杨树木材变色病病原菌的鉴定
山东林业科技 ２０１１年第３期 总１９４期 ＳＨＡＮＤＯＮＧ ＦＯＲＥＳＴＲＹ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ２０１１．Ｎｏ．３
文章编号：１００２—２７２４（２０１１）０３—０００１一Ｏ３
杨树木材变色病病原菌的鉴定
吴玉柱 ，赵桂华 ，季延平 ，刘 憋 ，段春华 ，刘幸红 ，王守国
‘（１．山东省林业科学研究院，山东济南２５００１４；２．江苏农林职业技术学院）
摘要：杨树木材变色病已影响了我国木材工业从粗放加工型向精细加工型的发展，已给木材工业带来重大经济损失。山 东杨树木材变色病主要为褐变和红变。经分离培养、纯化、接种试验，依其培养性状和形态学特征，鉴定出杨树褐变、红变变 色病的病原茵分别为Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ和Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｄｅｃｅｍｃｅｌｌｕｌａｒｅ。 关键词：木材变色；变色菌；可可球二孢；多隔镰孢茵 中图分类号：￥７６３．１ 文献标识码：Ａ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆｕｎｇｕｓ ｏｎ Ｐｏｐｌａｒ Ｗｏｏｄ Ｓｔａｉｎ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｗｕ Ｙｕｚｈｕ ｅｔ ａ１． （Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｊｉｎａｎ ２５００１４ Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｏｏｄ ｓｔａｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ ｇｒｅａｔｌｙ ｕｎｄｅｒｍｉｎｅｓ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｗｏｏｄ，ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｌｏｓｓｅｓ ｏｆ ｗｏｏｄ ｉｎ— ｄｕｓｔｒｙ．Ｔｗｏ ｍａｊｏｒ ｗｏｏｄ ｓｔａｉｎｓ，ｂｒｏｗｎ ｓａｐｓｔａｉｎ ａｎｄ ｒｅｄ ｓａｐｓｔａｉｎ，ｃａｎ ｂｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｙ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｔＯ ｂｅ Ｌｎｓ ０ｄ 户Ｚｏ 口ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ ａｎｄ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｄｅｃｅｍｃｅｌｌｕｌａｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅｉｒ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｕｌ— ｔｕｒｅ ｐｒｏｐｅｒｔｙ ａｆｔｅｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｂ． Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：Ｗｏｏｄ Ｓｔａｉｎ；Ｓａｐｓｔａｉｎ Ｆｕｎｇｉ；Ｌ口ｓ ０ｄ ｐＺｏ 口ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ；Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｄｅｃｅｍｃｅｌｌｕｌａｒｅ
在我国，杨木的工业用途非常广泛，主要是包装
箱、单板、刨花板、木工板、纤维板、人造丝和纸浆工
业的重要原料，粗加工的木材利用率只有４０ ；发
达国家的杨木利用率，如美国、法国、意大利、瑞典等 国家的杨木利用率都在５０ 以上，因此，应大力发
展木材深加工，在高档人造板产品和木材纤维原料
纸张产品等方面尽可能避免产生杨木变色，从而提 高木材的附加值和产品竞争力［１４ ］。
木材的腐朽和变色是影响我国木材工业从粗放
加工型向精加工型过渡的两大因素。木材的变色和
防治正在受到所有木材使用者的重视。增加原木的
价值已集中在生产高级别的木材上，市场对高质量
的木材需求明显增加。变色被认为是针、阔叶材等
级上的一个很大的缺陷，实际上每一根原木的小比
例的缺陷已经给 规模加工企业造成了相当大的经
济损失。即使未变色的原木制成板材，问题并没有
结束，因为板材，特别是边材，在干燥前会由霉菌和
变色菌引起变色口叫］。
杨树病害分为活树病害和木材病害两部分。而
木材病害又分为木材腐朽和木材变色，木材腐朽分
收稿日期：２０１１一Ｏ２一Ｏ２ ＊基金项目：山东省自然科学基金资助项目（Ｚ２ＯＯ５Ｄ０５）。 为木材的白腐、褐腐和软腐；而木材变色分为褐变、 红变、蓝变、黑变、黄变、霉变等多种类型。在木材变
色中，又分为化学变色、光变色和生物变色，而生物
变色也是被木材加工业广泛关注的问题，山东、苏北
等地的杨木变色大都属于有真菌引起的生物变色。
１材料和方法
１．１标本采集
２００６￣２０１０年，分别对山东省济南市、临沂市、
菏泽市、潍坊市等地正在砍伐的５年生以上的杨树、
以及杨木加工厂的储存杨木进行了随机调查，采集
变色病标本，供变色菌分离使用。杨树品种主要有
Ｉ一１Ｏ７杨、中菏１号杨、Ｌ３５杨、中林４６杨和Ｉ一６９
杨等。
１．２变色菌的分离培养
将采回的杨木褐变和红变标本，分别在ＰＤＡ
平板培养基上进行组织分离。先将杨木变色标本表 面用７０ ９／６酒精棉球擦３次，将多余的酒精在酒精灯
上烧去，用灭菌的解剖刀削去表层木材，然后取内部
的木材组织小块，转移到ＰＤＡ平板上，每次每种标 山东林业科技２０１１年第３期
本分离８～１０皿，每皿放５～６块，约５０～６０块组
织。放在２５℃，ＲＨ７０ （黑暗）的ＰＲＸ￣２５０Ａ型智
能人工气候箱内培养５天，检查统计分离结果，将不 同的菌落分别进一步纯化，保存试管菌种备用。
１．３变色菌的接种试验
１．３．１变色菌的培养 将在分离过程中出现频率较高的变色菌菌株分
别进行ＰＤＡ平板培养，待长满培养皿后备用。
选取采自济南市商河县的０．９～１．０ｒａｍ厚的 健康Ｉ一１Ｏ７杨木单板，制作成２×２ｃｍ大小，包在牛
皮纸或培养皿内进行高压湿热灭菌，在１２１℃下维
持４０分钟，待温度下降至４Ｏ～５０℃时取出，然后放 在已培养好的变色菌落上，每皿放２块，共５皿１Ｏ
块。用无菌ＰＤＡ平板作对照，把木片直接接在其 上，每皿２块，共２皿４块。放在２５℃、ＲＨ ７０ 黑
暗的条件下培养。 １。３．２变色试验观察
对接种的样品，每５天观察一次、记录变色情
况、连续观察３０天。每次观察需记载菌丝覆盖木片
的情况，木片变色面积大小，颜色深浅。 １．４变色菌形态观察
用变色菌在培养基上产生的子实体、分生孢子，
在显微图像分析系统（ＸＳＡ—Ｊ）显微镜下观察形态 特征，测量大小（ｎ＝＝＝３０）和照相，根据相关资料记载
进行鉴定。
２结果与分析
２．１变色菌的分离培养
杨木褐变１３批１２９个样品分离获得２１３个分 离物，依其培养性状和形态特征，初步归属于４个分 类单位。上述４个分离菌株中，分离频率最高的是
可可球二孢Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ（Ｐａｔ．） Ｇｒｉｆｆ．＆Ｍａｕｂ．，分离频率为８７．４ ；小穴壳属
Ｄｏｔｈｉｏｒｅｌｌａ ｓｐ．分离频率为４．９ 大茎点霉属Ｍａｃ—
ｒｏｐｈｏｍａ ｓｐ．分离频率为４．１ ，壳梭孢属Ｆｕｓｉｃｏｃ— ｃｕｅ ｓｐ．分离频率为３．６ 。
杨木红变１１批１２３个样品分离获得１９７个分
离物，依其培养性状和形态特征，初步归属于３个分 类单位。上述３个分离菌株中，分离频率最高的是
多隔镰孢菌Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｄｅｃｅｍｃｅｌｌｕｌａｒｅ Ｂｒｉｃｋ．，分离 频率为８９．３ ；大茎点霉属Ｍａｃｒｏｐｈｏｍａ ｓｐ．分离
频率为５．８ 。壳囊孢属Ｃｙｔｏｓｐｏｒａ ｓｐ．分离频率
为４．９ 。 ２．２变色菌的接种试验 ・ ９ ’ ■ 豳
图１ 司日１球二孢形态图
ａ．在ＰＤＡ上的菌落形态；ｂ．分生孢子器，ｂａｒ＝２０ｔ￣ｍ；Ｃ．成熟 和未成熟的分生孢子，ｂａｒ一１Ｏ“ｍ 在ＰＤＡ平板培养基上（３０℃±１℃、ＲＨ ７０ ±
２ ）菌落初为灰白色，后变为灰褐至褐黑色，培养基 为黑色，日生长量为４．０ｃｍ；在全光条件下，１５～２０ 天产生黑色近球状子实体，子座表面附满菌丝。一
个子座内有多个分生孢子器，近球形，１５１．０～４２９．０
×１４５．０～４６９．０ｐｔｍ；孔口周缘细胞深褐色，未成熟 分生孢子单细胞、无色，它的壁比成熟的分生孢子壁
更厚，平均１．２ｆｔｍ；成熟的分生孢子双细胞褐色至 黑色，表面有黑白相间的纵条纹，平均２３．２×１３．７
／ａｍ；长宽比（Ｌ／Ｗ）为１．７，侧丝无色，顶端略微膨
大，无隔。未成熟分生孢子无色，易与Ｍａｃｒｏｐｈｏｍａ 山东林业科技 吴玉柱等：杨树木材变色病病原菌的鉴定 ２０１１年第３期
属的真菌相混淆。
２．３．２ 多隔镰孢菌Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｄｅｃｅｍｃｅｌｌｕｌａｒｅ ＢｒｉｃｋＥ ～８］
该菌隶属于半知菌亚ｆ－ｊ Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ、丝孢 纲Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ、瘤座孢目Ｔｕｂｅｒｃｕ１ａｒｉａ１ｅｓ、瘤座
孢科Ｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｉａｃｅａｅ、镰孢菌属Ｆｓａｒｉｕｍ。 在ＰＤＡ培养基平板上（３０℃±１℃、ＲＨ ７０ ±
２ ），生长极缓慢，培养４天，菌落直径在２．Ｏｃｍ左 右，菌落表面气生菌丝为白色至淡红色，基物为玫瑰
红色或深浅不一的紫红色，基物表面胭脂红至紫色；
在气生菌丝上产生小型分生孢子，小型分生孢子串 生或假头生，大多数无隔，在ＰＤＡ培养基上生长２０
～３Ｏ天左右，培养基上有米黄色粘状分生孢子团产
生，大孢子镰刀形，壁较厚，有足细胞，分隔数为５～ ９个，多数为６～７个大小型分生孢子的平均大小
７４．４×６．９ ｍ，小分生孢子平均大小６．９×２．８ ｍ。
图２多隔镰孢形态图
ａ．在ＰＤＡ上的茵落形态，ｂ—Ｃ．分生孢子梗，ｂａｒ一２０／ｚｍ；ｄ． 分生孢予，ｂａｒ一１０／￣ｍ
３讨论
研究木材变色和变色菌的目的，就是为更好地
预防和防治木材变色。木材变色的防治方法与林木 病害的防治方法相似。防止木材变色对于木材工业
和制浆造纸工业有重要的使用价值，国内报道的所 有防治木材变色的方法都是采用化学防治，其缺点 是成本高，对人畜不安全，同时也引起环境污染，破坏 生态环境。如能采用生物的方法来预防木材的变色，
除了克服上述缺点外，其经济效益也是很明显的。作 者认为，研究木材变色须从下列基础工作开始。
首先要确定引起变色的原因，确定变色菌，变色 菌大都属于真菌，在我国未见细菌引起木材变色的
报道。变色菌的种类繁多，要想弄清楚一些主要的
变色菌在我国的分布，必须通过大量采集各种木材
变色标本；分离、培养和鉴定，以及进行培养特性和 生态学测试的研究。
积极寻找用于我国木材变色菌生物防治的各种
菌系，保护木材，保护我国有益生物资源，提高木材 利用率。
木材的变色和腐朽将阻碍我国木材深加工业的
发展，问题是如何确定不同树种上的变色菌种类，并
采取相应的控制措施。
参考文献： Ｅｌｉ王艳艳，赵桂华，等．边材变色及防治研究进展．林业实用 技术，２００７，（６）：３３～３４ ［２］刘志军．木材变色与防护问题的研究状况．世界林业研 究，２００１，１４，（５）３１～３６ ［３］赵桂华，等．木材变色及变色菌的研究现状．世界林业研 究，２００５，１８，（５）５４６～５１ Ｅ４］赵桂华，等．木材变色对木材工业的影响．山东林业科技， ２００５，（５）８４～８６ Ｅ５］赵桂华，等．橡胶木变色菌和霉茵的研究一分离和鉴定． 热带作物学报，１９９１，１２（２）６３～６７ ［６］符永碧，施振华，利群．引起橡胶和马尾松蓝变的真菌一 可可球二孢．林业科学研究，１９８８（２）３８～４１ Ｅ７］魏景超．真菌鉴定手册［Ｍ］．上海科学技术出版社，１９７９， ６Ｏ９～６３８ Ｅ８］陈其瑛译．镰刀茵属［Ｍ］．农业出版社，１９８８，１～３２３
・ ３ ・
杨树主要病害种类、症状及防治方法
杨树主要病害种类、症状及防治方法
表A.1杨树主要病害种类、症状及防治方法
主要病害 主要病原 发病规律 主要危害部位 症状 防治方法
锈病 马格栅锈菌杨栅锈菌粉被栅锈菌松杨栅锈菌 病菌以菌丝体在病落叶或病枝稍中越冬，第二年开春之后，被真菌感染的那些冬芽,在逐渐开放的时候就会形成大量的夏泡子堆，成为这一年最初的侵染源头。每年于5月―6月为发病高峰期，到7月s8月份，由于气温不断升高，不利于夏泡子的萌发侵染，故病害进入平缓期。到9月初，气温逐渐下降，随着枝叶的二次抽发，病害又进入发展阶段，形成第二个发病高峰期，到10月下旬，由于温度不断降低，病害便停止发生。 叶片 叶片受害初期先出现退绿点斑，逐步形成黄色小斑点，以后在叶背面可见到散生的黄色粉堆，形成黄色绣球花状的病叶，严重时黄色粉堆可联合成大块，且叶背部隆起。 发病初期每隔10天~15天整株喷洒15%三嗖酮可湿性粉剂1000倍液sl500倍液，或15串粉锈宁可湿性粉剂IOOO倍液SI500倍液，或50%退菌特500倍液〜IOoO倍液；发病期高峰期整株喷洒50%的代森氨100倍液，或50%退菌特500倍液SlOOO倍液。
黑斑病 杨生盘二狗菌 病菌以菌丝体在病落叶或病枝稍中越冬，翌年4月~5月病菌新产生的分生袍子借风力传播，落在叶片上，由气孔侵入叶片，2天~8天形成分生抱子盘，进行新的侵染。7月~8月发病较重，9月达到高峰。病害的发生与湿度密切相关，湿度大发病重，反之则轻。 茎和叶片 发病初期首先在叶背面出现针状凹陷发亮的小点，后病斑扩大到Imnl左右，黑色，略隆起，叶正面也随之出现褐色斑点，5天~6天后病斑（叶正、反面）中央出现乳白色突起的小点，即病原菌的分生抱子堆，以后病斑扩大连成大斑，多成圆形，发病严重时，整个叶片变成黑色，病叶可提早脱落2个月。 发病初期每15天~20天整株喷药1次，可用45%代森锌，或70%甲基托布津200倍液，或波尔多液、百菌清、戊理醇等按照产品说明书喷雾使用。
分级标准 杨树烂皮病 分生孢子角
分级标准、杨树烂皮病、分生孢子角
一、分级标准
在科学研究和管理实践中，分级标准是十分重要的。它不仅能够帮助人们对复杂的现象进行系统化的分类和评价，还能够为相关的决策和行动提供指导。针对杨树烂皮病这一常见的植物疾病，分级标准的制定尤为重要。通过合理的分级标准，可以及时识别患病程度，采取相应的防治措施，保护和促进杨树的生长。我们将从不同方面来探讨杨树烂皮病的分级标准。
1. 外部症状
杨树烂皮病是由真菌引起的疾病，最为明显的症状就是树皮的褐色或黑色溃疡。溃疡的大小、数量和分布密度可以作为分级标准的重要依据。一般来说，溃疡范围越大、数量越多、分布越密集的树木，病情等级越高。还可以考虑树皮的变色情况，比如变为黄色或紫色等，来综合评估病情。
2. 内部病变
除了外部症状，杨树烂皮病还会引起木质部分的变化。这些变化可能表现为木质的褐变、软烂、腐朽等，进一步加剧了树木的衰弱和逝去。在分级标准中，可以根据木质部位的受损程度和深度来进行评估。仅表皮受损的树木可以定为轻度患病，而已经影响到较深层木质的树木则可以定为中度或重度患病。
3. 感染源和传播方式
科学家们通过研究发现，杨树烂皮病的传播途径是多样的，包括风、昆虫、水等。对于疾病的传播路径的不同，也需要采取不同的防治对策。分级标准中也需要考虑感染源和传播方式的影响，对于易感染、高风险的树木，可以视为重点监测对象，并采取重点防治措施。
二、杨树烂皮病
杨树烂皮病，是由南方木杨烂皮病菌引起的，是一种常见的病害。该病是由于杨树在高温多雨的季节，受到了高温多湿的环境因素的影响，使得树皮变得松软，进而被病原菌侵染，从而引起的。刚开始的时候，是许多小斑，后来慢慢的发育成一些大坏溃病斑。
杨树烂皮病的发病有一定的规律。首先是在树的下部，或者是树桩，树根附近，首先是在底部，慢慢变黑，之后也会向上发展延伸。而且会遗留许多裂口，看得出树干的病情与伤痕。
三、分生孢子角
分生孢子角是菌丝或细菌线体上特殊的、像根的生长物。
新疆杨树主要病害的识别与防治
新疆杨树主要病害的识别与防治
作者：李红武
来源：《新疆农垦科技》 2016年第2期
李红武
（兵团第四师六十四团林业工作站 ，新疆霍城县835214）
收稿日期：２０15—11—11
摘要：随着国内消费市场对木材需求量的不断增长以及对木材质量要求的逐步提高，在林木生产管理过程中严格控制林木病虫害的发生，降低杨树病虫害对林木生长造成的危害至关重要。本文针对杨树主要病害发生情况，简述了相应的防治措施。
关键词：杨树；病害；识别；防治
1腐烂病
腐烂病是杨树普遍发生的病害之一，几乎分布全国各地，是杨树、柳树等大乔木的重要枝干病害。在一些地区的特殊年份，容易形成杨树腐烂病害的大流行，影响范围大，常造成杨、柳树的大面积死亡。
腐烂病的病原属子囊菌纲，球壳菌目，间座壳菌科，污浊腐皮南宁属。分生孢子器埋生于子座中，黑色、单室或多室，具明显的壳口，分生孢子，属单细胞，腊肠状，无色透明，向一方微弯。杨树腐烂病主要有枯梢型、干腐型2种类型。
枯梢型。枯梢型症状发生几率较少，病斑大多发生在1 ～ 2年生幼树主干或大树枝条上。发病初期病部暗灰色，未出现水渍状，病斑发展快，数天后即环切树干1周，使得病斑以上枝条枯死，病斑皮层外部枯黄色，患病处相继出现散生小黑点，皮下韧皮部变成黑褐色，易脱离木质部。
干腐型。干腐型腐烂病的病斑大多发生在主干分杈处和大枝、树干处。初期光皮树种在患病部位透出褐色或灰褐色水渍状病斑，稍微隆起，病健交界处明显；粗皮树种的病斑不明显。当寄主（杨树）生长衰弱、空气湿度较高时，病组织迅速坏死，变软且腐烂，手压病患处有褐色液体流出，酒糟味较浓，随后病组织失水干缩下陷，在表皮下可见许多针头状的突起，即腐烂病病原菌的分生孢子器。分生孢子器接近成熟时突破上表皮露出，顶端呈黑色或淡褐色，阴雨或空气湿度高时从分生孢子器内溢出混有器孢子的丝状物，即分生孢子角。分生孢子角常通过风雨来传播。患病部杨树皮的韧皮部或内皮层呈现褐色或暗褐色，糟烂如麻，逐渐形成暗紫褐色隆起的斑块，在皮下密生许多小黑粒，即子囊壳。子囊壳沿树干纵横方向发展，绕树1周时，产生病斑部以上的枝条枯死，出现枯枝、焦梢等发病症状。
内蒙古呼和浩特市杨树腐烂病病原菌鉴定
内蒙古呼和浩特市杨树腐烂病病原菌鉴定
贾伟;马强;宿静瑶;李正男;刘义龙;孙平平
【期刊名称】《西北林学院学报》
【年(卷),期】2022(37)4
【摘 要】为明确内蒙古呼和浩特市引起杨树腐烂病的病原菌种类,利用组织分离法对内蒙古呼和浩特市杨树腐烂病菌进行分离,基于柯赫氏法则对其致病性进行测定,采用形态学结合分子生物学方法,对病原菌进行鉴定。结果表明,从内蒙古呼和浩特市表现树皮腐烂症状的杨树上分离到8株真菌,其中3株可以回接到杨树枝条并引起典型的杨树腐烂病症状,将其命名为YSFL1、YSFL3和YSFL4-2。根据菌落特征、产孢体形态及ITS、β-tubulin序列将其确定为Cryptosphaeria
pullmanensis(YSFL1)与Cytospora chrysosperma(YSFL3、YSFL4-2)。C.pullmanensis与C.chrysosperma可以引起内蒙古呼和浩特市地区的杨树腐烂病。结果可为开展内蒙古地区杨树腐烂病的防治和病原菌的鉴别研究奠定基础。
【总页数】7页(P210-215)
【作 者】贾伟;马强;宿静瑶;李正男;刘义龙;孙平平
【作者单位】内蒙古农业大学园艺与植物保护学院;呼和浩特市园林植保站
【正文语种】中 文
【中图分类】S763
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杨树红心病的研究
福建林学院学报２０１０，３０（３）：２０７—２１１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｕｊｉａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ 第３０卷第３期 ２０１０年７月
杨树红心病的研究
赵桂华 ，孟庆庭 ，席刚俊 （１．江苏农林职业技术学院，江苏句容２１２４００；２．临沂市林业局，山东临沂２７６０００）
摘要：２００６—２００８年对杨树红心病进行调查、病原菌分离培养和致病性实验。结果表明，杨树红心病是一种为害严重的病 害，成年树病株率达１００％，变色率为１５％一９５％。砖红镰刀菌和接骨木镰刀菌是引起杨树红心病的病原菌，该病的发生与 栽植立地条件、杨树品种有关。 关键词：杨树；红心病；致病性 中图分类号：￥７６３．１１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１—３８９Ｘ（２０１０）０３—０２０７—０５
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｐｏｐｌａｒ ｒｅｄ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ
ＺＨＡＯ Ｇｕｉ—ｈｕａ ，ＭＥＮＧ Ｑｉｎｇ—ｒｉｎｇ ，ＸＩ Ｇａｎｇ－ｊｕｎ （１．Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｃｏｆｉｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｊｕｒｏｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２１２４００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｌｉｎｙｉ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｌｉｎｙｉ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２７６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｐｌａｒ ｒｅｄ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎ ａｎｄ ｐａｈｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ ｆｉｅｌｄ ｆｒｏｍ ２００６ ｔｏ ２００８．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｐｏｐｌａｒ ｒｅｄ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ａ ｓｅｒｉｏｕｓｌｙ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｄａｍａｇｅ，ｒａｔｅ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｕｐ ｔｏ １００％ｉｎ ａｄｕｌｔ ｐｏｐｌａｒｓ，ｒａｔｅ ｏｆ ｈｅａｒｔ ｗｏｏｄ ｓｔａｉｎ ｔｏ ｂｅ １５％一９５％．Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｌａｔｅｒｉｔｉｕｍ ａｎｄ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｍｂｕｃｉｎｕｍ ａｒｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏ ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｐｌａｒ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｐｌａｒ，ｒｅｄ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ，ｐａｈｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
杨树腐烂病辨别技术、发病规律与综合防治措施
林业果树Linyeguoshu
杨树腐烂病又名烂皮病、臭皮病、出疹子等，属于杨树主要
枝干病害之一，在发生期间，不仅只对杨树造成影响，还会对柳
树、榆树、蔷薇科、刺槐等多种植物、品种造成危害。被腐烂病危
害的杨树在感病后不及时治疗，将会出现枯死，严重影响杨树的
造林、绿化效果。基于此，技术人员在开展林业管理期间，应当重
视对杨树腐烂病的防治管理，明确杨树腐烂病的发生规律，做到
高效预防，减少其对杨树林业生产所造成的不良影响。
杨树为杨树科杨属植物落叶乔木的通称，在我国杨树的种
类包含50多种。杨树在生长期间具有较强的环境适应性，种植
面积分布广阔，其品种类型较为丰富，具有较强的易改良、易无
性繁殖、速生丰产性强、经济效益性高等特征，是我国的植树造
林、市政绿化、木材加工等方面的主要树种之一。随着近年来我
国对于环境生态重视性的提升，在开展退耕还林、廊道绿化、农
田林网等林业工程实施期间，营造了大量优质的杨树丰产林，杨
树的种植面积在我国也显著提升。在杨树种植面积显著扩展的
同时，杨树腐烂病的发病概率与危害症状也呈现上升的趋势，严
重影响杨树造林的优质效果。
杨树腐烂病又名杨树烂皮病，主要以危害杨树树干部位，为
我国重要的森林植物检疫病害之一。杨树腐烂病在我国的东北、
华北、西北等地区危害较为严重，在部分杨树速生品种中，发病
率最高可达到90%，严重影响我国林业事业的良好发展。基于
此，为了避免杨树腐烂病对林业产业造成严重的影响，本文将对
杨树腐烂病的辨别技术、发生规律、防治措施等进行简单叙述，
以期能够为林业工作人员提供有效的参考建议。
一、杨树腐烂病致病原
造成杨树出现腐烂病的致病原为子囊菌亚门污黑腐皮壳属
真菌，属于无性型半知菌亚门全黄壳囊孢菌。致病菌在冬季以子
囊壳、菌丝体或分生孢子器在危害部位的组织内进行越冬。直至
翌年春季外界气温回升后，子囊孢子成熟，随后借助外界的风
雨、昆虫、鸟类等进行传播危害。在条件适宜的情况下，致病菌的
分生孢子会从杨树的枝干、树枝等部位的伤口处进行入侵，在经
4年杨树树干黑褐色斑块
4年杨树树干黑褐色斑块
我家附近的一条小路边上，有一棵年轻的杨树，长得很健康，枝繁叶茂。但是，最近几年，我发现这棵杨树的树干上出现了一些黑褐色的斑块，颜色比周围的树皮要深很多。我特地请教了一些植物专家，他们告诉我，这可能是杨树皮斑病的症状。
杨树皮斑病是由一种真菌引起的树木病害，通常会影响杨树这一类树木。初期，病害表现为干燥、裂开的树皮，然后在树皮上出现黑色到暗褐色的斑块。这些斑点会逐渐扩大，并可能在树干周围周围形成环状的斑块。如果不及时处理，这种病害会严重危害树木的健康，并可能导致树木倒塌。
那么，当我们在发现杨树树干上有黑褐色斑块时，应该如何处理呢？以下是简单的处理步骤：
1. 初步检查：首先要定期检查杨树，如果发现树干上有黑褐色的斑点，应该立即进行初步检查。大多数情况下，这些斑点会产生臭味，这是病原微生物在杨树上繁殖的结果。
2. 剪去感染部分：如果发现感染的斑点很小，可以尝试使用消毒工具，修剪掉感染的部分。在此过程中，需要确保剪刀或锯子是干净的，并且不会损坏健康的树皮。
3. 清洁残留部分：为了防止病菌传播，应该清洗干净杨树的树皮。这可以用一把湿布轻轻擦拭，以避免杨树的干燥和裂开。
4. 保护健康部分：如果病情已经严重，建议找专业植物保健公司进行诊断和治疗。该公司将会分析病害的程度，并根据需要为树木提供药物治疗。如果树还比较健康，可以通过施肥和浇水等方法增强其免疫力。
总之，在发现杨树树干上有黑褐色斑块时，我们应该积极采取措施处理，以保证树木的健康和长寿。例如，定期检查干燥和树皮裂开的情况，及时剪去感染部分，并清洗干净树皮。如果杨树病情已经很严重，则需要专业的植物医生进行治疗，以确保杨树的健康和生命力。
杨树细菌性溃疡病简介
杨树细菌性溃疡病简介
杨树细菌性溃疡病(Aplanobacterium populi Ride)是世界闻名的杨树重要枝干病害，是我国对外检疫对象。该病为肿茎型细菌溃疡病症状，危害尤为严重，大多数杨树品种常在环境条件不良、栽培措施不利的地区或年份，均可严重发病。
症 状：早春至初夏，在幼枝上形成小的增生肿瘤，肿瘤部的韧皮部和木质部变色。随变色区的扩展和肿瘤的不断增大，于夏季开裂流出棕褐色黏液，有臭味。病害发展到后期，肿瘤不断形成，伤口不断扩大而不能愈合，形成增生的梭形瘤或长圆柱形瘤。木质部变色区以溃疡部位为中心，向上、下2个方向延伸，如果病害发生严重，向上一直到枝，向下到根，木材都变色，中心腐烂。
病 原：病原优势种是成团泛氏菌(Pantoea agglomerans
Gavini et al.=Erwinia herbicola (Lohnis)Dye.)，隶属泛氏菌属细菌。
发病规律：病原细菌在病株多年的病斑内潜伏越冬，第二年春天潮湿多雨时，病菌开始活动，并从裂缝中流出细菌黏液蔓延。细菌的传播借助于雨水、风、昆虫和人为活动。自寄主皮孔、叶痕、托叶痕、芽鳞痕和各种伤口侵入，在侵入点周围形成溃疡斑。最初为隐性溃疡，随之出现开口或多年生溃疡。发病杨树产生的黏液是重要的侵染源。 据国内报道，从杨树上分离到大量的细菌，约有10％的菌株具有冰核活性，如Pseudomonas syringae和Erwinia herbicola。据初步研究表明，存在于杨树上的冰核活性细菌在引起杨树冻伤和诱发干部溃疡病过程中起重要的作用。土壤黏重、低洼积水、管理不善均有利于病害的发生。
树种抗病性是影响溃疡病发生的关键因素。易感病的品种有香脂杨、毛果杨、新疆杨等，美洲黑杨均为高度感病，而晚花杨、健杨、I-214杨等具有抗病性。
总之，杨树细菌溃疡病是一种寄主主导型病害，也是一种生态性病害，即杨树冰核活性细菌具有腐生性和弱寄生性，广泛地存在于自然界中，可长期潜伏在寄主体上，感病杨树品种、品系在春秋霜冻条件下可造成杨树冻害，并引起肿茎型细菌溃疡病，是发病的主导因素。被害杨树皮层变褐、坏死，木质增生，形成肿瘤，严重时造成树木畸形，以至树木枯死。
欧美杨溃疡病的病原鉴定
第45卷第6期2009年6月林业科学SCIENTIASILVAESINICAEVol145,No16Jun.,2009
欧美杨溃疡病的病原鉴定3
贺 伟1 任飞娟1 郭利民3 李 永1,2 常聚普3(11北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室 北京100083;21中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 北京100091;31河南省濮阳市林业科学研究所 濮阳457000)摘 要: 从河南濮阳、山东菏泽等地的欧美杨溃疡病发病林地采集病样96份,经分离、纯化、归类出10种分离物,其中镰孢属(Fusarium)真菌占优势。以离体苗干水培接种和盆栽苗接种,经致病性测定,明确分离物Mz01为致病菌株。经形态学鉴定,Mz01为茄镰孢菌(Fusariumsolani)。采用真菌通用引物对分离物Mz01进行PCR扩增,对其核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区测序,并将测序结果在GenBank中进行同源性比对分析,分子鉴定与形态学鉴定一致。茄镰孢菌作为我国欧美杨溃疡病的病原菌系首次报道。关键词: 欧美杨溃疡病;病原菌;茄镰孢菌中图分类号:S76317 文献标识码:A 文章编号:1001-7488(2009)06-0104-006
收稿日期:2009-04-02。基金项目:国家十一五科技支撑计划课题(2006BAD32B02);河南省林木重大病虫害成灾机理及可持续控制技术研究(081100911400);长江学者与创新团队发展计划(PCSIRT0607);国家科技基础条件平台项目(2005DKA21207-7)。3北京林业大学森林病理研究生覃丰全、倪杨、罗军参加部分试验工作;山东省菏泽市林业局牛迎福先生提供病害标本,在此一并致谢。PathogenidentificationofPopulus×euramericanaCankerDiseaseHeWei1 RenFeijuan1 GuoLimin3 LiYong1,2 ChangJupu3(11KeyLaboratoryforSilvicultureandConservationofMinistryofEducation,BeijingForestryUniversity Beijing100083;21ResearchInstituteofForestEcology,EnvironmentandProtection,CAF Beijing100091;31ForestryResearchInstituteofPuyang,HenanProvince Puyang457000)Abstract: AnewcankerdiseaseoccurredonPopulus×euramericanacv1‘74Π76’andP.×euramerican‘zhonglin46’inPuyang,HenanProvinceandHeze,ShandongProvinceinresentyears,andcausedseveredamagetothepoplars.Diseaseincidenceincreasedyearafteryear.Determinationofthepathogenofthediseaseisinanurgentneed.Ninety2sixsamplesofthecankerwerecollectedfromstandsofdiseasedpoplarsand10isolateswereobtained,amongwhichmostisolatesbelongedtogenusFusarium.TheisolateswereinoculatedonbothhydroponicstemandpottedtwoyearsoldseedlingsofPopulus×euramericanacv1‘74Π76’for4～5daysat25℃.Re2isolationfromthelesionformedbytheinoculationwasthesameastheinocula,demonstratingthattheisolateMz01wasapathogenicstrainofFusariumsolanibasedonitsmorphological.ThesequencesoftheisolatesMz01wereamplyfiedbyPCRtechniquewithuniversalprimersoffungi,andthesequenceswerefurthercomparedwiththatinGenBank.Themolecularidentificationconfirmedthesameresultsfrommorphologyidentification.ThisisthefirstreportthatFusariumsolaniisthepathogenofcankerdiseaseinPopulus×euramericanainChina.Keywords: Populus×euramericanacankerdisease;pathogen;Fusariumsolani 近几年,优良品种欧美杨107杨(Populus×euramericanacv1‘74Π76’)等在河南、山东等省得到迅速推广,仅河南省欧美杨树种植面积达近133万hm2。但是,在大面积发展速生杨造林的同时,病虫害问题成为制约生产发展的因素之一。2005年5月在河南濮阳首次观察到在6年生107杨树上出现树皮开裂、从树皮裂缝中流出大量汁液、树干韧皮部局部坏死、坏死处组织肿胀的症状。2006年在河南濮阳、山东兖州多块林地观察到此病害的发生。2007年在上述2地的107杨和中林46杨(P.×euramericana‘zhonglin46’)上普遍发生,发病率一般为30%～50%,病害严重的林分病株率达70%以上。2008年病害发生的面积和严重程度又有所增加。感病树木病部枝条和树干顶梢枯死,树木材积和其他可利用部分减少;大量伤流的产生,损耗树木养分,严重影响树木的健康生长。在欧美杨上,此症状国内未见报道。类似的症状在美国见于北美鹅掌楸(Liriodendrontulipifera)(Dochingeretal.,1962),另外,在糖槭(Acersaccharum),枫香树属(Liquidambar)也有发生(Skelly,1964)。Boyce(1961)报道了在加拿大魁北克省发生在美洲黑杨(Populusdeltoids)上由茄镰孢菌(Fusariumsolani)引起的溃疡病。同年,在美国密西西比河沿岸的美洲黑杨上也出现由茄镰孢引起的溃疡病(Toole,1963)。1965年春,在美国衣阿华州7年生的威斯康星5号杨(美洲黑杨的一个无性系)和杂交杨上发生了由茄镰孢引起的杨树溃疡病,进一步的调查表明,2个有白杨派树种亲缘的无性系也受到感染。它们是5年生的大齿杨(Populusgrandidentata)和银白杨(P.alba)的天然杂交种。发病树木树干上出现线形的裂缝,干形受到明显损害。1年生的溃疡斑可扩展到013m,病害严重时溃疡病环割树干(Dochingeretal.,1967)。从症状看,该病与以前普遍发生在毛白杨等杨树上由冻害造成的破腹病不同,而与北美报道的阔叶树溃疡病的特征相似。生产上迫切需要明确病原,本文在对病害标本分离、纯化、接种、致病性测定,明确病原的基础上,根据病原菌形态特征和病菌的核糖体DNA(rDNA)内转录间隔(internaltranscribedspacer,ITS)的序列特征,鉴定速生杨伤流溃疡病的病原。以明确病原菌的种类,为进一步研究病害的发生规律、制定防治措施提供参考依据。1 材料与方法111 供试材料11111 接种杨树品种 2年生107杨,由中国林科院中林公司提供。11112 培养基 包括以下2种(灭菌条件:121℃,20min):1)PDA培养基;2)稻秆培养基:将3g稻秆洗干净后剪成015cm长的小段,加入有10g琼脂粉的1L水中,加热搅拌至琼脂溶化后灭菌。11113 引物 真菌核糖体基因转录间隔区ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)ΠITS4:(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)由上海英骏生物技术有限公司合成。112 试验方法11211 病样的采集与微生物分离纯化 于2007年9月28日、2008年5月5日、7月23日和10月2日先后4次在河南省清丰县、濮阳县、南乐县和山东菏泽等地发病严重的林地,观察和记录病害的症状特点,调查林地的病株率,采集具有典型症状的病组织,用常规组织分离方法,在实验室用PDA培养基进行分离,25℃下培养,纯化后对分离物进行归类、编号和转管保存。11212 致病性测定 采用无伤接种和苗干伤皮接种2种方式对盆栽2年生苗木和玻璃缸水培2年生主干干条进行接种。1)接种体:将PDA上培养7～10天的分离物,真菌制取菌饼(Φ6mm),细菌则用无菌水稀释成107・mL-1的菌悬液,备用。2)树苗的培育:将来自中国林业科学研究院房山育苗基地的2年生107杨苗木分别栽植于盛有灭菌的土壤花盆中和北京林业大学森保研究室院内土壤中。水培接种时,从生长旺盛的健康苗木上截取直径约215～3cm,长30cm的2年生苗干,放入经消毒的玻璃缸内,缸底部盛2cm深的无菌水,使苗干下端截面被水淹没,每隔2天换1次水,苗干上端包裹透明胶带,防止水分散失,室内自然光下培养。3)接种(1)伤皮接种:真菌接种:用湿棉球清洁苗干表皮,再用蘸有75%酒精的棉球擦洗苗干,待酒精挥发后,用孔径6mm的打孔器在苗干上切去树皮块,将备好的同样直径的真菌分离物菌饼,菌丝体与苗干木质部相贴接入伤口处,对照接入无菌的培养基饼。细菌接种:在苗干接种点用消毒的大头针刺伤皮层,用滴管吸取011mL细菌悬液,滴加到刺伤处,对照在刺伤处滴无菌水。接种后用透明胶带包裹接种点,防止水分散失,6天后去掉透明胶带。(2)无伤真菌接种:接种处表面清洁消毒后,用分离物真菌孢子悬浮液(15×40倍镜下,30个分生孢子Π视野)浸湿棉球,对照用无菌水浸湿棉球,包裹在苗干表面,外面包裹塑料薄膜,上下两端用线绳扎紧。每根苗干和每株盆栽苗各接种3个点,每个处理5根苗干或5株苗木,2次重复,每处理共接种10株。接种后的杨树苗木和苗干在室内培养(温度23～25℃)。4)发病植株的再分离:接种后3天开始观察记录发病情况。取接种发病组织分离,并以分离物的培养性状和孢子形态等特征与最初的接种分离物进行比较。11213 调查统计方法 接种发病率(%)=接种发病点数Π接种点数×100%。11214 病原菌的生长及形态学观察 均在25℃下培养。1)生长速率:将病原菌接种于PDA平板上,黑暗条件下培养5天后用十字交叉法测量菌落生长直径,计算生长速率。2)孢子形态:将病原菌接于稻秆培养基上,14天后在显微镜下观察其分生孢子形态,并照相记录。3)孢子着生方式:在灭菌培养皿中放置无菌载玻片,加1%水琼脂,将病原菌接于其上,盖上盖玻片,保温培养3天后,观察并照相记录。4)分生孢子的测量:取用Mz01菌株接种发病组织上产生的分生孢子和稻秆培养基上产生的厚垣孢子,用蒸馏水作浮载剂,在Nikon光学显微镜下(15×40)用测微尺测量,每种类型的分生孢子均测量30个。501 第6期贺 伟等:欧美杨溃疡病的病原鉴定11215 病原菌的分子鉴定 用真菌的通用引物对ITS1ΠITS4对病原菌进行PCR扩增(White,1990),对获得的扩增产物进行测序,将得到的序列在GenBank中进行比对,通过同源性分析对病原菌进行鉴定。1)病原菌总DNA的提取:试验菌株为Mz01和培养性状与之相似,同样来自107杨病株的Mz02。菌丝培养用PDA培养基,25℃培养7天,DNA提取采用CTAB提取方法。2)rDNAITS的扩增与序列测定:采用真菌核糖体基因转录间隔区(ITS)通用引ITS1ΠITS4,扩增该病原菌的ITS和518SrDNA。PCR反应采用50μL反应体系,包括模板DNA溶液2μL(约10ng)、10×PCRbuffer510μL、215mmol・L-1dNTP410μL、715pmol・μL-1的ITS1和ITS4引物各115μL、5U・μL-1Taq酶(含MgCl2)015μL、加ddH2O至50μL。扩增反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min、55℃退火1min、72℃延伸115min,35个循环,72℃延伸8min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测后,直接委托上海英骏生物技术有限公司进行纯化和序列测定。3)病原菌rDNAITS序列同源性比较:将菌株Mz01和Mz02的rDNAITS序列在NCBI网站上(http:ΠΠblast1ncbi1nlm1nih1govΠBlast1cgi)用BLAST软件与GenBank中已知种属的rDNA序列进行比对和同源性分析。2 结果与分析211 病害症状与危害程度在107杨和中林46杨上,病害主要出现树木的主干上。树干上从基部向上015～10m的范围内均可出现溃疡斑,而以4～6m处较多。1株树上可产生1到多个病斑,最多的有8处病斑。4月下旬至5月中旬,在枝干上形成小型病斑,树皮呈湿润状,随着气温的升高,病斑逐渐扩展,病部皮层开裂,裂口边缘的皮层组织腐烂,皮层下的木质部表层产生白色乳状粘液,发出酸臭味,自发病部位流出大量黑褐色液体,发病部位流出的液体可自6～8m的树干上流至干基部(图版Ⅰ-A)。8月份液流最多。发病后期,病部皮层干枯,树皮翘起,撕裂状,与木质部剥离,病部木质部浅层(1～2mm)变褐,少数严重的木质部变色深度达2cm。在病部树皮上出现肉桂色垫状物,为病菌的分生孢子座和分生孢子(图版Ⅰ-B)。溃疡斑长20～30cm,宽3～5cm。少数病株在出现溃疡斑的地方风折,风折处木质部变色深达2～3mm。在侧枝和1年生主干,常局部出现疙瘩状肿胀,剖开肿胀处,皮层变色处呈不规则线纹,其下木质部表层少许变色。病害在10月上旬停止发展。病害引起树体生长衰弱,在病斑周围常出现杨树腐烂病和杨树水疱型溃疡病的病斑。少数发病严重的植株枯死。已发病株第2年不再复发,但也有少数病株,第2年5月份在先年病斑的边缘向外扩展,流出树液。从病害症状看,此病害为典型的1年生溃疡病。该病2005年5月在河南省濮阳县海通乡刘吕丘村4年生的中林46杨树林地首次发现;2006年该病在濮阳县、清丰县相继出现,在林地零星发生,个别地块病株率为17%;2007年部分林地已造成严重危害,清丰县阳邵乡南阳建村,5年生中林46杨林地,病株率达50%。2008年在清丰县柳格乡面积约4hm2,分别栽植中林46杨和欧美107杨的杨树林中,各随机抽取100株调查,中林46杨,病株率达75%,而与之相邻的6年生欧美107杨,病株率为60%。212 病样的采集及分离结果分别于2007—2008年共4次从濮阳市清丰县、濮阳县、山东菏泽等地,采集到杨树伤流溃疡病典型症状的树皮皮层、木质部变色、肿胀组织共96份样品,经分离、纯化、共获得108个菌株,根据菌落形态、色素产生情况和分生孢子的基本形态的相似性进行合并分类编号,鉴定出2株菌落颜色不同的细菌,2株有明显差异的镰孢菌和多种真菌。其中细菌21株、真菌87株。Mz01为优势菌株,其次是Cz02,Cz03和Cz05,分别为5311%,1717%,1315%,813%,其他真菌分离频率较低(表1)。213 分离物致病性接种于2008年8月26日,选择分离频率较高的4个分离物进行离体苗干水培接种。伤皮接种中,Cz03和Cz05的2株细菌不致病,Cz02的真菌亦无致病力,Mz01的菌株则具强烈致病性,接种30点全部发病。接种后第4天,从接种点流出少量褐色的汁液(图版Ⅰ-C),第5天流汁量最大,第6天流汁量很少,第7天停止流汁,在苗干上留下褐色液渍,此时病斑开始扩展。在坏死的皮层上出现菌丝,病斑纵向扩展较横向扩展明显。接种后13天,横向扩展315～5mm,纵向扩展515～13mm,其上产生白色菌丝体和乳白色粘团,镜检为病菌的分生孢子堆;对照伤皮处无树液流出,伤口4周变褐约115～3mm,其上未产生菌丝和孢子(图版Ⅰ-D)。接种点以外其余皮层组织为绿色,表明苗干组织仍保持生活力。接种23天后,接种Mz01的整个枝段皮层全部变黑,接种点周围的坏死皮层和皮孔组织上,长出大量白601林业科学45卷
杨树锈病病原菌的分子鉴定及防治措施
《杨树锈病病原菌的分子鉴定及防治措施》
【摘要】青杨铸病是互助县杨树人工林和天然林的重大病害之一，在纯林或落叶松混交林中均普遍发生并造成严重的经济损失，该研究对互助县南门峡林场杨树锈病病原菌进行了分子鉴定，为明确其正真的病原菌种类并总结了防治措施。
【关键词】杨树 锈病 分子鉴定 防治技术
1 病害调查
2015-2017年，在互助县南门峡林场选取10块标准地，7～10月每隔1月调查一次青杨锈病发病率与病情指数。标准地的设置为每块标准地面积约为30×30m
经调查发现，青杨锈病主要危害青杨苗木和新生叶片，导致未成熟芽早落，该病害于5-6月在叶背出现退绿斑点并产生夏孢子堆，并产生桔黄色小泡，破皮后散出黄粉堆，严重时黄粉布满整个叶背，9月，叶正面出现锈红色斑点，并逐渐变成棕色至褐色的冬孢子堆，叶子提前脱落，树木长势变弱易受其它病原物侵染。
2 病原菌分子鉴定
2.1 夏孢子DNA提取
取夏孢子DNA，用灭菌载玻片刮取新鲜夏孢子堆于灭菌研钵中研磨，置于1.5mL离心管内，具体加样步骤如下：①加20μl的Lysozyme溶液，混合，室温静置6min；②加30μl的EDTA Buffer，混合，室温静置5min；③加200μl的Solution A，振荡，65℃保温10min；④加400μl的Solution B，剧烈振荡15S；⑤加650μl的So-lution C，混合；12，000rpm離心1min，弃上层，将无色下层移人预先置于1.5ml离心管上的Filter Cup中，12，000rpm离心1min。⑥弃Filter Cup，在滤液中加入450μl的DB Buffer，混合均匀。将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。⑦将上述操作的混合液转移至Spin
Column中，12，000rpm离心1min，弃滤液。⑧将500μl的Rinse A加入至Spin
Column中，12，000rpm离心1min，弃滤液。将700μl的Rinse B加入至Spin Column中，12，000rpm离心1min，弃滤液。⑨将Spin Column安置于CollectionTube上，12，000rpm离心1min。⑩将Spin Column安置于新的1.5ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入60μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1min。12，000rpm离心1min洗脱DNA。