子，可以在试剂中加入标记物质并进行检测。
沉淀反应、免疫电泳
一.液体内沉淀试验
（一）絮状沉淀反应
(flocculation)
抗原、抗体特异性结合，在电解质存 在的情况下出现肉眼可见的絮状/块状 沉淀
既可在试管内进行，也可在玻片上进行。 用于：玻片法常用于定性测定
试管法:半定量测定
在沉淀反应前，应测试抗原、抗体间最适 比例，方法有抗原稀释法、抗体稀释法、 方阵滴定等。
增浊剂（促聚剂）：PEG、Tween-20可促进
IC快速形成
免疫比浊方法分类
透射免疫比浊 散射免疫比浊 胶乳免疫比浊
1. 透射免疫比浊法
原理： 缓冲液中，先加入已知过量Ab， 然后加入待测Ag，AgAb复合物的量随Ag 量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增 加，与一系列标准品对照，即可算出未知 Ag含量。
本法不易选择适用的乳胶，同时Ab与胶 乳结合也困难。
二.凝胶内沉淀试验
在凝胶介质（琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶） 中进行的沉淀反应
原理
可溶性抗原与相应抗体在电解质 存在下，在琼脂基质中扩散，当两者 相遇，比例恰当时结合，可出现肉眼 可见的沉淀线/沉淀环。
（一）双向琼脂扩散试验
（简称 双扩
double immunodiffusion)
方法：
已知定量Ab+琼脂混合，制板 在玻板一端打孔、加梯度Ag
电泳
根据所知样品梯度含量绘制标准曲线
查出待测样品含量
-
+
1
2
3 4
5
待测
火箭免疫电泳
优点与用途：
与单扩相同，已知Ab定量检测Ag （IgG/IgA/IgM），时间短，敏感度高（ng/ml）。
（三）免疫电泳 （immunoelectrophoresis)
【优利特】链球菌溶血素O的基因克隆、原核表达及在胶乳增强透射比浊法测ASO试剂盒的开发应用
【优利特】链球菌溶血素O的基因克隆、原核表达及在胶乳增强透射比浊法测ASO试剂盒的开发应用链球菌溶血素O的基因克隆、原核表达及在胶乳增强透射比浊法测ASO试剂盒的开发应用摘要目的：以乙型溶血性链球菌A群菌株总DNA为模板，通过PCR 扩增得到链球菌溶血素O （SLO）基因片段，与表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3)进行可溶性表达，目的蛋白纯化后用于胶乳增强透射比浊法测ASO试剂盒的开发应用。
结果：SDS-PAGE分析表明SLO能够在大肠杆菌中进行可溶性表达，纯化后的重组SLO蛋白纯度﹥95%。
Western Blot检测显示重组SLO能与ASO高值血清有特异的免疫反应。
纯化后的重组SLO包被本公司生产的胶乳颗粒制成ASO胶乳增强透射比浊试剂盒，并与市售同类试剂上BeckmanAU480自动生化分析仪做41份临床血清标本检测比对，结果显示两者之间有良好的相关性。
结论：成功构建了稳定、高效可溶性表达重组SLO蛋白的基因工程菌株，工程菌表达的重组SLO能用于胶乳增强透射比浊法测ASO试剂盒的开发。
关键词：链球菌溶血素O；原核表达；胶乳增强透射比浊；ASO 链球菌溶血素O （SLO）是由一种化脓性球菌分泌的蛋白，它可刺激人体产生SLO抗体（ASO）[1]。
SLO属于-SH基激活的细菌性毒素之一，对心脏有急性骤停作用[2]，抗原性强，85%-95%链球菌感染的患者，感染后2-3周至病愈后数月甚至一年内均可检出ASO，临床上常测定ASO作为链球菌感染引起的扁桃体炎、急性肾小球肾炎、活动性风湿热、风湿性心肌炎、皮肤及软组织等的感染诊断和监控[3,4]。
因此ASO是临床检测的常规项目。
ASO体外诊断试剂盒的主要成分是SLO抗原，利用基因工程技术构建稳定、高效可溶性表达高活性SLO的工程菌便可以为试剂盒的研发大大节约成本。
本研究运用分子生物学技术克隆SLO蛋白的DNA编码序列，采用大肠杆菌对其进行表达，实现了SLO重组蛋白在大肠杆菌表达系统中的可溶性表达。
临床医学检验主管技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第二十章 免疫检验自动化仪器分析讲义
第二十章免疫检验自动化仪器分析第一节自动化免疫浊度分析系统免疫浊度分析属液相沉淀试验，其基本原理是抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（＜19S），在增浊剂（如PEG 、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（＞19S），使反应液出现浊度。
根据检测器的位置及其所检测的光信号性质不同，免疫浊度分析可分为免疫透射比浊法（turbi-dimetry）和免疫散射比浊法（nephelometry）。
一、免疫透射比浊法（一）原理可溶性抗原抗体反应后形成的免疫复合物，使介质浊度发生改变，光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收，在保持抗体过量的情况下，吸光度（A值）与免疫复合物量呈正相关。
与已知浓度的抗原标准品相比较，可确定标本中抗原的含量。
（二）仪器工作过程1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。
2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。
3.按方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。
（三）方法评价透射比浊法灵敏度比单扩法高5～10倍，CV小于10%，操作简便，结果准确，且能用全自动或半全自动生化分析仪进行检测，常用于生化指标的测定。
本法的不足在于：①抗体用量较大②灵敏度较散射比浊法低③耗时较长二、免疫胶乳比浊法用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚。
分散的单个胶乳颗粒直径位于入射光波长之内，不阻碍光线通过，当2个或2个以上胶乳颗粒凝聚时，透射光和散射光即出现显著变化。
抗原-抗体反应后溶液的吸光度或散射光强度与待测抗原浓度呈正相关。
采用透射比浊法或散射比浊法测定。
（二）方法评价本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng／L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子（RF）可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F（ab’）2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。
胰岛素测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求lepu
胰岛素测定试剂盒(胶乳免疫比浊法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中胰岛素的含量。
1.1规格试剂1: 1×50mL，试剂2: 1×50mL；试剂1: 1×50mL，试剂2: 1×25mL；试剂1: 1×45mL,，试剂2: 1×15mL；试剂1: 1×48mL，试剂2: 1×12mL；试剂1: 1×50mL，试剂2: 1×10mL；试剂1: 1×60mL，试剂2: 1×20mL；试剂1: 1×60mL，试剂2: 1×10mL；试剂1: 2×20mL，试剂2: 2×10mL；试剂1: 1×20mL，试剂2: 1×10mL。
1.2主要组成成分试剂1主要组分：试剂2主要组分：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。
2.2 外观试剂1应为无色或黄色澄清液体，试剂2应为乳白色液体。
外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。
2.3 试剂空白在600nm处测定试剂空白吸光度，应≤1.8；2.4 分析灵敏度测试10μIU/mL的被测物时，吸光度变化（ΔA）应不低于0.0006。
2.5 准确度在样品中加入一定体积的纯品，计算回收率，应介于90%-110%之间。
2.6 重复性批内变异系数（CV）应不超过10％。
2.7 线性2.7.1在[1,100]μIU/mL区间内，线性相关系数r应不低于0.990；2.7.2 [1,12)μIU/mL区间内绝对偏差不超过±1.44μIU/mL；[12,100]uIU/mL 区间内相对偏差超过±12%。
2.8 批间差对同一份样品进行重复测定，相对极差≤12％。
2.9 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
散射免疫比浊法
目
录
第一节 免疫比浊技术原理 第二节 自动化免疫比浊分析
第三节 小结
第一节
免疫比浊技术原理
免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
一、透射免疫比浊法
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
（二）技术要求
速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓度及 纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试 剂。此外，要保证待测样本血清的性状符合要求， 如严重脂血等即为不合格样本。
（三）方法学评也小，因此结果稳定、可靠， 特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器 设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪 或散射比浊仪均可使用。
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第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
（三）方法学评价
该法具有快速、敏感度及精密度高的特点， 其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体 达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测 标本数十份；敏感度高，最小检出量达微克/ 升水平。
四、免疫胶乳比浊法
（一）基本原理 将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时， 发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗
抗原抗体反应曲线
二、散射免疫比浊法
（一）基本原理
散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，
免疫比浊检验技术原理与进展
新型免疫比浊法研究动态
纳米颗粒增强免疫比浊法
01
利用纳米颗粒的高比表面积和光学性质，提高抗原抗体复合物
的浊度变化，从而提高检测灵敏度。
均相免疫比浊法
02
在反应体系中直接加入抗原抗体复合物，通过浊度变化检测待
测物，无需分离步骤，简化实验操作。
多重免疫比浊法
03
同时检测多个目标物，提高检测通量和效率，满足临床多样化
需求。
存在问题与挑战分析
抗原抗体复合物稳定性
复合物在反应体系中的稳定性直接影响浊度变化的准确性和可重复性，需要优化复合物制备和保 存条件。
非特异性干扰
血清等样本中的非特异性物质可能干扰免疫比浊反应，导致结果误差，需要采取相应措施降低干 扰。
自动化与标准化
当前免疫比浊法操作仍较为繁琐，需要进一步提高自动化程度，同时推动标准化进程，以确保结 果的准确性和可比性。
肿瘤标志物检测中的应用
01
肝癌
通过检测甲胎蛋白（AFP）等肿 瘤标志物，可辅助诊断肝癌及判 断其预后。
卵巢癌
02
03
前列腺癌
免疫比浊法可检测癌抗原125 （CA125），用于卵巢癌的诊断 和病情监测。
通过检测前列腺特异性抗原 （PSA），有助于前列腺癌的早 期发现和诊断。
05 免疫比浊法研究进展及挑 战
探讨了免疫比浊检验技术在临床实验室中的应用，如特定蛋白的 测定、药物监测等，并强调了质量控制的重要性和实施方法。
对未来发展趋势的展望
自动化与智能化
多项目联合检测
随着科技的进步，未来免疫比浊检验技术 将更加自动化和智能化，提高检测效率和 准确性。
开发能够同时检测多个项目的免疫比浊试 剂盒，以满足临床实验室对于高通量、高 效率的检测需求。
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附件5胱抑素C 测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C 测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。
本指导原则是对胱抑素C 测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。
应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围胱抑素C 测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C 进行体外定量分析的试剂。
目前胱抑素C 含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、单向免疫扩散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等，免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。
其中透射免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、全自动生化分析仪，散射免疫比浊法需特定蛋白分析仪。
从方法学上讲，本指导原则仅适用于胶乳透射免疫比浊法, 不适用于散射免疫比浊法。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5 号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242 号），胱抑素C 测定试剂（免疫比浊法）管理类别为二类，分类代号为6840。
二、注册申报资料要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5 号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014 年第44 号）的相关要求。
相关描述应至少包含如下内容：1. 产品预期用途及辅助诊断的临床适应证背景情况（1）胱抑素 C 的生物学特征、结构与功能、在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。
胱抑素C（Cystatin C, CysC ）是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为Y—微量蛋白及—后球蛋白，广泛存在于各种组织的—— 2 —有核细胞和体液中，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD ，由122 个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。
循环血液中的Cys C 能自由透过肾小球，在近曲小管几乎全部被上皮细胞摄取并分解，尿中仅微量排出。
Cys C 水平不受性别、年龄、饮食等因素的影响，是一种反映肾小球滤过率（GFR ）变化的理想内源性标志物。
当肾功能受损时，Cys C 在血液中的浓度随肾小球滤过率变化而变化。
肾衰时，肾小球滤过率下降，Cys C 在血液中浓度可增加数倍甚至十数倍。
（2）与预期用途相关的临床适应证背景情况，如临床相关疾病的发生、实验室诊断方法等。
肾小球滤过率（GFR）的评估在肾功能的监测方面具有重要意义。
注：若注册申报产品声称临床意义超出此内容范围，应提供相关文献或临床研究依据。
CysC 分子量较小，其测定方法主要基于免疫反应原理。
随着CysC 在临床上的应用，检测它的方法也越来越多，按照原理大体上可分为二类：一类是非均相法如单向免疫扩散法（RID）、放射免疫测定法（RIA ）、荧光免疫测定法（FIA ）、酶联免疫测定法（ELISA ）；另一类是均相法如颗粒计数免疫测定法，颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA ），颗粒增强散射免疫比浊法（PENIT ）。
非均相法难于自动化，限制了CysC 的临床推广应用，胶乳免疫测定是一种均相测定方法，在胶乳颗粒上包被抗体，与抗原结合时颗粒发生凝集，此方法易于自动化，已被广泛应用于临床。
2. 产品描述包括产品所采用的技术原理、主要原材料的来源、质量控制及制备方法、主要生产工艺过程及关键控制点，质控品、校准品的制备方法及溯源情况。
3. 有关生物安全性方面的说明如果体外诊断试剂中的主要原材料采用各种动物、病原体、人源的组织和体液等生物材料经处理或添加某些物质制备而成，为保证产品在运输、使用过程中对使用者和环境的安全，研究者应提供上述原材料有关生物安全性的说明。
4. 有关产品主要研究结果的总结和评价5. 参考文献6. 其他包括同类产品在国内外批准上市的情况，相关产品所采用的技术方法及临床应用情况，申请注册产品与国内外同类产品的异同等。
（二）主要原材料的研究资料（如需提供）主要原材料的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；质控品（如产品包含）、校准品（如产品包含）的原料选择、制备、定值过程及试验资料；校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。
（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供）产品的主要生产工艺可以用流程图表示，明确关键工序和特殊工序，并简单说明控制方法。
确定反应温度、时间、缓冲体系等的研究资料、确定样本和试剂（盒）组分加样量的研究资料。
不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。
—— 4 —（四）分析性能评估资料申请人应提交产品研制阶段对三批试剂进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、实验数据、统计方法、可接受标准、研究结论等详细资料。
性能评估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作为一个整体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。
有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验地点、适用仪器、试剂规格和批号、所选用的校准品和质控品、临床样本来源等。
性能评估应至少包括空白吸光度、分析灵敏度、精密度、准确度、线性、分析特异性（抗干扰能力）等。
1. 试剂空白吸光度用生理盐水作为样本重复测定2 次，记录试剂参数规定读数点主波长下的吸光度值（A ），结果均值应符合产品技术要求性能指标的要求。
2. 分析灵敏度测定已知浓度在（1.00±0.10）mg/L 的样本，记录试剂规定参数的吸光度差值。
换算为1.00mg/L 的胱抑素C 的吸光度差值，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
3. 准确度建议按如下优先顺序，同时结合申请人实际情况，采用如下方法之一对试剂准确度进行评价。
（1）相对偏差根据生产企业提供的试剂线性区间，将可用于评价常规方法的参考物质作为样本，按照待测试剂说明书的步骤进行检测，每个样品重复测定 3 次，测试结果记为( Mi )，按公式( 1)分别计算相对偏差( Bi )，如果3 次结果都符合产品技术要求性能指标的要求，即判为合格。
如果大于等于2 次的结果不符合，即判为不合格。
如果有2 次结果符合，1 次结果不符合要求，则应重新连续测试20 次，并分别按照公式( 1)计算相对偏差，如果大于等于19 次测试的结果符合产品技术要求性能指标的要求，即判为合格，准确度符合产品技术要求性能指标的要求。
Bi= ( Mi-T ) /T X100% (1)式中：Bi —相对偏差；Mi —测量浓度；T —参考物质标示值。
( 2)回收试验在人源样品中加入一定体积由具有溯源性的参考物质配制的标准溶液(标准溶液体积与人源性样品体积比应不会产生基质的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂检测线性区间内)或纯品，每个浓度重复检测3 次，按公式( 2 )计算回收率，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
R=[C X(V o+V) - C oWo) ] / (V XC s)X1OO% (2)式中：R —回收率；V —加入标准溶液的体积；V o —人源样品的体积；C —人源样品加入标准溶液后的检测浓度；C o —人源样品的检测浓度；C s —标准溶液的浓度。
—— 6 —（3）方法学比对参照EP9—A2的方法，用不少于40个在检测浓度范围内不同浓度的人源样品，以生产企业指定的已上市分析系统作为比对方法，每份样品按待测试剂操作方法及比对方法分别检测。
用线性回归方法计算两组结果的相关系数（r）及医学参考水平的相对偏差，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
在实施方法学比对前，确认两者都分别符合各自相关的质量标准或技术要求后方可进行比对试验。
方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。
4. 精密度测量精密度的评估方法包括重复性和批间差试验，应至少包括两个浓度水平的样本，其中一个样本浓度应在（ 1.00 ±0.10）mg/L样本范围内，另一个样本应为异常高值样本。
（1）重复性在重复性条件下，对不同浓度的样品分别重复测定10次，计算10次测定结果的平均值（X）和标准差（SD），根据公式（3）得出变异系数（CV ），结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。
CV=SD/ X X100% （3）式中：CV —变异系数；SD —10次测量结果的标准差；X—10次测量结果的平均值。
（2）批间差分别用三个不同批号试剂，对不同浓度的样品，分别重复测(4) (5)(6)定3次，计算每个浓度样本每批号 3次测量结果的平均值（X i , i=1、2、3）,根据公式（4）、公式（5）计算批间相对极差（R ）, 结果均应符合产品技术要求相应性能指标的要求。
X i X 2 X 3X T = 3 R= （ X max - X min ） Z ^OO%式中：R —批间相对极差；X max — X i 的最大值，i=1、2、3； X min — X i的最小值，i=1、2、3；X T —三批测量结果的总平均值。
5. 线性取接近测定范围上限的高值（ H ）和接近下限的低值（L ） 样本各一份，混合成至少 6个稀释浓度的样本（xj ,充分混匀， 防止蒸发或其他改变。
用试剂（盒）分别测试各稀释浓度 3次， 然后分别计算每个稀释浓度检测结果的均值（ y i ）,以X i 为自变 量，以y i 为因变量求出线性回归方程，按公式（ 6）计算线性回 归的相关系数（r ）；同时将X i 代入线性回归方程， 计算y i 的估计 值（y ie ），根据公式（7）和（8）计算线性绝对偏差或相对偏差（R i ），结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。
' [(x i - x)(y i - y)]/ % - x )2' (y i - y)2 绝对偏差=检测结果均值（yj -估计值（y ie ）（7）R厂y i -y ie 100%y ie建立试剂线性所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。