高效苯酚降解菌的筛选及其特性的研究
鉴定该菌为球 菌， 兰氏染色阴性 。 实验结果表 明 ： 革 降解苯 酚的最佳条件为 ： 温度 ３ 、 Ｈ值 ７ ８ 葡 萄糖 浓度 １５０ｍｇ 、 ０ｏ ｐ Ｃ ～， ０ ／ 接 Ｌ
种 量 ｌ％、 液 量 ５ Ｌ Ｏ 装 ０ｍ 。 关键词 ： 酚 ； 化 ； 苯 驯 筛选 ； 响 因素 影
文章 编 号 ：６ ４ １２ （０ ０ ０ — ０ ５ ０ １ ７— ０ １ ２ １ ）９ ０４ — ３
长所 需 的各种 营 养物 质 。实 际工 业含 酚废 水 中可 能 苯 酚是 一种 重要 的有 机化 工 原料 ，是 丙烯 的重
要 衍 生物 之 一 ， 要用 于 生 产 酚醛 树 脂 、 主 己内酰 胺 、 双 酚 Ａ、 己二 酸苯胺 以及 水杨 酸 等 …， 成 为这 些 工 并
ｄｏ ｅ１ ％ ，ｉ ｉ ｏ ｕ ｅ５ ｍ Ｌ ｓ ０ ｌｑｕ ｄｖ ｌ ｍ ０ Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｈｅ ｏ ； ｃ ｌｍａｔ ａｉ ｎ ｓ ｒ ｅ ｎｇ ｆ ｃｏ ｓ ｐ ｎ ｌａ ｃ ｉ ｉ ｔｏ ； ｃ ｅ ｎｉ ； ａ ｔｒ ｚ
中 图分 类 号 Ａ
Ｋ２ ＨＰＯ４０． Ｌ， Ｓ ５ Ｍｇ Ｏ４‘ ７Ｈ２ ０． ／ Ｃａ ２０． ／ ０ ２ ｇ Ｌ， Ｃ１ １ ｇ Ｌ，
业废 水 中 的主要 污染 物 。 中国等 许多 国家 已将 其列
入重点污染物的名单之中［。 ２ 近年来 ， １ 国内外许多学 者在生物降解苯酚方面进行了广泛的研究 ，已筛选 出多种 降 酚微 生物 菌株 ， 如假 单 胞 菌 （ｓｕｏ ｏａ— Ｐｅｄｍ ｎｓ ｓ． 、 ｐ ） 真养 产碱菌 （ ａｉｅｅ ｕｒ ｈ ｓ …、 Ａｌ ｌ ｎ ｓ ｔ ｐ ｕ ） 醋酸 钙 ｃ ｇ ｅ ｏ
高效苯 酚降解菌 的筛选及其特性 的研究
宋颜彬 魏炜 霍石磊
（ 阳建筑大学 ， 宁沈 阳 １０ ６ ） 沈 辽 １ １８
摘
要 ： 沈 阳 北部 污 水 处 理 厂 的 活性 污 泥 中 筛选 出一 株 具有 降 解 高浓 度 苯 酚 的 菌 株 Ｓ Ｅ ２并 研 究其 降 酚 特 性 ； 初 步 从 Ｇ Ｒ 经
５ Ｌ 蛋 白胨 １． ｇ ， ．ｇ ， ０／ ０ Ｌ 氯化钠 ５ Ｌ ｐ ． ７ 。 ０／ ．ｇ ，Ｈ７ － ． ０／ ４ ６
（） ４ 斜面 培养 基 。于 富集 培养基 中加 入琼 脂 ， 其终 使
含有 对该 降 酚菌 产生 毒 害作 用 的干扰 物质 ，应 视情
况采 取 预处理 或分 级处 理 ＿ 。 ６ ］
仪器 设 备 ： 紫外 可 见分 光 光 度计 、 Ｚ Ｘ１０振 Ｈ Ｑ— ０ 荡 培养 箱 、 Ｎ 一 １２型 电热 恒 温 培养 箱 、Ｄ 一 一 Ｄ Ｐ ９６ Ｔ Ｌ ５Ａ 台式 离心 机 、 台式显 微镜 。 培养基 ：１ （ ）无 机 盐 培 养 基 。Ｋ Ｏ ０５ｇＬ ＨＰ ． ／，
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｆ ｏ ｔ ｅａ ｔ ａｅ ｌｄ ｅｏ ｈ ｎ ａ ｇ ａ ｅ ｇ ｒ ａ ｍｅ ｔ ｌ ｎ， ｉ ｈｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎｏ ｈ ｎ ｌ ｅ ｒ ｄ ｎ ｔ ｉ ｓ ｓ ｅ ｅ ｔｄ ｓ ｒ ｃ ： ｒ ｍ ｃｉ ｔ ｄｓｕ ｇ ｆ ｅ ｙ ｎ ｈ ｖ Ｓ Ｎｏ ｈ Ｓ ｗａ ｅ ｅ ｔ ｎ ａ ｔａｈ ｇ ｏ ｃ ｎ ｒ ｉ ｆ ｅ ｏ ｇ ａ ｉ ｇｓ ａ ｎ ｌ ｃｅ Ｔ Ｐ ａｏ ｐ ｄ ｒ ｗａ ｓ ａ ｄｔ ｅ ｈ ｎ ｌ Ｇ ｎ ｅ ｏ ＥＲ２ｆａ ｕ ｅ ｒ ｔ ｄ ｅ ． ｈ ａ ｔ ｒ ｓｉ ｅ ｔ ｅ ｒ ｌ ｎ ｒｌ ｓ ａ ｎ ｇ ｔ ｅｂ ｃ ｅ ｉ． ｅｒ ｓ ｌ ｈ ｗ ｄｔ ａ ｅ ｈ ｐ Ｓ ｔｒｓ ｅ ｗｅ ｅｓ ｉ ｄ Ｔ ｅｂ ｃ ｅ ｉ ｗａ ｎｉ ｄｐ ｅ ｉ ａ ｉ ａ ｍ－ ｅ ａ ｉ ａ ｔ ｒ Ｔｈ ｅ ｕ ｔ ｓ ｏ ｅ ｔ ｈ ｕ ａ ｄ ｉ ｆ ｍｉ ｙ Ｇｒ ｖ ａ ｓ ｈ ｔ
不 动杆 菌 （ ｉｅｏａｔ ａ ｏｃｔ ｕ ） 。在 含 酚 ｃｎｔ ｃｅ ｃｌ ａｅｉ ｓ ＿等 ｂ ｒ ｃ ｃ ５ 废水 的治 理 中 ，利 用 微生 物处 理 苯酚 是一 种 既经济
又无 二次 污染 的方法 。
Ｎａ １ ． ｇ Ｍｎ Ｏ ・ ０ ００ ／ Ｆ Ｓ ・Ｈ２ ．１ｇ Ｃ ２ ／ ０ Ｌ， Ｓ ４Ｈ２ ．１ｇ ｅ Ｏ４７ Ｏ ００ ／ Ｌ， Ｌ，
Ｎ ２Ｏ １ Ｌ Ｈ ｑ ，．ｇ ，苯 酚按 实验需要 量 添加 ，Ｈ７ — ．。 ０／ ｐ ． ７６ ４ （） ２ 琼脂 平板 培养基 。于无 机 盐培养 基 中加入 琼脂 ， 使 其 终 浓 度 达 到 ２ ／。 （ ） ０ｇ Ｌ ３ 富集 培养 基 。牛 肉膏
从 沈 阳北 部污 水处 理 厂 的活性 污 泥 中筛选 出一 株 可 以利用 苯 酚 作 为碳 源 生 长 的菌 株 Ｓ Ｅ ２该 菌 ＧＲ ， 株对 苯酚具 有 良好 的降解 性能 。通 过对 活 性污 泥 的 驯化 ， 菌株 的分 离 纯化 及 降解苯 酚 的性 能研 究 ， 出 得 了 降解 苯 酚 的最佳 条件 ，旨在 为工 业化 废 水处 理提 供 初 步的参 考数 据 。
ｂ ｓ ｃｎ ｉ ｏ ｓ ｏ ｈ ｎ ｌ ｅ ｒｄ ｔ ｎｔｍｐ ｒｔｒ ｒ ｓ ｌ ｗｓｔｍｐ ｒｔｒ ０（， Ｈ ７ ８ ｇｕ ｏｅｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎ１５ ０ｍｇ ｉｏ ｕａｉｇ ｅｔ ｏ ｄｔ ｎ ｒ ｅ ｏ ｇａ ａｉ ｉ ｆ ｐ ｄ ｏ ｅ ｅａｕ ｅ ｅａ ｌ ：ｅ ｅａｕｅ３ ￣ ｐ － ， ｌｃ ｓ ｏ ｃｎｒ ｉ ０ ＆ ｎ ｃ ｌｔ ｗｅ ｏ ｆ ｏ ２ ａｏ ｎ
一株好氧反硝化苯酚降解菌的筛选和降解特性分析
一株好氧反硝化苯酚降解菌的筛选和降解特性分析一、前言苯酚是一种常见的有机化合物，广泛应用于各种工业领域中，但长期的排放和使用会对环境产生严重的污染。
因此，开发一种高效的苯酚降解菌对于环境保护至关重要。
本研究旨在筛选一株好氧反硝化苯酚降解菌，并对其降解特性进行分析。
二、材料与方法2.1 筛选苯酚菌本实验采用活性污泥为菌源，经过序列分离筛选获得苯酚降解菌。
分离后的菌株进行纯化后，经过16S rDNA序列比对确定其菌种。
2.2 生长条件的优化在不同的培养基和培养条件下，探究苯酚降解菌的最适生长条件，并确定其最适浓度和最适pH值等。
2.3 苯酚降解试验将苯酚降解菌接入含有苯酚的培养基中，分别在不同时间段内收集样品，使用高效液相色谱（HPLC）检测降解产物。
2.4 剖析苯酚降解代谢途径通过GC-MS分析降解菌代谢苯酚的代谢产物，分析苯酚降解代谢途径。
三、结果分析经过序列分析和比对，鉴定出本次筛选获得的菌株为一株好氧反硝化菌，归属于福克斯氏菌属。
本次实验结果显示，最适生长温度为30℃，最适pH值为7.5，最适浓度为250mg/L。
本次实验结果显示，在48小时内，苯酚的降解率可达到85%，降解产物主要为苯酚羟基化物。
GC-MS分析结果显示，菌株代谢苯酚主要通过羟基化、甲基化、环化等途径进行，其中苯酚加氧羟基化产物的比例最高。
四、结论本研究成功筛选出一株好氧反硝化苯酚降解菌，其最适生长条件为30℃，pH值为7.5，浓度为250mg/L。
在48小时内，苯酚降解率达到了85%，代谢途径主要为羟基化、甲基化、环化等。
本研究的结果对于苯酚的治理与处理具有重要的实践意义。
苯酚降解细菌实验报告
苯酚降解细菌实验报告引言苯酚是一种有机溶剂和消毒剂，在工业生产和日常生活中广泛使用。
然而，由于其具有较强的毒性和对环境的潜在危害，苯酚的降解成为了一个重要的研究领域。
本实验旨在从自然环境中分离得到能够降解苯酚的细菌，并对其降解效果进行评估。
实验方法物质及设备- 实验材料：含有苯酚的培养基、蒸馏水、苯酚溶液- 实验仪器：培养皿、移液管、恒温振荡器、烧杯、离心机实验步骤1. 从自然环境中采集土壤、水样品。
2. 将土壤、水样品分别加入含有苯酚的培养基中。
3. 分别在不同温度下（比如25、37）进行恒温振荡培养，培养时间根据实验需求确定。
4. 取样品进行稀释，并分别接种在含有苯酚的琼脂培养基上。
5. 利用平板计数法，计算出细菌的菌落数目。
6. 采用高效液相色谱法检测苯酚的含量。
7. 进一步筛选表现出较强降解能力的细菌，进行进一步鉴定。
实验结果细菌菌落数目在实验过程中，我们成功分离到了一株对苯酚具有较强降解能力的细菌。
经过平板计数法的计算，其细菌菌落数目为1.2x10^6 CFU/ml。
苯酚的降解效果我们利用高效液相色谱法对苯酚的降解情况进行了检测。
实验结果表明，在细菌作用下，苯酚的降解速率较快。
在48小时内，苯酚的浓度从初始浓度的100 mg/L 降至5 mg/L，降解率达到了95%以上。
数据分析与讨论细菌的降解机制细菌通过代谢苯酚的酶系将苯酚降解为无机化合物，并利用其作为碳源和能源。
该细菌可能通过以下途径降解苯酚：1. 将苯酚通过羟化作用转化为苯酚羟化物；2. 苯酚羟化物经进一步代谢，生成苯甲酸、邻苯酚等化合物；3. 经过一系列代谢反应，最终生成无机化合物，如水和二氧化碳。
细菌的应用前景本实验分离得到的对苯酚具有降解能力的细菌，拥有较高的降解效率和广泛的适应性。
这些细菌可应用于苯酚的处理和环境修复，对于解决苯酚污染问题具有良好的应用前景。
结论通过本次实验，我们成功地分离出具有苯酚降解能力的细菌，并对其降解效果进行了评估。
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性研究
ｔａ ｉ ｎ ｙ Ｗ ｕ ｔＣ ｒ ｔｏ ｓ ｂ ｓ－
２ ４ 固 定 化 Ｗ ｕｔ ． ｓ Ｃ对 苯 酚 的 降解 效 果 －
通 过 比 较 采 用 ２ ５ １ 、 、 ０ ｍＬ 注 射 器 制 作 的 Ｗ ｕｔＣ固定 化 小球 （ 别 记 为 １ ２ ３ ｓ— 分 、 、 小 球 ）
８６ ４ 、 ９ ３ 、 ７． 、 １ 。 ． ５ 。 ４ ６ ４ ．７
茅醇假 单胞 菌 ） 降解 苯酚 的效 率 明显 高 于 其 他 菌
株 ， 选其 作为研 究 菌株 ， 故 其革 兰 氏染 色结 果为 阴
性。
通过 一系列 的降 解 条件 优 化 试 验 发现 ， 酚 含
经 反 复驯化 、 涂板 分离 ， 共得 到 ８株 以苯酚 为
惟 一碳 源 和能源 而高 效生 长 的菌株 。通过 比较 发 现其 中 ３号 菌 株 （ 名 为 Ｗ ｕｔ 初 步鉴 定 为香 命 ｓ Ｃ， —
降解 不 同浓度 的苯 酚 。初 始 苯 酚浓 度 越 低 ， 解 降
所需 时 间越短 。在 初始 苯酚 浓度 为 ３ ０ｍｇ Ｉ 和 ０ ／ ５ ０ｍｇ Ｌ的 试 样 中 ， 酚 完 全 降解 所 需 的 时 间 ０ ／ 苯 分别 为 ８ｈ和 １ ； 初始 苯酚浓 度 为 ｌ ０ ／ ２ｈ 在 ０ｍｇ ０ Ｌ的试样 中， 酚完 全降解 所需 的时 问为 ３ ； 苯 ２ｈ 在 初 始苯 酚浓度 为 １６ ０ｍｇ Ｌ的试样 中 ， ０ ／ 菌体 的生 长 速度和 苯 酚的 降解 速度 均 极 其缓 慢 。培 养 ４ ｈ 时 ， ｓ Ｃ 对 初 始 含 酚 浓 度 分 别 为 ３ ０ ５ ０ Ｗｕ ｔ — ０、 ０、 ８ ０ １０ ０ｍｇ Ｉ 试 样 中的 苯酚 降解 率 分 别 达 到 ０ 、 ０ ／
苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究
上海师范大学硕士学位论文苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究姓名：何小丽申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：肖明20090501上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究学校专业：微生物学学位申请人：何小丽指导教师：肖明摘要酚类化合物为细胞原浆毒物，属高毒性物质。
这类物质来源广泛，通常污染水源，毒死鱼虾，危害农作物，并严重威胁人类的健康。
含酚有机物的毒性还在于其只能被少数的微生物分解。
从自然界中筛选分离出能够降解特定污染物的高效菌种，有针对性的投加到已有的污水处理系统中的生物强化技术，能够快速提供大量具有特殊作用的微生物，在有毒有害污染物治理中显示出巨大的潜力。
1、本研究从胜利油田河口采油厂的飞雁滩油田土壤样品中分离得到10株能够利用并降解苯酚的菌株P1-P4、P7、P9-P13。
该10株苯酚降解菌能够在以苯酚为唯一碳源和能源的培养基上生长，经16S rDNA分子鉴定和生理生化检测，该10株降酚菌分别被鉴定到属或种。
其中降酚菌株P1、P3和P4这3株菌株分别属于劳尔氏菌属(Ralstonia)、贪噬菌属（Variovorax）和节杆菌属（Arthrobacter）里的种。
其它7株降酚菌株P2、P7、P9-P13都属于假单胞菌属（Pseudomonas）里的种。
这4个属里的细菌在国内外都已被报道有降解苯酚的特性，其中有关假单胞菌降解环境有机物的报道较多。
2、培养液中的苯酚含量通过4-氨基安替比啉分光光度法测定，通过苯酚降解效率的比较，菌株P2降解苯酚的能力较其它9株菌株要强。
于是将菌株P2作为本研究中进一步研究的对象，研究了不同的环境条件下该菌株降解苯酚和菌体生长的情况。
3、通过苯酚羟化酶特异性引物的设计，从菌株P2扩增出苯酚羟化酶大亚基基因，该基因片段编码对苯酚有催化活性的多肽，催化苯酚代谢的第一步反应；表明菌株P2能降解苯酚是由于细胞具有降解苯酚的遗传基础。
苯酚降解菌MW-1的分离及其降解特性研究
苯酚降解菌ＭＷ－1的分离及其降解特性研究摘要：用以苯酚为唯一碳源和能源的无机盐驯化液对沈阳某煤气厂土壤进行驯化培养。
从中分离筛选到1株苯酚降解菌。
编号为MW-1。
试菌株最高可耐受1600苯酚，其降解性能研究表明：该菌具有较强的苯酚降解能力。
在30。
C，pH5.5—7.5。
装液量为60mL，接种量20％，摇床振荡速度120 r／min的每件下，振荡培养6 h后可使400=e,／L的苯酚降解率逮80％以上。
虽然葡萄糖对该菌体的生长及降解苯酚均有一定的抑制作用。
但有葡萄糖(600 me／L)存在的情况下，该菌对苯酚的降解率仍接近60％。
这对处理含有其它碳源的含酚度水具有一定的意义。
关键词：苯酚；苯酚降解菌；特性试验文献标识码：A苯酚是焦化、造纸、石油、塑料、纺织、制药等工业废水中的主要污染物，也是生物降解多种人工合成化合物如杀虫剂时产生的一种中间代谢物。
大量酚类物质及其衍生物在土壤和水体中的排放和积累导致了生态环境的日趋恶化，许多国家已将其列入环境优先控制污染物的黑名单中。
近年来，国内外在苯酚生物降解方面进行了广泛的研究，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物有细菌、酵母菌等。
利用培养优势菌群的微生物法降解酚类化合物因其投资少、处理效率高、运行成本低、无二次污染等优点而得到越来越广泛的应用。
本试验从沈阳某废弃煤气厂土壤中分离筛选到一株高效苯酚降解菌，并对其降解特性进行了研究，旨在找到对酚类化合物具有高效降解能力的优势菌株，为今后的进一步研究及含酚废水的生物处理奠定基础。
1材料与方法1.1菌种的来源沈阳某废弃煤气厂土壤1.2培养基驯化培养液：为无机盐溶液中添加一定浓度的苯酚配制而成。
各种无机盐的含量为(g／L)：NaO0.2；NH4.N03 1.0。
分离及保存培养基：为含200 m#L儿苯酚的牛肉膏蛋白胨固体培养基。
1.3苯酚降解菌的驯化、筛选与分离取一定量的菌源土壤加入到苯酚浓度为300mv／L的驯化培养液中,室温通气富集培养，定时取样测定苯酚浓度，至苯酚完全降解后，再加入新的以苯酚为唯一碳源的驯化培养液进行驯化培养。
苯酚降解菌的筛选及动力学初步研究
＊联系人 E -mail :jiangs t @收稿日期:2002-09-12,修回日期:2002-11-26苯酚降解菌的筛选及其降解特性的初步研究潘利华 姜绍通＊ 刘鹏达 李慧星(合肥工业大学生物与食品工程学院 合肥 230009)摘要:从某印染厂下水道的污泥中分离到一株能高效降解苯酚的菌株ph 16,经初步鉴定为微球菌属(Micro coccu s sp .)。
该菌株最高可耐受1.5g L 左右的苯酚,对苯酚降解最适条件为p H 7.0,温度35℃,苯酚浓度为1.0g L ,时间为36h ,降解率可达99.6%。
试验还表明Hg +、Co 2+、Ag 2+等重金属离子对该菌株降解苯酚能力有不同程度的抑制作用。
并对其降解动力学作了初步探讨。
关键词:苯酚,生物降解,微球菌属中图分类号:Q93 文献标识码:A 文章编号:0253-2654(2003)05-0078-04SCREENING AND CHARACT ERIZATION OF A PHENOL -DEGRADING BACTERIUMPAN Li -Hua JIANG Shao -Tong LIU Peng -Da LI Hui -Xing(Co lleg e o f Bio tech no lo gy a nd Fo o d En gin eer ing ,Hefei Uni vers ity o f T echn ol og y ,Hefei 230009)Abstract :A s train ph 16,th at cou ld effectivel y degrad e phen ol ,was is olated from se wer s lud ge of prin ting and dyeing p lant .The p reliminary id entification su ggested that the strain belongs to Micr o co ccu s s p .Th e strain cou ld res ist to p henol u p to 1.5g L .The efficient biodegrad ation of p henol occu rred when t he s train was cul tured in th e mediu m (p H 7.0)contain ing 1.0g L p henol u nd er 35℃,wh ere the high es t d egradation rate reac h 99.6%after 36h ours .Th is s train ,when treated wi th s ome h eavy metal i on s such as Hg +、Co 2+and Ag 2+,sh owed th e s ign ifican t inh ibition of p henol d egradation by 74.2%～100%.The k inetics of p hen ol d egradation durin g cu lture of th e s train was also explored .K ey words :Ph en ol ,Biodegrad ation ,Mi cr oc o ccus sp .苯酚是重要的化工原料,被广泛应用于酚醛树脂、杀虫剂、染料、农药和医药的生产中。
一株苯酚降解菌株的筛选鉴定及特性研究
收稿日期：2018-04-25基金项目：山西省高等学校大学生创新创业训练计划项目（2017105）作者简介：任瑞凡（1997—），女，山西河津人，在读本科生，主要从事生物技术研究。
通讯作者简介:吕建华(1977—)，女，山西祁县人，讲师，博士，主要从事环境微生物修复研究。
一株苯酚降解菌株的筛选鉴定及特性研究任瑞凡,刘永阳,曲文浩,孔令腾,李潇潇,薛智权,吕建华（山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801）摘要：为了从焦化废水活性污泥中筛选出高效降酚的细菌，以对废水中苯酚进行生物处理。
以苯酚为唯一碳源，从太谷县某焦化厂活性污泥中筛选苯酚降解菌，同时通过Plackett-Burman 试验设计，结合正交试验分析，确定该菌株降解苯酚的最佳条件，通过酶活性测定推测菌株降解途径。
结果从活性污泥中分离得到1株苯酚降解菌株B10，经分析16S rDNA 序列和构建系统进化树，初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属细菌。
通过利用Plackett-Burman 试验设计，结合正交试验分析，确定该菌株降解苯酚的最佳条件为：酵母膏10g ·L -1，乙醇4g ·L -1，初始接菌量2.5%，培养温度30℃，硫酸镁1g ·L -1。
当以苯酚为唯一碳源时，菌株B10中仅有邻苯二酚1,2-双加氧酶活性被检测到，因此推测，该菌株通过邻位途径降解苯酚。
结果表明，B10菌具有降解苯酚能力，对于治理含酚废水具有应用潜力。
关键词：苯酚；芽孢杆菌属B10；Plackett-Burman 试验设计；邻苯二酚1,2-双加氧酶活性中图分类号:X172文献标识码:ADOI 编码:10.3969/j.issn.1006－6500.2018.11.004Study on Screening,Identification and Characterization of A Phenol-degrading Bacterium Strain REN Ruifan,LIU Yongyang,QU Wenhao,KONG Lingteng,LI Xiaoxiao,XUE Zhiquan,LYU Jianhua(College of Life Science ,Shanxi Agricultural University ,Taigu,Shanxi 030801,China)Abstract :The purpose of this paper is to screen highly effective phenol -degrading bacteria from the activated sludge of coking wastewater for the treatment of phenol in wastewater.The paper took phenol as the sole carbon source,by utilizing phenol as sole car ⁃bon source,screening phenol -degrading bacteria from the active sludge of coking plant in Taigu county of Shanxi province,at the same time,the optimum conditions for degradation of phenol were determined by Plackett-Burman experimental design and orthogonal test analysis,and the degradation pathway of the strain was determined by enzyme activity detection.The results showed that a phe ⁃nol-degrading bacterium strain B10was isolated from the active sludge.Based on the analysis of the 16S rDNA sequence and the construction of the phylogenetic tree,the strain was identified as Bacillus .Utilizing the Plackett-Burman design,together with orthog ⁃onal test analysis,it was confirmed that the optimum degradation conditions of the strain were yeast extract 10g ·L -1,ethanol 4g ·L -1,inoculation volume 2.5%,temperature 30℃,magnesium sulphate 1g ·L -1.When phenol was the only carbon source,only catechol 1,2-dioxygenase activity in strain B10was detected.Therefore,it was speculated that the strain might metabolize phenol via ortho -cleavage pathway.The results showed that B10could degrade phenol and had potential application in the treatment of phenolic wastewater.Key words :phenol;Bacillus sp.B10;Plackett-Burman;catechol 1,2-dioxygenase activity天津农业科学Tianjin Agricultural Sciences 圆园18,24(11):11-16,50苯酚及其衍生物是各种有机化合物的基本结构单元，作为原料已被广泛应用于石油化工、医药、印染、造纸等行业，其工业废水成为含酚废水的主要来源[1-3]。
高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究
高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究引言石油、化工、煤气、焦化及酚类等生产厂排放的废水当中含有大量的苯酚[1]。
未经净化的含酚废水可导致水源被污染，致使鱼类死亡，危害农作物，最终威胁人类的健康。
许多国家将苯酚列为重要的污染物之一。
目前，国内外处理含酚废水的方法主要有物理法、化学法、微生物法及各种结合法[2]。
其中微生物法主要利用微生物的代谢活动去除废水中的有毒物，处理方法无2次污染且安全、经济。
目前，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物主要有假单胞菌（Pseudonomonas.sp）[3]、芽孢杆菌（Bacillus.sp）[4]、酵母菌（Yeast trichosporon）[5]、根瘤菌（Rhizobia）[6]、醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）[7]等，降酚菌株多存在于酚类污染物企业排放的废水、污泥和被废水污染的土壤中[8]。
本课题拟从被苯酚废水污染的污泥中进行菌株筛选，得到耐酚菌后在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养上筛选降酚菌株，进一步测定苯酚降解的影响因素。
对特定菌株降解含酚废水的应用价值进行研究。
1 实验材料和方法1.1 菌株来源采集原黑龙江省佳木斯东郊黑龙农药化工集团废弃排污口处污泥进行菌株筛选。
1.2 培养基基础培养基：NaCl 5.0g/L，蛋白胨10g/L，琼脂15～20g/L，酵母浸膏5.0g/L，调节pH为7.0。
以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基：CaCl2 0.1 g/L ，FeSO4.7H2O 0.01 g/L，K2HPO4 0.5g/L，MnSO4.7H2O 0.05 g/L，NaCl 0.2 g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4.H2O 0.01 g/L，NH4NO3 1.0 g/L苯酚按实验需要量添加，调节pH为7.0 [8]。
富集培养基：葡萄糖10.0g/L，营养琼脂33.0g/L，酵母浸粉10.0g/L，调节pH为7.5。
1.3 研究内容与方法1.3.1 菌株和的驯化和分离在超净工作台中，将10mL含0.1g/L苯酚的基础培养基倒入培养皿，取10 g污泥加90mL蒸馏水搅拌15min，静置5min后取上层清液为菌原液[8]。
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究摘要从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，初步确定为假单胞菌属（Pseudomonas）；该菌株能在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基中生长；可以在20～40℃、pH值5.0～9.0范围内较好生长；降解苯酚最适温度为35℃，最适pH 值为7.0，最大降解率达到89％。
完全降解无机盐培养基中500mg/L、1 000mg/L、1 200mg/L的苯酚分别需要60h、72h、108h。
关键词苯酚；生物降解；假单胞菌属苯酚是树脂制造、炼油、焦碳、染料、纺织、农药和医药生产等工业废水中的主要污染物[1-2]，在水体中，5～25mg/L的苯酚即可对鱼类的生存构成威胁[3]。
被美国环保署列入优先控制污染物和65种有毒污染物名单，也是我国优先控制污染物之一[4]。
因此，含酚工业废水的治理在环保中具有重大的意义。
除了传统的理化方法外，用微生物降解苯酚的方法对环境无害且成本低廉，因而在苯酚污染治理中起了越来越重要的作用[5]。
但是，目前生物处理技术只限于处理低浓度的含酚废水，而高浓度含酚废水具有污染物浓度高、可生化性差等特点，制约了这一技术在实际中的应用。
本实验从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，并对其降解特性进行了研究。
1 材料与方法1.1 培养基无机盐培养液[7]（g/L）：(NH4NO3 1.0，CaCl2 0.1，K2HPO4 0.5g，KH2PO4 0.5，MgSO4·7H2O 0.5，NaCl 1.0，定容到1 000 mL，pH值7.0～7.2，固体培养基中加入1.5％～1.8％的琼脂，按实际需要加入相应浓度的苯酚。
1.2 高效降解细菌的筛选和驯化从某农药厂废水处理活性污泥中采集污泥样品，称取5.0g污泥置于预先灭菌的100mL苯酚浓度为500mg/L的无机盐培养液中，30℃、150r/min振荡培养，到培养液浑浊后，按1％接种量转接到苯酚浓度为1 000 mg/L的无机盐培养液中，继续振荡培养。
高效苯酚降解菌的分离与降解特性
基金项 目：佳木斯大学学 生创新课题 （课题编号 ：Ｄｚ２０１１—０２１） ＊为通讯作者
· ２５· ２０１１年 ８月
农 业 与 技 术
Ｖｏ１．３１ Ｎｏ．４
荫 种 的甯 集 与驯 化 采用 一 次性 加入 大 剂昂 化 号 】、２、３、４、５、６、７。
合 物 的方法 ［８］。将菌 种在 无菌条 件 下接 种到 ２０ｍＬ
３．１ 结 果
大面积 农 作 物种 植 区 ，利 用 松 花 江 水 进 行 灌 溉 ，
３．１．１ 筛选 出 ７株降解能力强的菌株对苯酚都有 而含酚废水直接排入江中则将对农作物造成毒害 一 定 的点适应 性 ，且对苯 酚有很强的降解能力 ， 作用 ，同时人们适用后有毒物质 在人体 内富集 ，
达 ２５％，血酚浓度为 ０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，１０分钟死亡。 将浓度 为 ｌ０～，１０～，１０～，１０一，ｌ０一 的土样
酚类会对人类的身心健康造成危害，毒害其他生 溶液接种到富集培养基上 ，培养 ４８ｈ后观察。
物 ，破坏了生态系统 的稳定性 ，故我国及其他国
（２）选 择 培 养基［ ］：ＫＮｏ３４．０ｇ，ＮａＣ１ ５．０ｇ，
ｓｏｒｂｅｎｔｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ８Ｏｌ￣ Ｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｔｏｗａｎｔｓ ｐｈｅｎｏｌ ａｎｄｉｔｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ［Ｊ］．ＲＰ￣ｌｃｔｉｖｅ ａｎｄ ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＰｏｌｙｍｅｒｓ，２００１，４６ （３）：
２５９—２７１
高 浓度 含 酚污 水 的研 究 仍 有 深 度 可挖 ，因此 必 须 ［８］任源 ，吴超 飞，等 ．苯胺分离菌 的驯化筛选研究 ［Ｊ］．环 境
及不 同苯酚浓度下的生长和苯酚降解情况的考察 ，