单纯皮内变态反应和比较变态反应在奶牛结核病检测中的应用
皮内变态反应试验和IFN-γ试验在奶牛结核病检测中的比较研究
皮内变态反应试验和IFN-γ试验在奶牛结核病检测中的比较研究王曲直;沈素芳;杨显超;赵洪进;卢军;唐文红;王建;夏炉明【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2015(31)12【摘要】目的比较分析皮内变态反应试验和IFN-γ试验,为临床应用提供依据.方法对4个奶牛场的奶牛开展单纯颈部皮内变态反应试验(SICT)、比较皮内变态反应试验(SICCT)、尾根试验(CFT)和IFN-γ试验的比较研究.结果国产牛型PPD和进口牛型PPD在1 745头试验牛中检出阳性符合牛19头,两种方法一致性高;进口牛型PPD SICT和SICCT在1 107头试验牛中检出阳性符合牛5头,两种方法一致性中度;国产牛型PPD SICT和SICCT在1 316头试验牛中检出阳性符合牛3头,两种方法一致性弱;SICT和CFT在599头试验牛中检出阳性符合牛17头,两种方法一致性高;SICT和IFN-γ试验在236头试验牛中检出阳性符合数为1头,两种方法一致性微弱;SICCT和IFN-γ试验在362头试验牛中检出阳性符合牛10头,两种方法一致性中度.结论应根据不同地区的结核病流行率和结核病净化进程选择适合的检测方法.【总页数】5页(P1162-1166)【作者】王曲直;沈素芳;杨显超;赵洪进;卢军;唐文红;王建;夏炉明【作者单位】上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103【正文语种】中文【中图分类】R378.91【相关文献】1.γ-干扰素试验和皮试变态反应对检测奶牛结核病的比较 [J], 陈祥;徐正中;时振华;范峰;蒋锁俊;孟闯;黄根成;单锋丽;焦新安2.皮内变态反应试验检测奶牛结核病的假阳性率初步测定及对策 [J], 王永斌;谭余权3.牛型结核菌素皮内变态反应试验和γ-干扰素ELISA试验检测奶牛结核病的比较研究 [J], 豆思远;曹丽萍;王佳;周峰;程文杰4.应用皮内变态反应和γ-干扰素体外释放试验检测奶牛结核病的比较研究 [J], 邓永强;阳爱国;郭莉;侯薇;文豪;陈冬;吴宣;邢坤;张代芬5.单纯皮内变态反应和比较变态反应在奶牛结核病检测中的应用 [J], 沈素芳;王曲直;赵洪进;唐文红;刘佩红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
奶牛结核病实验室诊断技术研究进展
奶牛结核病实验室诊断技术研究进展牛结核病（Bovine Tuberculosis）是由牛分枝杆菌引起的一种慢性传染病。
该病传染性强，且能通过奶制品传染给人和其他动物，危害严重，被世界动物卫生组织（OIE）列为B 类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。
牛结核病的诊断大体上可归为两类：一是临床症状诊断；二是实验室诊断，包括细菌学检测，如涂片镜检、细菌培养、动物实验等；免疫学检测；分子生物学诊断技术等。
传统的细菌学方法由于繁琐费时、检出率低、灵敏度差，已不能满足当前疫病诊断的需要。
目前世界各国都在致力于研究开发牛结核病的快速诊断方法，并已经建立了一些快速、准确、可靠的新型检测技术，有些技术已经在生产实践中得到了广泛的应用。
1 细菌学检测细菌学检查的方法有涂片镜检、细菌培养等。
临床上样品中的牛分枝杆菌可通过涂片抗酸染色、镜检并通过细菌培养做出确认。
涂片抗酸染色法所需材料、设备简单，操作方法简便，是较为普遍应用的方法。
由于此法检出的细菌只能说明有抗酸杆菌存在,而且也不能准确地鉴定出结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌，因此,其缺乏特异性。
细菌培养需在37℃培养3～8 周才可生长。
菌落形态粗糙，中心隆起，周围大而边缘不规则，菌落颜色微白。
细菌培养法到目前为止仍被认为是确诊结核的黄金标准。
但牛结核分枝杆菌生长缓慢，有10%～20%的病例结核菌培养失败。
同时由于各种条件的影响，阳性率较难提高。
2 血清学检测2.1 传统的结核菌素皮内变态反应（OT,PPD）OT 是老式皮内变态反应，PPD 是目前公认最有效的方法，也是被世界动物卫生组织（OIE）确定的法定检疫方法，被世界各国接受和采用的方法。
它主要是用提纯的PPD 进行牛皮内接种，于72-96小时后观察有无热、痛、肿胀等反应，对可疑的牛需60d 后再次复检。
该方法检出率和准确率都比较高。
PPD 作为皮肤试验最大的缺点就是易呈现假阳性和假阴性反应。
当感染副结核分枝杆菌等环境分枝杆菌时则可能呈现假阳性反应，即PPD 中大多数蛋白质与其他分枝杆菌和一些无关细菌的相同。
不同监测方法在奶牛结核病检疫中的应用
摘
要 ：为 了解牛型提 纯结核 菌素ｌ ￣ Ｐ ｆ ） 皮 内变态反 应试验 和牛结核 一 干扰 素Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ＇ ￣
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７ １ 王海林， 舒适， 郑 家三， 等．黑龙江 垦区规模化 奶牛场肢蹄痛 的调 调 查 数据 显 示 ，胎 次 、年龄 与 奶 牛肢 蹄病 的关 系不 【
尽 相 同。３ － ６ 胎 次奶 牛 的发 病数 较 多 ，占 总发 病 头数 的
８ ５ ． １ ９ ％ 以上 ，其 原 因可 能 是 奶 牛 体 内 物 质代 谢 旺盛 ，
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收稿 日期 ： ２ ０ １ ６ — ０ ６ — ２ ０
内变 态 反 应 （ ＧＢ ／ Ｔ １ ８ ６ ４ ５ — ２ ０ ０ ２），但 该 方 法 具 有操
营养 供 给 ，／ Ｊ Ｄ ， ￣ ０ 了蹄 变形 严 重程 度 ，二者 之 间 差异 极显 机 体 抵抗 力 相对 下 降 ，发病 率 大幅 上升 。还 应值 得 关 注 著 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ １） 【 ６ ］ 。蹄 变 形和 蹄 叶炎 易使 蹄 抵抗 力下 降 ，
Ｉ ３ １ 吴树清， 马刚 ， 等 内蒙古 包头地 区奶 牛 变形蹄 与蹄 病的发 生及 相 关因素的调 查ｌ ＿ ｌ ｌ 畜牧 与饲料科 学， ２ Ｏ （ ， Ｉ ４ 邓益锋 ， 仇焕雷， 芮荣． 奶牛蹄 变形及蹄病发 生规律的研 究ｌ Ｊ ｌ ＿ 动
介绍奶牛结核病PPD反应的三种检疫判断标准
牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的人、畜和禽共患的一种慢性传染病，人结核的10％以上由牛分枝杆菌引起。
世界各国对结核病大多采取检疫净化的方法进行控制，皮内变态反应是世界动物卫生组织（OIE）唯一指定的检疫方法，其判断标准有三种：1、我国的国家标准注射方法：不论牛只大小，一律皮内注射0.1mL（20000 IU/ mL）的牛型提纯结核菌素，72h 后观察结果。
阳性反应：局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0 mm 。
疑似反应：局部炎性反应不明显，皮厚差大于或等于2.0 mm，同时小于4.0 mm ；阴性反应：无炎性反应，皮厚差在2.0 mm以下。
2、欧盟的对比PPD试验在注射牛型提纯结核菌素（注射方法、剂量同我国的标准）的同时，在牛的颈部另一侧对应部位（或在颈部同一侧，但两次注射的位置间隔大约为12～15cm），皮内注射禽型PPD（20000 IU/ mL） 0.1 mL，72h后观察结果。
阳性反应：牛型PPD反应阳性，且比禽型PPD反应大4mm以上；疑似反应：牛型PPD反应是阳性，并且牛型PPD反应仅比禽型PPD反应多1～4mm；阴性：牛型PPD反应是阳性或阴性，但其反应等于或小于禽反应。
3、世界动物卫生组织（OIE）判断标准仅用牛性结核菌素进行检疫，方法同中国国标，但判断标准较严：局部出现炎性反应，皮厚差≥2.0mm，判断为阳性；皮厚差<2.0mm判断为阴性。
综合来看，世界动物卫生组织（OIE）在牛结核变态反应判定标准较为严格。
欧盟比较法皮内变态反应是对传统的牛型PPD法的改进，能够区别被检动物是由牛型分枝杆菌感染还是由其它非典型分枝杆菌感染，可避免由于禽结核分支杆菌引起的非特异性反应，减少无害化处理损失，对于我国的奶牛结核病检疫净化具有一定的借鉴作用。
几种牛结核病检疫方法在结核污染牛群中的应用研究的认识
几种牛结核病检疫方法在结核污染牛群中的应用研究的认识作者：吴肃来源：《农家科技》2018年第06期摘要：文章主要针对几种牛结核病检疫方法在结核污染牛群中的应用进行分析，结合当下牛结核病检疫方法发展现状，从实验材料与方法、研究结果、研究分析方面进行深入研究与探索，更好的推动牛结核病检疫方法的发展与进步。
关键词：牛结核病；检疫方法；结核污染随着我国畜牧业的快速发展，牛结核病情在我国的蔓延程度也逐渐加快，使得人们对于其检疫方法逐渐重视，并通过科学方法实现对牛结核病的预防与控制。
但当前我国经常使用的方法为皮内变态反应，而对其的运用也缺少相应的成熟性。
一些发达国家则长使用皮内变态反应与γ-干扰素等试验方法，进而在其良好的检测效果影响下，使得其受到了人们的广泛关注与认同。
一、研究材料与方法1.研究材料。
首先，准备较为完善的单纯牛型提纯结核菌素（PPD）与像一个的试剂盒。
其中变态反应试剂主要分为进口牛型提纯的PPD与禽型提纯的PPD，同时还配备良好的牛结核分枝杆菌，即γ-干扰素检测试剂盒。
其次，研究使用的牛群主要为我国某地区2880头活牛。
2.研究方法。
其一，牛结核皮内变态反应实验。
其主要结合我国有关部门制定的《动物结核并诊断技术》标准进行科学的研究与处理。
其二，欧美对比变态反应。
其与牛结核变态反应实验具有较强的相似性，也就是在对PPD注射的基础上，在牛境位置的其他位置（最好为另一侧）一同注射注射进口牛型与禽型PPD，而两者之间的间隔应为12厘米至15厘米之间，注射计量为每头牛3000IU与2500IU。
其中注射前后的实验结果检测应有同一人完成。
其三，γ-干扰素检测。
这种实验可分两个方面：一方面为抗原刺激。
对每头牛都采集5mL肝素抗凝血液，并在室温环境下30小时内运输到实验位置。
接着将各抗凝血提取1.5mL防止在3个孔洞中，在使用100μL牛型PPD、禽型PPD、阴性对照；磷盐酸缓冲液等添加至抗凝全血中，在均匀搅拌后放置时在二氧化碳含量为5%的培养箱中培养16小时，其中培养箱温度为37℃。
单纯皮内变态反应和比较变态反应在奶牛结核病检测中的应用
单纯皮内变态反应和比较变态反应在奶牛结核病检测中的应用沈素芳;王曲直;赵洪进;唐文红;刘佩红【摘要】通过对常用的单纯颈部皮内变态反应(SICT)、比较变态反应(SICCT)检测方法的比较,分析不同检测方法的优缺点,为临床应用提供依据.本试验对某奶牛场205头奶牛进行SICT和SICCT检测.结果显示205头牛中,进口牛型PPD和国产牛型PPD的SICT阳性牛符合数为8头,阳性符合率为69.57％(8/11.5);进口牛型PPD的SICT和SICCT两者之间的阳性符合数为3头,阳性符合率为46.15％(3/6.5);国产牛型PPD的SICT和SICCT两者之间的阳性符合数为1头,阳性符合率为14.29％(1/7).结论表明,SICT具有较高的阳性检出率,敏感性较高;与SICT相比,SICCT具有较好的特异性.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2013(049)010【总页数】4页(P21-24)【关键词】牛结核;单纯皮内变态反应;比较变态反应【作者】沈素芳;王曲直;赵洪进;唐文红;刘佩红【作者单位】上海市动物疫病预防控制中心,上海长宁201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海长宁201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海长宁201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海长宁201103;上海市动物疫病预防控制中心,上海长宁201103【正文语种】中文【中图分类】S858.23牛结核病是由牛分枝杆菌和结核分枝杆菌引起的重要人畜共患病，被列为国家二类动物疫病。
牛分枝杆菌和结核分枝杆菌都能感染人和多种动物，尤其是牛，形成人与人之间、动物与动物之间，人和动物之间的相互传播关系，造成严重公共卫生问题。
2000年第4次全国结核病流行病学抽样调查报告显示，全国人口的结核感染率为44.5%［1］。
一些研究认为肺结核病人中约15%的结核病人是饮用了结核病牛的奶而发病［2］。
1985年、1987年进行的两次全国奶牛抽样调查结果，牛结核病患病率分别为5.83%和5.34%［3］。
奶牛结核病检测方法
奶牛结核病检测方法奶牛结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可以影响奶牛的健康和生产能力，还可以通过食用患有结核病奶牛的牛奶和肉类传播给人类。
因此，对奶牛结核病进行及早的检测和防控非常重要。
下面将介绍几种常用的奶牛结核病检测方法。
一、皮内试验皮内试验是目前最常用和经济实用的奶牛结核病检测方法之一。
这种方法通过在奶牛的皮肤下注射结核菌抗原，观察注射部位是否产生特异性的变应反应来判断奶牛是否感染结核菌。
结果的判断是根据注射后48~72小时观察注射部位是否有明显的硬结和红肿，硬结直径大于10mm者为阳性反应，表明该奶牛可能感染有结核菌。
需要注意的是，皮内试验属于间接试验，存在一定的假阴性和假阳性的可能性，因此在实际应用中需要与其他检测方法相结合来判断奶牛结核病的感染情况。
二、血清学检测血清学检测是通过检测奶牛血液中特异性抗体的存在来诊断奶牛结核病。
常用的血清检测方法包括血液凝集试验、酶联免疫吸附试验和胶体金试验等。
这些方法的原理是将感染结核菌的奶牛的血清与结核菌抗原进行反应，然后通过不同的检测方法观察血清的凝集、发色等反应，判断是否存在结核菌的感染。
相比于皮内试验，血清学检测方法具有操作简单、准确性高等优点，但也存在着一定的假阳性和假阴性的可能性，因此也需要与其他方法相结合来判断奶牛结核病的感染情况。
三、结核菌培养结核菌培养是通过在适当的培养基中培养样本中的结核菌，然后观察菌落的生长情况和形态特征来判断奶牛是否感染结核菌。
这种方法是目前诊断结核病的“金标准”，对确定结核病感染的确诊具有重要意义。
但是，结核菌培养的过程需要较长时间，通常需要培养4-6周才能得到结果，因此不太适合作为常规的奶牛结核病筛查方法。
此外，结核菌培养的操作较为复杂，需要较高的实验室技术和设备条件。
四、核酸检测核酸检测是通过检测奶牛体内结核菌的核酸（基因）来判断是否感染结核菌。
这种方法的优点是操作简便、结果快速，对于早期结核病感染的检测具有较高的灵敏度和特异性。
田阳县应用皮内变态反应监测牛结核病
按照（广西壮族自治区中长期动物疫病防治 规划（2012—2020年）》和《2019年广西壮族自治 区动物疫病监测与流行病学学查计划》目标要求 和相关病种防治计划，我县开展牛结核等人畜共患 病监测是例行年度动物疫病防治工作计划内指标。 牛结核病# Bovine Tuberculosis）是由牛型结核分枝 杆菌#Mycobacterium bovis）引起的一种人兽共患的 慢性传染病[1],奶牛最易感，其次黄牛、水牛等动 物为易感对象，人也可被感染，我国将其列为二类 动物疫病。结核病病牛是本病的主要传染染，临床 症状呈慢性经过，以肺结核、乳房结核和肠结核最 为常见叫牛型结核分枝杆菌随鼻汁、痰液、粪便 和乳汁等排出体外，健康牛可通过被污染的空气 、 饲料、饮水等经呼吸道、消化道等途径感染[1]o近 年来，随着国家鼓励种草养畜的推广，我县规模养 牛场迅猛发展，目前全县年养殖量100头企上的养 牛场有5家，以繁殖和育肥为主，由于牲畜来源广 大，调运频繁，病种检测少，引进牛牛时仍没有普及 检测牛结核病的个例,特别是引入牛牛后用来自繁 自养的牛，携带牛型结核分枝杆菌风险高。因此， 牛结核病防治任重而道远，形势不容乐观。近两 年，田阳县坚持采取牛结核病PPD皮内变态反应 检测法，-11 -10 作者简介:林许峰，男（1973 -03 -），大专，畜牧兽医师，主要从事
动物疫病监测、诊断、防治治社医技术研训等工作。
2.1对山友现代农业综合开发有限公司的调查 养殖场位于百色市田阳县坡洪镇局盛村，东经
106。43'14",北纬23。38'24",公司占地面积235亩, 养殖场占地面积10亩，公司发展定位是种养循环 模式，即充分利用养殖场的粪污经发酵喷施果表。 养殖场存栏西门塔尔牛110头（公牛3头,后备母 牛和能繁母牛95头，小犊牛12头），其中于2019 年7月份新引进80头西门塔尔后备母牛，有吉林 省动物检疫部门出具的检疫证明和口蹄疫检测报 告书，但无牛结核病和布鲁氏杆菌病检测报告。 2019年9月份由田阳县坡洪镇宏牧动物防疫技术 专业合作社防疫员对该场免疫注射牛口蹄疫疫苗 105头，动物养殖档案填写清楚，记录齐全。经询 问，该养殖场引牛作自繁自养，引牛牛来无重大疫 病发生。 2.2对黄纯养牛场开展流行病学调查
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中 国兽 医杂 志 ２ ０ １ ３年 （ 第 ４ ９卷 ） 第 １ Ｏ期 ２１
单 纯 皮 内变 态 反 应 和 比较 变 态 反应 在 奶 牛 结 核 病 检 测 中 的应 用
沈 素 芳 ，王 曲 直 ，赵 洪 进 ，唐 文红 ，刘佩 红
（ 上 海 市 动 物疫 病 预 防 控 制 中心 ，上 海 长 宁 ２ ０ １ １ ０ ３ ） 摘要 ： 通 过 对 常 用 的单 纯 颈 部 皮 内 变 态 反 应 （ ｓ Ｉ Ｃ Ｔ） 、 比较变 态反应 （ ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ） 检测方 法 的比较 ， 分 析 不 同 检 测 方 法 的优 缺 点， 为 临 床 应 用 提 供 依 据 。本 试 验 对 某 奶 牛 场 ２ ０ ５头 奶 牛 进 行 Ｓ Ｉ Ｃ Ｔ和 Ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ 检 测 。结 果 显 示 ２ ０ ５头 牛 中 ， 进 口牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 和 国产 牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ的 Ｓ Ｉ Ｃ Ｔ 阳性 牛符 合 数 为 ８头 ， 阳性符合率为 ６ ９ ． ５ ７ （ ８ ／ ｉ ｉ ． ５ ） ； 进 口牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ的 Ｓ Ｉ Ｃ Ｔ和 Ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ 两 者 之 间 的 阳性符合数为 ３ 头， 阳性符合率 为 ４ ６ ． １ ５ （ ３ ／ ６ ． ５ ） ； 国产 牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ的 Ｓ Ｉ Ｃ Ｔ和 ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ 两 者 之 间 的 阳性 符 合 数 为 １头 ， 阳性 符 合 率为 １ ４ ． ２ ９ （ １ ／ ７ ） 。结 论 表 明 ， Ｓ Ｉ Ｃ Ｔ 具 有 较 高 的 阳性 检 出率 ， 敏感性较高 ； 与Ｓ Ｉ Ｃ Ｔ相 比 ， Ｓ Ｉ Ｃ Ｃ Ｔ具 有 较好 的 特 异性 。
关键词 ： 牛结核 ； 单 纯 皮 内 变 态 反 应 ；比 较 变 态 反 应
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ８ ． ２ ３
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ： ０ ５ ２ ９ — ６ ０ ０ ５ （ ２ ０ １ ３ ） １ ０ — ０ ０ ２ １ 一 Ｏ ３
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