不同毒力番鸭呼肠孤病毒在番鸭免疫器官的分布和排毒

程 晓霞 , 小 丽 , 锋 强 , 仕 龙 , 朱 林 。陈 陈少 莺 , 王 劭 , 兆 龙 李 。
( . 建省 农业 科学 院畜 牧兽 医研究 所 , 建 福州 3 0 1 ;. 1福 福 5 0 3 2 福建 省畜 禽疫病 防治 工程技 术研 究 中心) 摘 要 : 讨番 鸭呼 肠孤病 毒 强毒株 和弱毒 株在 番 鸭免 疫 器 官 中的分 布 和排 毒 的 差异 。结 果 显 示 探 强毒株 在 感 染后 1d就 可在 脾脏 、 氏囊 、 腺检 出病毒 RNA, 法 胸 高峰 期为 攻毒后 7 4d 直到 感 染 ~1 ; 后 3 , 免 疫 器官 中不能检 测到病 毒 R 5d 在 NA。接 种 强毒株 后 7d开始 向外 界排 毒 , 1 而 4d后 停止 向 外界排 毒 。雏 鸭免 疫弱毒 疫 苗后 3d 即可在脾 、 , 胸腺 、 氏 囊中检 出病 毒 RNA; 法 高峰 期 为攻毒后
呼肠孤 病毒 是一 种免疫 抑制性 病毒 , 导致 脾 、 胸腺 和 法 氏囊 淋 巴细胞 变性坏 死 , 量 明显减 少 , 数 网状纤 维 组织 显露 , 给番 鸭养殖 带 来 巨大 经济 损 失 。2 0 0 2年
胡奇林 等研 制发 明番 鸭 呼肠 孤 病 毒活 疫 苗 , 控 制 是 番 鸭呼肠 孤病毒 病 非 常有 效 的措 施 之一 , 苗 免 疫 疫
M us o c t re o e r t n 7 h da n s o c vy du ks s a t d t xc e e o t y a d t ppe n 1l h d y. d o t a
Ke o d :M u c v u k r o iu ;i y w rs s o y d c e v r s mmu e o g n;v r ln ta n te u t d s r i n ra iu e ts r i ;a t n a e ta n;d s r u in a d e c e in iti t n x r t b o o
9 , 死率 达 6 ~8 %。研 究 发现番 鸭 呼肠 孤 O 病 O 0
2 0 06 [ 稿 日期 ] ZOl — 5— 收
后番 鸭 平均 发 病率 7 , 均病 死 率 3 , 平 免疫 保 护
率 9 , 明该 疫 苗 安 全 、 0 证 有效 。林 锋 强 等 研 究 表 明免 疫 番鸭呼肠 孤病 毒活 疫苗后 番 鸭细胞 免疫 功能
根 据建 立 的 R T— P R方 法 对 样 品 进行 检 测 。 C 设 D RV—C 株 细胞 病 毒 培养 液 为 阳性 对 照 , 常 A 正
番鸭 呼肠 孤 病 毒 病 ( 称 番 鸭 “ 白点 病 ” 是 俗 肝 ) 1 9 年 以来 发 生 于 福 建 、 江 、 东 等 地 番 鸭饲 养 97 浙 广 区的一种 番鸭 新疫 病 , 病 由番 鸭 呼肠 孤 病 毒 引起 该 以软脚 、 肝脾 等脏 器 出现 灰 白色 坏 死 点 , 肾脏 肿 大 、 出血 、 面有 黄 白色条 斑 为特 征 。发 病 率为 3 ~ 表 O
d ya dso p do 4 hd y a n t p e n 1 t a .On 3 d d y i r a mmu ie t DRV n z d wih M CA ta n i lRNA sp st ei p e n u s ,t y s s r i 。v r a wa o i v s l e ,b r a h mu i n o s o y d c s h e k t s d rn t 一 1 t a fmu c v u k ,t ep a i wa u i g 7 h me 4 h d y,u t 8 h d y,M DRV n i2 t a l RNA sn g t e i h mmu eo g n , wa e a i n t ei v n r a s
1 7 RT— P R 检 测 . C
C A弱 毒株 , 由本实 验 室经 鸡 胚 传 代致 弱 获 得 ; 胚 鸡
成 纤 维 细 胞 测 定 TC D5 I 0为 1 ・ O 2mL; 日龄 0 。 . / 1
雏番 鸭 由莆 田克 里 莫 种 番 鸭 公 司 提 供 , 打 任 何 未 疫苗 。
CHENG a — i Xi o x a ’ ,ZHU a —i’ LI Fe — i n 。, Xio l , N ng q a g , CHEN hil n 。, S —o g ’ CH EN Sha — i ’’ o y ng , W ANG a . a —o 。 Sh o LiZh o l ng ,
1 t da un i 5t aya t ri f c i 4 h y, tl3 h d f e n e ton,via NA sne tv n t m m u r a r lR wa ga ie i hei neo g ns,M us o uc t r e t x r t n 7t c vy d kss a td o e c e e o h
8
J u n l fAnma ce c n t rn r e iie o r a i lS in e a d Vee i ay M d cn o
Vo . 1 13
No 5 .
2 1 02
不 同毒 力番 鸭呼肠孤病 毒 在 番 鸭 免疫 器 官 的 分 布 和 排 毒
1 2 主 要 试 剂 .
R —P R试 剂 盒 购 自大 连 宝 生 物 工 程 公 司 ; T C T Io 试剂 ( 号为 V 5 2 6 2 ) 购 自 i rvg n R zl 批 X 9 3 81 8 , n oo e t
公 司 ; 20 N re( 连 宝 生 物 工 程 公 司 ) D 0 0D A Makr大 。 13 引物 设计 与合成 .
[ 者 简 介 ] 程 晓 霞 ( 9 2 )女 , 建 福 州 人 , 科 , 研 究 作 17 ~ , 福 本 副 员, 主要 从 事 畜 禽 传 染 病 和 分 子 生 物 研 究 工 作 。 *[ 讯 作 者 ] 陈 少莺 , 通 E—ma :hn y 8 1 3 Cr i c e s5 @ 6 .O l n
( W 9 1 )o te u t d ( M 7 O ra t n a e CA)s r i tan i i n mmu e o g n . Th e u t n ia e h to s a n e t d wi DRV W 9 1 n ra s e r s ls id c t d t a n 1 td y i f c e t M h M 70 sr i t an,Via rl RNA s p stv e e t d b wa o iie d t ce y RT— PC i p e n,b r a h mu fmu c v u k ,t e p a i s i ~ R n s le u s ,t y so s o y d c s h e k t me wa n 7
增强 , 有效 抵抗 病 毒 感染 。现将 番 鸭 呼 肠 孤病 毒 强
[ 金 项 目] 国 家 自然 科 学 基 金 (0 7 60 ;省 公 益 类 项 目 基 3 7 12 )
( 0 1 0 5— 7 2 1 R12 )和 福 建 省 星 火 计 划 项 目
(0001) 助 。 21S05资
氏囊 等 组织 。同时 采 集 喉头 和泄 殖 腔 棉 拭 样 品 , 置
于 内含 双抗 的 ImL 0 0 M H 7 2P S管 中 。样 . 1 p . B
MD RV—MW9 1 7 0株 番 鸭 呼 肠 孤 病 毒 MD RV
—
品保 存 于一 2 ℃备 用 。 o
16 样 品 R . NA 的 制 备
毒 株和 弱毒株 在感 染 鸭 的免 疫 器 官 的分 布 、 毒 的 排
差 异结 果报告 如下 。
畜牧 兽 医杂志
第 3 卷 1
第 5期
21 0 2年
9
1 材 料 和 方 法
1 1 病 毒 株 及 实 验 鸭 .
每 组分 别 随机选 取 5羽 鸭 采 血 致死 , 取脾 、 胸腺 、 法
( .I s t t f Anma sa d y a d V trn r d cn ,F ja a e f Ag iu t r Z ce cs,F z o u n 3 0 1 , h n ; 1 n t u e i lHu b n r n eei a y Me iie u inAc d my o rc lu a in e i o S u h uF ja 5 0 3 C ia i
2 Fu i i lDie ssCo to c n l g v lpme tCe tr . janAn ma sae nr lTe h oo y De eo n ne )
Ab ta t src :Th be t e o hs a t l s t n e t ae dsr u Байду номын сангаасn a d e cein o so y d c e vr s vr ln eo jci ft i ri e wa o iv si t iti to n x rt fmu c v u k ro iu iue t v c g b o
7 1 , 疫后 2 ~ 4d 免 1d免 疫 器官 中的检 测逐 渐 降低 , 直到 感 染后 2 , 免疫 器 官 中不 能检 测 到病 8d 在
毒R NA。表 明番鸭 接种 活疫 苗后 7d开始 向 外界 排毒 , l 而 1d后停 止 向外界排 毒 。 关键 词 : 番鸭 呼肠孤 病毒 ; 疫 器官 ; 免 强毒株 ; 弱毒株 ; 分布 排毒 [ 中图分 类号] ¥ 5 . 5 [ 献标识 码] A [ 8 8 6 文 文章 编号 ] 1 0 —7 4 2 1 )5O O —3 0 4 6 O (0 2 0 一 O 80
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不同禽源和不同毒力新城疫病毒对鸭的感染性

不同禽源和不同毒力新城疫病毒对鸭的感染性

不同禽源和不同毒力新城疫病毒对鸭的感染性刘梅;程旭;戴亚斌;韦玉勇;周生;潘志明;徐玲霞;焦新安【摘要】为探讨不同禽源和不同毒力的新城疫病毒(NDV)株对鸭的感染性、致病性以及鸭在家禽新城疫(ND)流行中的意义,本研究选用7个NDV株进行了雏野鸭的人工感染试验,对感染鸭的临床症状、增重、抗体反应、排毒以及组织器官中病毒分布进行了观察.结果表明,鸭源强毒株JSD0812和标准强毒株F48E8对鸭具有强的致病性,感染鸭的发病率和死亡率高达100%,病毒广泛分布于感染鸭的多种组织器官中.鸽源强毒株JSP0204、鸡源强毒株JSC0804、鹅源强毒株JSG0210以及疫苗毒株Mukteswa和La Sota对鸭不具有致病性.感染鸭未出现临床症状,生长发育也未受到影响.它们在鸭体内存在时间也较短.所有感染鸭均有排毒现象,排毒时间和排毒途径因病毒株毒力不同而异.结果表明NDV在进化过程中对鸭的致病性有逐渐增强的趋势.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2010(032)008【总页数】5页(P586-590)【关键词】新城疫病毒;感染性;排毒;致病性【作者】刘梅;程旭;戴亚斌;韦玉勇;周生;潘志明;徐玲霞;焦新安【作者单位】中国农业科学院,家禽研究所,江苏,扬州,225003;中国农业科学院,家禽研究所,江苏,扬州,225003;中国农业科学院,家禽研究所,江苏,扬州,225003;中国农业科学院,家禽研究所,江苏,扬州,225003;中国农业科学院,家禽研究所,江苏,扬州,225003;扬州大学,生物科学与技术学院,江苏,扬州,225009;中国农业科学院,家禽研究所,江苏,扬州,225003;扬州大学,生物科学与技术学院,江苏,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S852.65由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的新城疫(ND)是一种急性、高度传染性疫病,主要侵害鸡和火鸡,亦可感染其它禽类及人类,是禽类重要疫病之一,世界动物卫生组织(OIE)将其列为应呈报疫病,我国将其列为一类动物传染病。

番鸭呼肠孤病毒感染对MPV-GPV弱毒疫苗抗体应答的影响

番鸭呼肠孤病毒感染对MPV-GPV弱毒疫苗抗体应答的影响

番鸭呼肠孤病毒感染对MPV-GPV弱毒疫苗抗体应答的影响Lin Fengqiang;Zhu Xiaoli;Chen Shilong;Xiao Shifeng;Cheng Xiaoxia;Wang Shao;Chen Shaoying【摘要】1日龄番鸭感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV)后,应用LPAI方法检测MPV-GPV二联弱毒疫苗免疫后抗体变化规律,应用MTT法测定番鸭血液、脾脏和胸腺的B淋巴细胞增殖功能,探讨MDRV对B淋巴细胞功能的影响.结果显示番鸭感染MDRV后免疫MPV-GPV二联疫苗,IM7d时番鸭GPV-LPAI效价平均值1.51og2;随后缓慢上升,到IM 21-28 d时GPV-LPAI效价平均值维持在约31og2.与单独免疫组相比,GPV-LPAI效价大大降低,不能提供有效保护.1日龄番鸭人工感染MDRV 后,PI7d外周血T淋巴细胞增殖指数与对照组相比明显下降(P<0.05).PI 14-28 d 与对照组相比下降,差异极显著(P<0.01),表明MDRV感染抑制了B淋巴细胞增殖功能.结果表明,MDRV感染能抑制抗体应答和番鸭外周血和免疫器官中B细胞的增殖功能作用,造成B细胞功能抑制.【期刊名称】《福建畜牧兽医》【年(卷),期】2018(040)006【总页数】4页(P7-10)【关键词】番鸭呼肠孤病毒;MPV-GPV疫苗;B细胞;抗体;增殖【作者】Lin Fengqiang;Zhu Xiaoli;Chen Shilong;Xiao Shifeng;Cheng Xiaoxia;Wang Shao;Chen Shaoying【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文番鸭呼肠孤病毒病临床上以软脚为主要症状,以肝、脾表面有多量白点、肾脏肿大、出血、表面有黄色条斑为主要病理变化的传染病 [1-2]。

该病在意大利、美国、德国和以色列等国家传播,国内福建、广东和浙江等省份自1997年以来都有该病发生的报道,通过血清学调查表明在番鸭群中广泛存在呼肠孤病毒感染,给番鸭养殖业带了巨大的经济损失[3-5]。

番鸭呼肠孤病毒病的综合防治技术

番鸭呼肠孤病毒病的综合防治技术

2018年第9期番鸭呼肠孤病毒病是由番鸭呼肠孤病毒(MDRV )引起的一种急性、烈性传染病。

该病因其肝脾等脏器出现灰白色坏死点,又称番鸭肝白点病或花肝病。

本病在我国广东、广西、福建、浙江和江西等地广泛流行,具有较高的发病率和致死率,严重危害番鸭养殖业的健康发展。

1病原本病的病原为番鸭呼肠孤病毒(MDRV ),MDRV 是呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属Ⅱ亚群成员。

MDRV 呈球形,无囊膜,有可见的双层衣壳结构。

本病毒对紫外线、温度和pH 敏感;对有机溶剂不敏感。

2流行特点本病多发生于7~35日龄,以10~25日龄的雏番鸭最易发生,发病率30%~90%,病死率60%~80%;病程长短不一,通常为14~21d。

发病后5~10d 进入死亡高峰期,高峰期一般持续10~20d。

病鸭和带毒鸭是本病的主要传染源,通过其病死尸体、分泌物尤其是排泄物散毒,污染饲料,饮水、垫料、空气和用具等经消化道、呼吸道和脚蹼损伤等水平传染,本病也能垂直传播。

本病一年四季均可发生,但天气炎热、潮湿时发病率显著升高。

饲养密度高、卫生条件差、鸭舍潮湿且温差幅度大等均可诱发本病,加重病情。

同时,番鸭呼肠孤病毒病也是一种免疫抑制性疾病,鸭患病中后期易继发感染鸭传染性浆膜炎或大肠杆菌病等,造成大量死亡。

3临床症状发病番鸭精神不振,羽毛蓬乱无光泽,食欲减少或废绝,畏冷扎堆,腹泻,排绿色或黄白色稀粪,有大量稀粪粘附在肛门周围,泄殖腔扩张、外翻,大部分番鸭表现为软脚,部分患鸭逐渐出现趾关节或跗关节肿大,跛行,耐过病番鸭生长发育迟缓,成为僵鸭。

4剖检病变对病死番鸭剖检,可见病变主要集中在肝脏和脾脏,肝脏肿大、质脆,呈淡褐红色,表面有出血点或出血斑,表面和实质密布大量坏死点,呈灰白色或灰黄色,脾脏肿大、质硬,呈暗红或黑紫色,表面和切面实质有大量坏死点或坏死灶,呈白色或黄白色;肾脏肿大、出血、表面有黄白色条斑;个别病例可见心包积液、心包炎,肝周炎。

5诊断依据流行特点、临床症状和剖检病变能够做出初步诊断,具体确诊可采集濒死番鸭肝脏、脾脏和肾脏等病变组织进行病原分离鉴定和血清学检查。

番鸭养殖要点 番鸭主要病毒病及其防控要点 - 养鸭技术

番鸭养殖要点 番鸭主要病毒病及其防控要点 - 养鸭技术

番鸭养殖要点番鸭主要病毒病及其防控要点-养鸭技术番鸭又称瘤头鸭、全番、正番或红鼻番,多分布在我国福建、浙江、广东等长江以南地区。

近几十年,我国番鸭产业快速发展。

由于番鸭品种的自身特点及各种新疫病的不断出现如水禽呼肠孤病毒病和坦布苏病毒病,造成番鸭养殖的技术要求越来越高。

下面具体来了解一下:番鸭养殖要点番鸭主要病毒病及其防控要点。

一、雏番鸭呼肠孤病毒病俗称番鸭“花肝病”或“肝白点病”,是由番鸭呼肠孤病毒引起的高发病率和高死亡率的传染病。

1997年开始在我国流行,发病日龄小,发病率高,病死率高,耐过鸭成为僵鸭。

诊断要点:雏鸭怕冷,常挤成一堆,番鸭精神委顿,全身乏力、脚软或拐脚。

肛门周围有白色或淡绿色稀粪。

剖检见肝脏、脾脏肿大或稍肿大,表面和切面有弥漫性、大小均匀、灰白色坏死点,脾脏的白色坏死点比肝脏上的白点略大,发病后期雏鸭见心包膜严重。

成年鸭未见发病。

防控要点:可在番鸭1日龄时注射番鸭呼肠孤病毒病弱毒疫苗。

发病鸭使用氟苯尼考、阿莫西林等广谱抗生素药物防治细菌病的继发感染,饮水中添加保肝护脾的药物和提高免疫力的药物(如黄芪多糖)来改善病情。

及时隔离淘汰发病鸭,做好雏鸭的保温工作,特别是在冬季防止病鸭聚集,对行走困难的发病鸭加强护理,必要时可以人工辅助给食。

二、新型鸭呼肠孤病毒病俗称“鸭出血坏死性肝炎”,是2005年以来在我国出现的一种新疫病。

发病日龄小(以5~10日龄居多),病死率高,易感宿主广,番鸭、半番鸭、麻鸭、樱桃谷鸭、北京鸭等都易感。

种鸭感染该病后,雏鸭的发病率特别高。

诊断要点:精神沉郁,突发死亡。

死亡鸭肝脏和脾脏出现不规则坏死和出血,心肌出血和法氏囊出血,肾脏出血。

防控要点:淘汰带毒种鸭(父母代)。

种鸭免疫灭活苗,使后代雏鸭有母源抗体保护。

加强雏鸭的饲养管理,饲喂电解多维,做好保温工作,减少应激。

对死亡率高的鸭群可用禽干扰素或植物血凝素进行治疗。

三、番鸭病毒性肝炎病毒性肝炎是一种传播迅速、死亡率高的烈性传染病,主要侵害3周龄以内的雏鸭,1周龄内死亡率高达95%以上。

MTS法检测番鸭呼肠孤病毒对鸭胚成纤维细胞活力的影响

MTS法检测番鸭呼肠孤病毒对鸭胚成纤维细胞活力的影响

MTS法检测番鸭呼肠孤病毒对鸭胚成纤维细胞活力的影响林泽鑫【摘要】采用MTS法检测接种不同致病力番鸭呼肠孤病毒12 h、24 h、36 h、48 h、72 h、96 h后对番鸭鸭胚成纤维细胞(MDEF)活力的影响.根据细胞病变情况和活力状态确定细胞发生变化的拐点,初步探讨番鸭呼肠孤病毒感染诱导细胞凋亡的发生和细胞活力的特征变化,进一步了解番鸭呼肠孤病毒与宿主之间的相互关系,为研究番鸭呼肠孤病毒感染和致病机理提供时间科学依据.结果表明,接毒后36 h,细胞活力达到最高,高致病力YB毒株作用于MDEF,细胞活力在48 h大幅下降并出现明显细胞凋亡;低致病力YJL毒株作用于MDEF,则在72 h可出现明显细胞凋亡.【期刊名称】《福建畜牧兽医》【年(卷),期】2017(039)006【总页数】4页(P13-16)【关键词】MTS检测法;番鸭呼肠孤病毒;番鸭鸭胚成纤维细胞(MDEF);细胞活力【作者】林泽鑫【作者单位】福建省平和县动物疫病预防控制中心福建平和 363700【正文语种】中文番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)可引起番鸭以肝脾出现灰白色坏死点(白点病、肝白点病、花肝病)、纤维素心包炎为主要特征的一种急性传染病,临床症状体现为番鸭软脚、腹泻、生长障碍,该病也感染鹅。

番鸭呼肠孤病毒感染也是我国近年来才出现的较为流行的番鸭疫病,该病发病率高(30%~90%),致死率高(60%~80%)[1]。

番鸭呼肠孤病毒引发的番鸭疫病主要发生于40日龄以下番鸭,以7~45日龄常发,且日龄越小,病死率越高,发病鸭耐过后变成僵鸭[2-3],并且治疗该病至今无特效药。

番鸭呼肠孤病毒是呼肠孤病毒科(Reoviridae)正呼肠孤病毒属(Orthoreovirus)的成员,病毒粒子呈正二十面体对称,无囊膜,有双层衣壳结构。

完整的番鸭呼肠孤病毒粒子直径60~75 nm,氧化铯中的浮密度为1.36~1.37 g/mL,有空心、实心两种病毒粒子。

不同毒力番鸭呼肠孤病毒双重PCR鉴别方法的建立

不同毒力番鸭呼肠孤病毒双重PCR鉴别方法的建立

不同毒力番鸭呼肠孤病毒双重PCR鉴别方法的建立周五朵;朱二鹏;蔡一龙;温亚萍;吴异健;吴宝成;王全溪【期刊名称】《中国家禽》【年(卷),期】2014(36)6【摘要】自2001年我国出现番鸭感染呼肠孤病毒(MDRV)报道以来,本课题组从病鸭体内分离到2株在临床上致病力差别很大的病毒毒株,并分别命名为YJL株和YB株。

本研究根据这2株病毒基因特点,分别针对YB株P10蛋白基因和YJL株P17蛋白基因设计2对特异性引物,通过条件优化建立了鉴别2个毒株的双重PCR。

结果显示:该方法可同时扩增出YB 288 bp、YJL 441 bp长度的特异性片段,而对其他番鸭病病原无扩增结果;该方法最佳反应条件为95℃5 min,94℃1 min,55℃45 s,72℃1 min,30个循环,72℃延伸10 min;该方法最低能检出10 pg YB和YJL株RNA模板;使用单重PCR和多重PCR方法对60份临床病料检测验证,两者符合率为100%。

结果表明该方法特异性、敏感性和重复性良好,具有快速、准确的特点,可用于这2种不同毒力毒株的鉴别。

【总页数】4页(P14-17)【作者】周五朵;朱二鹏;蔡一龙;温亚萍;吴异健;吴宝成;王全溪【作者单位】福建农林大学动物科学学院【正文语种】中文【中图分类】S852.659.4【相关文献】1.番鸭呼肠孤病毒通用RT-PCR检测方法的建立2.不同毒力番鸭呼肠孤病毒在番鸭免疫器官的分布和排毒3.番鸭呼肠孤病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用4.禽(番鸭)呼肠孤病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立及应用5.鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒及番鸭呼肠孤病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与临床应用因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

番鸭得了呼肠孤病毒病怎么办 什么是鸭呼肠孤病毒

番鸭得了呼肠孤病毒病怎么办什么是鸭呼肠孤病毒
番鸭是一种肉质厚嫩、饲养价值较高的肉用水禽,有白色、黑色和花色番鸭.由于番鸭容易感染呼肠孤病毒病,一些养户常感觉到很难饲养。

那么,番鸭得了呼肠孤病毒病怎么办?
鸭呼肠孤病毒病是由基因1型呼肠孤病毒引起的,可通过水平和垂直传播及常引起鸭“花肝”或“肝白点”等肝坏死,以及脾脏坏死的一种鸭病毒性传染病。

该病多发生于7-35日龄,最常见于10-25日龄,潜伏期一般为3-11天;发病率在30%-90%之间,病死率约10%-60%,达龙禽得乐预防鸭鹅新型呼肠孤病毒的感染。

这个病一年四季均可发生,但是在冬春季节则比较少见,现在这种天气炎热、潮湿的时候其发病率明显升高。

该病的患病鸭子耐过后会出现明显的生长、发育迟缓,并且该病具有明显的免疫抑制,很容易诱发细菌方面的(如鸭大肠杆菌、鸭疫里默氏菌)严重继发感染。

新型鸭呼肠孤病毒弱毒株在雏番鸭体内的分布和排毒规律

㊀㊀2021年第62卷第11期2295收稿日期:2021-09-18基金项目:浙江省重大科技专项重点农业项目(2015C02012);浙江省重点研发计划(2019C02052)作者简介:华炯钢(1968 ),男,浙江杭州人,助理研究员,学士,从事家禽疫病防控研究工作,E-mail:huajg2008@㊂通信作者:云涛(1978 ),男,河南长垣人,副研究员,博士,从事畜禽疫病防控研究工作,E-mail:yt-t@㊂文献著录格式:华炯钢,叶伟成,刘可姝,等.新型鸭呼肠孤病毒弱毒株在雏番鸭体内的分布和排毒规律[J].浙江农业科学,2021,62(11):2295-2298.DOI:10.16178/j.issn.0528-9017.20211153新型鸭呼肠孤病毒弱毒株在雏番鸭体内的分布和排毒规律华炯钢,叶伟成,刘可姝,云涛∗,倪征,陈柳,朱寅初,张存(浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州㊀310021)㊀㊀摘㊀要:为了解新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒株感染雏番鸭后在体内的分布和排毒规律,本研究采用传代致弱的NDRV JDm10-150毒株接种1d 龄雏番鸭,对接毒后6h ~35d 雏番鸭的血液㊁脑㊁胸腺㊁心㊁肝㊁脾㊁肺㊁肾㊁胰腺㊁法氏囊㊁盲肠扁桃体㊁咽拭子和泄殖腔拭子采用qRT-PCR 方法检测病毒分布情况㊂结果显示:接6h 后,在各组织脏器及血清中可检到NDRV 核酸,且肝和脾病毒含量最高㊂随后,各组织脏器及血清中NDRV 核酸含量逐渐减少㊂接毒后9d,各组织器官及血液均检测不到NDRV 核酸或NDRV 核酸检测为阴性(Ct>35)㊂接毒后第13~35d,除脑和血清外,大部分的组织脏器中均又检测到NDRV 核酸,且NDRV 核酸含量基本稳定,其中脾脏和法氏囊组织中NDRV 核酸含量始终保持较高水平㊂对不同时间采集的咽拭子和泄殖腔拭子进行检测,发现雏番鸭在接毒后6h 开始向外界排毒,之后通过泄殖腔排毒,直至攻毒后28d 停止排毒㊂以上检测结果表明,NDRV JDm10弱毒株感染雏番鸭后快速侵入各组织脏器和血液,脾脏和法氏囊为主要侵染和定殖场所,主要通过泄殖腔分泌物向外界排毒㊂关键词:新型鸭呼肠孤病毒;弱毒株;qRT-PCR;分布;排毒规律中图分类号:S852.65㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:0528-9017(2021)11-2295-04㊀㊀自2000年以来,在福建㊁浙江㊁广东和江苏等地鸭鹅群暴发一种以肝㊁脾出现大量出血性坏死灶为主要特征的新疫病,根据临床病理特征被命名为出血性坏死性肝炎(Hemorrhagic-Necrotic Hepatitis),发病以5~10d 龄为主,死亡率达2%~15%,且患病鸭日龄越小,感染率和病死率越高[1-3]㊂多品种鸭(如番鸭㊁麻鸭㊁北京鸭㊁樱桃谷等)和鹅均可发生[4-7]㊂经分离鉴定㊁全基因组破译和分子进化树分析,确定该病原为一种新型鸭呼肠孤病毒(Novel Duck Reovirus,NDRV )[1-7],与经典MDRV (Classical Muscovy Duck reovirus,CDRV )均属于禽正呼肠孤病毒群(Avian Orthoreovirus species group II)成员,但二者属于不同的基因型:CDRV 为I 型;NDRV 为II 型[8-11]㊂尽管传统DRV 和NDRV 都属于禽正呼肠孤病毒群成员,病毒生物学特性有很多相似性,但是两者在致病性㊁抗原性及基因组结构上存在差异[2-3,9-12]㊂本实验选取经DF-1细胞传代致弱的一株NDRV (JDm10株)人工感染雏番鸭,应用qRT-PCR 技术[13]研究NDRV 弱毒株在雏番鸭体内的分布动态及排毒规律,为探讨该病发病机理和研制NDRV 活疫苗提供试验依据,更为今后对该病的防控奠定基础㊂1 材料与方法1.1㊀试验动物与病毒株㊀㊀112只1d 龄雏番鸭购自金华兰溪禾旺克里莫种番鸭公司,出壳后未接种任何疫苗㊂NDRV JDm10弱毒株由本实验室经DF-1细胞连续传代150代获得(JD-150代)㊂1.2㊀主要试剂与仪器㊀㊀Prefilled Viral Total RNA Kit-Flex (货号KFRPF-805296)购自Thermo Fisher Scientific 公司;One Step PrimeScriptTMRT-PCR Kit (Perfect Real2296㊀㊀2021年第62卷第11期Time)(货号RR064A)购自宝生物工程(大连)有限公司;Tissuelyser-24全自动样品快速研磨仪(上海净信科技公司);Thermo Scientific King Fisher Flex全自动磁珠提取纯化系统(Thermo Fisher公司);荧光定量PCR(ABI7500)仪(Applied Biosystems公司)㊂1.3㊀引物设计与合成㊀㊀参照文献[13]设计Taq-Man-MGB探针和引物,由上海基康生物技术有限公司合成㊂引物与探针引物以S3基因特异性保守序列作为靶目标区,荧光定量RT-PCR检测引物为P1和P2,产物大小为128bp,探针引物5ᶄ端标记的荧光报告基团为FAM,3ᶄ端标记的荧光淬灭基团为MGB㊂P1引物序列(5ᶄ-3ᶄ)ACAAGTGTCATCAACAGCAATA TCG,P2引物序列(5ᶄ-3ᶄ)ATCATAGTAATCTG CAATGACATGCA,MGB探针序列(5ᶄ-3ᶄ)FAM-CGCACTACAGAGCAA-MGB㊂1.4㊀试验设计与样品采集㊀㊀1d龄雏番鸭分成2组,对照组42只,每只注射0.5mL DMEM培养液;攻毒组70只,每只腿部肌肉接种P150代NDRV JDm10细胞病毒液(10-7.8 TCID50/0.1mL)0.5mL㊂于攻毒后6h㊁12h㊁1d㊁3d㊁5d㊁9d㊁13d㊁15d㊁18d㊁21d㊁24d㊁28d㊁31d和35d共14个时间点,随机选取试验组5只番鸭和对照组3只番鸭先采血,后进行安乐处死解剖,每只番鸭均取脑㊁胸腺㊁肺㊁心㊁肝㊁脾㊁胰腺㊁肾㊁盲肠扁桃体和法氏囊等脏器组织㊂同时采集口腔和泄殖腔棉拭子,置于内含双抗(1000IU㊃mL-1)的PBS(0.01mol㊃L-1, pH7.2)液中㊂除血液外,其余样品均-20ħ保存以备用㊂1.5㊀RNA的提取㊀㊀将血液样品先置于37ħ培养箱中静置2h,然后4000r㊃min-1离心10min,取上层血清待用;将各棉拭子样品在振荡器上充分混合后,用灭菌镊子将拭子中的液体挤出,3000r㊃min-1离心5min,吸取上清液200μL待用;将各组织脏器样品按1ʒ5(m/m)比例加入无菌PBS(0.01mol㊃L-1,pH7.2)后,常温下在高通量全自动样品快速研磨机上匀浆成糊状,冻融3次后,将研磨液经12000r㊃min-1离心5min,取上清待用㊂取上述各样品上清液200μL,按照Prefilled Viral Total RNA Kit-Flex试剂盒说明书在Thermo Scientific King Fisher Flex全自动磁珠提取纯化系统上进行RNA 提取㊂RNA置于-80ħ保存备用㊂1.6㊀qRT-PCR检测㊀㊀根据建立的qRT-PCR方法对不同时间点采集的不同组织㊁拭子及血液样品的RNA进行检测㊂以提取的NDRV JDm10弱毒株DF-1细胞病毒RNA 作为阳性对照,正常DF-1细胞RNA作阴性对照㊂反应体系和条件及标准曲线的建立均参照文献[13]进行㊂具体如下:2ˑOne Step RT-PCR BufferⅢ10μL㊁TaKaRa Ex Taq HS0.4μL㊁PrimeScript RT Enzyme MixⅡ0.4μL㊁P1/P2(10μmol㊃L-1) 0.4μL㊁MGB-Probe(10μmol㊃L-1)0.8μL㊁模版2μL㊁Rox DyeⅡ0.4μL㊁RNase Free dH2O 5.2μL㊂反应条件为42ħ5min;95ħ10s; 95ħ5s㊁54ħ31s,40个循环㊂以Ct值和扩增曲线确定样品RNA的阴㊁阳性,即采集的不同时间点样品中是否含有NDRV核酸㊂2 结果与分析2.1㊀一步法qRT-PCR检测NDRV标准曲线的建立㊀㊀以10倍系列稀释的NDRV RNA标准品为模版,按照优化的反应条件进行一步法qRT-PCR反应㊂根据扩增结果绘制标准曲线,以Ct值为Y轴, RNA标准品拷贝数的对数为X轴,其回归方程为y=-3.477x+42.504,R2为0.999㊂2.2㊀NDRV JDm10-150株在攻毒雏番鸭各组织器官的分布㊀㊀攻毒前期雏番鸭各组织器官及血液NDRV检测均为阴性;于接毒后6h,即可从雏番鸭的各组织器官及血液中检测出NDRV核酸;接毒12h后,除脑组织外,心㊁肝㊁脾㊁肺㊁肾㊁胸腺㊁法氏囊㊁胰腺㊁盲肠扁桃体及血清均可检到NDRV核酸,且肝㊁脾㊁肾在各脏器组织及血清中病毒含量最高;接毒后1~5d,只有肝㊁脾㊁肾脏组织及血清可检测到NDRV核酸,且含量减少,其余组织器官均检测不到NDRV核酸或NDRV核酸检测为阴性;接毒后9d,各组织器官及血液均检测不到NDRV核酸或NDRV核酸检测为阴性;接毒后第13~35d,除脑和血清外,大部分的组织脏器中均又检测到NDRV核酸,其中脾脏和法氏囊组织器官中NDRV核酸含量始终保持较高水平(表1)㊂2.3㊀攻毒番鸭的NDRV JDm10-150排出情况㊀㊀攻毒后6h,即在咽拭子和泄殖腔拭子中均可检测到NDRV核酸㊂接毒24h后咽拭子中检测NDRV核酸为阴性,或检测不出NDRV核酸;28d㊀㊀表1㊀鸭新型呼肠孤病毒在雏番鸭组织中的qRT-PCR 检测结果攻毒后时间样品脑胸腺肺脏心脏肝脏脾脏胰腺肾脏法氏囊盲肠扁桃体血清0h-----------6h34.7533.2331.8734.6826.4925.2033.6330.3634.6433.1433.1212h-34.4933.9133.5126.6626.4234.0128.0033.1833.2032.331d--33.60-30.9830.4834.8933.08-34.6434.433d----32.5034.60-----5d-----33.04-33.2134.93-34.599d-----------13d33.0132.1432.47-29.9627.8533.5832.8427.1730.09-15d -32.7731.2334.7533.5328.4530.4732.3224.9828.44-18d-29.1132.7534.2932.1727.5428.7232.0026.3332.50-21d-29.0433.18-34.6529.4728.2532.4627.2433.15-24d-31.0331.99-34.7426.6832.3932.0127.4131.38-28d-31.6334.70-32.5429.8030.1134.0228.7533.75-31d-32.87-34.31-27.1630.8632.3228.93--35d-----30.3232.91-28.3633.91-㊀㊀注:-表示为阴性,Ct>35或未检测到NDRV 核酸㊂表2同㊂后泄殖腔拭子中才完全检测不到NDRV 核酸或NDRV 核酸检测为阴性㊂结果表明,弱毒株NDRVJDm-150接种雏番鸭后可通过口腔分泌物和泄殖腔排泄物向外界排毒,但通过口腔分泌物排毒时间短,主要还是通过泄殖腔排泄物向外界排毒(表2)㊂表2㊀攻毒后雏番鸭排毒qRT-PCR 检测Ct 值采集部位6h12h1d3d5d9d13d15d18d21d24d28d31d35d咽喉31.8433.93-----34.78------泄殖腔33.12--34.03--30.9928.0133.14-33.06---3 小结与结论弱毒疫苗在动物体内的分布和增殖规律是阐明疫苗免疫机理的重要基础㊂而对病原体在宿主机体内分布与增殖规律的研究,根据病原体特性,可采用组织病理学检查㊁电镜观察㊁血清学㊁原位杂交和PCR /RT-PCR 等技术手段[14]㊂对于DRV(CDRV 和NDRV)主要采用常规RT-PCR 技术研究其在雏番鸭体内的分布与增殖规律[15-17],未见使用灵敏度更高㊁特异性更强且可进行定量的qRT-PCR 技术㊂而该技术可将病原体在宿主机体内的分布㊁增殖动态变化与宿主病程有效的结合,通过实时监测病原体在宿主机体内变化,从而确定宿主病程阶段[14]㊂因此,本试验应用qRT-PCR 技术对NDRV JDm10-150毒株在雏番鸭体内的分布动态㊁增殖规律和排毒规律进行了研究㊂首先,雏番鸭感染NDRV JDm-150弱毒株后6h,各组织器官及血液中即可检测出NDRV 核酸,包括胸腺㊁脾脏和法氏囊等中枢免疫器官,并且病毒在脾脏中增殖最快㊂感染后13d 起,直至35d,脾脏和法氏囊组织中的病毒含量均高,胸腺较低㊂表明脾脏和法氏囊是NDRV JDm10弱毒定居和繁殖的主要场所,这一特点与NDRV 强毒感染鸭相同[3,17]㊂脾脏和法氏囊是禽类的主要中枢免疫器官,NDRV JDm10-150弱毒能迅速分布于这2个免疫器官,表明该弱毒株可刺激雏番鸭机体迅速产生免疫力,可对NDRV 强毒在各组织器官的分布及增殖起干扰作用,符合弱毒疫苗特性,免疫宿主后可迅速为宿主提供免疫保护力[14]㊂其次,在感染NDRV JDm-150弱毒株12h 后,各组织器官及血液中的NDRV 核酸量持续降低,且大部分组织脏器中的病毒核酸检测呈阴性(肝脏㊁脾脏和肾脏除外)㊂至感染后9d,各组织脏器及血液中NDRV 核酸均呈阴性,表明雏番鸭机体的免疫作用对NDRV JDm10-150弱毒株的增殖起到了抑制作用㊂而感染后13d 起,各组织脏器中的NDRV 核酸基本又呈阳性(脑和心脏除外)㊂直至感染后35d,脾脏㊁法氏囊和胰腺等组织器官中仍可检测到NDRV 核酸,表明NDRV JDm10-150弱毒株持续存在(尤其在脾脏和法氏囊中),可不间断的刺激番鸭中枢免疫器官产生特异性抗体,为其提供免疫保护㊂2298㊀㊀2021年第62卷第11期研究[17]发现,NDRV强毒株可以通过消化道和呼吸道途径传播,并通过这2种途径向外排毒,排毒时间2周左右㊂因此,在生产实际中应加强环境卫生管理,切断传染源,对防治NDRV病的发生有重要作用㊂本实验通过对咽喉和泄殖腔棉拭子的检测发现,NDRV JDm10-150弱毒感染雏番鸭后,主要通过粪便向外界排毒,感染6h后就可排毒,且持续24d㊂表明NDRV弱毒株可迅速通过粪便排出体外,然后通过消化道再次进入鸭体,从而起到加强免疫的作用,这一结果具有重要的免疫学意义和生态学意义㊂本试验明确了NDRV弱毒株在雏番鸭体内组织器官中的动态分布情况和排毒规律,该研究结果对新型鸭呼肠孤病毒病的分子流行病学调查㊁疫病防控以及其弱毒疫苗研究提供指导意义和理论依据㊂参考文献:[1]㊀王永坤,周继宏,严维巍,等.鹅出血性坏死性肝炎的初步研究[J].中国家禽,2002,24(18):9-11.[2]㊀黄瑜,傅光华,施少华,等.新致病型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定[J].中国兽医杂志,2009,45(12):29-31. [3]㊀陈少莺,陈仕龙,林锋强,等.新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定[J].病毒学报,2012,28(3):224-230. [4]㊀LIU Q F,ZHANG G Z,HUANG Y,et al.Isolation andcharacterization of a reovirus causing spleen necrosis in Pekinducklings[J].Veterinary Microbiology,2011,148(2/3/4):200-206.[5]㊀YUN T,YE W C,NI Z,et plete genomic sequence ofgoose-origin reovirus from China[J].Journal of Virology,2012,86(18):10257.[6]㊀WANG D,XU F,MA G M,et plete genomic sequenceof a new Muscovy duck-origin reovirus from China[J].Journalof Virology,2012,86(22):12445.[7]㊀LI N,HONG T Q,WANG Y,et al.The pathogenicity of novelduck reovirus in Cherry Valley ducks[J].VeterinaryMicrobiology,2016,192:181-185.[8]㊀CHEN Z Y,ZHU Y Q,LI C F,et al.Outbreak-associatednovel duck reovirus,China,2011[J].Emerging InfectiousDiseases,2012,18(7):1209-1211.[9]㊀WANG D,SHI J J,YUAN Y,et plete sequence of areovirus associated with necrotic focus formation in the liver andspleen of Muscovy ducklings[J].Veterinary Microbiology,2013,166(1/2):109-122.[10]㊀YUN T,YU B,NI Z,et al.Isolation and genomiccharacterization of a classical Muscovy duck reovirus isolated inZhejiang,China[J].Infection,Genetics and Evolution,2013,20:444-453.[11]㊀YUN T,YU B,NI Z,et al.Genomic characteristics of a novelreovirus from Muscovy duckling in China[J].VeterinaryMicrobiology,2014,168(2/3/4):261-271. [12]㊀陈仕龙,陈少莺,程晓霞,等.3种禽类呼肠孤病毒血清学相关性及致细胞病变差异分析[J].畜牧兽医学报,2011,42(4):533-537.[13]㊀云涛,华炯钢,叶伟成,等.新型鸭呼肠孤病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[J].浙江农业学报,2020,32(4):571-576. [14]㊀齐雪峰,程安春,汪铭书,等.应用TaqMan-MGB探针FQ-PCR探讨鸭瘟弱毒苗在鸭体内的分布及排泄规律[J].中国兽医学报,2008,28(7):766-770.[15]㊀林锋强,陈仕龙,胡奇林,等.番鸭呼肠孤病毒弱毒株在免疫番鸭体内的分布及排毒规律[J].中国兽医学报,2008,28(11):1259-1261.[16]㊀林锋强,朱小丽,陈少莺,等.番鸭呼肠孤病毒在番鸭体内的动态分布和排毒规律[J].福建农业学报,2011,26(3):335-337.[17]㊀林锋强,程晓霞,陈仕龙,等.新型鸭呼肠孤病毒在番鸭体内分布和排毒规律[J].中国家禽,2018,40(3):53-55.(责任编辑:王新芳)。

免疫鸭群中一株变异型番鸭呼肠孤病毒的分离与特性研究

并 能 够 致 死 番 鸭胚 和 S P F鸡 胚 ,回 归 1日龄 雏 番 鸭 出现 典 型 的肝 脏 点状 或 斑 块 状 出血 等 特征 性 病 变 ,与 临床 发
病 鸭 相 同 。分 离株 S 3基 因核 苷 酸 同 源性 与 太湖 流 域 2 0 1 1年 分 离株 D R V. T Hl l最 高 ,为 9 9 . 9%,与福 建番 鸭 源 分
A b s t r a c t : A d u c k r e o v i r u s( DR V )wa s i s o l a t e d f r o m v a c c . i n a t e d Mu s c o v y d u c k s , w h i c h a d mi n i s t r a t e d wi t h Mu s c o y v d u c k r e o v i r u s v a c c i n e a n d Mu s c o v y d u c k p a r v o v i r u s( MD P V)v a c c i n e s i n Gu a n g d o n g p r o v i n c e , a n d p u r i i f e d b y l i mi t e d d i l u t i o n s i n
CHEN F e n g , LEI We n , ZHANG Xi a n g — b i n , ZHAO Li - c h a n 2 ,CAO Sh e n g 2 ,
L I U C h u a n g 2 , Q r N J i a n — p i n g 2 , L I Ha i — y a n 2
l s o l a t i o n a n d c h a r a C t e r i z a t i O n o f a v a r i a n t a v i a n r e o v i r u s f r O m v a c c i n a t e d M u s c o v y d u c k f l o c k s

不同水果排不同的毒

不同水果排不同的毒
阳光
【期刊名称】《农业知识(瓜果菜)》
【年(卷),期】2009(000)009
【摘要】@@ 草莓不可忽略的排毒水果,热量不高,而且又含有维生察C.在自然疗法中,草莓可用来清洁胃肠道,并强固肝脏.不过,对阿司匹林过敏和肠胃功能不好的人,不宜食用. rn樱桃很有价值的天然药食.樱桃的果肉能去除毒索和不洁的体液,因而对肾脏排毒具有相当的辅助功效.同时还有温和的通便作用.选择时,最好选择果实饱满结实、带有绿梗的樱桃.
【总页数】1页(P57)
【作者】阳光
【作者单位】(Missing)
【正文语种】中文
【相关文献】
1.秋补前先排毒不同食物排五脏毒 [J],
2.不同毒力番鸭呼肠孤病毒在番鸭免疫器官的分布和排毒 [J], 程晓霞;朱小丽;林锋强;陈仕龙;陈少莺;王劭;李兆龙
3.不同免疫抗体水平下
H9亚型AIV的排毒规律研究 [J], 盛媛;魏秀丽;徐恩民;刘娜;吴静;艾武;宋敏训;王林;马秀丽
4.不同鸡MD疫苗免疫鸡及强毒攻击后羽囊排毒规律 [J], 詹爱军;彭大新;刘秀梵;何叶峰
5.保元排毒丸对顺铂肾损害的不同证型的临床疗效观察 [J], 葛信国;张福产;蒋小燕;王缨;曹杰;周俭
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