生活饮用水中微囊藻毒素的测定方法—液相色谱串联质谱联用法编制说明
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《生活饮用水5种微囊藻毒素的测定方法—液相色谱串联质谱联用法》
（送审稿）
编制说明
《生活饮用水中微囊藻毒素的测定方法》标准编制组
二O一二年五月
《生活饮用水中5种微囊藻毒素的测定方法—液相色谱串联质谱联用法》编制说明
1 编制依据
本检测方法的制订是中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、深圳市疾病预防控制中心受卫生部卫生政策法规司/卫生标准专业委员会/环境卫生标准委员会委托，对现行《生活饮用水卫生检验标准方法-毒素指标》(GB/T 5750-2006)中5种微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR、LW、LF）测定方法进行修订
本课题于2011年初立项，经过查阅文献、实验方案设计、条件选择实验、方法学各项指标的实验研究、现场及实验室验证、实验数据汇总，至标准方法送审稿形成，历经1年时间，于2012年2月完成。
2 起草单位及主要起草人
起草单位：深圳市疾病预防控制中心、珠海市疾病预防控制中心、深圳市水质检测中心、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。
主要起草人：刘红河、刘桂华、朱舟、陈剑刚、宗栋良、岳振峰。 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.
2文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 3 背景及标准概况
水是生命之源，健康之本，饮用水水质的安全与卫生是人类健康最基本的保障。在我国，由于环境污染的不断恶化，内陆河湖地区普遍存在藻类污染，其中蓝绿藻属中的一类微囊藻，能够在水中分解出微囊藻毒素（microcystin，简称MC）。
MC是一类具有强烈促癌作用的天然肝毒素，大量研究表明，MC能抑制磷酸（酯）酶活性，形成活性氧，干扰细胞骨架的组成，引发细胞凋亡、肝出血、肝肿瘤。其结构变化很多，但都有一个共同的单环肽毒素结构，含有共同的分子成分：3-氨-9-甲氧基-2, 6, 8-三甲基-10-苯基- 4, 6-二烯酸（Adda），Adda是一个关键的毒性成分。在MC已发现的60多种异构体中，MC-LR、MC-YR、MC-RR分布很广泛, 其中MC-LR 在世界上分布最为广泛。MC性质稳定，其在水中的溶解度大于1 g/L，也溶于甲醇和丙酮，煮沸后不失活，不挥发，抗pH变化。
微囊藻毒素对生物体的损害主要表现为肝脏毒性和神经毒性，对肾、肾上腺、肺及胃等也有不同程度的损伤。有调查研究表明：在某湖泊周围的3个自来水厂的出厂水中都检出低浓度的微囊藻毒素（0.013-0.14 mg/L）。1995年在加拿大Manitoba地区的调查表明：当地城市供水以及日常用的池溏水经处理后仍有68%可检出微囊藻毒素，因此，自来水常规处理工艺（混凝沉淀、过滤、消毒）无法有效去除水中的MC，从而通过饮水摄入危害人类的健康。
目前还没有足够的实验数据来确定微囊藻毒素总量的最高容许浓度，因此，现阶段还没有强制性的饮用水中藻毒素含量的卫生标准。而各国已有饮水中的藻毒素含量标准一般都为MC-LR的含量。世界卫生组织（WHO）推荐的饮水中藻毒素标准为MC-LR 0.001 mg/L。加拿大健康组织规定饮水中可接受的藻毒素标准为0.0005 mg/L（MC-LR），澳大利亚学者建议将0.001 mg/L的含量（MC-LR）作为安全饮用水的上限。我国《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）及《地表水环境质量标准》（GB 3838-2002）中均将MC-LR的标准限值定为0.001 mg/L（参照WHO标准）。
鉴于上述微囊藻毒素在我国水体中存在的普遍性及其毒性危害，有必要建立灵敏、快速、准确的标准检测方法。建立饮用水及其水源水中5种微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR、LW、LF）的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）分析法，能够为卫生监督部门提供更有效的监督手段，完善我国水质标准检测方法。
本项目研究方法具有灵敏、快速、准确及实现多种有害物质同时测定等特点，可极大地提高工作效率，拓展监督覆盖面，有较好的经济效益；在有效预防和控制肝脏疾病、保障人类身文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.
3文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 体健康方面，有较大的社会效益。
4 确定本方法内容的依据
《美国水和废水标准检测方法》（第20版，1999年）没有规定微囊藻毒素的检测方法，美国环境保护署（USEPA）的水质检测方法中也未涉及微囊藻毒素；我国卫生部发布的《生活饮用水标准检验方法》（GB/T 5750.8-2006）中规定采用高压液相色谱法配二极管阵列检测器来检测饮用水及其水源水中的微囊藻毒素（MC-LR、RR）；我国国家质量监督检验检疫总局发布的国家标准《水中微囊藻毒素的测定》（GB/T 20466-2006）中规定分别采用高效液相色谱法和间接竞争酶联免疫吸附法测定饮用水、湖泊水、河水及地表水中的微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR）。
采用LC/MS/MS定量分析5种微囊藻毒素残留比标准中规定的液相色谱法或酶联免疫法更有优势， LC/MS/MS方法具有更高的灵敏度、选择性和特异性。并且，5种微囊藻毒素现有的标准检验方法中，在水样的前处理时，都需要进行萃取处理，这会造成回收率降低等一系列问题，而LC/MS/MS方法分析时，就不存在这些问题，对于本研究所选择的5种微囊藻毒素，甚至可以将水样直接进样测定。
4.1本方法的原理
本标准采用水样经针式微孔滤膜过滤后直接进样的方法，以液相色谱-质谱/质谱的多反应监测(MRM)进行检测生活饮用水及其水源水中5种微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR、LW、LF），外标法定量。
4.2本方法适用范围
本标准规定了用液相色谱-串联质谱联用法检测生活饮用水及其水源水中5种微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR、LW、LF）。
本方法适用于生活饮用水及其水源水中5种微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR、LW、LF）的测定。
5 实验结果
5.1方法线性范围和相关系数
5种微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR、LW、LF）0.0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 µg/L，相关系数（r）分别为MC-LR 0.9994、MC-RR 0.9999、MC-YR 0.9994、MC-LW 0.9998、MC-LF
1.0000。
5.2方法检出限
5种微囊藻毒素的检出限分别是： MC-LR 0.0016 ng、MC-RR 0.0012 ng、MC-YR 0.0014 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.
4文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. ng、MC-LW 0.0016 ng、MC-LF 0.0016 ng。进样25 µL时，5种微囊藻毒素的定量下限： MC-LR
0.26μg/L、MC-RR 0.20 μg/L、MC-YR 0.23 μg/L、MC-LW 0.26 μg/L、MC-LF 0.25 μg/L。
5.3干扰及消除
微囊藻毒素浓度为2.0 μg/L时，水中可能共存的草甘膦、己内酰胺、邻苯二甲酸酯、莠去津、五氯酚、丙烯酰胺、灭草松、呋喃丹、2,4-滴和甲基对硫磷等多种化合物在浓度均为20.0 μg/L时不干扰微囊藻毒素的测定。
5.4 方法精密度
当5种微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR、LW、LF）的浓度为1.0µg/L，5.0µg/L和20.0 µg/L时，日内重复测定的相对标准偏差在1.17%-4.22%之间；10天内日间重复测定的相对标准偏差在2.08%-4.45%之间。
5.5 方法加标回收率
采用加标回收方法，当5种微囊藻毒素（MC-LR、RR、YR、LW、LF）加入加入浓度分别为1. 0 μg/L、10.0μg/L和20.0 μg/L时，回收率在92.8%-103.3%之间。
5.6 与现行标准方法（GB/T 5750.8-2006）的比较
由于现行国标测定法中微囊藻毒素检测的为MC-LR和RR两种类型，本文仅仅比较MC-LR和RR。当MC-LR和RR浓度均为1.0 μg/L、5.0 μg/L和20.0 μg/L时,本方法与现行饮用水标准检测方法（GB 5750.8-2006）-液相色谱法的结果基本一致，相对标准偏差在1.62%-6.12%之间。
6方法验证报告
6.1主要验证单位
珠海市疾病预防控制中心、深圳市水质检测中心、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。.
6.2验证报告数据汇总
表1 方法检出限、测定下限汇总表
实验室 MC-LR（μg/L） MC-RR（μg/L） MC-YR（μg/L） MC-LW（μg/L） MC-LF（μg/L）
检出限 定量限 检出限 定量限 检出限 定量限 检出限 定量限 检出限 定量限
1* 0.08 0.27 0.06 0.20 0.07 0.23 0.08 0.27 0.08 0.26
2 0.08 0.26 0.06 0.19 0.07 0.23 0.08 0.26 0.08 0.25 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.
5文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 3 0.077 0.25 0.062 0.20 0.069 0.23 0.078 0.26 0.077 0.25
4 0.08 0.25 0.06 0.20 0.07 0.22 0.08 0.25 0.08 0.25
均值 0.08 0.26 0.06 0.20 0.07 0.23 0.08 0.26 0.08 0.25
*注：实验室代码：1 为标准起草单位深圳市疾病预防控制中心，2为珠海市疾病预防控制中心、3为深圳市水质检测中心、实验室4为中华人民共和国深圳出入境检验检疫局，下表同。
表2 精密度测试数据汇总表
MC-LR 实验室 低浓度（RSD%） 中浓度（RSD%） 高浓度（RSD%）
日内 日间 日内 日间 日内 日间
1 4.17 4.45 3.26 4.36 2.25 2.23
2 3.52 4.05 3.01 3.42 1.72 2.89
3 2.92 3.11 2.17 3.66 1.37 2.13
4 3.24 4.11 3.53 3.66 2.87 2.91
MC-RR 1 3.78 4.09 2.35 3.13 1.88 2.57
2 4.01 4.43 3.22 3.02 2.05 2.08
3 4.01 4.53 3.02 3.28 1.17 2.27
4 4.17 4.33 3.35 3.25 3.12 2.66
MC-YR 1 3.33 4.02 2.11 3.56 1.57 3.31
2 3.78 3.31 3.69 3.40 2.15 2.70
3 4.10 3.70 3.64 3.51 2.07 2.22
4 4.10 3.70 3.51 3.07 2.23 3.16
MC-LW 1 4.22 3.78 2.18 3.18 1.92 2.34
液相色谱-质谱法测定水中的微囊藻毒素
２０１１年第９期 东北水利水电 水生态
【文章编号】１００２—０６２４（２０１１）０９—００２５—０３
液相色谱一质谱法测定水中的微囊藻毒素
杨帆，钱宁，戴欣，彭俊
（松辽流域水资源保护局，吉林长春１３００２１）
【摘要］运用液相色谱一离子阱质谱法建立水中微囊藻毒素（ＭＣ—ＬＲ）的多反应监测的检测 方法。采用全自动固相萃取装置富集、浓缩、净化样品。ＭＣ—ＬＲ的定量限为０．０００ ０１ ｍｇ／Ｌ；回 收率为７１％～９１％；在０．０５～０．６０ １１１ｇ／Ｌ范围线性关系良好，相关系数６－）达到０．９９９。离子阱质谱 的多反应监测能有效地降低背景干扰，提高仪器的灵敏度。 ［关键词】液相色谱一质谱法；微囊藻毒素；水；测定 ［中图分类号］ＴＶ２１３．４ ［文献标识码］Ａ
近年来环境污染和富营养化程度不断加剧，
蓝藻水华频繁发生，这已经成为国内外普遍关注
的问题。微囊藻毒素即为水体中蓝藻类如铜绿微
囊藻、鱼腥藻和念珠藻等藻属水华释放一类具有
强烈致癌、具有肝毒性的单环七肽化合物，它的一
般化学结构可表示为：环Ｄ一丙氨酸一Ｌ—ｘ～赤一
Ｂ一甲基一Ｄ一异天冬氨酸一Ｌ—Ｙ—Ａｄｄａ—Ｄ一异谷氨
酸一Ｎ一甲基脱氢丙氨酸。其中Ａｄｄａ是表达ＭＣ活
性的必需基因，其结构改变或被去除，毒素的毒性
都会降低。 ，ｙ为２个可变的Ｌ一氨基酸。由于 ，
ｙ的不同而产生多种异构体，目前已知有６０多种。
其中存在最普遍、含量较多、毒性较大的是ＭＣ—
ＬＲ，ＭＣ一 和ＭＣ—ＹＲ ｆＬ，Ｒ，Ｙ分别代表亮氨
酸、精氨酸和酪氨酸）。
１实验部分
１．１仪器和试剂
Ａｇｉｌｅｎｔ １ ２００ ｓｅｒｉｅｓ——Ａｇｉｌｅｎｔ ６ ３１０ Ｉｏｎ Ｔｒａｐ ＭＳ 液相色谱一离子阱质谱联用仪；Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｅｓ
全自动固相萃取装置；ＩＳＯＬＵＴＥ Ｃ１８（ＥＣ）固相萃
取柱（２００ ｍｇ，３ ｍＬ）；ＯＡ—ＳＹＳＴＭ氮吹装置；电子
生活饮用水标准检验方法18个方法
培训资料
生活饮用水卫生监测
部分水质指标补充检验方法手册
（试行）
国家卫生计生委疾控局
2014年7月
目录
1 生活饮用水中55种挥发性有机物的检验方法—吹扫捕集气相色谱质谱法 ........................... 1
2 生活饮用水中27种卤代烃的检验方法—顶空毛细管气相色谱法 ........................................... 9
3 生活饮用水中11种挥发性有机物的检验方法—顶空毛细管柱气相色谱法 ......................... 15
4 生活饮用水中丙烯酰胺的检验方法—液相色谱串联质谱联用法............................................ 19
5 生活饮用水中微囊藻毒素的检验方法—液相色谱串联质谱联用法 ....................................... 24
6 生活饮用水中环氧氯丙烷的检验方法—气相色谱质谱联用 .................................................... 29
7 生活饮用水中15种半挥发性有机物的检验方法—固相萃取气相色谱质谱法 ..................... 32
8 生活饮用水中呋喃丹、草甘膦、灭草松和2,4-滴的检验方法—液相色谱质谱法 ............. 39
9 生活饮用水中灭草松、呋喃丹、草甘膦、2,4-滴、莠去津、五氯酚和甲基对硫磷的测定方
法—液相色谱串联质谱联用法 .......................................................................................................... 41
10 生活饮用水中百菌清检验方法—毛细管柱气相色谱法 .......................................................... 48
水质微囊藻毒素的测定
水质微囊藻毒素的测定
水质微囊藻毒素的测定
1. 引言
水是生命之源，但当水质受到微囊藻毒素的污染时，会对人类健康和生态环境带来严重威胁。对水中微囊藻毒素进行准确、快速的测定成为了保障水环境健康的重要手段。本文将探讨水质微囊藻毒素的测定方法、应用和前景，并分享个人观点和理解。
2. 微囊藻毒素的生态影响
微囊藻是一类常见的浮游藻类，它们在水体中繁殖迅速，形成大量的藻华。某些微囊藻会释放出毒素，称为微囊藻毒素。微囊藻毒素的存在对水生生物和生态系统造成了巨大的威胁，可以引起鱼类和其他水生动物中毒，造成养殖业和渔业的经济损失。
3. 水质微囊藻毒素的测定方法
目前，常用的水质微囊藻毒素测定方法主要包括生物学法、物化法和分子生物学法。
3.1 生物学法：生物学法是通过动物或昆虫对水样进行毒性试验，测定微囊藻毒素的毒性。这种方法比较简单，但时间成本较高，并且涉及动物使用，不符合伦理要求。
3.2 物化法：物化法是利用化学方法对水样中的微囊藻毒素进行检测。主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱质谱法（GC-MS）和光谱法等。这些方法具有灵敏度高、准确度高和操作简单等优点，但需要专业设备和技术支持。
3.3 分子生物学法：分子生物学法是通过检测水样中微囊藻毒素基因或毒素合成相关基因的存在和表达来测定微囊藻毒素含量。这种方法具有非常高的灵敏度和特异性，能够快速准确地测定微囊藻毒素含量。
4. 水质微囊藻毒素测定的应用和前景
水质微囊藻毒素的测定方法已广泛应用于水环境监测、饮用水源地保护和水产养殖等领域。对微囊藻毒素的准确测定可以及时预警和控制水质污染，保护环境和人类健康。随着技术的不断进步，水质微囊藻毒素的测定方法将越来越简便、快速和准确，为水环境保护提供更高效的手段。
5. 我对水质微囊藻毒素测定的个人观点和理解
我认为水质微囊藻毒素的测定是一项非常重要的工作，它关系到人类健康和生态环境的可持续发展。通过准确测定水质中微囊藻毒素的含量，可以及时采取措施防止和解决水质污染问题。水质微囊藻毒素的测定方法的不断改进和发展，将为水质监测和保护提供更加可靠、高效和便捷的手段，为人类创造更健康、安全的生活环境。
微囊藻毒素的测定
第 1 页 共 2 页 微囊藻毒素的测定
1．微囊藻毒素的毒性和结构 水体中产毒藻类主要为蓝藻，如微囊藻、鱼腥藻和束丝藻等，其中，微囊藻可产生肝毒素，导致腹泻、呕吐、肝肾等器官的损坏，并有促瘤致癌作用；鱼腥藻和束丝藻可产生神经毒素，伤害神经系统，引起惊厥、口舌麻木、呼吸困难，甚至呼吸衰竭。微囊藻毒素(microcystin，简称MC)是蓝藻产生的一类自然 毒素，是富养分化淡水水体中最频繁的藻类毒素，也是毒性较大、危害最严峻的一种。目前已发觉的微囊藻毒素有70多种，其中微囊藻毒素-LR是最常见、毒性最大的一种，结构6-2所示。 世界卫生组织(WHO)在《饮用水水质标准》(其次版)中规定，微囊藻毒素-LR在生活饮用水中的限值为1ug/L。我国现行的《生活饮用水卫生标准》 图6-2微囊藻毒素-LR的结构 (GB
5749-2006)和《地表水环境质量标准》(GB 3838-2002)中均规定微囊藻毒素-LR的限值为0.001 mg/L。 2．微囊藻毒素的检测办法 目前常用的微囊藻毒素的检测办法有生物(生物化学)测试法和物理化学检测法两类，其不同点在于检测原理、样品预处理的复杂程度，以及检测结果的表达形式。微囊藻毒素的几种检测办法的比较列于表6 -9。 表6-9微囊藻毒素的几种检测办法的比较 我国在《水中微囊藻毒素的测定》(GB/T 20466-2006)中规定采纳高效液相色谱(HPLC)法和间接竞争酶联免疫吸附法测定饮用水、湖泊水、河水及地表水中的微囊藻毒素。《生活饮用水标准检验办法有机物指标》(GB/T5750.8-2006)中也规定采纳高效液相色谱法测定生活饮用水及其水源水中的微囊藻毒素。以下介绍高效液相色谱法。 (1)原理。 水样中的微囊藻毒素经反相硅胶柱萃取(固相萃取)富集后，其各种异构体在液相色谱仪中分别，微囊藻毒素对波长为238 nm的紫外线有特征汲取峰，经紫外检测器检测，得到样品中不同的微囊藻毒素异构体的色谱峰和保留时光，与微囊藻毒素标准样品的保留时光比较可确定样品中微囊藻毒素的组成，依据峰面积可计算水样中微囊藻毒素的含量。 藻细胞中的微囊藻毒素经冻融、反相硅胶柱萃取浓缩后，可用高效液相色谱法测定。 (2)测定要
直接进样-超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定地表水中微囊藻毒素-LR
新疆环境保护２０１４，３６（２）：３６—４０ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆＸｉｎｊｉａｎｇ
直接进样一超高效液相色谱一三重四级杆串联质谱法测
定地表水中微囊藻毒素－ＬＲ
吴丽，李欣，李刚（新疆环境监测总站，新疆乌鲁木齐８３００１１）
摘要：采用直接进样一超高效液相色谱～三重四级杆串联质谱法，为地表饮用水中的微囊藻毒素（ＭＣ－ＬＲ）检测提供灵敏而可靠的分析方法。该方法样品前处理过程简单、方便，且结果准确。结果表明，在５．００—２０．ｏｕｇ／Ｌ的浓度范围内微囊藻毒素－ＬＲ具有良好的线性关系，样品回收率在８９．３％～１０７％范围内。该方法中微囊藻毒素的栓出限为０．１ｎｇ／ｍＬ，测定低限为０．４ｎｇ／ｍＬ，能够满足地表水环境质量标准中关于饮用水微囊藻毒素最高安全浓度指南的要求，提高了饮用水源微囊藻毒素的检测要求。关键词：微囊藻毒素－ＬＲ；超高效液相色谱一三重四级杆串联质谱；地表水中图分类号：Ｘ８３０．２文献标识码：Ａ文章编号：１００８—２３０１（２０１４）０２－００３６一０５
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＭｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎｓ—・ＬＲｉｎＳｕｒｆａｃｅＷａｔｅｒｂｙＤｉｒｅｃｔＩｎｊｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｌｔｒａＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄ
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ＴｒｉｐｌｅＱｕａｄｒｏｐｏｌｅＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．ＷＵ“，ＬＩＸｉｎ，ＬＩＧａｎｇ（ＸｉｎｊｉａｎｇＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｍｏｎｉ－
ｔｏｒｉｎｇｓｔａｔｉｏｎ，ＸｉｎｊｉａｎｇＵｍｍｑｉ，８３００１１，Ｃｈｉｎａ）．ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆＸｉｎｊｉａｎｇ２０１４，３６（２）：３６－４０
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄｏｎｕｌｔｒａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ。。ｔｒｉｐｌｅｑｕａｄｒｏｐｏｌｅｍａｓｓｓｐｅｃ－ｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＵＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）ｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｆｏｒｄｉｒｅｃｔｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｖｉｄｅａｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄ
超高效液相色谱-串联质谱法测定水中8种微囊藻毒素
超高效液相色谱-串联质谱法测定水中8种微囊藻毒素
张盼伟;郎杭;丁相毅;赵晓辉;李昆;万晓红;李争
【期刊名称】《人民珠江》
【年(卷),期】2022(43)7
【摘 要】微囊藻毒素主要是由水中蓝绿藻凋亡后产生的一类常见的环肽肝脏毒素,对水生生物及人体健康具有非常大的危害性。建立准确、快速检测微囊藻毒素的方法对中国民众饮水安全非常重要。对固相萃取、色谱和质谱等条件进行优化,建立了超高效液相色谱-串联质谱同时检测水中8种微囊藻毒素(LR、RR、YR、WR、LW、LA、LF、LY)的方法。该方法检出限为0.002~0.006μg/L,定量限为0.006~0.018μg/L,加标回收率为85.3%~107.5%,相对标准偏差小于11%。该方法可为地表水中微囊藻毒素的日常检测提供技术支持。
【总页数】6页(P131-136)
【作 者】张盼伟;郎杭;丁相毅;赵晓辉;李昆;万晓红;李争
【作者单位】中国水利水电科学研究院
【正文语种】中 文
【中图分类】Q949.2
【相关文献】
1.直接进样-超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定地表水中微囊藻毒素-LR2.直接进样-高效液相色谱-串联质谱法测定地表水中9种微囊藻毒素3.超高效液相色谱-串联质谱法测定饮用水中微囊藻毒素4.超快速高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定水中微囊藻毒素的研究5.固相萃取-超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时测定地表水中9种微囊藻毒素
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高效液相色谱法测定饮用水中微囊藻毒素(MC-LR)的研究
山西科技 ＳＨＡＮＸＩ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ２０１８年第３３卷第２期
文章编号：１００４—６４２９（２０１８）０２—００４５—０４ 收稿日期：２０１８～０３—０８
高效液相色谱法测定饮用水中微囊藻毒素
（ＭＣ—ＬＲ）的研究
张国华
（太原市环境监测中心站，山西太原，０３０００２）
摘 要：研究了利用高效液相色谱仪测定饮用水中微囊藻毒素（ＭＣ—ＬＲ） 的方法，并优化了测量条件：选择体积分数为２０％的甲醇溶液作为淋洗 液、酸化甲醇作为洗脱液对样品进行前处理，具有较低的检出限，并可以在 保证回收率的前提下，最大限度地减少杂质的干扰，同时有利于提高后续 处理的速度。 关键词：微囊藻毒素；高效液相色谱法；水质分析 中图分类号：Ｘ８３２ 文献标识码：Ａ
微囊藻毒素（Ｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎｓ，ＭＣ）是由蓝藻水华，如鱼 腥藻、束丝藻等爆发所产生的一种肝毒素 。随着中国 近年水体的富营养化程度逐渐加剧，蓝藻水华的发生 概率逐渐增加。而８０％的蓝藻水华都可检测出次生代 谢产物——微囊藻毒素，它对水体环境的污染及人群 健康的危害已经成为全世界关注的问题之一。中国拥 有众多的天然湖泊，２０世纪９Ｏ年代以来，云南滇池、江 苏太湖、安徽巢湖等地的淡水湖泊和水库相继发生了 水华污染，并检测到了ＭＣ的存在。ＭＣ是一种单环七 肽物质，具有多种异构体。其中存在最普遍、含量最多 的是ＭＣ—ＬＲ、ＭＣ—ＲＲ、ＭＣ—ＹＲ这３种微囊藻毒素（Ｌ、 Ｒ、Ｙ分别代表亮氨酸、精氨酸和酪氨酸）。研究表明， ＭＣ—ＬＲ的急性毒性最强，ＭＣ—ＹＲ次之，ＭＣ—ＲＲ最弱。 由于ＭＣ具有水溶性和耐热性，加热煮沸都不能将毒素 破坏；自来水处理工艺的混凝沉淀、过滤、加氯、氧化、 活性炭吸附等也不能将其完全去除。为了保证饮用水 安全，我国地表水环境质量标准把ＭＣ—ＬＲ作为特定项 目定期监测［２］。因此，本文研究利用液相色谱仪测定饮 用水中微囊藻毒素ＭＣ—ＬＲ的方法，并优化了测量条 件。
自来水中微囊藻毒素的检测
自来水中微囊藻毒素的检测
前言
微囊藻毒素(Microcystin，MC)是一类具有生物活性的环状七肽化合物，为分布最广泛的肝毒素。其具有相当的稳定性，它能够强烈抑制蛋白磷酸酶的活性，还是强烈的肝脏肿瘤促进剂。中国生活饮用水卫生标准（GB 5749-2006）的颁布实施对水源水的质量提出了更高的要求。
本文在“GB/T 20466-2006水中微囊藻毒素的测定”基础上做了一些方法改动，大大提高了该方法做自来水中微囊藻毒素的回收率。方法中使用Labtech D-SPE全自动固相萃取系统对水中的微囊藻毒素-LR进行固相富集萃取，D-SPE全自动固相萃取系统使用的是膜片萃取，萃取速度快， 1L水样的萃取全过程只需27分钟。通过D-SPE全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合水中微囊藻毒素-LR的检测。
关键词
D-SPE全自动固相萃取系统，水，微囊藻毒素-LR， GB/T 20466-2006
1、设备及试剂
D-SPE全自动固相萃取系统，莱伯泰科公司；
高效液相色谱仪：LC600 二元高压梯度高效液相色谱，莱伯泰科公司；
标样：微囊藻毒素-LR标准物质（农业部环境保护科研监测所，20μg/mL，溶剂：甲醇）；
标样工作液：将20μg/mL标样用甲醇稀释至浓度为2μg/mL；
甲醇（色谱纯， Fisher Chemical）；
三氟乙酸（分析纯，天津市福晨化学试剂厂）；
磷酸二氢钾（分析纯，北京化学试剂公司）；
磷酸（分析纯，国药集团化学试剂公司）；
超纯水；
固相萃取膜（3M, C18 47mm）； 磷酸二氢钾溶液（0.05mol/L）：称取6.8g磷酸二氢钾，用水溶解，定容至1000.0mL；
磷酸盐缓冲液：用20%（体积分数）磷酸溶液将磷酸二氢钾溶液调至pH到3；
洗脱液：用甲醇将0.1mL三氟乙酸定容至100.0mL。
2、测试过程
2.1 样品预处理
固相萃取-超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法同时测定地表水中9种微囊藻毒素
・５２・ 色 谱 第３０卷
随着环境污染和富营养化程度加剧，淡水流域
中有害藻类水华尤其是蓝藻水华频繁发生，现已成
为国内外普遍关注的环境问题…。微囊藻毒素
（ｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎ，ＭＣ）是蓝藻暴发中出现频率最高、
产生量最大和造成危害最严重的藻毒素。ＭＣ是一
类具有生物活性的单环七肽，具有强烈的促癌作
用 ，其典型结构见图１，为环一（Ｄ一丙氨酸一Ｌ—Ｒ 一赤－
一甲基一Ｄ－异天冬氨酸一Ｌ—Ｒ 一Ａｄｄａ—Ｄ一异谷氨酸－Ⅳ．甲
基脱氢丙氨酸）。其中Ⅳ＿甲基脱氢丙氨酸（Ⅳ＿
ｍｅｔｈｙｌｄｅｈｙｄｒｏＡｌａ，Ｍｄｈａ）为一种特殊的氨基酸，
含有Ｏ／、 不饱和双键；３一氨基一９一甲氧基一２，６，８－三甲
基一１０一苯基一４，６一二烯酸（３一ａｍｉｎｏ一９一ｍｅｔｈｏｘｙ一２，６，８一
ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ—ｌ ０一ｐｈｅｎｙｌｄｅｃａ－４，６－ｄｉｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，Ａｄｄａ）
是毒素活性表达所必需基团；Ｒ 和Ｒ 在不同的微
囊藻毒素变体中代表不同的Ｌ一氨基酸，并以此为该
毒素命名。目前已鉴定了８０多种不同结构的
ＭＣ 。水体中高浓度的ＭＣ会影响水生植物种群
的多样性，也可以使鱼卵变异、蚤类死亡、鱼类生长
异常 ；关于家畜及野生动物饮用含ＭＣ的水后死
亡的报道也有很多 ；ＭＣ同样也威胁人体的健 康，１９９６年巴西一透析中心因透析液遭ＭＣ污染最
终导致５３人死亡 。我国已有许多饮用水源发生
蓝藻水华并检测出ＭＣ，特别是２００７年发生了太湖
大面积暴发蓝藻水华导致震惊世界的无锡市饮用水
污染的事件 。因此加强水质的ＭＣ监测就显得尤
为迫切。目前，文献报道的检测ＭＣ方法主要有高
效液相色谱法（ＨＰＬＣ） 、液相色谱一质谱联用法
（ＬＣ—ＭＳ） ” 和酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ） 等。ＬＣ—
ＭＳ／ＭＳ是近几年兴起的新技术，具有灵敏度高、选
择性好等特点。文献报道中有关ＬＣ—ＭＳ检测ＭＣ
的种类主要为ＬＲ、ＲＲ两种构型（Ｌ代表亮氨酸，Ｒ
高效液相色谱法测定水中微囊藻毒素
第２５卷第２２期
２００９年１１月中国给水排水
ＣＨＩＮＡＷＡＴＥＲ＆ＷＡＳＴＥＷＡＴＥＲＶ０１．２５Ｎｏ．２２
ＮＯＶ．２００９
高效液相色谱法测定水中微囊藻毒素
薛罡，杨林，龚清杰，闵浩
（东华大学环境科学与工程学院，上海２０１６２０）
摘要：通过对前处理过程中关键环节进行不同水平比较，建立了简便、实用的固相萃取／高
效液相色谱／紫外联机（ＳＰＥ／ＨＰＬＣ／ＵＶ）快速测定水样中微囊藻毒素的方法，在微囊藻毒素浓度为
Ｏ—１．８ｍｇ／Ｌ的范围内，ＨＰＬＣ峰面积与藻毒素进样量呈线性关系，方法检测限可达０．０１～０．０５
恤ｇ／Ｌ。对藻毒素提取方法进行优化后，运用此方法测定了铜绿微囊藻中的藻毒素含量，取得了理
想的分析效果，三种藻毒素异构体的回收率均不小于９４％。
关键词：微囊藻毒素；固相萃取；高效液相色谱法；铜绿微囊藻
中图分类号：Ｘ７０３．１文献标识码：Ｃ文章编号：１０００—４６０２（２００９）２２—００９０—０４
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＭｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎｉｎＷａｔｅｒｂｙＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ
ＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＸＵＥＧａｎｇ，ＹＡＮＧＬｉｎ，ＧＯＮＨＱｉｎｇ－ｊｉｅ，ＭＩＮＨａｏ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＤｏｎｇｈｕａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１６２０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｒｏｕｇｈｃｏｍｐａｒｉｓｏｎａｍｏｎｇｓｏｍｅｋｅｙｌｉｎｋｓｉｎｔｈｅｐｒｅ—ｔｒｅａｔｍｅｎｔｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，ａｐｒａｃｔｉｃａｌ
ａｎｄｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｏｎ－ｌｉｎｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎｂｙｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ／ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ
ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ＴｈｅｒｅＷａｓａｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｅａｋａｒｅａ