三维重组眼角膜上皮模型法与兔眼刺激法对洗发水眼刺激性的比较与评价
屏障功效测试 体外重组3D表皮模型 测试方法
屏障功效测试体外重组3D表皮模型测试方法概述屏障功效测试是评估化妆品、药物和其他外部物质对皮肤屏障功能的影响的一种测试方法。
体外重组3D表皮模型是一种常用的实验模型，可以模拟真实皮肤的结构和功能。
本文档将介绍屏障功效测试的基本原理和体外重组3D表皮模型的测试方法。
屏障功效测试原理皮肤是人体最外层的保护屏障，其主要功能是防止水分流失、抵御外界有害物质的侵入。
屏障功效测试通过模拟真实皮肤环境，在体外条件下评估化妆品、药物和其他外部物质对皮肤屏障功能的影响。
常用的屏障功效测试指标包括水分蒸发率、皮肤电导率和表皮厚度等。
体外重组3D表皮模型体外重组3D表皮模型是一种由人类表皮细胞构建的实验模型，可以模拟真实皮肤的结构和功能。
它由上皮细胞、角质细胞和基底细胞构成，具有较好的屏障功能。
测试方法步骤1：制备3D表皮模型1.1 收集人类表皮细胞：使用无菌的方法收集人类表皮细胞，通常采用无菌屏障技术进行收集。
1.2 培养表皮细胞：将收集到的表皮细胞进行培养，提供适当的营养物质和培养基，培养温度通常为37℃。
1.3 构建重组3D表皮模型：将培养好的表皮细胞放入培养皿中，形成多层细胞结构，然后使用培养基维持细胞的生长。
步骤2：屏障功效测试2.1 测量水分蒸发率：使用水分蒸发仪测量体外重组3D表皮模型的水分蒸发率。
仪器将模型暴露在一定的温度和湿度条件下，通过测量水分的损失来评估模型的屏障功能。
2.2 测量皮肤电导率：使用皮肤电导计测量体外重组3D表皮模型的皮肤电导率。
仪器通过测量电流通过模型时的电阻程度来评估模型的屏障功能。
2.3 测量表皮厚度：使用显微镜或光学相机测量体外重组3D表皮模型的表皮厚度。
通过比较不同处理条件下的表皮厚度来评估模型的屏障功能。
步骤3：数据分析和结果解读3.1 收集测试数据：将屏障功效测试的数据记录下来，包括水分蒸发率、皮肤电导率和表皮厚度等指标。
3.2 数据分析：使用合适的统计方法对测试数据进行分析，比较不同处理条件下的测试结果，判断测试物质对屏障功能的影响。
利用离体牛角膜多次暴露方法评测化妆品套装的眼刺激性
利用离体牛角膜多次暴露方法评测化妆品套装的眼刺激性黄健聪;陈志杰;陈义珠;秦瑶【摘要】Five commercially available cosmetic kits were evaluated by using the standard and modified bovine corneal opacity and permeability (BCOP) test,and the changes of opacity and permeability were compared in different test alternatives,developed a preliminary evaluation method of in vitro bovine corneal multi-exposure.Results show that according to the standard test method,each of five kits tested is non-irritation.On the other hand,the five kits,by the modified test,may cause eye irritation resulted from the various changes of opacity and permeability of the corneas.In conclusion,the modified BCOP test is demonstrated to be an appropriate method for multi-exposure eye irritation assessment of cosmetic kits,which can provide reference for improving product safety.%采用标准和改良的牛角膜浑浊度和渗透性(BCOP)试验对市售5种化妆品洗护套装进行评测,并比较不同方案下渗透性和浑浊度2个参数的变化,初步建立多次眼暴露的离体牛角膜试验体外评价方法.结果表明,采用标准方法套装内单个产品均显示无眼刺激性,而多次暴露后,发现角膜浑浊度和渗透性均出现了不同程度的变化,可能产生眼刺激性.改良后的BCOP测试方法可用于多次暴露的眼刺激性评价,为产品安全性的提升提供了参考.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2018(048)002【总页数】4页(P109-112)【关键词】化妆品;眼刺激;牛角膜;多次暴露【作者】黄健聪;陈志杰;陈义珠;秦瑶【作者单位】广州市华代生物科技有限公司,广东广州 510535;广州市华代生物科技有限公司,广东广州 510535;广州市华代生物科技有限公司,广东广州 510535;广州市华代生物科技有限公司,广东广州 510535【正文语种】中文【中图分类】TQ658从20世纪90年代开始，眼刺激的动物实验替代方法陆续进入验证程序。
两种硬性接触镜护理液除蛋白作用及生物相容性的比较研究
两种硬性接触镜护理液除蛋白作用及生物相容性的比较研究翁郁华;李伶俐;罗丽;南开辉;金婉卿;陈云云【摘要】Objective To evaluate the biocompatibility of a new type of rigid contact lens care solution ( RCLS) including deproteinization effect, cytotoxicity on human corneal epithelium cells, irritation of eyes and skin, compared with MeniconProgent, a commercially available contact lens care solution. Methods The human corneal epithelial cells HCE-2 were planted in 96-well plates, co-cultured with RCLS, MeniconProgent and cell medium respectively. Cell viability was determined using WST-1 reagent to detect the absorbance of each well after exposure for different time at 450 ran; For deproteinization efficacy experiment, two groups of rigid contact lens were soaked in 2 mg/mL lysozyme solution for 24 hours, then immersed in RCLS or MeniconProgent for 30 min. The protein content of each solution was determined with BCA kit; The New Zealand white rabbits were chosen to take irritant experiment. Each rabbit had one drop testing solution in one eye. The result was recorded after experiment. The gauze pieces was steeped with RCLS or MeniconProgent before fixing them onto the skin of rabbits' back, and the injury of the skin was evaluated. Results The RCLS had a 83. 159% deproteinization rate of lysozyme adsorbed upon the surface of lens,comparing to MeniconProgent of 85. 180% , which had no significant difference. Cytotoxicity results showed that MeniconProgent might lead to cell lysis which reveals a severe toxicity on corneal epithelium cells,and it also has irritating effect to eyes and skin.When co-cultured in RCLS for an hour, the toxicity of RCLS was less than 20% , neither irritating to the rabbit eyes nor to the skin. Conclusions RCLS had a superior biocompatibility comparing to MeniconProgent in regard to cytotoxicity and irratanting.%目的将一种硬性接触镜护理液(RCLS)与现有同类产品MeniconProgent进行除蛋白作用、对人眼角膜上皮细胞毒性及动物刺激性的比较,综合评价其生物相容性.方法细胞毒性实验采用人眼角膜上皮细胞,分别用培养液、RCLS、MeniconProgent作用细胞不同时间,以WST-1试剂检测细胞存活率；取硬镜RGP镜片在2 mg/mL溶菌酶溶液中浸泡、吸附24h,分别用RCLS和MeniconProgent浸泡吸附后的镜片,再用BCA法测定溶液中的蛋白含量；刺激性实验以新西兰白兔为实验对象,分别取0.1 mL RCLS或MeniconProgent滴入兔眼,记录眼损伤；取沾有RCLS和MeniconProgent的纱布块敷贴于兔背部裸露皮肤处,敷贴后评价皮肤损伤程度.结果RCLS对硬镜表面吸附的溶菌酶有83.159％的除去率,相对于MeniconProgent的85.180％,差异无统计学意义；MeniconProgent接触15 min后即对人角膜上皮细胞有溶解作用,细胞毒性大,对兔眼有刺激,对皮肤也有轻度刺激,而RCLS作用人角膜上皮细胞1h,细胞存活率＞80％,对兔眼及皮肤均无刺激.结论 RCLS在细胞毒性及刺激性方面的生物相容性优于MeniconProgent.【期刊名称】《中国眼耳鼻喉科杂志》【年(卷),期】2013(013)002【总页数】5页(P100-104)【关键词】硬性接触镜;护理液;除蛋白作用;生物相容性【作者】翁郁华;李伶俐;罗丽;南开辉;金婉卿;陈云云【作者单位】温州医学院眼视光学院医院生物医学工程研究院温州325027【正文语种】中文接触镜又称隐形眼镜，有软镜和硬镜之分。
体外评价体系介绍
表皮 基底层
真皮
皮肤基底层附近胶原蛋白示意图
4型胶原蛋白 7型胶原蛋白 1型胶原蛋白
1型胶原蛋白：存在于真皮的细胞外基质中，形成三股螺旋结构 4型胶原蛋白：多数存在于真皮与表皮之间的基底层中，起到支撑基底层结构的作用 7型胶原蛋白：以环状结构与基底层相连接，维持真皮基质的结构
② 胶原酶活性阻碍作用
美白作用评价是通过多种美白评估法， 分析美白成分、美白产品对由紫外线引起 的色斑的改善效果以及色素沉淀的抑制效 果，客观、有效的评价其美白功效
色素沉淀及色斑生成示意图
① 黑色素生成抑制作用
黑色素细胞受到紫外线照射后，启动人体保护机制生成黑色素， 黑色素吸收紫外线的作用避免皮肤细胞受到损伤。但持续的照射促进 了黑色素细胞活性，导致生成了过量的黑色素，从而在皮肤上形成了 色素沉淀与色斑。因此，化妆品成分、产品的黑色素生成抑制作用是 评价其美白功效的重要参数之一。
本评价项目，将被检验物质添加到黑色素瘤细胞培养，测定黑色 素瘤细胞生成的黑色素含量，分析其抑制黑色素生成的能力，评估其 美白作用的功效。
评价平台：B16BL6 小鼠黑色素瘤细胞
样品浓度 小
大
黑色素抑制效果 小
大
样品处理后黑色素生成效果
② 酪氨酸酶活性阻碍作用 酪氨酸酶（Tyrosinase）是黑色素合成的关键酶。对酪氨酸酶活性进
UVB照射后 样品 COMET Assay 结果
三维仿真皮肤组织模型
三维仿真皮肤是由正常人体成纤维细胞与人体角朊细胞构成，可 作为代替动物实验的仿真皮肤组织。
主要应用于医药制品、食品、化妆品等成分的刺激性、急性毒性、 美白效果的评定，比传统的皮肤实验，其稳定性好，再现性高。
3D-Skin 实物图
两种方法评价化妆品皮肤刺激反应的结果分析
【调查研究】文章编号:1001-5914(2001)04-0217-03两种方法评价化妆品皮肤刺激反应的结果分析张静,熊习昆,谢晓萍,陆凌霞 摘要 目的 探讨多次皮肤刺激实验和组织病理实验评价化妆品对皮肤刺激性的差异。
方法 对97种化妆品分别进行家兔多次皮肤刺激实验和皮肤组织病理学实验,比较了皮肤刺激性的超标率,并从中随机选择7种化妆品比较其肉眼观察的皮肤刺激反应积分和病理反应积分的差异。
结果 通过多次皮肤刺激实验和组织病理学实验获得的97种化妆品皮肤刺激性超标率分别为6.2%和13.4%,差异无显著性。
7种化妆品的皮肤刺激反应积分显著低于相应的组织病理学积分(W ilcox on test T+=27,P<0.05),7种化妆品皮肤刺激实验均合格,而组织病理学实验发现一种化妆品具有明显皮肤刺激性(积分值为4.25)。
结论 皮肤组织病理学实验能更早、更准确地反映化妆品引起的轻度皮肤损伤,应与皮肤刺激实验结合起来评价化妆品对皮肤的刺激性。
关键词 化妆品;皮肤;组织病理学实验;多次皮肤刺激实验中图分类号:R114 文献标识码:AAnalysis of Results Obtained From Two Methods for Detecting Cosmetic-induced Skin Irritation ZH A N G J ing,X I ON G X i-kun,X I E X iao-p ing,et al.G uangdong Provincial Center f or Disease Prevention and Control,Guangzhou 510300Abstract Objective T o ex plo re the differences of t he ir rit abilities o f cosmetics to skin detected by multiple skinir ritation(M SI)test and histopatho lo gical(HP)test.Methods T he irr itabilit ies of97kinds o f co sm etics to skin wer edet ect ed by M SI t est and HP test r espectively,the o ver-standard r ates o f irr ita bitities of cosmetics to skin in rabbits wer e compar ed stat istically.T he compar ativ e a nalysis on the differ ences between skin-ir ritation scor es o btained by macr oscop-ic and hist o-patho lo gical ex amination in7kinds o f ra ndomly selected cosmetics amo ng to tal97kinds of co smet ics wer ecarr ied o ut.Results T he over-standard r ates o f irr itabilit ies o f97kinds of cosmetics t o skin wer e6.2%detected byM SI test a nd13.4%by HP test r espectively(P>0.05),and ther e w as no significant differ ence betw een tho se tw o o ver-standar d r ates.T he skin-ir ritation sco res o f7kinds o f randomly selected cosmetics w ere sig nificantly low er t han the r e-lat ed histo-pa tholog ical sco res(W ilcox on test,T+=27,P<0.05).T he scor e o f ir ritabilities of all7kinds of cosmeticsw ere qua lified in M SI test.But t he hist opatholog ical test show ed that o ne of t he7kinds of co smetics presented signifi-ca ntly str ong irr itability to skin w it h a histopatho lo gica l sco re of4.25.Conclusion Skin histo patholog ical test could ac-cur atly detect the chang es in the ear ly stag e of lig ht skin damages induced by cosmetics.T hese tw o methods should be applied simult aneo usly t o the assessment o n the ir rit abilities o f co smetics to skin.Key words Co smet ics;Skin;Histo patholog ical test;M ultiple skin irr ita tio n test作者单位:广东省疾病预防控制中心毒理所(广州510300)作者简介:张静(1975-),女,河南信阳人,医师,医学学士,从事环境毒理学卫生检测工作。
基于整体角膜膨胀实验对兔眼角膜参数的确定
基于整体角膜膨胀实验对兔眼角膜参数的确定孙太凤;王慧枝;穆晶;李林;张海霞;刘志成【摘要】目的角膜一般被视为非线性弹性材料,用线弹性模型刻画角膜的力学特性难免存在一定误差.本研究基于体外兔眼角膜膨胀实验,探索用分段的线弹性模型描述角膜非线性弹性行为的可行性.方法选取5只新鲜兔眼,制备附带巩膜环的角膜试件,将试件固定在自制的加压装置上,用微量注射泵给试件加压以模拟角膜随内压力的增加发生形变的过程,同时利用显微镜获取相应压力下角膜的正侧面轮廓图像.预调后,记录加载过程中压力与角膜顶点及轮廓信息.分别选取角膜内压力为7mmHg、14 mmHg和21 mmHg时的角膜正侧面轮廓图像,建立具有不均匀厚度的轴对称角膜几何模型,将角膜视为各向同性不可压缩材料,在7～14 mmHg、14～21 mmHg和21～28 mmHg三个眼内压范围内视角膜为线弹性材料,通过有限元方法分段模拟体外角膜膨胀实验,将模拟结果与膨胀实验角膜外轮廓线位移结果比对,确定角膜在上述压力范围内的弹性模量.结果获得的兔眼角膜在7～14 mmHg、14～21mmHg和21～28 mmHg的弹性模量分别为(0.73±0.16) MPa、(2.20±0.43) MPa和(3.03±0.37) MPa.此结果与文献结果基本一致.结论用分段的线弹性模型近似描述角膜非线性弹性行为的方法是可行的.【期刊名称】《北京生物医学工程》【年(卷),期】2016(035)002【总页数】7页(P191-197)【关键词】角膜;膨胀实验;有限元;线弹性;分段线弹性【作者】孙太凤;王慧枝;穆晶;李林;张海霞;刘志成【作者单位】首都医科大学生物医学工程学院,首都医科大学临床生物力学应用基础研究北京市重点实验室北京 100069;首都医科大学生物医学工程学院,首都医科大学临床生物力学应用基础研究北京市重点实验室北京 100069;首都医科大学生物医学工程学院,首都医科大学临床生物力学应用基础研究北京市重点实验室北京100069;首都医科大学生物医学工程学院,首都医科大学临床生物力学应用基础研究北京市重点实验室北京 100069;首都医科大学生物医学工程学院,首都医科大学临床生物力学应用基础研究北京市重点实验室北京 100069;首都医科大学生物医学工程学院,首都医科大学临床生物力学应用基础研究北京市重点实验室北京100069【正文语种】中文【中图分类】R318.01角膜是眼球屈光系统的重要组成部分，它的形状和焦距影响全眼屈光能力的70%[1]～80%[2]。
SS熊胆眼药水刺激性研究
ＳＳ熊胆眼药水刺激性研究摘要:目的:构建滴眼液刺激性体外评价方法,筛查SS熊胆眼药水刺激性原因并采取适宜方法解决。
方法:采用兔角膜上皮细胞毒性试验(SIRC-MTT)对4种熊胆滴眼液进行评价,将结果与临床刺激性评分进行相关性分析,运用SIRC-MTT 筛查SS熊胆眼药水的刺激性原因并进行解决。
结果:相关系数为0.961,说明SIRC-MTT能较好评价熊胆滴眼液眼刺激性;造成熊胆眼药水刺激性较强的原因为羟苯乙酯与熊胆原液的共存;采用减少羟苯乙酯用量(调整至0.04%)、添加羧甲基纤维素钠(0.2%~0.25%)均能增加角膜上皮细胞存活率。
结论:SIRC-MTT是SS 有效的体外刺激性评价方法;降低羟苯乙酯用量和添加羧甲基纤维素钠均能降低熊胆眼药水的刺激性。
关键词:刺激性;熊胆眼药水;细胞毒性试验;角膜上皮细胞SS熊胆眼药水由熊胆单味中药研制而成,具有清热解毒,祛翳明目的功效,主要用于治疗急、慢性卡他性结膜炎,但大多患者在使用中发现该药具有较强刺激性,严重影响了其临床用药。
现今评价眼刺激性的方法为兔眼刺激法(draize test),该法具有主观性强,实验差异大等缺点[1],难以寻找出SS熊胆眼药水刺激性较强的内在原因。
该研究拟建立SS新的体外刺激性评价方法,用于筛查该眼药水的刺激性原因,并解决该问题。
1 材料与方法1.1 受试物、仪器与试剂SS熊胆眼药水(成都某药业公司提供),熊胆粉滴眼液(某药业公司),熊胆黄芩滴眼液(黑龙江黑宝药业),复方熊胆滴眼液(长春普华药业),熊胆、羟苯乙酯、羧甲基纤维素钠(成都某药业公司提供),氯化钠、硼酸、硼砂(科龙试剂有限公司),透明质酸钠(Solarbio);二氧化碳培养箱(Thermo),超净工作台(苏州净化),倒置显微镜(奥林巴斯),自动酶标仪(BIO-RAD),DMEM低糖(GIBCO,USA),胎牛血清(甘肃民海),MTT(SIGMA,USA),F12(GIBCO,USA),青霉素(石家庄制药有限公司),链霉素(华北制药股份有限公司),L-谷氨酰胺DMSO(SIGMA,USA)。
揭秘化妆品安全性评价技术(四)——化妆品眼刺激性及试验方法
方 法 已经 包括 在试 验 策 略 中， 为动 作
物 试 验 的 补 充 ， 体 内 兔 眼 试 验 仅 而 需 要 在 最 后 一 步 进 行 ， 就 是 说 当 也 全 部 其他 序 列 试 验 已 经 得 出 阴 性 评
价 结 果 ， 要 对 轻 度 到 中度 的 刺 激 需
性 混 合 物 进 行 评 价 时 才 考 虑 性体 内
１ 牛 角 膜 浑 浊 和 渗 透 性 实 验
（ ｖｎ Ｂｏ ｉ ｅ Ｃｏｒ ｅａ ｎ ｌＯｐ ｃｉ ｎｄ ａ ｔ ａ ｙ
Ｐ ｒ ａ ｉｙ Ｂ ｅｍｅ ｂｌ ， ＣＯＰ 使 用 屠 宰场 获 ｉ ｔ ） 得 的标 本 ， 新 鲜 分离 的角膜 水平 将
固 定 于 支 持 架 ， 后 放 置 于 特 殊 改 然 进 的透 光 容 器 里 。 温 条 件 下， 闭 恒 封
生细 胞 毒 性 ， 表面 活化 剂 和一 些 如
有 机 溶 剂 是 这 类 物 质 的 代 表 。那 些 作 用 于 细 胞 能 量 代 谢 的物 质 也 可 快 速 产 生作 用 ， 可 能 没 有 第 一 类 物 质 但 迅 速 。化 学 物 质 还 可 以 通 过 对 大 分 子 的 烷 化 或者 其 他 影 响 而产 生作 用 ，
这些年来 ， 为了减 轻 动 物 遭 受 的
在 第 一 位 。 些 可 溶 解 细 胞 膜 或 者 那
是 导 致 蛋 白质 凝 集 的 物 质 可 立 即产
痛 苦 和使 受 损组 织 更快 恢 复 ， 已经
提 出一些 优 化 意见 ， 如低 眼容量 例 实 验 （ ＶＥ 。目前 ， 少 和 优 化 的 Ｌ Ｔ） 减
试验 。
这 类 物 质 的 作 用 可 能 表 现 为 一 种 迟 发 性 的 细 胞 毒 性 （ 迟 发 性 坏 死 或 如
T17.3化妆品原料眼刺激体外替代试验检测策略的建立与评价
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戊二醇、己二醇、辛酰羟肟酸等防腐剂的眼刺激性评价
戊二醇、己二醇、辛酰羟肟酸等防腐剂的眼刺激性评价防腐剂是化妆品中必不可少的成分，但大部分防腐剂单体的使用频率非常低，经常使用的防腐剂单体约九种——苯氧乙醇、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、甲基异噻唑啉酮（卡松）、山梨酸、苯甲酸、己脒定二（羟乙基磺酸）盐、脱氢乙酸、咪唑烷基脲。
即使是复配使用，选择也是很有限的。
近年来不在《化妆品安全技术规范》内防腐剂范围却具有防腐性能（抑菌作用）的原料（无添加防腐剂）异军突起，得到很多化妆品生产商的青睐，其中防腐剂单体约20种。
这一类无添加防腐剂国家允许使用，并且不限量使用。
一款好的防腐剂应该具备良好的防腐抑菌能力及温和性，本文重点研究几款无添加防腐剂的眼刺激性，并对改善其刺激性进行了探讨。
市面上常用的无添加防腐剂有二元醇类（苯乙醇、戊二醇、己二醇、辛二醇）、对羟基苯乙酮、辛酰羟肟酸等。
其中，己二醇、辛甘醇可作为香料，戊二醇为性能优异的保湿剂，对羟基苯乙酮具有抗氧化、舒缓镇静能力，辛酰羟肟酸具有增溶助溶及美白功效。
实验选取苯乙醇、戊二醇、己二醇、辛二醇、对羟基苯乙酮、辛酰羟肟酸，评价其眼刺激性。
眼刺激性评价可通过鸡胚绒毛尿囊膜血管试验（HET-CAM ，国标SN/T 2329-2009 ）进行。
HET-CAM 模拟兔子眼结膜，通过记录受试物接触鸡胚尿囊膜后发生的出血、血管融解和凝血等变化的时间，根据计算公式得到一个IS 评分，用于评估受试物的眼刺激性。
评分越高，刺激性就越大。
IS=(301-sec H)x5300 +(301-sec L)x7300 +(301-sec C)x9300 (1)式中：Sec H （出血时间hemorrhage time ）——CAM 膜上观察到开始发生出血的平均时间，单位为秒（s ）； Sec L （血管溶解时间vessel lysis time ）——CAM 膜上观察到开始发生出血的平均时间，单位为秒（s ）； Sec C （凝血时间coagulation time ）——CAM 膜上观察到开始出现凝血的平均时间，单位为秒（s ）。