巯基化合物的色谱分析研究
硫化氢介导的S-巯基化修饰及其化学检测技术
硫化氢介导的S-巯基化修饰及其化学检测技术张珍;全心雨;唐志书【期刊名称】《中国生物化学与分子生物学报》【年(卷),期】2024(40)1【摘要】硫化氢(hydrogen sulfide, H_(2)S)是继一氧化氮和一氧化碳之后的第3种内源性气体信号分子,通过影响细胞信号通路调节机体各个系统,具有广泛的生理和病理作用。
近年的研究发现,H2S的作用主要通过对靶蛋白进行S-巯基化修饰,改变其结构,影响其活性、稳定性以及蛋白质之间互相作用,进而调控细胞内信号通路及相关生物学过程。
本文基于国内外对S-巯基化修饰的研究,主要综述了:S-巯基化修饰的研究现状,详细总结了目前已揭示S-巯基化修饰及其具体半胱氨酸(cysteine, Cys)位点的研究,并进一步总结了S-巯基化修饰与S-亚硝基修饰之间的关系;S-巯基化修饰的反应类型,3种化学检测(马来酰亚胺法、改良生物素转换法和标记转换法)方法的检测原理和特点,通过S-巯基化修饰检测的条件和应用范围,将这3种方法进行对比,并对各方法在检测过程中应注意的事项进行了讨论。
根据作者在S-巯基化修饰研究方面积累的经验,重点阐述马来酰亚胺法检测过程中,细胞和组织样品的制备及其较详细的实验步骤。
此外,本文还讨论了当前S-巯基化修饰检测方法存在的不足及该领域未来亟待解决的问题,为S-巯基化修饰的相关研究提供参考。
【总页数】10页(P44-53)【作者】张珍;全心雨;唐志书【作者单位】陕西中医药大学陕西省中药资源产业化协同创新中心;中国中医科学院研究生院【正文语种】中文【中图分类】Q67【相关文献】1.巯基丁二胺铜单层修饰金电极上HIV-p24抗原的电化学免疫检测2.亚微米铂粒子修饰电极液相色谱电化学检测巯基化合物的研究3.RhoA激酶的硫巯基化修饰在硫化氢抗大鼠神经细胞缺氧性损伤中的作用4.二茂铁巯基化合物/金纳米粒子/还原石墨烯修饰电化学传感器检测Cu^(2+)5.蛋白质巯基及其氧化性修饰的化学检测方法因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
巯基的化学修饰(医学课件)
修饰在药物研发中的应用
详细描述：通过研究二硫键的修饰过程及其与疾病的关 系，可以发现新的药物靶点，为新药的研发提供方向。
详细描述：在已知的药物中，针对二硫键的修饰过程进 行结构优化，可以提高药物的疗效和降低副作用。
• 发展新型巯基修饰技术：随着科学技术的发展，我们需要开发更为先进的巯基修饰技术，以满足各种不同的需 求。例如，利用光敏或酶促反应进行巯基修饰，可以实现高度特异性和高效率的修饰。
• 拓展巯基修饰的应用领域：目前巯基修饰的应用主要集中在药物传递、组织工程和生物材料等方面。未来，我 们期望能够看到巯基修饰在更多领域中的应用，如疾病诊断、基因治疗和纳米医学等。同时，我们也期望能够 看到更多的具有创新性的研究思路和方法出现，推动巯基修饰技术的发展和应用。
研究面临的挑战与未来发展方向
• 建立有效的巯基修饰方法：尽管已经有许多用于巯基修饰的方法，但它们往往存在一些问题，如反应条件剧烈 、对环境不友好等。因此，开发更为温和、高效且环保的巯基修饰方法仍然是一个挑战。
• 深入理解巯基修饰的生物效应：目前对于巯基修饰在生物医学领域的应用研究尚处于初级阶段，许多关键问题 仍需解决。例如，如何精确控制巯基修饰对生物分子的影响，以及如何评估这种影响对细胞和组织的功能和健 康的影响等。
详细描述
在新型药物的研发过程中，通过调节巯基修 饰的表达水平，可以开发出具有全新作用机 制的药物，为治疗多种疾病提供了新的选择 。经过实验验证，这种新型药物具有较高的 疗效和较低的副作用，具有很好的应用前景 。
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相关案例分析或研究报告
案例一：某疾病中巯基修饰的异常及其意义
巯基乙酸-中国食品药品检定研究院
附件1化妆品中巯基乙酸的检测方法（征求意见稿）1 范围本方法规定了离子色谱法测定化妆品中巯基乙酸的含量。
本方法适用于化妆品中巯基乙酸及其盐类和酯类含量的测定。
2 方法提要样品中的巯基乙酸经水溶解提取后，用离子色谱仪分离巯基乙酸根与无机离子，电导检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。
本方法巯基乙酸的检出限5.8ng，定量下限20ng。
取样量为0.5g时，检出浓度为46μg/g，最低定量浓度0.15mg/g。
3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。
3.1 巯基乙酸，优级纯。
3.2 甲醇，优级纯。
3.3 三氯甲烷，分析纯。
3.4 氢氧化钠，分析纯。
3.5 硫酸溶液[φ（H2SO4）=10%]：取硫酸（ρ20=1.84g/ml）10mL，缓慢加入到90mL水中，混匀。
3.6 盐酸溶液[φ（HCl）=10%]：取盐酸（ρ20=1.19g/ml）10mL，加入90mL水中，混匀。
3.7 淀粉溶液（10g/L）：称可溶性淀粉1g，加水5mL调成溶液，再加入沸水95mL，煮沸，并加水杨酸0.1g或氯化锌0.4g防腐。
3.8 氢氧化钠溶液（500g/L）：称取氢氧化钠50g，加水适量使溶解并至100mL。
再量取一定量用经超声脱气的水稀释到淋洗液浓度。
3.9 重铬酸钾标准溶液[c(1/6K2Cr2O7)=0.1000mol/L]：准确称取已于120℃±2℃电烘箱中干燥至恒重的重铬酸钾基准物质4.9031g ，溶于水并转移至1000mL 量瓶中，定容至刻度，摇匀。
3.10 硫代硫酸钠标准溶液(0.1mol/L)：称取硫代硫酸钠（Na 2S 2O 3▪5H 2O ）26g （或无水硫代硫酸钠16g ）溶于1000mL 新煮沸放冷的水中，加入氢氧化钠0.4g 或无水碳酸钠0.2g ，摇匀，贮存于棕色瓶内，放置两周后过滤，用重铬酸钾标准溶液标定其浓度，标定方法如下：准确吸取重铬酸钾标准溶液（3.9）25.00mL 于500mL 碘量瓶中，加碘化钾2.0g 和硫酸溶液（10%）20mL ，立即密塞，摇匀，于暗处放置10min 。
巯基化合物在分析中的应用
巯基化合物在分析中的应用
巯基化合物是一类重要的有机化合物，因其与蛋白质结合特别紧密，在分析学有着广泛的应用。
一方面，巯基化合物能够增强谱线的显示效果，从而提高测量的精确度；另一方面，它可以用来检测蛋白质及其它有机物质在溶液中的含量。
近年来，随着巯基化合物技术的发展，在分析学中的应用日趋广泛。
首先，巯基化合物能够改进核磁共振（NMR）谱线的显示效果。
对于某一种结构复杂的有机物，如果直接用NMR测量，得到的信号太微弱，用肉眼看不到，但是使用巯基化合物可以激发这些微弱的信号，使其变得更易于测量，提高精确度。
其次，巯基化合物还可以用来检测蛋白质及其它有机物质在溶液中的含量。
巯基化合物具有易于连接到蛋白质以及其它有机物质的特点，因此可以用来追踪蛋白质或有机物质在溶液中的含量。
例如，可以用哪种巯基化合物与蛋白质结合，在特定时间点释放出，然后再测量它们在溶液中的含量，从而了解蛋白质的结构及动态变化。
此外，巯基化合物还用于体外和体内结构的测定。
例如，可以使用核磁共振谱来测定巯基化蛋白质的结构，从而研究蛋白质的结构及功能，进而了解蛋白质和药物之间的相互作用。
在体内，可以用巯基化合物来评价药物在体内的分布和代谢情况，从而更好地评价新药的活性和安全性。
总而言之，巯基化合物是一类重要的有机化合物，它具有非常好的显示效果，且能够检测蛋白质及其它有机物质在溶液中的含量，因
此在分析学有着极为广泛的应用。
进一步研究和改进巯基化合物技术，将有助于更好地了解蛋白质的结构和功能，以及如何更有效地利用其在分析学中的应用。
发用类化妆品中巯基乙酸的测定-离子色谱法
中国口岸科学技术发用类化妆品中籬基乙酸的测定-离子色谱法符灵梅I 纪少凡I 戴小丽1刘庆祺I摘 要 建立了抑制型电导离子色谱法测定发用类化妆品中疏基乙酸的方法。
样品用水溶解，超声萃取20 min,经Bond Elut C18 小柱除去提取液中的表面活性剂,以 Dionex lonpac™ AG19 ( 4 mm x 50 mm )保护柱和 Dionex lonpac™ AS19 ( 4mm x 250 mm )高柱容量分析柱.25mmol/L 氢氧化钾为淋洗液等度洗脱.用电导检测器测定。
在0.5 ~ 10.0 rng/L 的范围内线性关系良好，相关系数为0.9996,检出限(S/N=3)为40从蜒，相对标准偏差为0.8% ~ 4.4%,回收率在95.1% ~ 102.2% 之间。
与其他方法相比，该方法具有简便、快速、准确、所需试剂少及灵敏度高的优点。
关键词 离子色谱；化妆品；疏基乙酸Determination of Thioglycolic Acid in Hair Cosmetics-lon ChromatographyFU Ling-Mei *1 JI Shao-Fan 1 DAI Xiao-Li 1 LIU Qing-Qi 1第一作者：符灵梅(1985—),女.汉族.海南海口人，本科.工程师，主要从事食品中有毒有害残留检测的研究，E-mail ：****************1.海口海关技术中心 海口 5703111. The Technology Center of Haikou Customs, Haikou 570311Abstract A new method was developed for the determination of thioglycolic acid in hair cosmetics by suppressed conductivity ionchromatography. The samples were dissolved by water and extracted with ultrasonic for 20 min. The surfactant in the extract was removed byBond Elut C18 column. Using Dionex lonpac™ AG19 (4 mm x 50 mm) guard column, Dionex lonpac™ AS19 (4 mm x 250 mm) high-capacityanalytical column and 25 mmol/L of KOH solution as eluent, the content of thioglycolic acid in hair cosmetics could be determined. Under the optimized conditions, this method showed a good linear relationship from 0.5 mg/L to 10.0 mg/L, the correlation coefficient0.9996, the recoveries between 95.1% and 102.2% with relative standard deviations (RSDs) ranging from 0.8% to 4.4%, and the limit of detection (S/N=3) 40 jjl g/g. Compared with other methods, this method has the advantages of simplicity, rapidity, accuracy, less reagentsand high sensitivity.Keywords ion chromatography ； cosmetics ； thioglycolic acid疏基乙酸(Thioglycolic acid, TGA )又名硫代乙醇 酸(HSCH q COOH),分子式中既含有竣基，又含有 疏基极性基团无色透明有机化合物，具有强烈刺激性气味，在碱性条件下有较强的还原性，直接接触皮肤可致红斑、瘙痒，甚至产生急性红肿、渗岀、疼痛，诱发慢性皮炎，皮肤刺激试验中阳性率高达85%以79CHINA PORT SCIENCE AND TECHNOLOGY上X%根据不同使用量，可使头发柔软甚至断裂凶，乙酸的监测提供便利的检测方法:所以其广泛应用于发用类化妆品中。
5-巯基-1-甲基四唑紫外分光光度计吸收波长
5-巯基-1-甲基四唑紫外分光光度计吸收波长5-巯基-1-甲基四唑紫外分光光度计吸收波长1. 介绍5-巯基-1-甲基四唑是一种常用的有机化合物，具有多种应用，其中之一就是在紫外分光光度计中作为吸收试剂。
它具有很强的吸收特性，因此在光度计测定中有着重要的作用。
本文将从深度和广度两个方面对它的吸收波长进行全面评估和探讨。
2. 5-巯基-1-甲基四唑的基本特性5-巯基-1-甲基四唑是一种含硫杂环化合物，化学式为C2H3N3S，具有巯基和唑环结构。
它的分子结构简单，但却具有较强的吸收特性，这使得它在紫外分光光度计中被广泛应用。
接下来，我们将从其分子结构和化学性质两个方面来分析其吸收特性。
3. 分子结构对吸收波长的影响我们来看5-巯基-1-甲基四唑的分子结构。
它的唑环结构使得它在紫外光区有较强的吸收能力，而巯基的存在则能进一步增强其吸收特性。
这意味着它在紫外分光光度计中的吸收波长很可能处于较短的波段范围内。
我们可以初步推测，5-巯基-1-甲基四唑的吸收波长可能集中在200-300nm之间。
4. 化学性质对吸收波长的影响我们要考虑5-巯基-1-甲基四唑的化学性质对吸收波长的影响。
由于其含有巯基，它在不同溶剂中的吸收特性可能会有所不同。
在溶剂不同的情况下，分子间的相互作用会发生改变，从而影响其吸收波长。
在测定5-巯基-1-甲基四唑的吸收波长时，需考虑到溶剂的选择对吸收情况的影响。
5. 5-巯基-1-甲基四唑在紫外分光光度计中的应用5-巯基-1-甲基四唑具有较强的吸收特性，因此在紫外分光光度计中被广泛应用。
它可以作为吸收试剂，用于测定不同样品中的吸收特性。
通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以得到样品的浓度、纯度、反应速率等信息，因此在分析化学领域有着重要的应用价值。
6. 个人观点和总结5-巯基-1-甲基四唑作为紫外分光光度计中的吸收试剂具有重要的意义。
通过对其分子结构和化学性质的分析，我们可以初步推测它的吸收波长可能集中在200-300nm范围内。
巯基化合物的色谱分析研究
巯基化合物的色谱分析研究巯基化合物广泛地存在于生物体内，具有清除自由基、重金属解毒和拮抗电离辐射等作用。
此外，巯基化合物还与机体生长发育、延缓衰老及某些疾病（如白血病，关节炎和帕金森综合症）有关。
巯基类药物可用于许多种疾病的治疗。
因此，建立简单、快速、灵敏的巯基化合物的分析检测方法具有十分重要的意义。
本论文采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测法（CE-LIF）和高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FL）分析测定生物样品中的巯基化合物。
研究内容主要包括以下三个部分：（1）建立了以BODIPY类荧光染料（1,3,5,7-四甲基-8-溴甲基-二氟化硼-二吡咯甲川，TMMB-Br）为柱前衍生试剂，采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时测定高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽三种巯基化合物的分析方法。
具体考察了电泳背景电解质的种类、浓度和pH值、分离电压、进样时间对分离的影响；研究了衍生缓冲溶液的组成及pH值、衍生试剂浓度、反应温度和时间对衍生效率的影响。
在优化的条件下，高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽的检出限（S/N=3）分别为0.73nmol/L，0.72nmol/L和0.36nmol/L。
将该方法应用于人血清和尿液样品中的高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽的测定，回收率在92.6%-109.1%之间。
此外，尝试了TMMB-Br用于活细胞内的巯基化合物的荧光成像。
（2）同时建立了高效液相色谱-荧光检测法和毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定巯基类药物D-青霉胺和硫普罗宁的两种分析方法。
以TMMB-Br为荧光标记试剂，详细探讨了电泳及色谱分离条件，D-青霉胺和硫普罗宁的衍生条件，确定了方法的可行性。
在最优条件下，D-青霉胺和硫普罗宁均可在12min内达到基线分离，检出限分别为5.0nmol/L，2.0nmol/L和0.88nmol/L，0.47nmol/L。
将两种方法成功应用于人尿液和血清样品中D-青霉胺和硫普罗宁的测定，回收率分别在95.0%-106.7%和95.2%-104.3%之间。
用于检测巯基化合物的荧光探针的研究进展
用于检测巯基化合物的荧光探针的研究进展刘柳;马景川;盖冬玮;张妍;冯昕;马梦瑶;张明;武祥龙【摘要】Thiol compounds are playing vital physiological roles in human body,so the efficient detection of thiol compounds has very important applicable values in pathology and life sciences.According to the structure of fluorescent probes,the research progress of fluorescent probes for the detection of thiol compounds is re-viewed in this paper.%巯基化合物在生物体内有着重要的生理作用，它的有效检测在病理学和生命科学领域具有非常重要的应用价值。
依据荧光探针的结构，分类综述了可检测巯基化合物的荧光探针的研究进展。
【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2016(033)002【总页数】8页(P1-7,30)【关键词】巯基化合物;荧光探针;检测【作者】刘柳;马景川;盖冬玮;张妍;冯昕;马梦瑶;张明;武祥龙【作者单位】西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安 710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072;西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西西安710072【正文语种】中文【中图分类】O625生物体内巯基化合物是构成蛋白质和某些大分子(如半胱氨酸、同型半胱氨酸、谷胱甘肽等)的主要物质，在人体生理活动中起着至关重要的作用，不仅参与了许多重要的细胞反应过程(包括氧化还原平衡和细胞生长)，还可以表征细胞内氧化还原状态以及蛋白质的高级有序结构[1]。
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巯基化合物的色谱分析研究
巯基化合物广泛地存在于生物体内，具有清除自由基、重金属解毒和拮抗电离辐射等作用。
此外，巯基化合物还与机体生长发育、延缓衰老及某些疾病（如白血病，关节炎和帕金森综合症）有关。
巯基类药物可用于许多种疾病的治疗。
因此，建立简单、快速、灵敏的巯基化合物的分析检测方法具有十分重要的意义。
本论文采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测法（CE-LIF）和高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FL）分析测定生物样品中的巯基化合物。
研究内容主要包括以下三个部分：（1）建立了以BODIPY类荧光染料（1,3,5,7-四甲基-8-溴甲基-二氟化硼-二吡咯甲川，TMMB-Br）为柱前衍生试剂，采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时测定高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽三种巯基化合物的分析方法。
具体考察了电泳背景电解质的种类、浓度和pH值、分离电压、进样时间对分离的影响；研究了衍生缓冲溶液的组成及pH值、衍生试剂浓度、反应温度和时间对衍生效率的影响。
在优化的条件下，高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽的检出限（S/N=3）分别为0.73nmol/L，0.72nmol/L和0.36nmol/L。
将该方法应用于人血清和尿液样品中的高半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽的测定，回收率在92.6%-109.1%之间。
此外，尝试了TMMB-Br用于活细胞内的巯基化合物的荧光成像。
（2）同时建立了高效液相色谱-荧光检测法和毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定巯基类药物D-青霉胺和硫普罗宁的两种分析方法。
以TMMB-Br为荧光标记试剂，详细探讨了电泳及色谱分离条件，D-青霉胺和硫普罗宁的衍生条件，
确定了方法的可行性。
在最优条件下，D-青霉胺和硫普罗宁均可在12min内达到基线分离，检出限分别为5.0nmol/L，2.0nmol/L和0.88nmol/L，0.47nmol/L。
将两种方法成功应用于人尿液和血清样品中D-青霉胺和硫普罗宁的测定，回收率分别在
95.0%-106.7%和95.2%-104.3%之间。
（3）建立了毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时测定卡托普利和N-乙酰-L-半胱氨酸两种药物的分析方法。
以荧光素为内标物，在25mmol/L硼酸电泳缓冲溶液（pH9.5）中，当分离电压为11.0kV时，卡托普利和N-乙酰-L-半胱氨酸的衍生物及内标物在室温条件下15min内达到基线分离。
在优化条件下，卡托普利和N-乙酰-L-半胱氨酸检测的线性范围在
6-600nmol/L之间，线性相关系数分别为0.9982和0.9985，检出限分别为
0.65nmol/L和0.76nmol/L。
将该方法成功应用于人血清和尿液样品中卡托普利和N-乙酰-L-半胱氨酸的测定，回收率在97.0%-105.7%之间。
该方法具有操作简单、重现性好、灵敏度高等特点。